Name: Oclusão bilateral artéria carótida comum como um estímulo pré-condicionamento adequados para induzir a tolerância isquêmica início da Isquemia Cerebral Focal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Aprenda a induzir tolerância isquêmica precoce em camundongos usando oclusão bilateral da artéria carótida comum como estímulo de pré-condicionamento. Este método demonstra proteção cerebral contra isquemia focal.

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Todos os procedimentos descritos neste artigo foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos do Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlin, Alemanha. Procedimentos pré-cirúrgicos 1. Preparação de monofilamentos <ol><li> Para a preparação de filamentos intraluminais, suturas de monofilamento de nylon 8-0 foram utilizadas e foram cortados com um comprimento de 13 mm cada. </li><li> Para o revestimento dos monofilamentos, Xantopren M mucosa (Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Alemanha) foi utilizado activada pela adição de uma gota de uma solução de activador (Activator, mais universal, a Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Alemanha). </li><li> O monofilamento foi puxado lentamente através do silicone, até que foi completamente coberto com ele. Ao fazê-lo, o monofilamento seriam igualmente coberto por silicone. Evite esperar muito tempo porque o material de revestimento ativado se tornará firme e seca rapidamente. </li><li> Antes de o silicone começa a solidificar, Recomenda-se para retirar o excesso de silicone a partir do filamento, puxando-o sobre uma folha de papel. Ao fazer isso, a camada de silicone pode ser diluído para uma espessura aproximada de 200 um. </li><li> A base do monofilamento silicone coberta foi preso em massa de modelar, a fim de deixá-lo secar durante a noite. </li></ol> Comentário: Idealmente, só esterilizada ou, pelo menos, monofilamentos desinfectadas deve ser usado para assegurar a esterilidade no local cirúrgico. Na prática, a esterilização ou desinfecção dos monofilamentos feitos à mão é muito difícil, porque a qualidade dos monofilamentos podem piorar 9. Portanto, pode ser preferível utilizar monofilamentos estéreis disponíveis comercialmente em seu lugar. 2. Preparação de instrumentos cirúrgicos e dos animais <ol><li> Todos os instrumentos cirúrgicos foram mantidas em 70% de álcool etílico. Além disso, antes de cada novo procedimento cirúrgico, todos os instrumentos cirúrgicos foram cuidadosamente limpos and desinfectados com 70% de álcool etílico. </li><li> A área cirúrgica foi completamente desinfectados com 70% de álcool etílico em todos os animais antes da transecção. Os sites de desinfecção foram autorizados a secar completamente antes de executar as incisões. Corte adicional da pele não foi realizada, pois isso pode causar microabrasions e inflamação da pele posterior 9. </li></ol> Os procedimentos cirúrgicos 3. Posicionamento da Sonda LDF e Monitoramento LDF <ol><li> Para a indução da anestesia, os ratos foram expostos a uma mistura gasosa constituída por 30% de oxigénio, 70% de N 2 O e 2,5% de isoflurano utilizando um vaporizador. Para manutenção da anestesia, a concentração de isoflurano foi reduzida para 1,5%. Ratos estavam respirando espontaneamente via máscara de respiração durante todo o procedimento cirúrgico. </li><li> A sonda de temperatura retal foi inserido e os ratos foram fixados ao quadro estereotáxico expondo a cabeça parietal. Durante a cirurgia, os ratos estavam descansando em umtermostato controlado almofada de aquecimento, assegurando uma temperatura constante de núcleo de 37,0 ± 0,5 ° C. Uma incisão na linha média sagital (~ 1 cm de comprimento) foi realizada para expor o crânio parietal. </li><li> O lado esquerdo do crânio foi cuidadosamente dissecado e uma sonda de fibra óptica foi fixada directamente ao crânio 2 milímetros caudal ea 5 mm lateral desde bregma usando cola instantânea. Em seguida, os bordos da ferida, foram cuidadosamente adaptado para evitar a hipotermia cerebral, bem como infecções. </li><li> O mouse foi se virou para expor o lado ventral do pescoço. A sonda de fibra óptica foi conectado ao dispositivo de LDF (PeriFLUX System 5000, Perimed, Järfälla, Suécia) através de ligação do adaptador de sonda (Master Sonda 418-1, Perimed; Järfälla, Suécia). </li></ol> Comentário: Ao girar o mouse, a sonda de fibra ótica deve ser dobrado com cuidado, a fim de evitar que ele rompe a partir do crânio. <ol start="5"><li> O dispositivo FDL foi ligada a um computador portátil comcomputador. A gravação contínua de valores FDL foi iniciado usando PeriSoft para Windows (versão 2.50, Järfälla, Suécia). Figura 1 demonstra o curso médio CBF obtida de dez gravações FDL durante BCCAO e reperfusão. </li></ol> 4. Oclusão bilateral artéria carótida comum <ol><li> A anestesia foi mantida como descrito em 3.1. Rato foi colocado em suas costas. Cauda e patas do animal foram fixados para a almofada de aquecimento com fita adesiva. A incisão mediana ventral sagital (~ 1 centímetro de comprimento) foi realizada. </li><li> As glândulas salivatório foram cuidadosamente separados e mobilizados para visualizar a base de CCA. </li><li> Ambos foram cuidadosamente CCA de separados das respectivas nervos vagais e veias anexas sem danificar estas estruturas. Manipulações dos nervos vagais pode conduzir a uma disfunção temporária ou permanente do sistema nervoso parassimpático, que tem o potencial para a ocorrência de arr cardíaca significativahythmia ou parada cardíaca até mesmo irreversíveis. Portanto, é crucial para evitar manipulações dos nervos vagais. Um fio de seda 5-0 laço frouxo foi feito em torno de cada CCA. </li><li> Um pequeno tubo de silicone (2 mm de diâmetro) foi inserido entre o CCA e as suturas de seda em cada lado. Este tubo foi utilizada como uma tala do CCA do, a fim de evitar danificar as paredes arteriais, quando as suturas foram apertadas (Figura 4). </li><li> Ambos CCA da ocluídas por um minuto, apertando as suturas de seda. Apenas os ratos, em que o sinal FDL foi reduzido a &lt;10% do sinal de linha de base foram incluídos no estudo. Após a reabertura dos dois CCA de um período de cinco minutos de reperfusão foi iniciado. Por FDL foi assegurada uma completa reperfusão. Foram excluídos animais com reperfusão incompleta (ie &lt;90% de recuperação da CBF em relação à linha de base CBF). A sequência de um minuto de BCCAO e cinco minutos de reperfusão foi repetido duas vezes para um total BCCAO duratiem de 3 min. Figura 1 mostra o curso significativo CBF obtida de dez gravações FDL durante BCCAO e reperfusão. Durante o procedimento, é recomendável manter o pescoço ferida húmida usando solução salina normal. </li><li> Após a última reperfusão, todos os tubos e as suturas, bem como a sonda de fibras ópticas ligada ao crânio foi removido, as feridas foram suturadas e unguento de lidocaína (2% xilocaína; AstraZeneca GmbH, Wedel, Alemanha) foi aplicada várias vezes para as feridas como necessário para gestão analgésico. </li><li> Ratos foram transferidos para um pré-aquecido (30 ° C) caixa de recuperação (MediHEAT. PecoServives Ltd. Brough, Cumbria, Reino Unido) até que tinha recuperado a consciência completa. Em seguida, os ratinhos foram devolvidos às suas gaiolas para animais. </li></ol> 5. Oclusão da artéria cerebral média <ol><li> Os ratinhos foram re-anestesiado, uma sonda de temperatura rectal foi inserido e os ratinhos foram colocados numa almofada de aquecimento para expor o lado ventral do pescoço. Posteriormente, eles were fixados como descrito na secção BCCAO. </li><li> Uma ligadura permanente utilizando um longo 7-0 sutura de seda foi feito em torno da esquerda CCA proximal e o segmento foi cuidadosamente removido usando uma braçadeira caudalmente mosquito (Figura 4). </li><li> Outra ligadura permanente foi feito em torno da artéria carótida externa esquerda (ACE) e o segmento foi puxado para o lado direito do animal (Figura 4). </li><li> Tecido conjuntivo em torno do ICA esquerda foi cuidadosamente mobilizados e do nervo hipoglosso foi levantado suavemente para obter uma boa visão geral do curso distal do ICA. As curvas ICA esquerdo para a esquerda, enquanto a artéria pterigopalatina (PPA) segue o curso do ACI proximal para a direita (Figura 4). </li></ol> Comentário: Há uma outra artéria a ser identificado que gira para a direita, em direção caudal. Esta é a artéria occipital, que variavelmente origina a partir da bifurcação CCA ou do prparte oximal da ECA (Figura 4). <ol start="5"><li> Um ciclo de sutura solto foi feito em torno da ACI proximal através de um fio de seda 5-0. </li><li> Usando um pequeno grampo microvascular, a AIC foi temporariamente obstruída distalmente ao laço 5-0 sutura solto (Figura 4). </li><li> Uma pequena incisão foi feita na parte distal do CCA, pouco antes da bifurcação CCA com uma tesoura microvasculares (Figura 4). </li><li> Um monofilamento de silicone coberto de pré-seleccionada foi introduzida no CCA através da pequena incisão, e empurrado para dentro do ACI até parar no grampo microvascular (Figura 4). </li><li> O microclampe foi cuidadosamente removido do ACI, enquanto que o monofilamento foi avançado mais profundamente na ICA até parar (Figura 4). Comentário: Neste ponto, virar a pinça na mão esquerda de modo que você não mantê-lo como uma caneta. Isto ajuda a agarrar o filamento com a pinça mais facilmente.O grampo aplicador vascular deve ser realizada na mão direita. Pode ser necessário para quase apertar a sutura 5-0 solta em torno do ACI, a fim de evitar o sangramento a partir do lado da incisão. </li><li> A localização exata da ponta do monofilamento foi identificado para verificar se ele foi avançado para o ICA e não para o PPA. Se a ponta de monofilamento foi introduzida no PPA proximal, o filamento foi gentilmente puxado para trás pouco antes do ICA / PPA bifurcação. Foi tentou avançar o monofilamento no ICA, novamente, enquanto puxa suavemente o ICA proximal um pouco para o lado direito. Ao fazer isso, o curso natural da ACI distal foi simulado tornando mais fácil para acessar o ICA. </li><li> Após o monofilamento foi avançada no ICA quase completamente, o laço frouxo 5-0 sutura ao redor do ICA proximal foi reforçada, a fim de manter o filamento no lugar. Depois, todos os fios de seda foram encurtadas ea pele ferida foi suturada. </li><li> A perda de fluidos durante a cirurgia foi replentada por injecção ip de 1,0 ml de solução salina normal, Em seguida, o ratinho foi transferida para o quadro de recuperação pré-aquecido até que recuperaram a consciência completa. </li><li> Para a reperfusão, os ratos foram re-anestesiados e o monofilamento removido, depois foi cuidadosamente o afrouxamento de seda de sutura 5-0 em torno da ICA proximal. Em seguida, o fio de sutura 5-0 foi novamente apertados cuidadosamente, a fim de evitar o sangramento. </li><li> Após a confirmação da hemostasia completa, a ferida foi suturada pescoço. </li><li> A lidocaína unguento foi repetidamente aplicado localmente na pele, conforme necessário para alívio da dor e o rato foi transferido para o pré-aquecido (30 ° C) até que a caixa de recuperação completa recuperou a consciência. </li><li> Uma vez que foi observado um primeiro sinal de um procedimento bem sucedido MCAO, um horário circular do animal. A gravidade do déficit funcional foi quantificada pelo escore Bederson modificado para ratos 10. De acordo com esta pontuação Bederson modificado, os resultados neurológicos queestá classificada da seguinte forma: 0 (função motora normal), 1 (flexão do tronco e dos membros anteriores contralateral quando o mouse foi levantada pela cauda), 2 (circulando para o lado contralateral quando o mouse foi realizada pela cauda em uma superfície plana, mas normal, postura em repouso), 3 (inclinando-se para o lado contralateral em repouso) e 4 (sem atividade motora espontânea ou morto). </li></ol> 6. BCCAO Sham Cirurgia Para procedimentos sham BCCAO, os ratinhos foram anestesiados para a duração de um verdadeiro procedimento BCCAO PC, as glândulas foram mobilizados salivação ea do CCA foram expostos. É fundamental que as manipulações diretas para as artérias carótidas ou nervos vagais são evitados durante procedimento simulado. Manipulações do CCA podem danificar a sua camada endotelial, o que pode resultar numa libertação de compostos vasoactivos a partir de endotélio ou induzir trombose local dentro do lúmen arterial. Como conseqüência, os eventos tromboembólicos pode ocorrer após a cirurgia sham. Este seria um grande fator de confusão of thprocedimento e. Por outro lado, manipulações dos nervos vagais pode conduzir a uma disfunção temporária ou permanente do sistema nervoso parassimpático, que tem o potencial para a ocorrência de arritmia cardíaca significativa ou mesmo paragem cardíaca irreversível. Portanto, é crucial para evitar manipulações dos nervos vagais durante BCCAO. Procedimentos pós-cirúrgicos 7. Infarto Desconto Medidas Para a avaliação de tamanhos de infarto, os ratos sobreviveram durante 72 horas após MCAO. Em seguida os animais foram profundamente anestesiados, os cérebros foram removidos, snap-congelado em metil, seccionado e corado com hematoxilina (usando o protocolo de Papanicolau) para medições de volume de infarto. Secções do cérebro foram recolhidos em intervalos de 600 micrometros de enfarte e os volumes foram determinados utilizando um analisador de imagem (MCID núcleo 7,0 Rev.2.0, GE Healthcare Niagara Inc) e foi corrigida para o edema de acordo com o método de Lin et ai. 7,11 </sup&gt;. 8. Critérios de inclusão Foram incluídos apenas os animais que tiveram uma redução CBF LDF medido por mais de 90% em cada um dos três episódios BCCAO. Idealmente, o monitoramento LDF deve ser realizada em ambos os hemisférios cerebrais durante BCCAO. Para a praticabilidade, é realizada a monitorização LDF apenas os hemisférios esquerdo, o que irá ser submetido a MCAO mais tarde. Esta abordagem tem sido descrito antes 6,12. Reperfusão após cada episódio BCCAO foi necessário para ser completo (ou seja, retorno aos valores basais). Por razões de reduzir o tempo de duração camundongos foram mantidos sob anestesia, não monitorar CBF durante a cirurgia MCAO. Em um estudo piloto com um grupo separado de animais no entanto, acompanhámos CBF por LDF durante a cirurgia MCAO. Neste grupo de ratos, nós sempre medido a redução CBF em 90% em relação à linha de base antes CCA oclusão. Além disso, após a remoção de monofilamentos CBF recuperado a&gt; 90% da respectivavalores basais após oclusão da ACC. Estes critérios são FDL estabelecido na literatura e resultar em volumes infarto consistentes 7. Somente foram incluídos animais que tiveram uma pontuação Bederson de pelo menos de 1 após a recuperação da anestesia após MCAO. Além disso, apenas os animais que sobreviveram por 72 horas após MCAO e que não mostrou sinais de hemorragia intracraniana foram incluídos no estudo.

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</ol>

Não temos nada a divulgar.

Em nosso estudo, nós mostramos que três seqüências de BCCAO, cada um com duração de um minuto, seguida de reperfusão por cinco minutos, são um estímulo PC isquêmico adequado para induzir início de TI. Além disso, demonstrámos que o protocolo utilizado é o pré-condicionamento de um procedimento invasivo e menor segurança sem morbidez pós-operatória digno de nota, não há sinais de apoptose no tecido cerebral e nenhuma mortalidade. Vários protocolos de pré-condicionamento têm sido descritos ant...

Acidente vascular cerebral isquêmico é uma doença com uma elevada taxa de mortalidade e um enorme fardo socioeconómico 1. Apesar experimentais e clínicos esforços científicos intensivos ao longo das últimas décadas, as opções de tratamento para pacientes com AVC isquêmico agudo permanece muito limitada 2. Em contraste com isso, aumento do percentual de idosos nos países desenvolvidos vai aumentar drasticamente a incidência e prevalência de pacientes com acidente vascular cerebral isquêmico nas próximas décadas 3. Portanto, existe uma necessidade premente de novas estratégias de tratamento em pacientes com acidente vascular cerebral isquêmico. Uma abordagem é a de obter uma maior compreensão dos mecanismos de adaptação endógena de cérebro de lidar com um estímulo nocivo. Esta neuroprotecção derivado do cérebro, também conhecido como pré-condicionamento isquémico (PC) ou tolerância isquémica (TI) e descreve um fenómeno, no qual um estímulo nocivo não-nocivo aplicado ao cérebro, induz uma resistência transientecontra um subsequente insulto isquémico prejudicial 4. Ela ocorre em duas janelas de tempo diferentes: início de TI, o que ocorre dentro de minutos a algumas horas após o PC e atrasou TI, que precisa de uma latência de um par de horas para ocorrer 4. Até agora, as pesquisas sobre TI no cérebro tem se concentrado em atraso TI. Muito menos se sabe sobre os mecanismos de início de TI. O objetivo deste estudo é estabelecer a oclusão bilateral da artéria carótida comum (BCCAO), que é um estímulo criado para induzir atrasou, como um estímulo PC adequado para induzir início de TI à isquemia cerebral focal transitória (induzida pela oclusão da artéria cerebral média, MCAO) em ratinhos C57BL6 / J. Durante os dois procedimentos cirúrgicos (BCCAO e MCAO), foi realizado monitoramento do fluxo sanguíneo cerebral (CBF) pelo laser Doppler (LDF). BCCAO foi realizada em ratos anestesiados e respirando espontaneamente. Ambas as artérias carótidas comuns (CCA) foram expostose tapada durante 60 seg seguido de 5 min de reperfusão. Esta sequência / reperfusão BCCAO foi repetido duas vezes. Após a cirurgia, os ratos recuperaram rapidamente e não mostrou sinais de comprometimento funcional. A fim de excluir, que o protocolo BCCAO descrito acima não resultou em morte celular atraso no cérebro, foi realizada uma TdT mediada dUTP-biotina nick rotulagem final (TUNEL) coloração 72 horas após BCCAO (ou cirurgia sham) em um grupo separado. MCAO é um modelo amplamente estabelecida para a indução de isquemia cerebral focal em roedores 5-7. Os procedimentos cirúrgicos foram realizados com procedimentos operacionais padronizados (POP) 8. Depois de expor CCA esquerda, um monofilamento de silicone coberto foi introduzida no CCA distal, avançado através da artéria carótida interna (ICA) para o círculo de Willis até que a artéria cerebral anterior (ACA) e, desse modo, a origem da artéria cerebral média ( MCA) foi ocluído durante um período de tempo definido. No presente estudo, nósutilizado 45 min de MCAO, o que normalmente resulta em lesão isquémica no território MCA envolvendo as áreas do corpo estriado e corticais cerebrais. Em nosso estudo, analisamos o perfil temporal do início de TI usando BCCAO como o estímulo PC. Nossos dados indicam que o intervalo de tempo ideal entre BCCAO e MCAO para induzir o início de TI é de 30 min. Neste vídeo, vamos dar uma demonstração de ambos os procedimentos cirúrgicos, ou seja, BCCAO e MCAO.

<table><tbody><tr><td>Microscópio cirúrgico binocular</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Fonte de luz para microscópio</td><td>Zeiss</td><td>SteREO CL 1500 ECO</td><td></td></tr><tr><td>Placa aquecida com sonda retal</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico</td><td>David Kopf</td><td>Modelo 930</td><td></td></tr><tr><td>Tesouras</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dumont nº 5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dumont nº 7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Clamp microvascular</td><td>FST</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>Aparafusador de clamp</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola</td><td>FST</td><td>15372-62</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td>BER 562-20</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 5-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 7-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 8-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

oclusão bilateral artéria carótida comum como um estímulo pré-condicionamento adequados para induzir a tolerância isquêmica início da isquemia cerebral focal

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Existem evidências, que o pré-condicionamento isquêmico - um desafio isquêmico não-prejudicial ao cérebro - confere uma proteção transitória a um insulto isquêmico prejudicial subseqüente. Nós estabelecemos a oclusão da artéria carótida comum bilateral como um estímulo pré-condicionamento isquémico para induzir tolerância no início da isquemia cerebral focal transiente em ratos C57BL6 / J. Neste vídeo, vamos demonstrar a metodologia utilizada para este estudo.

Nosso protocolo BCCAO resultou em reduções CBF imediatas e profundo (&gt; 90%) quando as duas CCA da ocluídas (Figura 1). A reabertura da CCA é levado a completa reperfusão como monitorizado por LDF (Figura 1). Depois de PC, os animais não apresentaram sinais de incapacidade funcional. Além disso, não houve mortalidade. Coloração de TUNEL realizada 72 horas após a BCCAO num grupo separado de animais não mostraram sinais de morte celular retardada no cérebro após BCCAO (dados não mostrad...

Existem evidências, que o pré-condicionamento isquêmico (PC) - um desafio isquêmico não-prejudicial ao cérebro - confere uma proteção transitória a um insulto isquêmico prejudicial subseqüente. Nós estabelecemos a oclusão da artéria carótida comum bilateral (BCCAO) como um estímulo pré-condicionamento isquémico para induzir tolerância precoce (TI) para a isquemia cerebral focal transiente (induzida pela oclusão da artéria cerebral média, MCAO) em C57BL6 / J mice.

Oclusão bilateral artéria carótida comum como um estímulo pré-condicionamento adequados para induzir a tolerância isquêmica início da Isquemia Cerebral Focal

Há evidências crescentes de que o pré-condicionamento isquêmico — um desafio isquêmico não prejudicial ao cérebro — confere uma proteção transitória a um ...

O objetivo geral do experimento a seguir é demonstrar que a oclusão bilateral das artérias carótidas comuns induz um estado transitório de tolerância isquêmica frente à isquemia cerebral, dentro de uma janela temporal precoce. Isso é realizado posicionando uma sonda de laser doppler de fibra óptica acima do córtex para monitorar continuamente o fluxo sanguíneo cerebral. Como segundo passo, realiza-se a oclusão bilateral das artérias carótidas comuns, a qual induz a tolerância isquêmica precoce.A seguir, é realizada a oclusão da artéria cerebral média para induzir isquemia cerebral focal. São obtidos resultados que mostram diferenças nos tamanhos das lesões isquêmicas entre animais pré-condicionados e não pré-condicionados com base nas medidas histológicas do volume de infarto. Os métodos descritos serão utilizados para responder à pergunta se a tolerância isquêmica, que é um estímulo estabelecido na janela temporal tardia, também pode induzir tolerância isquêmica na janela temporal precoce. Após a indução da anestesia com 2,5% de ISO (fluorano), fixe o animal no estereotáxico e, em seguida, insira uma sonda retal para monitorar sua temperatura. Coloque o camundongo sobre uma plataforma aquecida com controle termostático para garantir uma temperatura central constante de 37 ± 0,5 °C durante a cirurgia.Em seguida, limpe e desinfete o local cirúrgico. Faça uma incisão mediana sagital de aproximadamente um centímetro para expor o crânio parietal sob o microscópio. Remova cuidadosamente o tecido conjuntivo com uma pinça.Em seguida, fixe diretamente no crânio uma sonda de fibra óptica, a dois milímetros caudal e cinco milímetros lateral de BRE MA, utilizando cola instantânea. A seguir, vire o camundongo para expor o lado ventral do pescoço. Depois, conecte a sonda de fibra óptica ao dispositivo de LDF por meio do adaptador da sonda.O programa Peri soft é utilizado para registrar o valor de LDF. Neste procedimento, faça uma incisão mediana sagital ventral de aproximadamente um centímetro. Separe as glândulas salivares direita e esquerda uma da outra.Disseque cuidadosamente os nervos vagos e as veias circundantes para expor as artérias carótidas subjacentes. Em seguida, faça um laço solto de sutura de seda 5-0 ao redor de cada ACA. A seguir, insira um pequeno tubo de silicone com diâmetro de dois milímetros entre as ACAs e as suturas de seda em cada lado da artéria carótida comum.Este tubo é usado como uma tala para as ACs, a fim de evitar danos às paredes arteriais quando os pontos são apertados. Em seguida, oclua ambas as ACs por um minuto apertando os pontos de seda. Inclua apenas o camundongo com redução do sinal de LDF inferior a 10% do sinal basal no estudo.Após a reabertura das ACs, inicie um período de reperfusão de cinco minutos. Repita a sequência de um minuto B-C-C-A-O e cinco minutos de reperfusão até um total de três minutos de B-C-C-A-O. Enquanto isso, após a última reperfusão, utilize solução salina normal para manter a ferida no pescoço úmida, removendo todos os tubos e pontos.Fechamento da ferida com sutura. Em seguida, aplicar pomada de lidocaína no local cirúrgico para analgesia. Depois disso, virar o camundongo ao contrário.Remova a sonda de fibra óptica presa ao crânio, feche a ferida com sutura e aplique lidocaína. Em seguida, transfira o camundongo para uma caixa de recuperação pré-aquecida. Devolva-o à gaiola do animal após ele recuperar completamente a consciência sob o microscópio.Realize uma ligadura permanente ao redor da artéria carótida comum proximal com um fio de seda 7-0 longo. Puxe suavemente o fio com uma pinça tipo mosquito. Em seguida, faça outra ligadura permanente ao redor da artéria carótida externa.Puxe o fio em direção ao lado direito do animal. Em seguida, remova o tecido conjuntivo que envolve a artéria carótida interna. Levante cuidadosa e suavemente o nervo hipoglosso para obter uma boa visão geral do trajeto distal da ACI; curve a ACI esquerda para a esquerda, enquanto a artéria tegopalatina segue o trajeto da ACI proximal para a direita.Em seguida, faça um laço de sutura frouxo ao redor da AIC proximal com um fio de seda cinco zero. Usando um pequeno clamp microvascular, oclua temporariamente a AIC distalmente ao laço de sutura frouxo cinco zero para prevenir sangramento retrógrado proveniente da AIC. A seguir, faça uma pequena incisão na parte distal da ACC logo antes da bifurcação da ACC utilizando tesoura microvascular.Introduza um monofilamento pré-selecionado revestido de silicone na ACI através da pequena incisão até que pare no grampeamento microvascular. Em seguida, remova cuidadosamente o grampeador micro do AIC ao mesmo tempo em que avança o monofilamento mais profundamente no AIC até que pare, após o monofilamento ter sido quase completamente avançado no AIC. Aperte o laço frouxo de sutura 5-0 ao redor do AIC proximal para manter o filamento no lugar e verifique se ele entrou no vaso correto.O primeiro sinal que indica um procedimento MCAO bem-sucedido é o movimento em círculos no sentido horário do animal e a curvatura do animal para apenas um lado quando é levantado pela cauda; a gravidade do déficit funcional pode ser quantificada. Utilizando a pontuação de Peterson modificada para camundongos na reperfusão, reanestesie o camundongo e remova o monofilamento após afrouxar cuidadosamente o fio de seda 5-0 ao redor da ICA proximal, em seguida aperte cuidadosamente novamente o fio 5-0 para prevenir sangramento. Esta figura mostra a evolução dos valores médios de CVF medidos por LDF durante a reperfusão B-C-C-A-O.Aqui está o perfil temporal dos volumes de infarto em diferentes intervalos de tempo de OCM após O-A-C-C-B. Houve uma redução significativa nos volumes de infarto em comparação com o Grupo Sham quando a O-A-C-C-B foi realizada 30 minutos antes da OCM. Além disso, os volumes de infarto foram reduzidos quando a OCM foi realizada duas horas e 24 horas após a O-A-C-C-B.Um atraso de 24 horas entre B-C-C-A-O e MCAO é a janela temporal ideal para a tolerância isquêmica tardia. Assim, pode-se concluir que a janela temporal ideal para a tolerância isquêmica precoce utilizando B-C-C-A-O como estímulo de condicionamento precoce é de 30 minutos antes da indução da isquemia cerebral focal transitória. De modo geral, este método é adequado para fornecer dados confiáveis nas áreas de estudo da tolerância isquêmica.Ao realizar este procedimento, é importante utilizar monofilamentos com comprimento padronizado no ouvido, ou usar filamentos comercialmente disponíveis com tamanho pré-definido.

bilateral-common-carotid-artery-occlusion-as-an-adequate

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra o procedimento de realização da oclusão permanente da artéria cerebral média distal, ou MCAO, com a artéria carótida comum, ou ligadura CCA, em ratos idosos para modelar o AVC isquêmico. Isso bloqueia o fluxo sanguíneo para o cérebro, levando à morte neuronal e gerando um modelo para estudar os mecanismos do AVC e possíveis tratamentos.

Induzindo isquemia via oclusão do cérebro médio e da artéria carótida comum em um modelo de rato

Fonte: Zheng, Y., et al. Modelos experimentais para estudar a neuroproteção do pós-condicionamento ácido contra isquemia cerebral. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a aplicação do pós-condicionamento ácido (APC) para avaliar seus efeitos neuroprotetores contra lesão isquêmica em um modelo de camundongo de oclusão da artéria cerebral média (MCAO). Ele descreve as etapas envolvidas na reperfusão no modelo MCAO e a aplicação de APC durante a reperfusão para mitigar a excitotoxicidade, o...

 Avaliação dos efeitos neuroprotetores do pós-condicionamento ácido em um modelo de camundongo com isquemia cerebral

Este protocolo descreve o pré-condicionamento hipóxico repetitivo ou breves exposições à hipóxia sistêmica que reduzem os volumes de infarto e a ruptura da barreira hematoencefálica após oclusão transitória da artéria cerebral média em camundongos. Ele também detalha a quantificação dupla do volume do infarto e da ruptura da barreira hematoencefálica após o AVC para avaliar a eficácia da proteção neurovascular.

Quantificação de Proteção Neurovascular sequência repetitiva Hypoxic Pré-condicionamento e Transient Oriente oclusão da artéria cerebral em ratos

Aqui apresentamos um protocolo para produzir oclusão média distal permanente da artéria cerebral em ratos fêmeas idosos com oclusão simultânea das artérias carótidas de gerar grandes infartos corticais e déficits sustentados. Mostramos confirmação do tamanho da lesão utilizando MRI estrutural às 24 h e 8 semanas após o acidente vascular cerebral.

Realizando Permanente Distal Oriente cerebral com carótida comum Oclusão da Artéria em ratos idosos para estudar Cortical Isquemia com Deficiência Sustentada

Oclusão de filamento intraluminal da artéria cerebral média é o modelo mais frequentemente utilizadas na vivo do acidente vascular cerebral experimental em roedores. Uma abordagem alternativa cirúrgica para permitir a reparação de artéria carótida comum é realizada aqui, que permite a reperfusão da artéria carótida comum e uma reperfusão completa no território da artéria cerebral média.

Oclusão de artéria Cerebral média, permitindo a reperfusão através de reparação de artéria carótida comum em ratos

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

Este protocolo apresenta um guia passo a passo para os pesquisadores realizarem o procedimento de oclusão da artéria cerebral média em camundongos usando o método modificado da artéria carótida externa Longa. As modificações apresentadas neste artigo visam aumentar a acurácia da oclusão da artéria cerebral média e garantir a reperfusão completa.

Otimização do Método de Oclusão da Artéria Cerebral Média Longa para Reperfusão Completa

Este protocolo descreve o processo de preparação para a reperfusão da oclusão da artéria cerebral média através da artéria carótida comum.

Preparação de um modelo modificado para reperfusão de oclusão da artéria cerebral média

O método da agulha de estenose bilateral assimétrica da artéria carótida comum é proposto para criar um modelo de camundongo para comprometimento cognitivo vascular e demência. Isso resulta em resultados de longo prazo em comparação com modelos previamente estabelecidos e é compatível com ressonância magnética ao vivo. A representação visual demonstrando o procedimento fornece orientação para o domínio da cirurgia.

Um modelo de camundongo para comprometimento cognitivo vascular e demência baseado em estenose bilateral assimétrica da artéria carótida comum guiada por agulha

Este protocolo descreve o processo de indução de um modelo de coma isquêmico cerebral usando um método modificado de oclusão de quatro vasos.

Modelo de Coma Isquêmico Cerebral Induzido por Oclusão Modificada de Quatro Vasos

Aprenda a induzir tolerância isquêmica precoce em camundongos usando oclusão bilateral da artéria carótida comum como estímulo de pré-condicionamento. Este método demonstra proteção cerebral contra isquemia focal.

Oclusão bilateral artéria carótida comum como um estímulo pré-condicionamento adequados para induzir a tolerância isquêmica início da Isquemia Cerebral Focal (Vídeo) | JoVE Journal

Oclusão bilateral artéria carótida comum como um estímulo pré-condicionamento adequados para induzir a tolerância isquêmica início da Isquemia Cerebral Focal

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