Name: Procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de Transplante de Fígado parcial ortotópico com reconstrução arterial hepática (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 18 min 47 s
Description: Aprenda técnicas de transplante hepático ortotópico parcial em ratos com reconstrução arterial hepática. Este modelo experimental reprodutível utiliza enxerto de 50% do fígado para pesquisa em transplantação.

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Os autores agradecem Pascal Paschenda e Mareike Schulz para a sua assistência técnica.

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<li>Zhao, D., Zimmermann, A., Wheatley, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometry+of+the+liver+after+liver+transplantation+in+the+rat%3A+significance+of+an+intact+arterial+supply%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Morphometry of the liver after liver transplantation in the rat: significance of an intact arterial supply.</a> Hepatology. 17, 310-317 (1993).</li>
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<li>Knoop, M., Bachmann, S., Keck, H., Steffen, R., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience+with+cuff+rearterialization+in+600+orthotopic+liver+grafts+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Experience with cuff rearterialization in 600 orthotopic liver grafts in the rat.</a> Am. J. Surg. 167, 360-363 (1994).</li>
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</ol>

Nós não temos nenhum conflito de interesses para divulgar. Os ratos estão alojados em específico patógeno-condições livre de acordo com as diretrizes da Federação de Associações de Laboratório de Ciência Animal (FELASA). Todos os experimentos foram realizados em conformidade com a lei federal alemão em matéria de protecção dos animais e &quot;Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório&quot; (National Institutes of Health publicação No. 86-23, revisado 1985).

O primeiro modelo de rato OLT foi relatado por Lee et al. Em 1973 9, em que todos os recipientes, incluindo a artéria hepática foram reconstruídos por um método costuradas a mão e o desvio portossistêmico extracorpórea foi utilizado. Este modelo foi tecnicamente complicado e difícil de realizar. O modelo seguinte foi um sem reconstrução da artéria hepática e da derivação extracorpórea, desenvolvido pelos mesmos autores 10 em 1975. Posteriormente, em 1979, Kamada et al. Introduziu a técnica de anastomose manguito para o modelo sem rearterialization hepática 11. Com estas modificações, OLT em ratos foi simplificada com um tempo anepática encurtado em operações ao receptor e tem sido amplamente utilizado como modelo experimental. No entanto, tem havido uma considerável controvérsia uma vez que, em seguida, sobre o significado de arterialização hepática em ratos OLT 8 porque a arterialização foi uma tarefa exigente, mas did não afeta a sobrevivência após o transplante. Numerosos estudos sobre arterialização hepática utilizando técnicas de reconstrução várias foram relatadas 8, tal como uma anastomose do segmento de aorta 3,9,17-aórtico, uma técnica de anastomose cuff 18,19,20, uma técnica telescópica 5, uma técnica de stent 13, 16, e uma técnica de anastomose manga 12,21-23. Embora a técnica de OLT rato ainda não está padronizado hoje, o modelo arterializado tem sido cada vez mais favorecida em termos de sua superioridade fisiológica 8,12,13,14. Entre as técnicas acima mencionadas, uma técnica de stent que é simples e rápido de executar foi relatada por Lehmann et al. 16 em 2005. O estudo mostrou excelentes resultados: não foi observado grau de oclusão na artéria hepática reconstruído menos 8 h, 24 h, e 6 meses após a reperfusão. Por isso, adotou essa técnica para arterialização hepática. Nós desempenhoma anastomose costurado à mão para a reconstrução do SHVC e IHVC. Este método fornece o local da anastomose, com uma óptima condição fisiológica, o que leva à redução da incidência de trombose 8, e é o melhor simulação microcirurgia e de formação para os cirurgiões. Além disso, a anastomose pode ser possível mesmo com cotos dos vasos pequenos. No que diz respeito a anastomose de IHVC, este método não requer um IHVC longo do lado de enxerto em comparação com a técnica de anastomose manguito. Portanto, quando a veia renal doador é dissecada para fazer o enxerto IHVC tempo, este método é aplicável para o transplante de um enxerto que precisa de uma pequena IHVC longo, tal como um enxerto de 30%, que é constituída por lóbulos laterais direito e caudado com um curto intrahepática veia cava sem SHVC 2. Em relação às técnicas de ressecção hepática em ratos, até hoje vários métodos têm sido relatados, as duas principais técnicas são a técnica de ligadura clássica massae a técnica de vaso-orientado 24. Realizamos a técnica clássica para a ligadura ressecção hepática de 50% de 15, mas com um microscópio cirúrgico, para tornar o procedimento mais finas, e para evitar danos nos lobos remanescentes e estruturas. Descrevemos os resultados representativos dos ratos receptores no nosso modelo, os ratos sobreviveram durante o período de observação de 7 dias sem complicações aparentes. O modelo pode ser modificado para fins diferentes de experiências, escolhendo as configurações diferentes, como o armazenamento frio prolongado, isquemia quente prolongado que inclui a doação após a morte cardíaca, ea utilização de enxertos menores de fígado ou enxertos de modelos experimentais de lesão hepática ou doenças. Em nossa experiência, há três fatores-chave em todo os procedimentos que podem afetar a sobrevivência após o transplante, o parâmetro mais confiável para os resultados de OLT rato: a quantidade de perda de sangue, o tempo de operação, os eespecialmente tempo de pinçamento da veia porta e IHVC; ea adequação da reconstrução de cada navio, o que poderia resultar em trombose, estenose, ou sangramento. Em um período de treinamento deste modelo, a maioria das falhas provavelmente poderia estar relacionada a esses fatores. Neste artigo de vídeo, apresentamos passo-a-passo para os procedimentos cirúrgicos para o nosso modelo do rato de OLT parcial com reconstrução arterial hepática. Enquanto um modelo do rato de OLT é complicado e requer habilidades avançadas de microcirurgia, este artigo fornece uma abundância de informações práticas, que deve servir como um bom guia para a formação e aprendizagem deste modelo. Aprender este modelo eficaz é particularmente importante para a redução do período de aprendizagem, a redução do número de animais e dos custos necessários para a prática, e mais tarde reproduzir resultados fiáveis ​​em experiências. Isto está em linha com o conceito 3R (substituição, redução e refinamento) dos experimentos com animais, o que foi postulado por Russell e Burch em1959 25.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Microscópio cirúrgico </td><td> Leica </td><td> M651 </td><td></td></tr><tr><td> Fonte de luz </td><td> Schott </td><td> KL1500LCD </td><td></td></tr><tr><td> Cotonetes </td><td> NOBA Verbandmittel </td><td> 974202 </td><td></td></tr><tr><td> Compressas de gaze (5x5 cm) </td><td> Fuhrmann </td><td> 10002 </td><td></td></tr><tr><td> solução de iodo-povidona </td><td> Mundipharma </td><td> 6108022.00.01 </td><td></td></tr><tr><td> À base de óleo de argila </td><td> Debika corporação </td><td> 090148 </td><td></td></tr><tr><td> TachoSil </td><td> Takeda Pharmaceuticals International GmbH </td><td> EU/1/04/277/001-004</td><td> Aplicado a superfície ressecada do fígado </td></tr><tr><td> Lâmina de bisturi n º 11 </td><td> Pfm médica </td><td> 200130011 </td><td> Preparação da braçadeira e stents </td></tr><tr><td> Calibre 14 cateter </td><td> B. Braun </td><td> 4268210S </td><td> Manguito para o PV </td></tr><tr><td> Calibre 18 cateter </td><td> B. Braun </td><td> 4268130S </td><td> Perfusão através PV </td></tr><tr><td> Calibre 24 cateter </td><td> B. Braun </td><td> 4269071S </td><td> Stent para BD e HA </td></tr><tr><td> Sutura de seda 4-0 </td><td> Resorba </td><td> H3F </td><td> Ressecção hepática </td></tr><tr><td> 6-0 seda </td><td> Resorba </td><td> H1F </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 Prolene (polipropileno) sutura </td><td> Ethicon </td><td> 8701H </td><td> SHVC e IHVC </td></tr><tr><td> Sutura Vicryl 4-0 </td><td> Ethicon </td><td> V304H </td><td> Fechamento abdominal </td></tr><tr><td> Seringa de 5 ml </td><td> Terumo </td><td> SS + T05ES1 </td><td> Fazer travesseiro </td></tr><tr><td> Almofada de aquecimento </td><td> Thermo </td><td> 190 x 260 mm </td><td></td></tr><tr><td> Sistema de retração magnético fixador </td><td> Multa Ciência Tools Inc. </td><td> 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 </td><td></td></tr><tr><td> Banho de água fria </td><td> Huber </td><td> 740.000X </td><td> Preservação do enxerto </td></tr><tr><td> Fórceps bipolar </td><td> Soring </td><td> MBC-200 </td><td></td></tr><tr><td> Fórceps do mosquito </td><td> BONIMED </td><td> 451-476-03 </td><td> Dois pares utilizados </td></tr><tr><td> Adson micro fórceps </td><td> Dimeda </td><td> 10.176.12 </td><td></td></tr><tr><td> Milhas curvacro fórceps </td><td> AESCULAP </td><td> FD281R </td><td></td></tr><tr><td> Retas fórceps micro </td><td> Bonimed </td><td> 451-476-03 </td><td></td></tr><tr><td> Curvas microtesoura </td><td> Medicon </td><td> 05.15.83 </td><td></td></tr><tr><td> Retas microtesoura </td><td> AESCULAP </td><td> FD12 </td><td> Incisão fina </td></tr><tr><td> Tesoura </td><td> AESCULAP </td><td> BC211W </td><td></td></tr><tr><td> Suporte da agulha micro </td><td> AESCULAP </td><td> FD241R </td><td> Reconstrução </td></tr><tr><td> Prefeito Hegar-titular da agulha </td><td> Mizuho Ikakogyo </td><td> 06-798-00 </td><td> Fechamento abdominal </td></tr><tr><td> DeBakey Bulldog braçadeira (em linha reta) </td><td> ULRICH </td><td> CV3054 </td><td></td></tr><tr><td> DeBakey Bulldog braçadeira (curvo) </td><td> CODMAN </td> &lt;td&gt; 37-1062 </td><td></td></tr><tr><td> Satinsky braçadeira </td><td> Mizuhoika </td><td> 09-230-24 </td><td></td></tr><tr><td> Grampo vascular periférica </td><td> Teleflex Medical </td><td> 353494 </td><td> Destinatário SHVC </td></tr><tr><td> Braçadeira navio Micro (descartável) </td><td> AROSurgical Instruments Corporation </td><td> TKM-1-60 g </td><td> PV, IHVC enxerto, e receptor HA </td></tr><tr><td> Braçadeira navio Micro (metal) </td><td> Multa Ciência Tools Inc. </td><td> 18052-01 </td><td> Destinatário IHVC </td></tr><tr><td> Solução de Ringer com lactato </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 6150917.00.00 </td><td></td></tr><tr><td> Solução salina normal </td><td> DeltaSelect </td><td> 1299.99.99 </td><td></td></tr><tr><td> Solução HTK </td><td> Dr. Franz Köhler Chemie GmbH </td><td> 31268.00.00 </td><td> Solução de preservação </td></tr><tr><td> Heparina Natrium- </td><td> Ratiopharm </td><td> 5394.02.00 </td><td> 500 UI antes de perfusão do enxerto </td></tr><tr><td> Bicarbonato de sódio a 8,4% </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 4399.97.99 </td><td> 0,5 ml após a reperfusão </td></tr><tr><td> Solução de glicose a 5% </td><td> B. Braun </td><td> 6714567.06.00 </td><td> 1,0 ml após a reperfusão </td></tr><tr><td> Cefuroxima de sódio </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 38985.01.00 </td><td> Antibiótico, 16 mg / kg </td></tr><tr><td> Buprenorfina </td><td> Essex Pharma </td><td> 997.00.00 </td><td> Analgésico, 0,1 mg / kg </td></tr><tr><td> Gaiola de Unidade de Terapia Intensiva </td><td> Brinsea Products Ltd. </td><td> Vetario S10 </td><td> Cuidados pós-operatórios </td></tr></tbody></table>

procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de transplante de fígado parcial ortotópico com reconstrução arterial hepática

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

O transplante hepático (OLT) em ratos usando um enxerto total ou parcial é um modelo indispensável para a pesquisa experimental de transplante, como estudos sobre a preservação do enxerto e isquemia-reperfusão 1,2 lesão, respostas imunológicas 3,4, 5,6 hemodinâmica e pequeno para a dimensão síndrome 7. A OLT rato está entre os modelos animais mais difíceis em cirurgia experimental e exige técnicas de microcirurgia avançados que levam muito tempo para aprender. Por conseguinte, a utilização deste modelo tem sido limitada. Desde a confiabilidade e reprodutibilidade dos resultados são os principais componentes dos experimentos em que esses modelos animais complexos são usados, é essencial para os cirurgiões que estão envolvidos em OLT rato a ser treinados nos procedimentos de bem-padronizados e sofisticado para esse modelo. Embora várias técnicas e modificações do OLT em ratos foram descritos 8 uma vez que o primeiro modelo descreviaed por Lee et al. 9 em 1973, a eliminação da reconstrução arterial hepática 10 e da introdução da técnica de anastomose cuff por Kamada et al. 11 foram um grande avanço neste modelo, uma vez que os procedimentos de reconstrução simplificada, em grande . No modelo de Kamada et al., O rearterialization hepática foi também eliminado. Desde ratos podem sobreviver sem fluxo arterial hepática após transplante de fígado, houve uma considerável controvérsia sobre o valor de arterialização hepática. Contudo, a superioridade fisiológica do modelo arterializado tem sido cada vez mais reconhecido, especialmente em termos de conservação do sistema biliar 8,12 e a integridade hepática 8,13,14. Neste artigo, apresentamos detalhados procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de OLT com a reconstrução da artéria hepática utilizando um enxerto parcial de 50% após a ressecção hepática ex vivoção. Os procedimentos de reconstrução para cada navio e do ducto biliar são realizados pelos métodos seguintes: uma sutura de polipropileno 7-0 contínuo para a supra-infra e veia cava inferior, uma técnica de manga para a veia porta, e uma técnica de stent na artéria hepática e ducto biliar.

Todos os ratos destinatário (n = 20) sobreviveram sem complicações aparentes até eutanásia planeada para amostragem de sangue, 1, 3, 24 e 168 horas (7 dias) após a reperfusão portal (n = 5 em cada ponto de tempo). As amostras de sangue foram coletadas da IHVC por uma punção direta com uma agulha de calibre 27. Seguindo a centrifugação a 5340 xg durante 10 min, as amostras de soro foram obtidas e analisadas para a alanina aminotransferase (ALT), que reflectem o grau de dano hepatocelular após transplante. O curso temporal das alterações nos níveis de ALT no soro é mostrado na Figura 16. Os níveis de ALT atingiu um pico às 24 horas (média ± desvio padrão: 212,6 ± 67,9 UI / L) e, em seguida, desceu para dentro dos limites normais em 168 hr (33,6 ± 6,8 UI / L). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig1.jpg" /> Figura 1. Uma braçadeira para a veia porta (VP) de um 14 de calibre do cateter, e stents para a artéria hepática (AH) e ducto biliar (BD) de calibre 24 cateteres. <img alt="Figura 2" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig2.jpg" /> Figura 2. Esquema da retirada do fígado do animal doador BD, ducto biliar; HA., Artéria hepática; IHVC, infrahepatic veia cava; PV, veia porta; SHVC, supra-hepática da veia cava. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig3.jpg" /> Figura 3. Operação doador. a. O rato é colocado sobre uma almofada de aquecimento com um sistema de retracção magnética fixador. O abdómen é aberto por uma incisão na linha média com extensões bilaterais. B. Inserção do stent dentro do canal biliar. C. Perfusão do fígado através da veia portal. As abreviaturas são explicared na Figura 2. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig4.jpg" /> Figura 4. Fixação de um punho para a veia porta. a, b. DeBakey A braçadeira Bulldog que agarra o tronco venoso portal é colocado sobre o copo de metal. O copo está montado na caixa de plástico cheio de gelo picado. C. A veia porta é colocada através da braçadeira. D. A parede da veia portal é evertido sobre a manga com o coto da veia esplénica fora do manguito na 7 horas posição e uma extensão do punho na posição das 12 horas e.. A veia porta é fixada com um fio de seda 6-0 circunferencial no punho. As setas pretas indicam o coto da veia esplênica. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig5.jpg" /> Figura 5. Ex vivoa inserção de um stent na artéria hepática. a. O fígado é fixado por aperto de ambas as bordas do diafragma, e a artéria hepática é puxada reta, segurando o fio ligado à artéria. b. A parede anterior da pequena incisão na artéria hepática é realizada com uma pinça rectas micro . c, d. O stent é inserido na artéria hepática e fixada com um fio de seda 6-0. <img alt="Figura 6" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig6.jpg" /> Figura 6. O esquema de ressecção hepática ex vivo de 50%. Lobos em cor cinza são removidos. ACL, anterior caudado do lobo; PCL, lobo caudado posterior; LLL, lobo lateral esquerda; LML, parte esquerda do lobo médio; parte, RML direito do lobo médio; SRL, lobo direito superior lateral; IRL, lobo inferior direito lateral. Figura 7. Ex vivo ressecção hepática de 50%. uma ligadura. ligadura do pedículo do lobo caudado posterior. b. do pedículo da porção esquerda do lobo mediano. c. O fígado antes da ressecção de 50%. d. O fígado após ressecção de 50%. <img alt="Figura 8" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig8.jpg" /> Figura 8. Ex vivo plastia da veia cava supra-hepática. a. O fígado é fixado por aperto as duas bordas do diafragma com a pinça de mosquitos. b. Estadia sutura com fio de polipropileno 7-0 estão ligados em ambos os cantos. <img alt="Figura 9" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig9highres.jpg" src = &quot;files/ftp_upload/4376/4376fig9.jpg /&quot; /&gt; Figura 9. Esquema de implantação do enxerto no rato receptor. Os procedimentos de reconstrução são realizados para a supra-infra e veia cava (SHVC e IHVC) com um fio de sutura 7-0 contínua, a veia porta (VP), por uma técnica de manga, e a hepática artéria (HA) e das vias biliares (BD) por uma técnica de stent. <img alt="Figura 10" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig10.jpg" /> Figura 10. Operação beneficiário até à remoção do fígado nativo. um. O abdômen é aberto por uma incisão na linha. b. A veia adrenal direita é ligada. c. nativa O fígado é extirpado. As abreviaturas são explicados na figura 2. <img alt="Figura 11" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig11.jpg" /> Figura 11. Anastomose da suprahehepáticas veia cava. a, b. O grampo vascular periférico para a veia cava supra-hepática é fixado em um pedaço de argila à base de óleo. As suturas de ancoragem em ambos os cantos são mantidos com leve tração superiolaterally para ampliar a anastomose. C. Fio intraluminal contínua da linha posterior em andamento. D. Sutura contínua da linha anterior em andamento. <img alt="Figura 12" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig12.jpg" /> Figura 12. Reconstrução da veia portal. a, b. A pinça de aperto de mosquitos da veia portal é fixa em argila à base de óleo e puxado para o hilo do fígado. cf. Inserção da bainha para dentro da veia portal. <img alt="Figura 13" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig13.jpg" /> Figura 13. Reconstrução da artéria hepática. a, b. </stron<html> g&gt; A inserção de um stent na artéria hepática receptor comum (CHA) a bifurcação da artéria hepática própria (PHA) e da artéria gastroduodenal (GDA). <img alt="Figura 14" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig14.jpg" /> Figura 14. Anastomose da veia cava infrahepatic. um Reperfusão. As suturas de ancoragem em ambos os cantos. b. sutura contínua da linha posterior. c. sutura contínua da linha anterior. d. infrahepatic da veia cava. As abreviaturas são explicados na figura 2. <img alt="Figura 15" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig15.jpg" /> Figura 15. Todos os procedimentos de reconstrução terminar. As abreviaturas são explicados na figura 2. <img alt="&lt;/ Html">&quot;Figura 16&quot; src = &quot;files/ftp_upload/4376/4376fig16.jpg /&quot; /&gt; Figura 16 pós-operatória curso temporal das alterações de níveis séricos de alanina-aminotransferase (ALT) (n = 20, n = 5 em cada ponto de tempo).. Os dados são expressos como médias com barras de erro que indicam os desvios padrão. Os níveis de ALT atingiu um pico às 24 h (212,6 ± 67,9 UI / L) e, em seguida, desceu para dentro dos limites normais em 168 hr (33,6 ± 6,8 UI / L).

O transplante hepático em ratos é um modelo indispensável experimental para a pesquisa biomédica. Aqui apresentamos nossos procedimentos cirúrgicos para transplante ortotópico do fígado do rato com a reconstrução da artéria hepática utilizando um enxerto parcial de 50%.

Procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de Transplante de Fígado parcial ortotópico com reconstrução arterial hepática

O transplante ortotópico de fígado (TOF) em ratos, utilizando um enxerto total ou parcial, é um modelo experimental indispensável para a pesquisa em transplantes, tais como...

O objetivo geral deste procedimento é realizar o transplante hepático ortotópico parcial em ratos como um modelo experimental reprodutível para pesquisa em transplantes. Isso é realizado primeiramente pela explicação do fígado do rato doador. O segundo passo é o preparo do enxerto hepático ex vivo, incluindo uma ressecção de 50% do fígado.Em seguida, o fígado nativo da rata recebedora é removido. O passo final é o implante do enxerto hepático parcial na rata recebedora. Por fim, são medidos os níveis séricos de alanina aminotransferase para avaliar o dano hepatocelular ao enxerto hepático após o transplante.Em geral, indivíduos novos neste procedimento enfrentam dificuldades devido à complexidade do processo, que exige habilidades microcirúrgicas avançadas. Para iniciar este procedimento, posicione a rata anestesiada sobre uma placa aquecida após confirmar, por meio de um aperto no dedo do pé, que o animal está completamente anestesiado, e fixe os membros superiores utilizando o sistema magnético de retração e fixação. Remova a pelagem de toda a região abdominal da rata e esterilize a pele correspondente com uma solução de poviodina.Abra o abdômen por meio de incisão mediana com extensões bilaterais. Coloque uma seringa de cinco mililitros sob as costas da rata, de modo que a veia cava supra-hepática seja elevada ventralmente usando uma pinça tipo mosquito, puxe o processo em direção à cabeça e aplique os retratores subcostais para abrir o campo cirúrgico. Devido à necessidade de manipular frequentemente os retratores e a seringa de cinco mililitros durante o procedimento, campos cirúrgicos não são utilizados ao redor da incisão; trabalhe sob microscópio cirúrgico com ampliação de 16 vezes, disseque o ligamento falciforme e o ligamento triangular esquerdo em formato de oito, divida a veia frênica esquerda e retraiam os lobos mediano e lateral esquerdo para cima com uma compressa úmida.Usando pinça bipolar, coagule e seccione os vasos paraesofágicos entre o lobo lateral esquerdo e o lobo coordenado anterior. Retire os intestinos da cavidade abdominal para o lado esquerdo da rata e cubra-os com uma compressa úmida. Limpe e retrai o lobo lateral direito para cima com uma compressa úmida.Isolar a veia cava infra-hepática do tecido retroperitoneal e ligar a veia adrenal direita, que será seccionada posteriormente pouco antes da remoção do enxerto para inserir um stent no ducto biliar; primeiramente, ligar o ducto biliar ao nível da bifurcação da artéria gastroduodenal. Fazer uma pequena incisão na parede anterior do ducto biliar proximal ao ponto ligado, então, enquanto segura a parede anterior da incisão com uma pinça microcirúrgica reta na mão esquerda, usar uma pinça microcirúrgica curva na mão direita para inserir um stent no ducto. Fixá-lo com um fio de seda seis zero.Mantenha uma das extremidades cortadas do fio no ducto biliar com um comprimento de quatro milímetros, para que o fio possa ser segurado durante a posterior anastomose. Libere a veia porta das veias esplânicas ligando e dividindo-as; ligue e divida a artéria gastroduodenal. Em seguida, isole a artéria hepática comum da cabeça pancreática até sua raiz.Gire o fígado para o lado direito com cotonetes e dissecione o ligamento ao redor da parte posterior do fígado e do esôfago ao final dos preparos. Para a excisão hepática. Remova os retratores, a pinça hemostática para o processo xifoide e a seringa de cinco mililitros localizada sob a parte posterior do rato.Retorne os intestinos à cavidade abdominal. Injete 500 UI de heparina sódica em dois mililitros de solução salina normal através da veia peniana. Cerca de três minutos depois, reposicione a seringa de cinco mililitros, a pinça hemostática e o afastador para ligar a artéria hepática comum proximal à sua raiz.Mantenha uma das extremidades cortadas do fio ligada para a artéria hepática comum. Muito tempo após a clampeadura da veia cava infra-hepática. Próximo à veia renal direita com uma pinça mosquito.Prenda a veia porta com uma pinça descartável para microvasos abaixo do coto da veia esplênica. Incise a parede anterior da veia porta e insira um cateter de calibre 18 na veia porta. Perfunda o fígado in situ com 60 mililitros de solução fria de histidina, triptofano e alfa-cetoglutárico.Com uma pressão hidrostática de 20 centímetros, a água cortou imediatamente o diafragma, a veia cava intratorácica e a parede anterior da veia cava infra-hepática, permitindo que a solução de perfusão fosse lavada para fora do fígado. Prenda a veia cava infra-hepática com uma pinça para microvasos logo abaixo do fígado. Remova o fígado dissecando a veia cava infra-hepática.A veia porta, o diafragma, os ligamentos remanescentes, a veia adrenal direita e a artéria hepática comum. Coloque o fígado ressecado em solução HTK fria dentro de um copo metálico acondicionado numa caixa plástica cheia de gelo triturado org. Os procedimentos para o enxerto hepático são realizados no copo metálico preenchido com solução HTK gelada para a fixação de um manguito à veia porta: prenda o tronco venoso porta com um clamp DeBakey em formato de clipe e posicione o clamp em posição de ponte sobre o copo.Passe a veia porta pela cânula e prenda novamente a veia al juntamente com a extensão da cânula na posição das 12 horas; vire a parede da veia porta sobre a cânula para posicionar o coto da veia esplênica fora da cânula na posição das sete horas e fixe a veia porta com um fio de seda seis zero para inserir uma endoprótese na artéria hepática. Fixe o fígado prendendo ambas as bordas do diafragma com pinças e estique a artéria hepática comum segurando o fio laqueado com o clamp DeBakey em formato de bulldog e com tesoura microcirúrgica reta. Faça uma pequena incisão na parede anterior da artéria hepática comum com a mão esquerda.Segure a parede anterior da incisão com uma pinça microcirúrgica reta e, com a mão direita, insira um stent na artéria hepática comum. Usando uma pinça microcirúrgica curva, fixe o stent com um fio de seda seis zero e mantenha uma das extremidades cortadas do fio com um comprimento de quatro milímetros. Lave o fígado através do cateter arterial com cinco mililitros de solução HTK fria para a ressecção de 50% do fígado.Primeiro, prenda o lobo da coordenada posterior com uma pinça de mosquito para fixá-lo no lugar. Em seguida, ligue seu pedículo com um fio de seda quatro zero e resseque o lobo.O lobo corado anterior é removido da mesma maneira. Em seguida, gire a caixa de plástico em 90 graus. Prenda a borda direita do diafragma e a porção esquerda do lobo mediano.Realize uma pequena incisão na borda superior da região que separa as porções bilaterais do lobo medial e, em seguida, remova a porção esquerda após a ligadura. Após a ligadura do pedículo com fio de seda 4-0, remova o lobo lateral esquerdo e cauterize cuidadosamente a superfície hepática ressecada com pinça bipolar. A massa hepática agora está reduzida em aproximadamente 50% para a plastia da veia cava supra-hepática.Primeiro, fixe a posição do fígado prendendo ambas as bordas do diafragma com uma pinça mosquito. Em seguida, retire a parede anterior da veia cava supra-hepática removendo o diafragma correspondente. Prenda duas suturas de polipropileno 7-0 do lado externo para o interno em ambos os cantos como pontos de espera para a anastomose posterior.Em seguida, retire cuidadosamente a parede posterior da veia cava supra-hepática. Armazene o enxerto hepático a quatro graus Celsius em solução HTK em banho de água gelada. Prepare o receptor para a cirurgia de maneira semelhante ao procedimento do doador e abra a cavidade abdominal por meio de incisão mediana.Coloque um cotonete úmido sobre o lado direito do duodeno e sobre todo o intestino. Para obter um campo cirúrgico ao redor da veia cava infra-hepática. Coloque os lobos laterais esquerdo e médio na cavidade subfrênica esquerda e retrai o lobo lateral direito para cima com um cotonete úmido.Isole a veia cava infra-hepática do tecido retroperitoneal, ligue e seccione a veia adrenal direita com gaze úmida e cotonetes. Gire o fígado para a esquerda e dissecione o ligamento ao redor da parte posterior do fígado. Seccione o ducto biliar logo abaixo do ramo do lobo caudado.Mantenha uma das extremidades cortadas do fio laqueada para o ducto biliar com quatro milímetros de comprimento; laqueie e divida a artéria gastroduodenal e a artéria hepática própria a uma distância de três milímetros do ponto de bifurcação da artéria hepática comum, para obter uma estrutura arterial ampla na extremidade da artéria hepática comum. Prenda a veia cava infra-hepática com um clipe metálico para microvasos logo acima da veia renal direita e a veia porta no nível de sua bifurcação no hilo hepático com uma pinça tipo mosquito. Prenda a veia cava supra-hepática juntamente com o diafragma por meio de um clipe vascular periférico e fixe o clipe em um pedaço de argila à base de óleo. Reduza a anestesia com isoflurano para 0,4 por cento em volume. Remova o fígado nativo do receptor mediante dissecação da veia cava supra-hepática na borda entre a veia cava supra-hepática e o fígado.A veia porta logo acima da ponta da pinça de mosquito e a veia cava infra-hepática ligeiramente abaixo do ponto médio entre o fígado e a veia renal direita. Posicione o enxerto hepático ortotopicamente. A reconstrução do vaso é a parte mais difícil e importante deste procedimento.Deve ser feito com muito cuidado, mas rapidamente, para a anastomose da veia cava supra-hepática por sutura contínua. Coloque a sutura de fixação na veia cava supra-hepática do receptor, de dentro para fora, utilizando o polipropileno sete zero anexado no canto direito do enxerto, seguido pelo nó da mesma maneira. Coloque a segunda sutura de fixação no canto esquerdo.Este será o ponto inicial de uma sutura contínua. Para alargar a anastomose, segure e mantenha os pontos com pinças DeBakey em ambas as extremidades, aplicando tração suave para cima e lateralmente. Em seguida, introduza o fio cirúrgico no canto esquerdo através da parede do enxerto, de fora para dentro, bem próximo ao nó externo, e realize a fileira posterior da veia cava satílica intraluminal com sete a oito pontos até o canto direito.Realize os primeiros pontos com cuidado para que os lúmens internos fiquem voltados um para o outro no canto correto. Passe o polipropileno 7-0 através do vaso do lado do enxerto para fora. Suture a fileira anterior de fora para dentro, da direita para a esquerda, com aproximadamente 10 pontos.Enxágue o interior com solução de ringer lactato. Para remover bolhas de ar, faça o último ponto próximo ao ponto de retenção e, em seguida, amarre-os juntos. Para a reconstrução da veia porta, prenda a veia porta com uma pinça para microvasos e fixe a pinça hemostática na argila. A seguir, faça uma incisão na parede anterior da veia porta logo abaixo da extremidade da pinça hemostática.Lave o interior da veia porta do receptor e o manguito com solução de Ringer com lactato. Insira o manguito na veia porta e fixe-o com um fio de seda seis zero em ponto circunferencial. Por fim, reperfunda o fígado.Remova a seringa de cinco mililitros da região posterior da rata e aumente a concentração de isoflurano para 0,8 por cento em volume para a reconstrução hepática por técnica de stent. Primeiro, segure o fio da artéria hepática própria com pinça tipo mosquito e fixe-o na argila. Em seguida, prenda a artéria hepática comum do receptor.Fez uma pequena incisão na bifurcação da estrutura em Y na extremidade da artéria hepática comum para criar uma abertura em formato de funil. Segure o stent colocado na artéria hepática comum do enxerto com uma pinça microcirúrgica curva. Deslize o stent para dentro da artéria hepática comum do receptor e fixe-o com um fio de seda seis zero, amarrando uma ponta desse fio junto com o fio de quatro milímetros na artéria hepática comum do enxerto, de modo que ambas as artérias hepáticas comuns fiquem mais próximas uma da outra, reduzindo a tensão no local da anastomose.Em seguida, solte o clamp para a anastomose da veia cava infra-hepática por meio de sutura contínua da mesma forma que para a veia cava supra-hepática, mas utilize mais pontos com picadas mais finas. Após a retirada do clamp, aumente a concentração da anestesia para 1,0 por cento em volume para a reconstrução do ducto biliar. Segure o fio do ducto biliar do receptor com uma pinça mosquito e fixe-o na argila.Realize uma pequena incisão no ducto biliar no nível apropriado para que o ducto biliar reconstruído não fique muito longo. Insira o stent e fixe-o com um fio de seda seis zero. Amarre este fio e o fio no ducto do enxerto.Agora, todos os procedimentos de reconstrução estão concluídos. Feche a incisão abdominal com suturas contínuas de Vicryl 4-0 em camadas. Imediatamente após a operação, trate a rata receptora com uma injeção subcutânea de cloreto de sódio e buprenorfina em um total de 1,5 mililitros de solução salina normal.Permita que a rata se recupere por 60 minutos em uma gaiola especial de unidade de terapia intensiva com ar aquecido e suprimento de oxigênio antes de devolvê-la a uma gaiola normal. Todas as ratas receptoras sobreviveram até a eutanásia programada para coleta de sangue aos 1, 3, 24 e 168 horas após a reperfusão portal. As amostras de soro foram analisadas quanto aos níveis de alanina aminotransferase, que refletem o grau de dano hepatocelular aos enxertos hepáticos após o transplante.Como mostrado neste enxerto, os níveis de LT atingiram um pico em 24 horas e depois diminuíram até valores normais em 168 horas. Após este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar o transplante parcial de fígado em ratos como um modelo experimental reprodutível para pesquisas em transplante.

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