O Paradigma Residente-intruder: um teste padronizado para Agressão, Violência e Estresse social

O objetivo geral deste procedimento é provocar de forma confiável comportamento agressivo ofensivo em ratos machos. Em um ambiente de laboratório, o primeiro passo é alojar um rato macho adulto junto com uma fêmea esterilizada por um período de pelo menos uma semana. No dia do teste, equipamentos de gravação em vídeo são posicionados para registrar a interação social.

Em seguida, a fêmea companheira é removida da gaiola quando pronta, um rato macho desconhecido é introduzido na gaiola do macho residente e ambos têm permissão para interagir por 10 minutos. Em última instância, o procedimento tem como objetivo a criação e manutenção de um território pelo macho residente, que ele está disposto a defender contra intrusos. A força do método reside no fato de permitir a análise do comportamento social natural em um ambiente de laboratório, não apenas no macho residente, mas também no intruso.

Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais sobre a neurobiologia e a neurofarmacologia ou a agressão funcional biológica, bem como a violência como patologia da agressão. A técnica pode ser utilizada para estudar as consequências do estresse social agudo ou crônico no invasor. Observe que o paradigma residente-invasor não está isento de preocupações éticas.

O sofrimento grave pode ocorrer no potencial macho intruso. O sofrimento animal deve sempre ser equilibrado com os objetivos científicos principais do experimento. A agressão ofensiva é um comportamento altamente ativo e, portanto, é necessário espaço suficiente para sua expressão completa.

Para obter resultados ideais, utilize gaiolas de residentes com pelo menos meio metro quadrado de área para facilitar o desenvolvimento da territorialidade e reduzir o isolamento social. Mantenha cada residente com uma fêmea por pelo menos uma semana antes do início do experimento. Utilize fêmeas companheiras estéreis, mas com hormônios intactos.

Isso garantirá que a fêmea seja receptiva sem engravidar e desenvolver agressividade materna. Como a territorialidade baseia-se fortemente na presença de pistas olfativas, não troque a cama da gaiola antes ou durante os testes. O animal invasor utilizado nos estudos a seguir deve ser de uma linhagem não agressiva e com peso corporal ligeiramente inferior ao do macho residente.

Embora a agressividade possa ocorrer a qualquer hora do dia, é melhor testar durante a fase escura, quando o rato está mais ativo. Uma hora antes do teste, remova a fêmea companheira da gaiola do animal residente. Configure uma câmera de vídeo sensível à luz para gravar o comportamento do residente para análise futura.

Para iniciar o teste, introduza um intruso macho desconhecido na gaiola doméstica do animal residente. Observe a interação comportamental entre eles por 10 minutos. Comportamentos ofensivos, bem como comportamentos sociais, são registrados.

É mostrado aqui o comportamento de empinamento e o comportamento de movimentação em direção. Esta é a ameaça lateral. Este é o ataque de agarramento, e esta é uma perseguição demonstrada.

Aqui ocorre um período de exploração social seguido por um ataque de agarramento. Há alguma investigação olfativa anogenital. Agora, uma rata avança em direção à outra.

Este é o comportamento de manter-se abaixado. Aqui está uma postura ereta. Este comportamento é a ameaça lateral.

Observe os pelos eretos ou ereção piloereta no macho residente, seguidos pela postura ereta e alguma exploração não social. Remova o macho intruso da gaiola ao final do teste e reintegre o macho residente à sua fêmea companheira. Os dados são analisados reproduzindo o vídeo e pontuando os comportamentos com software especializado para medir comportamentos agressivos.

Introduza um intruso conforme mostrado anteriormente e determine a latência de ataque do macho residente. Uma latência muito curta é um primeiro indicador de violência. Ataques por mordida direcionados a partes vulneráveis do corpo, como a garganta, o abdômen e a pata, também são sinais de mordidas violentas.

Direcionados ao focinho do oponente indicam comportamento defensivo do agente. No caso de um ferimento grave em partes corporais vulneráveis, o experimento deve ser interrompido. Dependendo da gravidade.

Isso pode ser considerado um critério humano de encerramento do experimento, ou o invasor deve receber os devidos cuidados médicos. Além disso, o comportamento violento é demonstrado quando um macho residente ataca um macho invasor anestesiado. O teste com um macho anestesiado pode ser interrompido assim que o residente realizar o ataque.

O comportamento agressivo do residente também pode ser testado em um ambiente novo. A ausência de mudança na agressividade em comparação com a gaiola de origem é um sinal de violência. Para começar, selecione um macho residente bem treinado, altamente agressivo e não violento e siga o protocolo demonstrado anteriormente.

Observe o intruso quanto a diversos comportamentos. Após um período de exploração não social, um dos camundongos afasta-se do outro, comporta-se de maneira submissiva e foge. É mostrada aqui uma postura ereta defensiva.

Após o teste, devolva o intruso à sua gaiola de origem e calcule a pontuação total de defesa, que é a soma do tempo gasto em fuga, postura defensiva ereta, submissão e imobilidade. O estresse social é induzido seguindo o mesmo protocolo para estresse social crônico.

Mantenha o intruso na gaiola do residente, mas separado do residente por uma tela perfurada. Esta figura mostra a distribuição de frequência do escore de agressão ofensiva em uma linhagem selvagem originalmente feral de laboratório, e uma linhagem mais comum de ratos de laboratório na linhagem selvagem, em que cerca de um terço dos animais são extremamente agressivos, enquanto o fenótipo altamente agressivo está ausente em ratos Wistar. Este exemplo mostra a distribuição de diferentes categorias comportamentais no paradigma de intruso residente utilizando a linhagem WTG como residentes e os ratos Wistar como intrusos.

Aqui, o paradigma do intruso residente é utilizado em conjunto com a farmacologia comportamental. O agonista seletivo do receptor de serotonina 1A, Alna spiron, induz uma redução dependente da dose na agressão ofensiva, que é acompanhada por um aumento dependente da dose na exploração social. Em alguns indivíduos, a agressão ofensiva pode intensificar-se numa forma violenta de agressão.

A forma violenta de agressão caracteriza-se por ataques muito curtos, latência de ataque a um macho anestesiado ou uma fêmea com ferimentos graves, e uma razão muito baixa de ataques ameaçadores. Ao utilizar este procedimento para estresse social, é importante usar uma linhagem agressiva de ratos como residentes.

Você deve selecionar indivíduos que apresentem agressão ofensiva durante pelo menos 30% do tempo do teste. Após assistir a este vídeo, você deverá ser capaz de identificar corretamente todos os comportamentos realizados tanto pelo residente quanto pelo intruso. Além disso, você deverá ser capaz de reconhecer a violência.

Não se esqueça de que trabalhar com o paradigma do intruso residente não está isento de preocupações éticas. O sofrimento do macho intruso deve sempre ter uma relação clara com os objetivos principais do experimento.