Name: Luminescência de Cerenkov Imaging (CLI) para o Monitoramento Terapia de Câncer (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 45 s
Description: Aprenda a usar a imagem por luminescência de Cerenkov para monitorar terapia do câncer em camundongos com xenotransplantes de células H460. Este método oferece alternativa de baixo custo ao PET para estudos pré-clínicos.

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Reconhecemos o apoio do Instituto Nacional do Câncer (NCI) R01 CA128908 e Stanford Medical Research Scholar Fellowship. Nenhum outro conflito potencial de interesse relevante para este artigo foi relatado.

1. Modelo de Tumor <ol><li> Cultura de células H460 (American Type Culture Collection) em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino e 1% de penicilina / estreptomicina (Invitrogen Life Technologies). Deve notar-se que as escolhas de linhas celulares, meios de cultura, os locais de inoculação, o número de xenoenxertos por rato, e outras considerações são todos de ser adaptado para os objectivos de um determinado estudo. Aqui vamos apresentar apenas um projeto de projeto específico para servir como uma ilustração. </li><li> Manter as linhas de células numa atmosfera humidificada de 5% de CO2 a 37 ° C e de mudança para meio fresco todos os dias. </li><li> Quando uma monocamada confluente a 75% das células é formada, separar a monocamada com tripsina e dissociam-se as células numa suspensão de células individuais para a cultura da célula. </li><li> Suspender a cerca de 1 x 10 6 células H460 em tampão fosfato salino (PBS; Invitrogen) e o implante por via subcutânea emombros esquerdo e direito de ratinhos nus do sexo feminino (ratinhos nus atímicos (nu / nu), 4 - 6 semanas de idade, Charles River Laboratories, Inc.). </li><li> Permitir o crescimento dos tumores de 150-200 mm 3. Demora cerca de 2 semanas para xenoenxertos de tumores H460 a crescer a este tamanho. Padrão paquímetro medição é realizada para acompanhar os tamanhos tumorais. </li><li> Quando os tumores atingem o tamanho ideal os ratos portadores do tumor está agora pronto para o tratamento in vivo e imagiologia por PET e CLI. </li></ol> 2. PET <ol><li> Realizar os estudos de PET de acordo com esse cronograma ou qualquer variação do mesmo, dependendo do projeto específico (Figura 1) 12. Um certo número de factores podem influenciar o desenho da agenda, incluindo, mas não limitado a, a escolha de linhas de xenoenxertos de células de tumor, fármacos anti-cancerígenos, e regimes de dosagem. Aqui vamos apenas apresentar um cronograma de imagem específico. Os estudos da CLI devem ser realizadas de acordo com omesmo esquema como os dos estudos de PET, com CLI realizada imediatamente após o PET correspondente. Deve ser também notado aqui que o objectivo dos estudos de PET-se principalmente para a validação dos resultados de CLI. Para usuários comuns, que só querem usar instrumentos OI para testes de imagem radiomarcados, não PET é necessário. No entanto, se faz uma validação PET desejo deve sublinhar-se que os instrumentos de PET e CLI deve ser localizada dentro de uma proximidade muito estreita para a validação para ser bem sucedido por causa da meia-vida curta de 18 F (109,77 min). </li><li> Divida ratos em grupos de tratamento e controle (n ≥ 3 cada). Tratar os ratos no grupo de tratamento com 2 injecções de bevacizumab de 20 mg / kg nos dias 0 e 2. Dia 0 é definido pela primeira injecção. Note-se que no dia -1 um pré-scan deve ser realizada através de PET e CLI. </li><li> Pequenos animais PET de ratos portadores de tumores é para ser realizado com um aparelho de modelo de roedor R4 (Siemens Medical Solutions EUAA Inc.,). </li><li> Anestesiar os ratos com 2% de isoflurano (Aerrane, Baxter) e injectar com 3&#39;-desoxi-3&#39;-18 F-fluorotimidina (18 F-FLT; 7,3-8,0 MBq [198-215 | iCi]) através da veia da cauda. A sonda de PET deve ser diluído em PBS antes da injecção. </li><li> Depois de 1 hora, anestesiar ratos e coloque novamente anestesiados ratos propensos e próximo do centro do campo de visão do scanner PET pequenos animais. </li><li> Obter três minutos exames estáticos e reconstruir as imagens por um 2-dimensional algoritmo de máxima ordenada subconjuntos expectativa. Correção de fundo não é necessário. </li><li> Desenhe regiões de interesse (ROIs; 5 pixels para cortes coronais e transaxial) nos tumores no decaimento-corrigidas de corpo inteiro imagens coronais. Obter as contagens máximas por pixel por minuto a partir da ROIs e converter em unidades de contagem por mililitro por minuto por utilização de uma constante de calibração. Com o pressuposto de uma densidade de tecido de 1 g / ml, para converter o ROIs contagenspor grama por minuto. Determinar ROI imagem derivados% ID / g valores dividindo contagens por grama por minuto pelo dose injectada. Correção de atenuação não é necessário. </li></ol> 3. CLI <ol><li> CLI é para ser realizado com um sistema IVIS Spectrum (Caliper Life Sciences). A aquisição e análise de imagens são para ser efectuados utilizando Vivo Imagem 3.0 software (Caliper Life Sciences). Wavelength-resolved imagem espectral é para ser realizado utilizando um conjunto de 18 de emissão de banda estreita do filtro (490-850 nm). Mais uma vez, para cada rato, imediatamente depois de executar CLI PET para minimizar a quantidade de decaimento radioactivo se os estudos de PET são incluídos no protocolo. </li><li> Coloque os animais em uma câmara à prova de luz com anestesia isoflurano. Ratinhos múltiplos podem ser colocados simultaneamente para aumentar o rendimento. </li><li> Aquisição de imagens utilizando o tempo de exposição 3 min (f / stop = 1 binning, = 4). Use as configurações de iluminação mesmo (tensão da lâmpada, filtros, f / stop, campos de visão, binning) para adquirir todas as imagens. Usar a área da pele dorsal para calcular a intensidade do sinal do tecido de fundo. Normalizar emissão de fluorescência de fótons por segundo por centímetro quadrado por esterradiano (p / s / cm 2 / sr). </li></ol> 4. Resultados representativos Comparação visual entre CLI e imagens de PET podem ser facilmente realizados. Após a barra de unificar escala através de imagens da mesma modalidade e local CLI e PET imagens lado a lado, uma pode ver neste painel representativo (Figura 2A) que tanto CLI e PET revelou sinais diminuiu significativamente de H460 xenoenxertos em camundongos tratados de pré-tratamento ao dia 3, o que sugere efeito terapêutico significativo. Como comparação, moderadamente aumentado de sinais inalterados foram observados em ratinhos não tratados, durante o mesmo período de tempo (dados não mostrados). Por inspecção visual sozinho pode-se observar que existe uma boa consistência entre contrastes tumorais que são visualzada de CLI e PET. Na verdade, essa correlação visual tem resolução suficiente para mostrar necrose central do tumor secundário para o regime de tratamento anticâncer (por favor, comparar o CLI e imagens de PET a partir do dia 3). Para validar os resultados das quantificações de imagem e análise de correlação pode ser realizada. Quantificações de CLI e imagens de PET e uma montagem simples através de regressão linear mostrou que as duas modalidades de facto tinha uma excelente correlação (Figura 2B, R 2 = 0,9309 durante 18 F-FLT sondado grupo de tratamento). Notavelmente, em todos os nossos CLI e estudos de imagem PET com diferentes modelos de tumores e de diferentes fármacos anticancerígenos as inclinações das convulsões são também extremamente estreita, sugerindo assim uma excelente combinação de regressão linear mesmo de todos os dados são conglomerados (dados não mostrados). Ambas as imagens representativas são adaptados a partir de nossa publicação anterior 12. er.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4341/4341fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. Esquemática do delineamento experimental de estudos de PET e CLI. Os tumores foram implantados bilateralmente na região do ombro e deixadas a crescer até 150-200 mm 3, e ratos portadores de tumor foram submetidos a imagiologia in vivo por meio de PET e CLI no dia -1, 1 e 3. Bevacizumab tratamento foi realizado por duas injecções de 20 mg / kg nos dias 0 e 2. <img src="/files/ftp_upload/4341/4341fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. (A) In vivo CLI e imagens PET de ratinhos portadores de xenoenxertos H460 tratadas com Bevacizumab antes do tratamento (pré-scan) e após o tratamento (dia 3). (B) análise quantitativa correspondente da CLI e PET resultados (n = 3) e os seus correlações. Imagens adaptada a partir de (6).arge.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; Clique aqui para ver maior figura.

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<li>Holland, J. P., Normand, G., Ruggiero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraoperative+imaging+of+positron+emission+tomographic+radiotracers+using+Cerenkov+luminescence+emissions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Intraoperative imaging of positron emission tomographic radiotracers using Cerenkov luminescence emissions.</a> Mol. Imaging. 10 (3), 177(2011).</li>
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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

CLI está emergindo como uma técnica de imagem molecular promissor que tem encontrado em muitos potenciais aplicações das ciências básicas de pesquisa e até mesmo o uso clínico 4,5,15,16,17. As principais vantagens do CLI mais tradicionais modalidades de imagens nucleares, tais como tronco a partir de PET da utilização de instrumentos OI, que são mais fáceis de usar, caracterizados por tempo de aquisição curto e alta taxa de transferência, significativamente menos caras, e mais amplamente disponível para pesqu...

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strongNome&gt;</strong</td&gt;<td<strong&gt; Empresa</strong</td&gt;<td<strong&gt; Número de catálogo</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Linha Celular H460</td&gt;<td&gt; American Type Culture Collection</td&gt;<td&gt; Número ATCC: HTB-177</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; RPMI 1640</td&gt;<td&gt; Invitrogen Life Technologies</td&gt;<td&gt; 12633-012</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Soro Fetal Bovino</td&gt;<td&gt; Invitrogen Life Technologies</td&gt;<td&gt; 10091-148</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Penicilina / Estreptomicina</td&gt;<td&gt; Invitrogen Life Technologies</td&gt;<td&gt; 15640-055</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Salina tamponada com fosfato</td&gt;<td&gt; Invitrogen Life Technologies</td&gt;<td&gt; 10010-023</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Fêmea atímicos camundongos nude</td&gt;<td&gt; Charles River Laboratories, Inc.</td&gt;<td&gt; Código de tensão: 088</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Bevacizumab (Avastin)</td&gt;<td&gt; Genentech / Roche</td&gt;<td&gt; N / A</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Roedor MicroPET R4</td&gt;<td&gt; Siemens Medical Solutions EUA, Inc.</td&gt;<td&gt; N / A</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isoflurano (Aerrane)</td&gt;<td&gt; Baxter</td&gt;<td&gt; Número Baxter: AHN3637</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; IVIS Spectrum</td&gt;<td&gt; Caliper Life Sciences</td&gt;<td&gt; N / A</td&gt;</tr&gt;</table

luminescência de cerenkov imaging (cli) para o monitoramento terapia de câncer

Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for Cancer Therapy Monitoring

Em imagiologia molecular, positron emission tomography (PET) e imagiologia óptica (OI) são duas das modalidades mais importantes e, portanto, mais amplamente utilizado 1-3. PET é caracterizado pela sua excelente sensibilidade e capacidade de quantificação, enquanto OI é notável para a radiação de não-, relativo baixo custo, o tempo de verificação de curto, com rendimento elevado, e a disponibilidade de largura de pesquisadores básicos. No entanto, ambas as modalidades têm suas deficiências também. PET sofre de resolução espacial pobre e de custo elevado, enquanto que a OI é principalmente limitada a aplicações pré-clínicos devido à sua penetração nos tecidos limitada, juntamente com os sinais de espalhamento proeminentes ópticas através da espessura de tecidos vivos. Recentemente, uma ponte entre o PET e OI surgiu com a descoberta de luminescência de Cerenkov Imaging (CLI) 4-6. CLI é uma nova modalidade de imagem que utiliza radiação de Cerenkov (CR) para radionuclídeos de imagem com instrumentos OI. Nobel russo laurEATE Alekseyevich Cerenkov e seus colegas originalmente descoberto CR em 1934. É uma forma de radiação electromagnética emitida quando uma partícula carregada viaja a uma velocidade superluminal num meio dieléctrico 7,8. A partícula carregada, se pósitron ou elétron, perturba o campo eletromagnético do meio, deslocando os elétrons em seus átomos. Depois de passar dos fótons de ruptura são emitidos como os elétrons deslocados retornar ao estado fundamental. Por exemplo, um decaimento F 18 foi estimada para produzir uma média de 3 fotões em água 5. Desde o seu aparecimento, CLI tem sido investigada para o seu uso numa grande variedade de aplicações, incluindo pré-clínicos em imagiologia de tumores in vivo, do gene repórter de imagem, radiofármaco desenvolvimento, multimodalidade de imagem, entre outros 4,5,9,10,11. A razão mais importante pela qual CLI tem desfrutado de muito sucesso até agora é que esta nova tecnologia aproveita o co baixoº e ampla disponibilidade de OI para radionuclídeos de imagem, que costumavam ser fotografada apenas pelo mais caro e menos disponível modalidades de imagens nucleares, tais como PET. Aqui, apresentamos o método de usar CLI para monitorar câncer de terapia medicamentosa. Nosso grupo foi recentemente investigado esta nova aplicação e validada a sua viabilidade através de um estudo de prova de conceito-12. Nós demonstramos que a CLI e PET apresentaram excelentes correlações através de xenotransplantes tumorais diferentes e sondas de imagem. Isto é consistente com o princípio fundamental da CR que CLI essencialmente visualiza os radionuclídeos mesmas PET. Foram selecionados Bevacizumab (Avastin, Genentech / Roche) como o agente terapêutico porque é um inibidor da angiogénese bem conhecido 13,14. Maturação desta tecnologia no futuro próximo pode ser vislumbrada a ter um impacto significativo no desenvolvimento de medicamentos pré-clínico, triagem, bem como a monitorização terapêutica de pacientes que recebem tratamentos.

Uso de luminescência de Cerenkov Imaging (CLI) para monitorar o tratamento de câncer pré-clínico é descrito aqui. Este método tira vantagem da radiação Cerenkov (CR) e imagiologia óptica (OI) para visualizar sondas marcadas radioactivamente e, assim, fornece uma alternativa ao PET na monitorização terapêutica pré-clínica e triagem de drogas.

Luminescência de Cerenkov Imaging (CLI) para o Monitoramento Terapia de Câncer

Na imagem molecular, a tomografia por emissão de pósitrons (PET) e a imagem óptica (OI) são duas das modalidades mais importantes e, portanto, mais amplamente utilizadas1-3. ...

O objetivo geral deste procedimento é utilizar a imagem de luminiscência OV para monitorar a terapia contra o câncer em camundongos portadores de tumor. Isso é realizado primeiramente cultivando xenografias tumorais subcutâneas para os grupos de tratamento e controle. O segundo passo é realizar estudos de PET em pequenos animais para fins de validação.Em seguida, os estudos de imagem óptica são realizados imediatamente após os estudos de PET. O passo final envolve a quantificação das imagens de PET e CLEA e a subsequente validação cruzada das duas modalidades de imagem. Por fim, os resultados são obtidos para demonstrar que a CLEA é uma alternativa viável ao PET no monitoramento da terapia pré-clínica de fármacos contra o câncer.A principal vantagem da técnica chamada Luce Imaging ou argila em comparação com as modalidades de imagem nuclear existentes, como a PET, é que a argila aproveita o menor custo e a ampla disponibilidade de instrumentos de imagem óptica para visualizar radionuclídeos, os quais só podiam ser visualizados por modalidades de imagem nuclear no passado. As implicações dessa técnica estendem-se a aplicações pré-clínicas, como triagem de fármacos contra o câncer, g

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Research

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Medicine

Medicina

Luciferase modificados xenotransplantes tumorais humanos cerebral intracraniana pode ser estabelecida em camundongos atímicos, com posterior acompanhamento do crescimento tumoral e resposta à terapia com imagem de bioluminescência. Em combinação com a análise de sobrevivência, o monitoramento bioluminescência é uma ferramenta de pesquisa essencial para ensaios pré-clínicos de terapias sendo considerado para o tratamento de tumores cerebrais.

Estabelecer xenoenxertos tumor intracraniano Cérebro com posterior análise do crescimento tumoral e resposta à terapia com imagem Bioluminescência

Um modelo de camundongo experimental de metástase óssea foi estabelecido após a entrega intracardíaca da luciferase expressando células tumorais mamárias. Desenvolvimento do tumor e resultou lesão osteolítica foram monitorados longitudinalmente, com a bioluminescência e CT micro imagem.

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Imagem Química de Alta Resolução Espacial de Infecções Associadas a Implantes com Luminescência Expedida por Raios-X Imagem Química Através do Tecido

Este protocolo descreve um ensaio baseado em BRAKET para medir as interações da quinase CRAF com proteínas 14-3-3 em células vivas. O protocolo descreve as etapas para preparar as células, ler as emissões de BRET e analisar dados. Um exemplo de resultado com identificação de controles apropriados e solução de problemas para otimização de ensaio também é apresentado.

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Aprenda a usar a imagem por luminescência de Cerenkov para monitorar terapia do câncer em camundongos com xenotransplantes de células H460. Este método oferece alternativa de baixo custo ao PET para estudos pré-clínicos.

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