Transmissão de vírus de plantas Usando Whiteflies

O objetivo geral do experimento a seguir é transmitir vírus de plantas usando moscas brancas. Isso é conseguido estabelecendo e mantendo uma colônia de moscas brancas que fornecem moscas brancas adultas recém-emergidas semanalmente, que não estão contaminadas com outros vetores e patógenos potenciais. As colônias mantidas pela adição regular de moscas brancas a plantas jovens livres de insetos a partir das quais novos adultos são produzidos.

Após 17 a 20 dias por semana, os adultos recém-emergidos podem ser transferidos para plantas de teste para adquirir ou transmitir a transmissão do vírus. Eficiências de quase 100% são obtidas normalmente, e as taxas de transmissão geralmente começam baixas e sobem com otimização sistemática. O aspecto mais desafiador do uso de moscas brancas para inocular vírus é criar as moscas brancas de forma que patógenos e insetos indesejados sejam excluídos.

Patógenos, particularmente fungos de apodrecimento de raízes e ferrugem das folhas, reduzirão a qualidade das plantas hospedeiras do vírus. Insetos indesejados, como parcimônias, podem suprimir a reprodução da mosca-branca, bem como comprometer a qualidade da planta hospedeira do vírus. Demonstrando os procedimentos estará Heather Capa Bianco, técnica do meu laboratório.

As colônias de mosca-branca devem ser mantidas em uma sala de crescimento limpa e controlada. O controle da umidade relativa, temperatura, fotoperíodo e intensidade da luz são essenciais para uma colônia que se desenvolve do ovo ao adulto em 18 dias, use as seguintes configurações. A temperatura deve ser ajustada entre 26 e 30 graus Celsius, e a umidade relativa deve estar idealmente entre 30 e 50%Se a umidade relativa ultrapassar 70%patógenos de insetos e fungos de plantas provavelmente se tornarão um problema.

O período ideal para fotos é de 14 horas. A intensidade da luz deve ser bastante alta, e as lâmpadas fluorescentes VHO podem produzir velas de 800 a 1000 pés no dossel da planta. As taxas de fertilizantes e rega também devem ser reduzidas para desencorajar patógenos fúngicos, bem como o acúmulo de sal As gaiolas brancas devem permitir ventilação, facilidade de acesso e espaço suficiente para uma população crescente de brancos.

Bons resultados foram obtidos com organza de órgãos mais triagem de alumínio, bem como prova de branco A triagem das espécies de plantas é uma consideração importante. Em primeiro lugar, deve crescer rapidamente, mas não crescer demais na câmara. Em segundo lugar, a planta deve ser forte o suficiente para suportar uma alta população de insetos sem entrar em colapso.

Por essas razões, cultivares anãs ou arbustivas são boas escolhas de plantas. Em terceiro lugar, a planta deve ser capaz de hospedar ou não hospedar o vírus que está sendo usado, dependendo do tipo de colônia que está sendo criada. Como a colônia pode entrar em colapso devido a ácaros, THPs, moscas brancas selvagens ou outros insetos invasores, as cultivares escolhidas devem ser cultivadas em um ambiente protegido para excluir outros insetos.

As primeiras moscas brancas de uma nova colônia devem estar livres de vírus de plantas, outros insetos e patógenos de insetos. Se as moscas brancas forem coletadas no campo, crie-as por pelo menos oito semanas em plantas que não são hospedeiras do vírus durante esse período, verifique se há ausência de sintomas da planta. Uma vez obtidas as moscas brancas limpas, introduza entre 20 e 100 em uma gaiola de plantas por aspiração ou sacudindo-as suavemente de outra planta de origem.

Toda semana uma nova gaiola precisa ser estabelecida. Nas primeiras três semanas, use as moscas brancas em plantas não ST para estabelecer a nova gaiola. A partir da quarta semana, use moscas-brancas adultas jovens da gaiola de três semanas para estabelecer a próxima gaiola.

Durante a primeira semana em uma gaiola, as moscas brancas põem ovos na parte inferior das superfícies das folhas das plantas. Na segunda semana, moscas brancas imaturas se tornarão aparentes e alguns dos adultos ainda estarão vivos. Na terceira semana, muitas novas moscas brancas adultas terão surgido, e deve haver um aumento muito perceptível na população adulta de mosca-branca.

Essas moscas brancas podem ser usadas para experimentos de transmissão. Na quarta semana, os adultos de uma semana devem ser transferidos para uma nova gaiola. A gaiola velha deve ser removida e suas plantas descartadas. Preciso.

A transferência suave de moscas brancas é realizada com um dispositivo de aspiração e frascos de coleta que nunca aspiram. As moscas brancas que se alimentam de plantas ao alimentar os estilos brancos estão embutidas na planta e se quebram se forem puxadas para longe da planta. Tornando a mosca-branca inútil para coletar moscas brancas com uma mão, segure uma proteção de plástico amarelo dentro da gaiola da colônia com a outra mão.

Bata suavemente nas plantas para encorajar as moscas brancas adultas a voar. As moscas brancas serão atraídas para o cartão amarelo, onde podem ser coletadas. Usando o aspirador e uma sucção muito suave, adicione não mais do que 20 moscas brancas a cada frasco de coleta.

Em seguida, bata no frasco para desorientar as moscas e tampe o frasco com param. Para garantir uma transmissão viral bem-sucedida, experimente de 15 a 40 adultos jovens de plantas infectadas por vírus para plantas saudáveis, dependendo do vírus e da planta hospedeira. Outros protocolos, como triagem resistente, precisam de populações iniciais maiores.

Nesse caso, agite as plantas infectadas pelo vírus, que estão infestadas de moscas brancas sobre as plantas que precisam ser inoculadas. Uma vez que as moscas brancas são colocadas em uma planta infectada por vírus, deixe-as se alimentar por 48 a 72 horas para adquirir vírus transmitidos persistentemente. Mais tempo geralmente não aumenta a taxa de transmissão de vírus transmitidos de maneira não persistente ou persistente

Um período de acesso de aquisição mais curto de uma hora a um dia será suficiente para experimentos que requerem aquisição de folhas específicas. Gaiolas de clipe podem ser usadas, configure a gaiola de forma que a parte inferior da folha fique acessível e não use mais de 10 moscas brancas fêmeas por gaiola de 2,5 centímetros de diâmetro, ou a taxa de transmissão cairá devido à aglomeração. Para inoculação de plantas, selecione a gaiola apropriada considerando o número de plantas.

Uma planta, por exemplo, precisa apenas de uma pequena gaiola um pouco maior do que ela para várias plantas, escolha entre um tubo de PVC menor, gaiola emoldurada ou uma gaiola maior com estrutura de alumínio. Quanto menor o espaço ao redor da copa da planta, melhor. Uma vez que as moscas brancas são adicionadas à nova planta, a quantidade de tempo necessária para a inoculação depende do vírus e da planta hospedeira.

Assim como para a aquisição, a quantidade de tempo necessária para a transmissão depende da forma de transmissão. A transmissão não persistente requer um tempo de acesso muito mais curto do que a transmissão semi-persistente ou persistente. Verifique se as moscas-brancas estão sondando ou se alimentando durante o período de acesso à inoculação.

Abra a gaiola e investigue a parte inferior de algumas folhas de cada planta. Para a inoculação mais longa. Os períodos de acesso perturbam periodicamente suavemente as plantas para incentivá-las a redistribuir nas plantas.

Isso aumentará a taxa de transmissão, contrariando as tendências naturais das moscas brancas de se agregarem para encerrar o período de inoculação. Mate as moscas brancas com dois inseticidas aplicados, um após o outro. Primeiro, aplique um inseticida de contato para eliminar rapidamente as moscas brancas adultas, como o sabão inseticida.

Em segundo lugar, aplique um inseticida sistêmico para acabar com as moscas brancas que se desenvolverem nas semanas seguintes. E quaisquer adultos restantes emitem, árido ou pirazina são escolhas eficazes. Usando esses procedimentos, é possível obter rotineiramente taxas de transmissão de vírus de 100%Essas altas taxas de transmissão são essenciais na triagem de plantas de teste para resistência a vírus e são desejáveis ao avaliar a eficácia de compostos químicos quanto à sua capacidade de interferir na transmissão do vírus.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como criar moscas brancas e usá-las para transmitir vírus de plantas. Esses procedimentos podem ser usados para fins de pesquisa ou para o desenvolvimento comercial de plantas resistentes a vírus, ou para o teste de compostos quanto à sua capacidade de interferir na transmissão do vírus.