Procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de Transplante de Fígado parcial ortotópico com reconstrução arterial hepática

O objetivo geral deste procedimento é realizar o transplante hepático ortotópico parcial em ratos como um modelo experimental reprodutível para pesquisa em transplantes. Isso é realizado primeiramente pela explicação do fígado do rato doador. O segundo passo é o preparo do enxerto hepático ex vivo, incluindo uma ressecção de 50% do fígado.

Em seguida, o fígado nativo da rata recebedora é removido. O passo final é o implante do enxerto hepático parcial na rata recebedora. Por fim, são medidos os níveis séricos de alanina aminotransferase para avaliar o dano hepatocelular ao enxerto hepático após o transplante.

Em geral, indivíduos novos neste procedimento enfrentam dificuldades devido à complexidade do processo, que exige habilidades microcirúrgicas avançadas. Para iniciar este procedimento, posicione a rata anestesiada sobre uma placa aquecida após confirmar, por meio de um aperto no dedo do pé, que o animal está completamente anestesiado, e fixe os membros superiores utilizando o sistema magnético de retração e fixação. Remova a pelagem de toda a região abdominal da rata e esterilize a pele correspondente com uma solução de poviodina.

Abra o abdômen por meio de incisão mediana com extensões bilaterais. Coloque uma seringa de cinco mililitros sob as costas da rata, de modo que a veia cava supra-hepática seja elevada ventralmente usando uma pinça tipo mosquito, puxe o processo em direção à cabeça e aplique os retratores subcostais para abrir o campo cirúrgico. Devido à necessidade de manipular frequentemente os retratores e a seringa de cinco mililitros durante o procedimento, campos cirúrgicos não são utilizados ao redor da incisão; trabalhe sob microscópio cirúrgico com ampliação de 16 vezes, disseque o ligamento falciforme e o ligamento triangular esquerdo em formato de oito, divida a veia frênica esquerda e retraiam os lobos mediano e lateral esquerdo para cima com uma compressa úmida.

Usando pinça bipolar, coagule e seccione os vasos paraesofágicos entre o lobo lateral esquerdo e o lobo coordenado anterior. Retire os intestinos da cavidade abdominal para o lado esquerdo da rata e cubra-os com uma compressa úmida. Limpe e retrai o lobo lateral direito para cima com uma compressa úmida.

Isolar a veia cava infra-hepática do tecido retroperitoneal e ligar a veia adrenal direita, que será seccionada posteriormente pouco antes da remoção do enxerto para inserir um stent no ducto biliar; primeiramente, ligar o ducto biliar ao nível da bifurcação da artéria gastroduodenal. Fazer uma pequena incisão na parede anterior do ducto biliar proximal ao ponto ligado, então, enquanto segura a parede anterior da incisão com uma pinça microcirúrgica reta na mão esquerda, usar uma pinça microcirúrgica curva na mão direita para inserir um stent no ducto. Fixá-lo com um fio de seda seis zero.

Mantenha uma das extremidades cortadas do fio no ducto biliar com um comprimento de quatro milímetros, para que o fio possa ser segurado durante a posterior anastomose. Libere a veia porta das veias esplânicas ligando e dividindo-as; ligue e divida a artéria gastroduodenal. Em seguida, isole a artéria hepática comum da cabeça pancreática até sua raiz.

Gire o fígado para o lado direito com cotonetes e dissecione o ligamento ao redor da parte posterior do fígado e do esôfago ao final dos preparos. Para a excisão hepática. Remova os retratores, a pinça hemostática para o processo xifoide e a seringa de cinco mililitros localizada sob a parte posterior do rato.

Retorne os intestinos à cavidade abdominal. Injete 500 UI de heparina sódica em dois mililitros de solução salina normal através da veia peniana. Cerca de três minutos depois, reposicione a seringa de cinco mililitros, a pinça hemostática e o afastador para ligar a artéria hepática comum proximal à sua raiz.

Mantenha uma das extremidades cortadas do fio ligada para a artéria hepática comum. Muito tempo após a clampeadura da veia cava infra-hepática. Próximo à veia renal direita com uma pinça mosquito.

Prenda a veia porta com uma pinça descartável para microvasos abaixo do coto da veia esplênica. Incise a parede anterior da veia porta e insira um cateter de calibre 18 na veia porta. Perfunda o fígado in situ com 60 mililitros de solução fria de histidina, triptofano e alfa-cetoglutárico.

Com uma pressão hidrostática de 20 centímetros, a água cortou imediatamente o diafragma, a veia cava intratorácica e a parede anterior da veia cava infra-hepática, permitindo que a solução de perfusão fosse lavada para fora do fígado. Prenda a veia cava infra-hepática com uma pinça para microvasos logo abaixo do fígado. Remova o fígado dissecando a veia cava infra-hepática.

A veia porta, o diafragma, os ligamentos remanescentes, a veia adrenal direita e a artéria hepática comum. Coloque o fígado ressecado em solução HTK fria dentro de um copo metálico acondicionado numa caixa plástica cheia de gelo triturado org. Os procedimentos para o enxerto hepático são realizados no copo metálico preenchido com solução HTK gelada para a fixação de um manguito à veia porta: prenda o tronco venoso porta com um clamp DeBakey em formato de clipe e posicione o clamp em posição de ponte sobre o copo.

Passe a veia porta pela cânula e prenda novamente a veia al juntamente com a extensão da cânula na posição das 12 horas; vire a parede da veia porta sobre a cânula para posicionar o coto da veia esplênica fora da cânula na posição das sete horas e fixe a veia porta com um fio de seda seis zero para inserir uma endoprótese na artéria hepática. Fixe o fígado prendendo ambas as bordas do diafragma com pinças e estique a artéria hepática comum segurando o fio laqueado com o clamp DeBakey em formato de bulldog e com tesoura microcirúrgica reta. Faça uma pequena incisão na parede anterior da artéria hepática comum com a mão esquerda.

Segure a parede anterior da incisão com uma pinça microcirúrgica reta e, com a mão direita, insira um stent na artéria hepática comum. Usando uma pinça microcirúrgica curva, fixe o stent com um fio de seda seis zero e mantenha uma das extremidades cortadas do fio com um comprimento de quatro milímetros. Lave o fígado através do cateter arterial com cinco mililitros de solução HTK fria para a ressecção de 50% do fígado.

Primeiro, prenda o lobo da coordenada posterior com uma pinça de mosquito para fixá-lo no lugar. Em seguida, ligue seu pedículo com um fio de seda quatro zero e resseque o lobo.

O lobo corado anterior é removido da mesma maneira. Em seguida, gire a caixa de plástico em 90 graus. Prenda a borda direita do diafragma e a porção esquerda do lobo mediano.

Realize uma pequena incisão na borda superior da região que separa as porções bilaterais do lobo medial e, em seguida, remova a porção esquerda após a ligadura. Após a ligadura do pedículo com fio de seda 4-0, remova o lobo lateral esquerdo e cauterize cuidadosamente a superfície hepática ressecada com pinça bipolar. A massa hepática agora está reduzida em aproximadamente 50% para a plastia da veia cava supra-hepática.

Primeiro, fixe a posição do fígado prendendo ambas as bordas do diafragma com uma pinça mosquito. Em seguida, retire a parede anterior da veia cava supra-hepática removendo o diafragma correspondente. Prenda duas suturas de polipropileno 7-0 do lado externo para o interno em ambos os cantos como pontos de espera para a anastomose posterior.

Em seguida, retire cuidadosamente a parede posterior da veia cava supra-hepática. Armazene o enxerto hepático a quatro graus Celsius em solução HTK em banho de água gelada. Prepare o receptor para a cirurgia de maneira semelhante ao procedimento do doador e abra a cavidade abdominal por meio de incisão mediana.

Coloque um cotonete úmido sobre o lado direito do duodeno e sobre todo o intestino. Para obter um campo cirúrgico ao redor da veia cava infra-hepática. Coloque os lobos laterais esquerdo e médio na cavidade subfrênica esquerda e retrai o lobo lateral direito para cima com um cotonete úmido.

Isole a veia cava infra-hepática do tecido retroperitoneal, ligue e seccione a veia adrenal direita com gaze úmida e cotonetes. Gire o fígado para a esquerda e dissecione o ligamento ao redor da parte posterior do fígado. Seccione o ducto biliar logo abaixo do ramo do lobo caudado.

Mantenha uma das extremidades cortadas do fio laqueada para o ducto biliar com quatro milímetros de comprimento; laqueie e divida a artéria gastroduodenal e a artéria hepática própria a uma distância de três milímetros do ponto de bifurcação da artéria hepática comum, para obter uma estrutura arterial ampla na extremidade da artéria hepática comum. Prenda a veia cava infra-hepática com um clipe metálico para microvasos logo acima da veia renal direita e a veia porta no nível de sua bifurcação no hilo hepático com uma pinça tipo mosquito. Prenda a veia cava supra-hepática juntamente com o diafragma por meio de um clipe vascular periférico e fixe o clipe em um pedaço de argila à base de óleo. Reduza a anestesia com isoflurano para 0,4 por cento em volume. Remova o fígado nativo do receptor mediante dissecação da veia cava supra-hepática na borda entre a veia cava supra-hepática e o fígado.

A veia porta logo acima da ponta da pinça de mosquito e a veia cava infra-hepática ligeiramente abaixo do ponto médio entre o fígado e a veia renal direita. Posicione o enxerto hepático ortotopicamente. A reconstrução do vaso é a parte mais difícil e importante deste procedimento.

Deve ser feito com muito cuidado, mas rapidamente, para a anastomose da veia cava supra-hepática por sutura contínua. Coloque a sutura de fixação na veia cava supra-hepática do receptor, de dentro para fora, utilizando o polipropileno sete zero anexado no canto direito do enxerto, seguido pelo nó da mesma maneira. Coloque a segunda sutura de fixação no canto esquerdo.

Este será o ponto inicial de uma sutura contínua. Para alargar a anastomose, segure e mantenha os pontos com pinças DeBakey em ambas as extremidades, aplicando tração suave para cima e lateralmente. Em seguida, introduza o fio cirúrgico no canto esquerdo através da parede do enxerto, de fora para dentro, bem próximo ao nó externo, e realize a fileira posterior da veia cava satílica intraluminal com sete a oito pontos até o canto direito.

Realize os primeiros pontos com cuidado para que os lúmens internos fiquem voltados um para o outro no canto correto. Passe o polipropileno 7-0 através do vaso do lado do enxerto para fora. Suture a fileira anterior de fora para dentro, da direita para a esquerda, com aproximadamente 10 pontos.

Enxágue o interior com solução de ringer lactato. Para remover bolhas de ar, faça o último ponto próximo ao ponto de retenção e, em seguida, amarre-os juntos. Para a reconstrução da veia porta, prenda a veia porta com uma pinça para microvasos e fixe a pinça hemostática na argila. A seguir, faça uma incisão na parede anterior da veia porta logo abaixo da extremidade da pinça hemostática.

Lave o interior da veia porta do receptor e o manguito com solução de Ringer com lactato. Insira o manguito na veia porta e fixe-o com um fio de seda seis zero em ponto circunferencial. Por fim, reperfunda o fígado.

Remova a seringa de cinco mililitros da região posterior da rata e aumente a concentração de isoflurano para 0,8 por cento em volume para a reconstrução hepática por técnica de stent. Primeiro, segure o fio da artéria hepática própria com pinça tipo mosquito e fixe-o na argila. Em seguida, prenda a artéria hepática comum do receptor.

Fez uma pequena incisão na bifurcação da estrutura em Y na extremidade da artéria hepática comum para criar uma abertura em formato de funil. Segure o stent colocado na artéria hepática comum do enxerto com uma pinça microcirúrgica curva. Deslize o stent para dentro da artéria hepática comum do receptor e fixe-o com um fio de seda seis zero, amarrando uma ponta desse fio junto com o fio de quatro milímetros na artéria hepática comum do enxerto, de modo que ambas as artérias hepáticas comuns fiquem mais próximas uma da outra, reduzindo a tensão no local da anastomose.

Em seguida, solte o clamp para a anastomose da veia cava infra-hepática por meio de sutura contínua da mesma forma que para a veia cava supra-hepática, mas utilize mais pontos com picadas mais finas. Após a retirada do clamp, aumente a concentração da anestesia para 1,0 por cento em volume para a reconstrução do ducto biliar. Segure o fio do ducto biliar do receptor com uma pinça mosquito e fixe-o na argila.

Realize uma pequena incisão no ducto biliar no nível apropriado para que o ducto biliar reconstruído não fique muito longo. Insira o stent e fixe-o com um fio de seda seis zero. Amarre este fio e o fio no ducto do enxerto.

Agora, todos os procedimentos de reconstrução estão concluídos. Feche a incisão abdominal com suturas contínuas de Vicryl 4-0 em camadas. Imediatamente após a operação, trate a rata receptora com uma injeção subcutânea de cloreto de sódio e buprenorfina em um total de 1,5 mililitros de solução salina normal.

Permita que a rata se recupere por 60 minutos em uma gaiola especial de unidade de terapia intensiva com ar aquecido e suprimento de oxigênio antes de devolvê-la a uma gaiola normal. Todas as ratas receptoras sobreviveram até a eutanásia programada para coleta de sangue aos 1, 3, 24 e 168 horas após a reperfusão portal. As amostras de soro foram analisadas quanto aos níveis de alanina aminotransferase, que refletem o grau de dano hepatocelular aos enxertos hepáticos após o transplante.

Como mostrado neste enxerto, os níveis de LT atingiram um pico em 24 horas e depois diminuíram até valores normais em 168 horas. Após este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar o transplante parcial de fígado em ratos como um modelo experimental reprodutível para pesquisas em transplante.