Name: Extração de RNA a partir de células Neuroprecursor Usando o Bio-Rad Total de RNA Kit (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T23:51:30.000+00:00
Duration: 17 min 25 s
Description: Aprenda a extrair RNA de células neuroprecursoras usando o kit Bio-Rad Total RNA. Este método demonstra isolamento de cortiças embrionárias com rendimentos consistentes para estudos de expressão gênica em neurociência.

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Os autores não têm nada a declarar.

extração de rna a partir de células neuroprecursor usando o bio-rad total de rna kit

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

Extração de RNA a partir de células Neuroprecursor Usando o Bio-Rad Total de RNA Kit

Olá, sou Josh Sh, aluno de pós-graduação no laboratório do Dr. Ed Maki na Universidade da Califórnia em Irvine. Vou mostrar a vocês como extrair RNA de células precursoras neurais utilizando este kit BioRad To RNA Mini. Já estou usando este kit há alguns anos neste laboratório e ele sempre me forneceu resultados consistentes com altos rendimentos.As células que utilizamos são células precursoras neurais Eton e meio, dissociadas agudamente de cortices embrionários, e normalmente as semeamos em uma placa de cultura de tecidos com 24 poços, tratada e revestida com PD L e laminina, semeando cerca de cem mil células por poço. Antes de começar, devo informar que você deve trabalhar em uma bancada designada especificamente para seu trabalho com RNA. O primeiro passo é garantir que a sua bancada de RNA esteja limpa.A maneira apropriada de limpar a bancada é usar este RNA zap. Basicamente, ele elimina qualquer RNA, pois o RA destrói seus RNAs. Outra coisa é usar luvas sempre que estiver manipulando a extração, porque sua pele está cheia desses RNAs.Portanto, é totalmente proibido. Ok, o que tenho aqui é o kit mini de RNA total da BioRad. Retirei o conteúdo, então deixe-me mostrar o que ele

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Nós apresentamos um método para gerar cDNA de mRNA ambiental. Em geral, o total de RNA é a primeira coletados do ambiente, rRNA é seletivamente removido, mRNA é seletivamente amplificado, e cDNA sintetizado a partir do pool de mRNA enriquecido é seqüenciado. Seqüências recuperadas podem ser anotados usando técnicas padrão de bioinformática para identificar os genes expressos.

Analisando Expressão Gênica de comunidades microbianas Marinha usando transcriptômica Ambiental

Nós descrevemos um processo que utiliza laser de captura de microdissecção para isolar e extrair RNA de uma população de células homogêneas, neurônios piramidais, na camada III do giro temporal superior em cérebros post-mortem humano. Nós posteriormente linearmente amplificar (T7-based) mRNA, e hibridizar a amostra para o ser humano Affymetrix X3P microarray.

Obtenção de RNA de alta qualidade a partir de populações de células no tecido humano único post-mortem do cérebro

Devido à natureza transitória do pré-mRNA, pode ser difícil isolar e...

Um método rápido de alta capacidade para Ribonucleoproteínas Mapping (RNPs) no pré-mRNA Humanos

Neste artigo descrevemos um método simples para a colheita de células isoladas de ratos culturas primárias neuronais e análise de transcriptoma subsequentes usando a amplificação ARNA. Esta abordagem é generalizável a qualquer tipo de célula.

Análise do transcriptoma de uma única célula

Um passo a passo para protocolo de isolamento e identificação de RNA complexos associados através de RIP-Chip.

Método para o isolamento e identificação de mRNAs, microRNAs e componentes proteicos de complexos de ribonucleoproteínas de extratos celulares utilizando RIP-Chip

as interações RNA-proteína estão no centro de muitos processos celulares. Aqui, descrevemos um método in vivo para isolar RNA específico e identificar novas proteínas associadas a ele. Isso pode lançar uma nova luz sobre como os RNAs são regulados na célula.

Novel de Ligação a RNA Proteínas Isolamento pelo rápido Metodologia

A amplificação rápida dois diferentes 3' extremidades do cDNA (3' corrida) protocolos descrito aqui fazem uso de dois diferentes polimerases de DNA para mapear sequências que incluem um segmento de quadro de leitura aberta (ORF), o códon de parada e o inteiro 3' UTR de uma transcrição de usando o RNA obtidos de linhagens celulares de cancro diferentes.

Adaptação 3' rápida amplificação do CDNA termina para mapear transcritos em câncer

Este método de suspenso de RNA permite identificar os alvos de RNA de um tempo não-codificantes do RNA (lncRNA). Baseado na hibridação de caseiras, concebidas antido sentidas oligonucleotide sondas de DNA específicas para este lncRNA em um tecido apropriadamente fixo ou linha de células, com eficiência permite a captura de todos os alvos de RNA do lncRNA.

Procedimento de Pull-down de RNA para identificar alvos de RNA de um tempo não-codificantes do RNA

RNAs circulares (circRNAs) são RNAs não codificadores que podem ter papéis na regulação transcricional e mediar interações entre proteínas. Após a avaliação de diferentes parâmetros para a construção de bibliotecas de sequenciamento circRNA, um protocolo foi compilado utilizando a preparação total da biblioteca de RNA com o pré-tratamento RNase R e é apresentado aqui.

Identificação de RNAs circulares usando sequenciamento de RNA

O sequenciamento de RNA de quantificação absoluta (AQRNA-seq) é uma tecnologia desenvolvida para quantificar a paisagem de todos os pequenos RNAs em misturas biológicas. Aqui, as etapas de preparação da biblioteca e processamento de dados do AQRNA-seq são demonstradas, quantificando as mudanças no pool de RNA de transferência (tRNA) em Mycobacterium bovis BCG durante a dormência induzida por fome.

AQRNA-seq para quantificar RNAs pequenos

Aprenda a extrair RNA de células neuroprecursoras usando o kit Bio-Rad Total RNA. Este método demonstra isolamento de cortiças embrionárias com rendimentos consistentes para estudos de expressão gênica em neurociência.

Extração de RNA a partir de células Neuroprecursor Usando o Bio-Rad Total de RNA Kit

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