Name: Fabricação e Aplicação de Rosa Bengala-quitosana Films em Reparo de Tecidos Laser (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 6 s
Description: Aprenda a fabricar filmes adesivos de quitosana ativados por laser com rosa bengala para reparo de nervos periféricos em ratos. Este método minimiza danos teciduais comparado às suturas tradicionais.

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Este trabalho foi apoiado pela Research Grant UWS.

1. Quitosana Preparação adesiva <ol><li> O pó de quitosano é solúvel em solução de ácido acético, para a preparação de uma solução mãe de ácido acético (2% v / v), adicionar 10 ml de ácido acético glacial e 490 ml de água desionizada (DI-H 2 O). </li><li> Para a preparação de uma solução stock de Rose Bengal (RB) (0,01% w / v) em ácido acético, pesar 5 mg de RB em um frasco envolto com folha de alumínio para evitar a fotodegradação. Adicionar 0,5 ml de O 2 DI-H para dissolver o pó em seguida, adicionar 49,5 ml da solução de ácido acético stock (descrito na secção 1.1). </li><li> Para a preparação da solução de quitosano (1,7% w / v), pesar 0,85 g de quitosano em pó (MW médio, o grau de 85% de acetilação) e adicionar 50 ml de solução de ácido acético a RB. O controlo foi preparado por dissolução da quitosana em solução de ácido acético sem RB. </li><li> Adicionar um agitador magnético à mistura de quitosano e agitou-se à temperatura ambiente. Para assegurar a dissolução completa dos componentes, agitar a quitosanaem ácido acético + RB durante duas semanas e o quitosano em ácido acético, durante 5 dias (de controlo). Quando o quitosano é dissolvido, o pH da solução aumenta de 2,6 a ~ ~ 3.9. Note-se que RB é pouco solúvel em pH ácido e que exige um aumento do pH da solução, e um tempo prolongado de agitação para dissolver. </li><li> Centrifugar as soluções a 3270 xg, durante 1 hora e recolher o sobrenadante, utilizando, por exemplo, uma seringa estéril ml 10. Certifique-se de não perturbar a impureza da pelota. Durante esta etapa, a solução é feita a partir de impurezas macroscópicas e matéria insolúvel. </li><li> Injectar a (centrifugada) solução de quitosano sobre uma laje perpex plana usando uma seringa estéril. A espessura do filme seco depende da relação entre a quantidade de solução dispensada e a área da superfície sobre a qual a solução é espalhada. Assegure-se que a solução esteja livre de bolhas de ar e uniformemente distribuído sobre a laje. Para se obter filmes finos, com ~ 13 um de espessura, injectar ~ 1 ml de solução acima de 12 cm 2 de superfícieárea (~ dimensões 3x4 centímetros, Figura 1A). </li><li> Cobrir a placa de perspex com uma tela, feita de folha de alumínio, por exemplo, para evitar a foto-branqueamento da solução. Garantir que a ventilação de ar suficiente é garantida para secar a solução sob a tela. </li><li> Deixar a solução a secar à temperatura ambiente (25 ° C) e pressão (1 atm) até que o filme resultante é insolúvel em água e não incham macroscopicamente. Isto é tipicamente alcançado em 2 semanas. </li><li> Retire cuidadosamente os filmes usando uma espátula fina e plana: esses filmes podem ser facilmente arrancado a laje Perspex sem danificá-los. </li><li> Medir a espessura das películas utilizando um micrómetro. </li><li> Corte o adesivo em tiras retangulares com uma tesoura afiada limpa e coloque-os entre lâminas de vidro estéreis para preservar sua forma plana. Enrole as lâminas em folha de alumínio para a luz de blindagem e armazená-los à temperatura ambiente. Rotular os adesivos com ou sem RB como &quot;subiu adesivo&quot; ou &quot;quitosana ADHESive &quot;, respectivamente. </li><li> A rosa películas adesivas podem ser esterilizados utilizando etanol (90%) ou com radiação gama (0,1 kGy / h durante 24 horas) 4,5. </li></ol> 2. Atenuação Optical Adhesive <ol><li> Fixar o adesivo rosa dentro de um cadinho de quartzo. </li><li> Gravar o seu espectro atenuada na gama de 400-800 nm utilizando um espectrofotómetro de duplo feixe 4. </li><li> Assumindo que a validade da lei de Beer, calcular o comprimento de atenuação do adesivo como se segue: I = I 0 e Ax-onde 0 é a intensidade do feixe incidente, 1 / A atenuação é o comprimento, e x é a espessura da película. </li><li> Repita os passos 2,1-2,3 para o adesivo de quitosano para servir como um controlo. </li></ol> 3 aplicação in vitro:. Colagem de Tecidos Laser em Intestino <ol><li> Intestino de bezerro colheita imediatamente após a eutanásia dos animais e armazenar a -80 ° C. </li><li> Antes de usar, degelo e hidratar a tissue por imersão em O 2 DI-H durante 10 min. </li><li> Bissectar o tecido em secções (2 x 1 cm) usando uma lâmina 10 sob um microscópio de operação (x10). Manter a umidade seções usando DI-H 2 O. </li><li> Traga os tocos incisão juntos (ponta a ponta). Limpe o excesso de água da superfície usando pontas de algodão. </li><li> Coloque uma tira adesiva de rosa (10 x 6 mm) através da incisão na camada serosa com microfórceps garantindo contacto total com o intestino (Figura 2). </li><li> A aderência do tecido do adesivo rosa é activado por um diodo laser bombeado de estado sólido, o qual é acoplado a uma fibra óptica multimodo (diâmetro do núcleo de 200 um) 4. </li><li> Definir o nível de potência do laser de 180 mW e irradiar o adesivo para ~ min 6 com um tamanho de mancha de feixe de cerca de 5 mm, utilizando-se os parâmetros listados na Tabela 1. Ponto irradiam-o adesivo assegurando que cada local é irradiada para ~ 5 segundos antes de mover o feixe para o local adjacente. Tseu procedimento garante que o feixe laser varre a área de superfície total dos vários tempos adesivas. </li><li> Para avaliar a resistência de ligação do tecido, uma amostra de apertar a um tensiómetro de coluna única calibrado (Instron, MA, EUA), utilizando apertos mecânicos. Mover as pegas a 22 mm / min até que os dois cotos de tecidos separados 4. </li><li> Coloque um adesivo rosa sobre o tecido, tal como descrito no passo 3.5. Não irradiar a amostra e medir a resistência de ligação do tecido, tal como descrito no passo 3.8. Este exemplo serve como um controlo. </li></ol> 4 Na Aplicação Vivo:. Anastomose do nervo tibial <ol><li> Ratos Wistar com sedar o isoflurano / S mistura 2 (4% durante a indução, 2% depois) 5. Injectar subcutaneamente Buprenex (0,03 mg / kg) para fornecer intra-operatória actividade analgésica e possível aliviar a dor ou desconforto. </li><li> O seguinte procedimento cirúrgico deve ser realizado sob um microscópio de operação (x10). Faça uma pele oblíquaincisão de cerca de 3 cm de comprimento, na parte dorso-lateral da coxa direita e expor o nervo tibial com uma abordagem músculo-divisão através dos músculos glúteos 2. </li><li> Parcialmente dissecar e aparar a adventícia do nervo tibial usando retas micro-tesoura e absorver o excesso de água com uma gaze estéril ou pontas de algodão. </li><li> Cortar o nervo tibial com micro-tesoura. </li><li> Posicionar uma tira estéril quitosana (dimensões 5 x 4 mm) abaixo do nervo tibial utilizando micro-fórceps. </li><li> Aproximar os cotos end-to-end com micro-pinças sobre a fita adesiva rosa. </li><li> A tira completamente adere ao nervo formando um colar, o que pode auxiliar na rotação do nervo durante a irradiação com laser da tira. </li><li> Activar a rosa adesivo com o laser, tal como descrito nas etapas 3.6) e 3.7). </li><li> Apare o adesivo redundante subiu de o colar do nervo operado. </li><li> Feche os músculos e pele, com cinco suturas 3-0 5. </li&gt; <li> Procedimentos padrão de recuperação pós-operatória deve ser seguido, incluindo inspeção diária para deiscência ou formação de pus e administração de analgésicos, se necessário. </li></ol> 5. Resultados representativos As películas que se obtêm são brilhantes de cor rosa, fina e tem uma superfície lisa (figura 1). Eles também são flexíveis e podem ser enroladas em tubos de pequeno diâmetro, sem lágrimas causam ou qualquer outro dano aparente (Figura 1B). O adesivo rosa tem dois picos de absorção a 530 e 562 nm, o laser verde é assim fortemente absorvida pelo adesivo e o comprimento de atenuação correspondente a 532 nm é de ~ 12 ^ m (Figura 3). Em contraste, a quitosana sem películas fracamente RB atenua a laser (1 / A ~ 162 mm), provavelmente devido à dispersão. Depreende-se que a trama espectros sem agregação significativa de RB ocorre nos filmes. A rosa ligações adesivas firmementepara o intestino, após irradiação do laser (Figura 2) a realização de uma carga máxima típica de falha de 0,9 ± 0,4 N (n = 30). A força de adesão foi estimada como sendo a carga máxima dividida pela área da superfície de colagem, isto é, de 15 ± 6 kPa (n = 30). O adesivo não irradiado rosa ligado significativamente menor para o tecido (2 ± 2 kPa, n = 30, teste t não emparelhado p &lt;10 6). A anastomose in-vivo do nervo tibial foi atingido com sucesso após a aplicação e colagem do adesivo rosa em conjunto com o laser verde. Uma semana após a cirurgia, o nervo foi operado em continuidade e a força de reparação foi de 17 ± 9 kPa (n = 10). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4158/4158fig1.jpg" /> Figura 1. A) A solução de quitosano-RB é fundido em uma superfície plana Perspex espessura (laje laje ~ 5 mm). Papel gráfico é colocado por baixo da laje para facilitar o passo de dry-cast. O f insolúvel em águailm é obtido de duas semanas depois de fundição. B) O adesivo rosa é flexível e pode ser enrolado num cilindro pequeno. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4158/4158fig2.jpg" /> Figura 2. O adesivo está ligado a rosa de intestino de bezerro após irradiação do laser. Irradiação uniforme é aplicada sobre o tecido durante adesivo RB-ligação; manchas entretanto seleccionados são mostrados nesta figura para ilustrar o efeito de foto-branqueamento do laser sobre o adesivo. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4158/4158fig3.jpg" /> Figura 3. O espectro de absorção (em unidades arbitrárias) do adesivo rosa mostra dois picos a 530 e 562 nm. O laser verde (λ = 532 nm) é, assim, fortemente absorvida pelo adesivo durante a exposição à radiação laser. O adesivo de quitosano sem RB absorve mal o feixe de laser. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> n </td><td><strong&gt; Área (mm 2) </td><td> Potência (W) </td><td> Tempo (s) </td><td> Fluência (J / cm 2) </td><td> I (W / cm 2) </td><td> Max Load / Área (kPa) </td></tr><tr><td> Adesivo + Laser </td><td> 30 </td><td> 60 ± 10 </td><td> 0,18 ± 0,03 </td><td> 365 ± 5 </td><td> ~ 110 </td><td> ~ 0,9 </td><td> 15 ± 1 </td></tr><tr><td> Adesivo </td><td> 30 </td><td> 60 ± 10 </td><td> NA </td><td> NA </td><td> NA </td><td> NA </td><td> 2 ± 2 </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Legend. n, número da amostra; Área, área de superfície do adesivo rosa (média ± erro máximo); Power, potência do laser (média ± erro máximo); Tempo, tempo de irradiação (média ± erro máximo); Fluence, fluência laser média, eu, TIR estimadaadiance; máx / Area, carga máxima de ruptura do tecido reparado dividida pela área da superfície do adesivo, (média ± EP).

<ol><li>O'Neill, A. C., Winograd, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+anastomosis+using+a+photochemical+tissue+bonding+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Microvascular anastomosis using a photochemical tissue bonding technique.</a> Lasers Surg. Med. 39, 716-722 (2007).</li>
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<li>García, P., Jorge, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+the+mechanical+behavior+of+a+cyanoacrylate+and+a+bioadhesive%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Sci.+Mater.+Med%22%5BJournal%5D)">Comparative study of the mechanical behavior of a cyanoacrylate and a bioadhesive.</a> J. Mater. Sci. Mater. Med. 15, 109-115 (2004).</li>
<li>Lauto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+extracellular+matrix+with+chitosan+adhesive+film+for+sutureless+tissue+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Integration of extracellular matrix with chitosan adhesive film for sutureless tissue fixation.</a> Lasers Surg. Med. 41, 366-371 (2009).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A rosa fabricação adesivo é baseado num processo de seca-molde simples, embora a dissolução do RB em pH ácido requer agitação prolongada de solução de quitosano. É importante deixar a solução secar-se até se tornar uma película insolúvel em água. Isto acontece quando o teor em água de peso é de ~ 10%, em que o filme seco 6. Filmes insolúveis são geralmente obtidas duas semanas após a seca-casting em condições padrão de temperatura e pressão (~ 25 ° C e ~ 1 atm). O mecanismo de ligação do tecido não é claro, n...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Rosa Bengala </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 632-69-9 </td><td></td></tr><tr><td> A quitosana (média MW) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 10318AJ </td><td></td></tr><tr><td> Ácido acético glacial </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 08050051 </td><td> 2% v / v em água Dl </td></tr><tr><td> Agitador magnético </td><td> Heidolph </td><td> MR Hei-Mix S </td><td></td></tr><tr><td> Centrifugador </td><td> Beckman Coulter </td><td> Allegra X-12R </td><td></td></tr><tr><td> Espectrofotômetro </td><td> Varian </td><td> Cary 4000 UV-Visível </td><td></td></tr><tr><td> Laser </td><td> CNI Laser </td><td> MGL-532 </td><td></td></tr><tr><td> Micrômetro </td><td> Mitutoyo </td><td> Série 227 </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio cirúrgico </td><td> Zeiss </td><td> OPMI </td><td></td></tr></tbody></table>

fabricação e aplicação de rosa bengala-quitosana films em reparo de tecidos laser

Fabrication and Application of Rose Bengal-chitosan Films in Laser Tissue Repair

Colagem de tecidos fotoquímica (PTB) é uma técnica de sutura para a reparação de tecidos, o que é conseguido através da aplicação de uma solução de rose bengal (RB) entre duas extremidades de tecido 1,2. Estes são depois irradiadas por um laser que é selectivamente absorvido pelo RB. As reações fotoquímicas resultantes supostamente crosslink as fibras de colágeno no tecido com 3 mínima produção de calor. Neste relatório, RB, foi incorporada em filmes finos de quitosano para o fabrico de um adesivo de tecido novo que é activado por laser. Películas adesivas, com base em quitosano e contendo ~ 0,1% em peso de LD, são fabricados e ligados ao intestino de vitelo e os nervos tibiais de ratos por um laser de estado sólido (λ = 532 nm, de fluência ~ 110 J / cm 2, tamanho do ponto ~ 0,5 cm) . Um tensiómetro de coluna única, em interface com um computador pessoal, é utilizado para testar a resistência de ligação. Os RB-quitosano ligações adesivas com firmeza para o intestino com uma força de 15 ± 6 kPa, (n = 30). A força de adesão diminui para 2 &amp;plusmn; 2 kPa (n = 30) em que o laser não é aplicada ao adesivo. A anastomose de nervos tibial pode ser igualmente concluída sem a utilização de suturas. A novel quitosana adesivo ter sido fabricado que os títulos fotoquimicamente ao tecido e não requer sutura.

Suturas são normalmente necessários para reparar o tecido durante procedimentos cirúrgicos. No entanto, a sua aplicação pode ser problemática uma vez que são invasivos e pode danificar o tecido. Os métodos de fabricação e aplicação de um adesivo de tecido romance são aqui relatados. Esta película adesiva é activada por laser e não requer o uso de suturas.

Fabricação e Aplicação de Rosa Bengala-quitosana Films em Reparo de Tecidos Laser

A colagem tecidual fotoquímica (PTB) é uma técnica sem sutura para reparação tecidual, a qual é realizada aplicando-se uma solução de bengala rosa (RB) entre dois...

O objetivo geral deste procedimento é fabricar um adesivo de quitosana ativado por laser e demonstrar como aplicá-lo no reparo de nervos periféricos. Isso é realizado primeiramente solubilizando quitosana e pó de verde de brilhante em solução de ácido acético. O segundo passo do procedimento é realizar a secagem por moldagem da solução para obter um filme fino.O terceiro passo é expor o nervo do rato e dissecá-lo. O passo final é posicionar o filme ao redor do nervo dissecado e irradiá-lo com um laser verde para ligar o filme ao tecido. Por fim, a força com que o filme rose se liga ao tecido é medida usando um tensiômetro calibrado.O adesivo a laser é biocompatível e tem a vantagem de se ligar diretamente ao tecido. Isso o torna muito útil para reparar tecidos profundos e de difícil acesso, onde suturas seriam complicadas. Também teria a vantagem de reparar tecidos onde o fechamento estanque é importante, como a dura-máter ou o intestino.É importante demonstrar visualmente a técnica alto e adesiva porque várias etapas estão envolvidas na preparação do adesivo e também porque o procedimento cirúrgico exige cuidados especiais quando o adesivo é aplicado no tecido. A maior parte da demonstração será feita por Matt Barton, que é um estudante de pós-graduação no meu laboratório, e a operação cirúrgica será realizada pelo Professor Marcus Studley da Quare University. Comece preparando uma solução de Kita sand em ácido acético com rose bengala.Uma solução controle pode simplesmente omitir a rosa bengala, preparando a solução com agitação magnética à temperatura ambiente. Ela ficará pronta em cerca de duas semanas ou cinco dias para controles sem rosa bengala. Durante esse período, o pH aumenta de aproximadamente 2,6 para 3,9 à medida que a quitosana se dissolve.Uma vez preparada, centrifugue a solução por uma hora e separe a solução do pellet de impurezas. Por meio de aspiração suave, não perturbe o pellet. Usando uma seringa estéril, injete a solução em uma placa plana de perspec.Espalhe a solução uniformemente sem formar bolhas de ar. Para um filme com espessura de aproximadamente 13 micrômetros, espalhe um mililitro de solução sobre 12 centímetros quadrados. Cubra a placa de plexiglass com uma tela de folha de alumínio para evitar o clareamento fotográfico da solução, mas deixe espaço suficiente para ventilação, permitindo que o filme seque. Deixe a solução secar à temperatura e pressão ambiente.Uma vez que o filme esteja seco, use uma espátula fina para cuidadosamente desprendê-lo da placa e testar. Se o adesivo estiver seco, corte uma pequena amostra e coloque-a em um frasco contendo água.Quando o filme for insolúvel e não apresentar inchaço macroscópico, estará seco. Isso normalmente leva cerca de duas semanas. Em seguida, meça a espessura do filme utilizando um micrômetro com tesoura limpa e de corte preciso.Corte o filme em tiras retangulares do tamanho necessário para sua aplicação. Armazene os pedaços do adesivo de rosa ou do adesivo controle entre lâminas de vidro estéreis envoltas em folha de alumínio e à temperatura ambiente. Antes de usar o filme em uma aplicação, determine sua atenuação óptica.Isso é realizado fixando um pequeno pedaço de filme em uma cubeta de quartzo. Em seguida, em um espectrofotômetro de feixe duplo, registre o espectro atenuado do filme entre 400 e 800 nanômetros. As medições podem ser interpretadas utilizando a lei de Beer para fornecer o comprimento de atenuação, que será comparável à espessura do filme.Para este protocolo, o intestino de bezerro deve ter sido coletado imediatamente após a eutanásia do animal e armazenado a menos 80 graus Celsius. Descongele e hidrate o tecido imergindo-o em água deionizada por 10 minutos. Em seguida, corte o tecido em seções de dois centímetros por um centímetro usando uma lâmina número 10 sob um microscópio cirúrgico em baixa ampliação.Mantenha as seções úmidas com gotas de água para unir as duas seções. Coloque-as uma ao lado da outra e remova qualquer excesso de água da superfície. Utilize pontas de algodão com pinças microcirúrgicas.Coloque uma tira de filme adesivo rosa sobre a incisão na camada de ciero. Certifique-se de que o filme esteja em completo contato com o intestino. Prepare o laser de estado sólido bombeado por DDE acoplado a uma fibra óptica de múltiplos modos.Verifique se os parâmetros do laser estão configurados corretamente. Agora irradie o adesivo. O tamanho do ponto do feixe deve ter cerca de cinco milímetros de largura no ponto em que entra em contato com o adesivo; irradie cada porção do adesivo por aproximadamente cinco segundos.No final, a superfície é escaneada várias vezes ao longo de cerca de seis minutos. Remova a amostra irradiada. Para avaliar a resistência da ligação tecidual.Prenda uma amostra a um tensiômetro de coluna única calibrado. Utilizando garras mecânicas, mova as garras a 22 milímetros por minuto até que os dois cotos teciduais se separem como controle.Coloque um adesivo de rosa no tecido. Não irradie a amostra e meça a resistência da adesão ao tecido. Para este procedimento, os filmes de adesivo de rosa devem ser esterilizados.Isso pode ser feito usando etanol 90% ou com radiação gama. Sedenarize uma rata Wistar com isoflurano gasoso 4% e reduza a concentração para 2% quando o animal não responder mais a um reflexo de dor. Faça um teste como o aperto de uma pata, rape e sanitize a coxa do rato.Posicione-o para cirurgia sob microscópio cirúrgico, faça uma incisão oblíqua na pele de aproximadamente três centímetros na parte dorsolateral da coxa direita. Exponha o nervo tibial com a abordagem de separação muscular através dos músculos glúteos usando tesoura microcirúrgica reta. Disseque parcialmente e remova a adventícia do nervo tibial.Abсорва qualquer fluido em excesso com gaze estéril ou pontas de algodão. Agora, corte o nervo tibial utilizando pinça microcirúrgica. Posicione uma tira adesiva de roseta estéril sob o nervo tibial.Em seguida, aproxime as pontas do nervo uma da outra sobre a tira adesiva rosa. É importante que os nervos fiquem sem tensão. A tira aderirá completamente ao nervo, formando uma bainha que pode auxiliar na rotação do nervo.Durante a irradiação a laser, prossiga ativando o adesivo rose com o laser conforme descrito anteriormente. Finalmente, feche os músculos e a pele com cinco pontos três zero e siga os protocolos pós-operatórios padrão para a recuperação do rato. Após seguir o protocolo descrito.As películas obtidas são linhas brilhantes coloridas, finas e possuem uma superfície lisa. As películas também são flexíveis e podem ser enroladas em tubos de pequeno diâmetro sem causar rasgos ou qualquer outro dano aparente. O adesivo de rosa apresenta dois picos de absorção em 530 e 562 nanômetros.O laser verde é, portanto, fortemente absorvido pelo adesivo e o comprimento de atenuação correspondente em 532 nanômetros é de aproximadamente 12 mícrons. Em contraste, filmes de Esan sem RB atenuam fracamente com o laser. O adesivo rosa adere firmemente ao intestino após irradiação com laser, alcançando uma carga máxima típica na falha de cerca de um newton.A resistência adesiva foi estimada como a carga máxima dividida pela área da superfície adesiva. O adesivo de rosa não irradiado aderiu significativamente menos ao tecido. É importante secar a cetona e o adesivo até que fiquem completamente insolúveis em água.Leva cerca de duas semanas. Além disso, sempre que preparar o adesivo, você precisará usar ácidos, os quais devem ser manipulados em capela de exaustão. Lembre-se também de que há envolvimento de lasers neste procedimento e eles podem ser muito perigosos; portanto, é necessário usar óculos de proteção contra laser o tempo todo.

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

A fabricação de uma novela, filme flexível fino adesivo cirúrgico a partir de ingredientes aprovados pela FDA, a quitosana e indocianina verde é descrito. Bonding deste adesivo para tecido colagenoso através de um processo de activação com um simples de baixa potência de laser infra-vermelho é demonstrada.

A base de quitosana, Laser Activated adesiva Thin Film cirúrgica &quot;, SurgiLux &#39;: Preparação e demonstração

Um grande obstáculo em terapias com células-tronco atuais é determinar o método mais eficaz para entregar essas células para tecidos do hospedeiro. Aqui, nós descrevemos um método de entrega de quitosana-base que é eficiente e simples na abordagem, ao mesmo tempo permitindo que as células-tronco adiposas para manter a sua multipotency.

Construindo um hidrogel de colágeno para a entrega de células-tronco carregado microesferas

Este artigo descreve uma abordagem biofabrication: deposição de estímulos responsivos polissacáridos, na presença de eléctrodos enviesados ​​para criar filmes biocompatíveis que podem ser funcionalizados com células ou proteínas. Nós demonstramos uma estratégia de bancada para a geração dos filmes assim como as suas utilizações básicas para criar superfícies interactivos biofunctionalized para lab-on-a-chip aplicações.

Colmatar a interface Bio-eletrônico com Biofabrication

Este protocolo visa aliviar a limitação do enxerto celular deficiente para o tratamento de infartos do miocárdio com células-tronco por meio do uso de um sistema de hidrogel e uma cola à base de fibrina. Com essa abordagem, o contato célula a tecido pós-infarto pode ser mantido, aumentando o potencial terapêutico de agentes benéficos no local da lesão.

Um hidrogel Construir e fibrina à base de cola Approach to Deliver Therapeutics em um Infarto do Miocárdio modelo murino.

Um andaime engenharia de tecidos injectáveis ​​compostas de poli (N-isopropilacrilamida), sulfato de condroitina--graft (PNIPAAm-g-CS) molecular contendo micropartículas de alginato foi preparada. A força de aderência, propriedades e inchaço na biocompatibilidade in vitro são analisadas neste estudo. As técnicas de caracterização desenvolvidos aqui podem ser aplicados a outros sistemas termogelificantes.

Síntese de termogelificantes poli (N-isopropilacrilamida) -graft-condroitina Composites Sulfato com alginato micropartículas para Engenharia de Tecidos

A eletroforese capilar em solução livre é um método analítico rápido, barato e robusto que permite o monitoramento quantitativo de reações químicas em tempo real. Sua utilidade para análise rápida, conveniente e precisa é demonstrada aqui através da análise de enxerto de peptídeo covalente em filmes de quitosana para melhorar a adesão celular.

Eletroforese Capilar para monitorar Peptide Enxertia em quitosana Films em Tempo real

Aqui, nós apresentamos protocolos de cultivo de esferoides da pilha do ligamento periodontal humano (PDL) por películas do quitosana. A cultura de esferoides celulares tridimensionais (3D) fornece uma alternativa ao sistema convencional da cultura do poliestireno da cultura do tecido (TCPs).

Formação de esferóides da célula do ligamento periodontal humano em filmes de quitosana

O presente protocolo descreve um método não baseado emulsão para a fabricação de microgéis de genipin quitosano. O tamanho desses microgésis pode ser precisamente controlado, e eles podem exibir inchaço dependente de pH, degradar in vivo, e ser carregados com moléculas terapêuticas que liberam ao longo do tempo de forma sustentada, tornando-os altamente relevantes para aplicações de engenharia de tecidos.

Fabricação de microgéis chitosan-genipin controlados por tamanho e sem emulsão para aplicações de engenharia de tecidos

A fração vascular estromal isolada mecanicamente (SVF) em combinação com um hidrogel de fibrina oferece um transportador fácil e eficiente para células estromais derivadas de tecido adiposo viáveis para várias indicações, incluindo engenharia de tecidos e/ou fins de cicatrização de feridas. Aqui, apresentamos a preparação de uma construção mecânica de SVF (mSVF)-hidrogel de fibrina para pesquisa translacional e aplicação clínica.

A combinação de fração vascular estromal isolada mecanicamente e hidrogel de fibrina: um protocolo de processamento

Este estudo apresenta um modelo de bancada projetado para avaliar a compatibilidade de materiais de curativos com sistemas de terapia de feridas por pressão negativa, avaliando a pressão e a coleta de fluidos ao longo de 72 h sob configurações de pressão contínua e intermitente.

Desenvolvimento de um Modelo de Bancada para Avaliação da Compatibilidade de Materiais de Curativos com Sistemas de Terapia de Feridas por Pressão Negativa

Um protocolo reprodutível é apresentado para a preparação, enriquecimento e aplicação de um hidrogel in situ de luz azul e reticulável gelatina–riboflavina para reparo de feridas estromais corneanas em coelhos, incluindo etapas procedimentais para manuseio cirúrgico, tarsórrafia parcial e cuidados pós-operatórios.

Fabricação e Aplicação Cirúrgica de Hidrogéis Enriquecidos de Gelatina–Riboflavina com Foto-Cruzamento para Reparo de Feridas Corneanas em Coelhos

Aprenda a fabricar filmes adesivos de quitosana ativados por laser com rosa bengala para reparo de nervos periféricos em ratos. Este método minimiza danos teciduais comparado às suturas tradicionais.

Fabricação e Aplicação de Rosa Bengala-quitosana Films em Reparo de Tecidos Laser

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