Name: Captura óptica de nanopartículas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 39 s
Description: Aprenda a capturar nanopartículas dielétricas de aproximadamente 20 nanômetros usando armadilhas de duplo nano-orifício com baixa intensidade laser. Este método permite estudar interações biofísicas e dobramento de proteínas em nível molecular.

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Reconhecemos Thorlabs por patrocinar esta publicação e financiamento da Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Council (NSERC) do Canadá Discovery Grant. Agradecemos Bryce Cyr e Douglas Rennehan para assistência de produção na confecção deste artigo vídeo.

O princípio da técnica de aprisionamento SIBA é ilustrado na Figura 1. Figura 2 é um esquema da montagem experimental. 1. Configuração captura óptica Para esta seção do procedimento, consulte o manual do kit de captura óptica 9 ou óptico medições de força manual do módulo 10 para obter detalhes sobre a configuração dos kits. Note-se que um fotodiodo de avalanche (APD) é usado em vez de um detector de posição de quadrante. Para os parafusos não estão incluídos no kit de captura óptica, use os na tampa de rosca e kit de hardware (Thorlabs, HW-KIT2). Proteção dos olhos deve ser usado em todos os momentos em que o laser está ligada. Verifique se o feixe está contido dentro de uma área segura e acessórios reflexivos, tais como jóias, devem ser evitados. Além disso, proteção contra descarga eletrostática é aconselhável ao manusear diodos de laser. <ol><li> Configure o kit de pinça óptica (Thorlabs, OTKB / M) e da medição vigorurement módulo (Thorlabs, OTKBFM) como por seus respectivos manuais. Um fotodiodo de avalanche de silício (DPA) (Thorlabs, APD110A) é usada em vez da força de medição do módulo (Thorlabs, OTKBFM) quadrante detector de posição. </li><li> Ligue a APD para um osciloscópio (Tektronics, TDS1012) através de um cabo coaxial. </li><li> Adicionar uma placa de meia onda (Thorlabs, AHWP05M-980) no interior do expansor de feixe. A placa de meia onda é fixado entre dois tubos de lente (Thorlabs, SM1L03). </li></ol> 2. Nanofabricação <ol><li> Cortar uma lâmina de ouro revestido (EMF Corp, Cr / Au) em quatro partes iguais. Como uma alternativa para as lâminas disponíveis comercialmente, também utilizado um filme de 100 nm de espessura Au com uma camada de adesão 2 nm Ti depositado por deposição de feixe e para uma lâmina de vidro de 1 polegada quadrada a uma temperatura elevada do substrato de 200 ° C para a pelo menos 1 hora. Isto produz uma película policristalina lisa. </li><li> Criar uma imagem bitmap da estrutura de dupla nanohole como a entrada parao sistema de feixe de íons focalizados (FIB) é um bitmap. A imagem é constituída por dois círculos sólidos, 160 nm de diâmetro, com um centro à distância centro de 190 nm. Este modelo cria uma separação da ponta de cerca de 15 nm. Entre os círculos, uma linha fina opcional pode ser colocada para remover qualquer resíduo de metal entre as pontas. Figura 3a mostra um exemplo de imagem de bitmap. </li><li> Fabricar a estrutura de dupla nanohole usando um FIB (Hitachi, FB-2100) sistema de moagem. Converter o bitmap em passo 2.2 em um padrão de moagem FIB (a área escura no mapa de bits fica moído pela FIB). Use uma tensão de iões de aceleração de 40 kV, um feixe de abertura máxima de 15 um de diâmetro inferior a 60 vezes de ampliação K. Moinho 80 passa por cada dupla nanohole com um tempo de dosagem de 5 mseg em cada passagem. Figura 3b mostra uma típica estrutura resultante. Repita se necessário. Nano buracos apresentaram múltiplas devem ser feitas de maneira a permitir a erros. </li><li> Adicionar os marcadores de registo, quer utilizando o FIB e / ou por he para indicar a localização aproximada do duplo nanohole (s). </li><li> Opcionalmente, dar uma imagem SEM dos buracos para avaliar com precisão a qualidade e estrutura de ponta separação. </li></ol> 3. Microfluídicos Câmara Um diagrama de fluxo do processo para a fabricação da câmara de microfluidos é mostrado na Figura 4. <ol><li> Deitar 10 g de polidimetilsiloxano (PDMS) base (Dow Corning Canada, Sylgard 184 Base de Silicone Elastomer) e um adicional de 1 g de agente de cura (Dow Corning Canada, Sylgard 184 Silicone Agente de Cura Elastomer) em um copo descartável. Mistura-se durante alguns minutos. </li><li> Evacuar mistura na câmara de vácuo até que todas as bolhas se foram. </li><li> Despeje 1,5 g de PDMS em um prato centímetros de diâmetro 9 Petri. Spin-coat PDMS na parte inferior da placa de Petri de 950 rpm por 65 segundos Figura. 4b mostra o resultado. A espessura não é crítica, desde que ele esteja sob 80 um, a película de ouro está dentro da parte inferior do microscópio objetividadedistância de trabalho e de. </li><li> Suavemente lugar 3-5 # 1.5 lamelas (Fisher Scientific, 12-541-B) sobre o PDMS tal que não se sobreponham e evacuar durante 30 min, como mostrado na Figura 4c. </li><li> Se lamelas movido e empilhados uns em cima dos outros durante a evacuação, gentilmente movê-los um do outro. O cuidado deve ser tomado como manter PDMS sob lamínulas fina e uniforme. </li><li> Se a manipulação de lamelas era necessário, evacuar placa de Petri de novo durante 30 min. </li><li> Remover placa de Petri de câmara de vácuo e cozinhar em placa quente durante 20 minutos a 85 ° C. </li><li> Usando uma lâmina de barbear, cortar um da tampa desliza suavemente, em seguida levante o slide usando uma pinça de ponta fina. Uma fina camada de PDMS permanecerá na lamela como PDMS é mais adesivo à lamela de vidro do que a placa de Petri PMMA como na Figura 4e. </li><li> Cortar uma janela 3 x 3 mm na PDMS com uma lâmina de barbear, como no Figura 4F. Esta janela irá formar a câmara onde o nsolução anoparticle serão mantidos. </li></ol> 4. Preparação da Amostra <ol><li> Fabricar uma lâmina de microscópio com um orifício com diâmetro de ¾ &quot;no centro utilizando acrílico. Isto pode ser conseguido com um cortador a laser. Outros materiais podem ser usados ​​também. A amostra de ouro será colocado no interior do furo. </li><li> Circunferência fita do furo com fita dupla face. Use uma lâmina de barbear para cortar a fita em excesso. </li><li> Colocar a lâmina do microscópio para a lamela, PDMS enfrentar. </li><li> Dilui-se a solução de nanoesferas de poliestireno (Thermo Scientific, 3020A) de 1% w / v e 0,05% w / v usando água desionizada. A micropipeta pode ser usado. </li><li> Adicionar algumas gotas de solução na janela de PDMS. Adicionar uma gota sobre a amostra de ouro onde os nano buracos apresentaram estão localizados. </li><li> Lugar amostra de ouro sobre lamelas de tal modo que os nano buracos apresentaram estão dentro da janela de PDMS. Fazer bolhas certeza não estão presentes no interior da câmara. Pressione amostra de ouro contra lamela e dab qualquer excesso de solução. </li><li> Se, utilizando uma objectiva de imersão em óleo (como é o caso aqui, mas não necessária), adicionar uma gota de óleo de imersão sobre o lado oposto da lamela, por baixo da janela de PDMS. Tome nota da localização das nano buracos apresentaram. </li><li> Insira lâmina de microscópio em suporte de slides, o óleo para baixo, e depois titular inferior slide até óleo de imersão faz contato com a objetiva do microscópio. </li><li> Cerca de alinhar fase de slides de tal forma que marcas indicador estão sob o objetivo. </li><li> Siga linhas indicadoras que antecederam os nano buracos apresentaram. Slides posição tal que marcas indicadoras e outras áreas abertas são apuradas a partir do centro da tela. Transmissão de luz em excesso pode prejudicar a APD. </li><li> Ligue laser. À medida que o espelho dicróico não é perfeito, um ponto perto do centro da tela a partir do feixe de laser deve ser exibida. </li><li> Usando o software de controle de fase piezo, refinar ainda mais o alinhamento em todos os três eixos. </li></ol> 5. Aquisição de Dados <ol><li> Com o help das marcas indicadoras de posição, o local próximo de uma localização nanohole conhecido. Os nano buracos apresentaram será pequeno demais para ser resolvido e deve aparecer somente como manchas. </li><li> A transmissão de luz através da amostra é indicado pelo nível de sinal no osciloscópio. Prosseguir o alinhamento da amostra, tal como para maximizar a transmissão de luz. Tenha cuidado com marcas indicadoras e arranhões visíveis e não-visíveis como a transmissão de luz será elevado nessas áreas. Nano buracos apresentaram mostrará mudanças súbitas da transmissão de luz enquanto arranhões apresentam mudanças mais graduais. </li><li> Usando o waveplate, ajustar a polarização da luz para a maior transmissão de luz como a estrutura de dupla nanohole é polarizada. </li><li> Para minimizar o ruído, construir um filtro RC com a breadboard, 200 e 100 kW resistor capacitor pF e conectá-lo após a APD através de um cabo coaxial. Estes valores podem ser ajustados para obter o melhor desempenho, considerando a largura de banda de aquisição de dados necessária. </li><li> Ligue osciloscópio e dados acervoition módulo (Omega, USB-4711A) para o filtro RC com cabos coaxiais e adaptador T. </li><li> Amostrar a voltagem de APD, utilizando o módulo de aquisição de dados para o tempo desejado. Tempos de aquisição são geralmente na ordem das centenas de segundos. Neste caso, um pacote de software personalizado foi utilizado para a aquisição de dados. A tensão é amostrado a 2000 vezes por segundo. </li><li> Matlab, filtrar os dados adquiridos utilizando um filtro Savitzky-Golay e traçar-lo em função do tempo em um gráfico. </li></ol>

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</ol>

Produção e livre acesso a este artigo é patrocinado pela Thorlabs.

A actual configuração tem capacidades de armadilhagem eficazes devido à estrutura do nanohole. Este armadilhas nanohole ~ 10 nm escala partículas dielétricas em baixas intensidades ópticas. Armadilhas outros novos ópticos incluem ópticos antenas dipolo 11, sussurrando-gallery mode-ressonadores ópticos 12,13 e 14 guias de onda, no entanto, que normalmente operam no regime perturbativo, que é limitado pela escala ordem inversa quarto da energia necessária óptico contra partículas tamanho, ao contrário do SIBA e duplo nanohole armadilha. Formas de abertura alternativos também têm sido apresentados para a captura, tal como um nanopore plasmonic rectangular 15. Outras qualidades favoráveis ​​apresentadas pela armadilha de duplo nanohole incluem o comportamento de tamanho de partícula selectivo 7, um local de retenção único (para limitar multi-partículas trapping) e facilidade de fabricação 16. Como uma alternativa ao uso de um FIB, double-nano buracos apresentaram pode ser fabricada usando uma litografia coloidaly 6. Aprisionamento de materiais biológicos de polarizabilidade grande tamanho e incluiu bactérias 3, células vivas, 17,2,18, o vírus do mosaico do tabaco 3 e manipulação e alongamento de cadeias de ADN nas extremidades amarradas com grandes partículas dieléctricas 19, no entanto captura directa de menor amostras biológicas sem tethering permanece desafiador. Esta configuração trapping é capaz de prender pequenas partículas dielétricas em intensidades mais baixas de luz do que uma pinça de luz convencionais e nanohole circular, permitindo que pequenas partículas biológicas a ser realizada por longos períodos de tempo sem danos ou tethering. Além disso, os eventos de armadilhagem exibem uma relação sinal-para-ruído de alto permitindo esta configurado para trabalhar como um sensor sensível e detectar as menores partículas biológicas, tais como vírus e proteínas. De facto, 20 esferas de poliestireno nm tem um índice de refracção de 1,59, que é comparável com as menores partículas biológicascomo vírus. Este método poderia tornar-se uma técnica confiável e maduro para a imobilização e manipulação de nanopartículas, incluindo partículas biológicas. Aplicações desta técnica incluem a integração em um ambiente de microfluídica. Em vez de uma única câmara de microfluidos, um canal seriam usados ​​para controlar dinamicamente o ambiente ideal para a detecção de índice de refracção. Tal configuração seria definido em um único chip microfluídico levando a uma configuração mais estável e robusto e mais rápido de análise de solutos. Outra opção é o desenvolvimento de um sistema de detecção de fluorescência para a caracterização de um único fluorescente etiquetados vírus, pontos quânticos de semicondutores e verde proteínas fluorescentes. Esta configuração também tem potencial para a modificação em um biossensor para um único vírus ou proteína, permitindo amostras muito pequenas para serem analisados. A descoberta da droga 21 e a detecção de doenças e infecções 22 beneficiariam de um detector de proteína única. Raman SPEctroscopy podem ser incorporados para a detecção de sinais de Raman de partículas individuais e eventos de ligação. A estrutura em dupla-nanohole permite fortes melhorias de campo locais nas pontas, apropriadas para a ponta melhorada, espectroscopia Raman 23. Um método altamente específico etiqueta livre de caracterização dos materiais também seria possível utilizando espectroscopia de Raman 24.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Fabricante </td><td> Número de série </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Óleo de imersão </td><td> Cargille Labs </td><td> 16484 </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Sylgard 184 Kit de elastômero de silicone </td><td> Dow Corning Canadá </td><td></td><td> Quantidade: 1 Contém tanto a base eo agente de cura PDMS </td></tr><tr><td> Ouro revestidas lâminas </td><td> EMF Corp </td><td> Cr / Au </td><td> Quantidade: 1 Uma camada de adesão Ti pode ser usado como bem </td></tr><tr><td> Não 1,5 Lamelas </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-541 B- </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Focada-Ion Sistema Boca </td><td> Hitachi </td><td> FB-2100 </td><td></td></tr><tr><td> Módulo de Aquisição de Dados Portátil </td><td> Omega Engineering </td><td> USB-4711A </td><td> Quantity: 1 </td></tr><tr><td> Estágio linear </td><td> Parker </td><td> 4034M </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Cabeça laser de diodo e Controlador </td><td> Sacher Lasertechnik Grupo </td><td> TEC 120 </td><td> Quantidade: 1 Manual de Tunable Littrow Laser System </td></tr><tr><td> Osciloscópio Digital </td><td> Tektronics </td><td> TDS1012 </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Padrões de tamanho de 20 nm Nanosphere </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3020A </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> 1 &quot;Montagem de Lente </td><td> Thorlabs </td><td> LMR1 </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> 0,3 metro Lens &quot; </td><td> Thorlabs </td><td> <a href="http://www.thorlabs.com/thorProduct.cfm?partNumber=SM1L03" target="_blank">SM1L03</a> </td><td> Quantidade: 2 </td></tr><tr><td> Absorção ND 4,0 Filtro </td><td> Thorlabs </td><td> NE40A </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Alumínio Breadboard </td><td> Thorlabs </td><td> MB1824 </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Avalanche Photodiode </td><td> Thorlabs </td><td> APD110A </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Medidor de energia digital óptica </td><td> Thorlabs </td><td> PM100 </td><td> Quantidade: 1 Obsoletos, outros farão </td></tr><tr><td> Força Módulo de Medição </td><td> Thorlabs </td><td> OTKBFM </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Cinemática Espelho Monte </td><td> Thorlabs </td><td> KM200-E03 </td><td> Quantidade: 1 Com quase espelho da qualidade IR Laser </td></tr><tr><td> Diode Laser driver de corrente constante </td><td> Thorlabs </td><td> LD1255R </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> LD1255 Placa Tabela Optical Montagem </td><td> Thorlabs </td><td> LD1255P </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Montado placa de meia onda acromática </td><td> Thorlabs </td><td> AHWP05M-980 </td><td> Quantidade: 1 690 - 1200 nm </td></tr><tr><td> Kit pinça óptica </td><td> Thorlabs </td><td> OTKB / M </td><td> Quantidade: 1 Métrica ou Imperial </td></tr><tr><td> Publicar Base de Suporte </td><td> Thorlabs </td><td> BA2 </td><td> Quantidade: 2 </td></tr><tr><td> Fonte de Alimentação </td><td> Thorlabs </td><td> PS-12DC-EUA </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Cabo de Alimentação </td><td> Thorlabs </td><td> LD1255-CAB </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Placa de ângulo direito </td><td> Thorlabs </td><td> AP90 </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Grampo Mensagem ângulo direito </td><td> Thorlabs </td><td> RA90 </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Mensagem de aço inoxidável óptico </td><td> Thorlabs </td><td> TR3 </td><td> Quantidade: 1 </td></tr><tr><td> Grampo tabela </td><td> Thorlabs </td><td> CL1 </td><td> Quantidade: 2 Obsoletos, outros farão </td></tr><tr><td> Sensor térmico </td><td> Thorlabs </td><td> PM210 </td><td> Quantidade: 1 Para medidor de potência óptica digital </td></tr><tr><td> 100 Capacitor pF </td><td></td><td></td><td> Quantidade: 1 Qualquer marca, não crítica </td></tr><tr><td> 200 Resistor KOhm </td><td></td><td></td><td> Quantidade: 1 Qualquer marca, não crítica </td></tr><tr><td> Chapa acrílica </td><td></td><td></td><td> Quantidade: 3 &quot;x 1&quot; Qualquer marca, não crítica </td></tr><tr><td> Variedade de cabos coaxiais, fios e conectores </td><td></td><td></td><td> Conforme necessário </td></tr><tr><td> Breadboard </td><td></td><td></td><td> Quantidade: 1 Qualquer marca, não crítica </td></tr><tr><td> Lente côncava </td><td></td><td></td><td> Quantidade: 1 Qualquer marca, não crítica </td></tr><tr><td> Lapidador </td><td></td><td></td><td> Quantidade: 1 Qualquer marca, não crítica </td></tr><tr><td> Fita dupla face </td><td></td><td></td><td> Qualquer marca, não crítica </td></tr><tr><td> Gilete </td><td></td><td></td><td> Quantidade: 1 Qualquer marca, não crítica </td></tr><tr><td> Pinça </td><td></td><td></td><td> Quantidade: 1 Qualquer marca, de ponta fina </td></tr></tbody></table>

captura óptica de nanopartículas

Optical Trapping of Nanoparticles

Captura óptica é uma técnica de imobilização e manipular pequenos objetos de uma maneira suave utilizando a luz, e que tem sido amplamente aplicado na captura e manipulação de pequenas partículas biológicas. Ashkin e colegas de trabalho demonstrou pela primeira vez pinças ópticas usando um único feixe focalizado 1. A armadilha único feixe pode ser descrito com precisão usando a formulação força perturbativa gradiente no caso de pequenas partículas de regime de Rayleigh 1. No regime perturbativa, a potência óptica requerida para capturar uma balança de partículas como a potência inversa quarto do tamanho de partícula. Altas potências ópticas podem danificar as partículas dielétricas e causar aquecimento. Por exemplo, esferas de látex de 109 presos nm de diâmetro foram destruídos por um feixe mW 15 em 25 seg 1, que tem sérias implicações para a matéria biológica 2,3. A auto-indução de volta a ação-trapping (SIBA) óptico foi proposto para prender 50 esferas de poliestireno nm nonão-perturbativa regime 4. Em um regime não-perturbativa, mesmo uma partícula pequena com pouco contraste permissividade para o fundo pode influenciar significativamente o campo eletromagnético do ambiente e induzir uma grande força óptica. Como uma partícula entra uma abertura iluminada, a transmissão de luz aumenta drasticamente devido à carga de dielétrico. Se a partícula tenta sair da abertura, a transmissão diminuída provoca uma alteração na dinâmica para o exterior a partir do furo e, por Terceira Lei de Newton, resulta em uma força sobre as partículas para o interior no orifício, prendendo a partícula. A transmissão da luz pode ser monitorada, daí, a armadilha pode ser um sensor. A técnica de captura SIBA pode ser ainda mais melhorado através da utilização de uma estrutura de duplo nanohole. A estrutura de dupla nanohole foi mostrado para dar um aumento do campo local forte 5,6. Entre as duas pontas afiadas da dupla nanohole, uma partícula pequena pode causar uma grande alteração na óptica transmission, induzindo assim uma grande força óptico. Como resultado, as nanopartículas podem ser interceptados mais pequenos, tais como esferas de silicato de 12 nm 3,4 nm 7 e hidrodinâmicos raio proteínas de albumina de soro bovino 8. Neste trabalho, a configuração experimental utilizado para a captura de nanopartículas é delineada. Em primeiro lugar, nós detalhe da montagem da instalação aprisionamento que se baseia em um Kit Pinça Thorlabs óptico. Em seguida, explicar o procedimento nanofabricação da dupla nanohole em um filme de metal, a fabricação da câmara de micro e a preparação da amostra. Por fim, detalhe o procedimento de aquisição de dados e fornecer os resultados típicos para capturar 20 nanoesferas de poliestireno nm.

<html> Um rastreio de aquisição típico é mostrado na Figura 5a. Um evento de captura é caracteristicamente brusca, com uma borda afiada, mostrando uma mudança clara entre dois níveis de potência de transmissão. Como as partículas estão sujeitas ao movimento browniano, os eventos de aprisionamento irá ocorrer aleatoriamente. Para 20 partículas nm, mudanças de transmissão de armadilhas eram normalmente em torno de 5-10% e tempos de armadilhas, em torno de 10-300 seg. O tempo típico para realizar um evento de aprisionamento para a alimentação e concentração acima apresentado é da ordem de um minuto. Devido ao impedimento estérico é incomum ver captura de partículas múltiplas simultaneamente, embora uma vez uma partícula é liberada, é tipicamente seguido por um evento posterior captura. Consoante a qualidade dos resultados obtidos, pode haver algum aumento do ruído de sinal no estado de presa. Este aumento do ruído vem do movimento browniano das partículas aprisionado. Sem a partícula presa, esta fonte de ruído não está presente. <html> _content &quot;&gt; Alguns artefactos podem apresentar-se nos resultados que não são indicativos de eventos de armadilhagem. Resultados deriva, que mostram mudanças lentas na transmissão ao longo de um período de minutos, como mostrado na figura 5b, deve ser descartada. Outros artefactos podem também estar presentes, tais como mudanças de transmissão inconsistentes, barulho excessivo ou nenhuma retenção de todo. Por exemplo, pode fazer com que as bolhas de intensidade saltos descontínuos, se não for tomado cuidado para assegurar que a câmara seja livre de bolhas. Estas bolhas respondem de forma diferente aos acontecimentos de armadilhagem em termos de dinâmica mudança de comportamento e intensidade, e por isso eles são facilmente identificáveis. Tais sintomas podem ser causados ​​por uma estrutura de dupla nanohole pobres, contaminantes ou vibrações mecânicas. num ambiente calmo, de baixa atividade é altamente recomendado para colocar esta configuração. Além disso, permitindo a laser e fase para resolver alguns minutos após o alinhamento pode ajudar também. s/ftp_upload/4424/4424fig1.jpg &quot;/&gt; Figura 1 transmissão subwavelength abertura óptica: a) Sem partículas, b) transmissão aumentada, devido à partícula dieléctrico; c) Se as tentativas para deixar de partículas, a diminuição do impulso de luz (AT) fará com que uma força (F) sobre a partícula como a. puxá-lo para trás para dentro do buraco, d) Red-deslocamento da curva de transmissão causados ​​pela partícula, conduzindo à alteração do AT transmissão. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4424/4424fig2.jpg" /> . Figura 2 uma representação esquemática) Total de aprisionamento de configuração, o alargamento do círculo vermelho é mostrado em b), b) mostra o alargamento duplo nanohole, e as nanoesferas dentro da câmara de PDMS, c) imagem SEM da estrutura de dupla nanohole. Siglas utilizadas: LD = diodo laser; ODF = densidade óptica filtro; HWP = placa de meia onda; BE = expansor de feixe; MR = espelho; MO = objetiva do microscópio; OI MO = óleo immerobjetivo Sion microscópio; DH = duplo nanohole, APD = avalanche fotodetector. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4424/4424fig3.jpg" /> Figura 3 a) Exemplo figura bitmap usado na fabricação FIB;. B) Uma imagem SEM de uma dupla nanohole. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/4424/4424fig4.jpg" /> Figura 4. Diagrama de processo para a fabricação da câmara de microfluidos. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/4424/4424fig5.jpg" /> Figura 5. (A) aquisição típica de prender eventos com 20 esferas de poliestireno nm. (B) A aquisição pobre mostrando deriva aguda.

Os detalhes de instalação a seguir abordagem armadilhas de baixa potência óptica do dielétrico nanopartículas usando um duplo-nanohole no filme de metal.

Captura óptica de nanopartículas

O aprisionamento óptico é uma técnica para imobilizar e manipular pequenos objetos de maneira suave utilizando a luz, e tem sido amplamente aplicada no aprisionamento de...

O objetivo geral deste procedimento é criar uma configuração de aprisionamento óptico por abertura para prender partículas de cerca de 20 nanômetros de tamanho. Para isso, um detector é adicionado a uma configuração existente de aprisionamento a laser óptico para permitir a medição. Em seguida, a solução de nanopartículas a ser medida é dispensada em uma câmara microfluídica com a armadilha de duplo nano orifício, e a câmara é carregada na configuração de aprisionamento óptico.Quando uma partícula entra na abertura iluminada, a transmissão de luz aumenta drasticamente devido à carga dielétrica. Se a partícula tenta sair da abertura, a transmissão reduzida provoca uma mudança no momento para fora do orifício, e, pela terceira lei de Newton, resulta em uma força que puxa a partícula de volta para dentro do orifício, aprisionando-a. A partícula provoca um deslocamento para o vermelho da curva de transmissão, o qual pode ser monitorado.Assim, a armadilha pode se tornar um sensor. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram eventos de aprisionamento de nanopartículas, incluindo a desnaturalização de proteínas aprisionadas, indicada por alterações na intensidade do laser ao passar pelo duplo nano-orifício. A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como o aprisionamento óptico por força de gradiente, é a capacidade de aprisionar nanopartículas menores com intensidades de laser mais baixas.Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na bioquímica, como como as proteínas individuais se dobram e interagem, e como as partículas virais infectam células vivas? Geralmente, os indivíduos que utilizam este método enfrentarão dificuldades porque é difícil integrar o duplo orifício nana em um sistema de aprisionamento a laser já existente. A configuração de aprisionamento óptico baseia-se em um kit de pinças ópticas da Thor Lab, equipado com um módulo de medição de força.Um fotodiodo de avalanche é utilizado para substituir o detector de quadrantes no módulo de medição de força. Ao configurar o sistema de aprisionamento óptico, deve-se usar proteção ocular sempre que o laser estiver ligado. Certifique-se de que o feixe permanecerá confinado em uma área segura operando em uma sala fechada e restringindo o feixe ao máximo dentro da montagem de aprisionamento; deve-se evitar joias reflexivas.Usam-se luvas de látex. Para garantir a limpeza da óptica, monte o kit de pinça óptica e o módulo de medição de força. De acordo com as instruções do fabricante, o kit de pinça óptica montado possui um design de microscópio invertido e é composto pelos seguintes elementos: um laser de aprisionamento, um objetivo de imersão em óleo de 100x, uma platina de posicionamento de amostra com três eixos e uma câmera CCD.Observe que é aconselhável proteção contra descarga eletrostática ao manipular diodos a laser. O módulo de medição de força permite a calibração das pinças ópticas por meio da detecção posicional do plano focal traseiro do condensador. Um fotodiodo de avalanche à base de silicone ou um PD é usado em vez dos módulos de medição de força.O detector de posição de quadrante também insere um filtro resistor-capacitor ou filtro RC usando um resistor de 200 kilo ohms e um capacitor de 100 picofarads. Isso é usado para reduzir o ruído de alta frequência e facilitar a visualização de eventos de aprisionamento no osciloscópio. Use um cabo coaxial para conectar o filtro RC após o APD. Em seguida, use cabos coaxiais e um adaptador em T para conectar o osciloscópio e o módulo de aquisição de dados ao filtro RC.O sistema agora está pronto para o carregamento da amostra. A abertura com duplo nano orifício é composta por dois nano orifícios usinados em uma película de ouro por meio de um feixe de íons focado. A película tem 100 nanômetros de espessura e é suportada por um substrato de vidro.Os nano orifícios se sobrepõem para produzir duas pontas afiadas. As nanopartículas serão aprisionadas no espaço entre essas pontas pela luz laser que incide sobre o duplo nano orifício.Recursos de registro grandes também devem ser usinados no filme metálico para ajudar a identificar a localização do orifício duplo em nanoescala no microscópio óptico. Esses recursos devem ser posicionados a cerca de 100 micrômetros de distância do orifício duplo em nanoescala. Despeje 10 gramas de poli(dimetilsiloxano) ou base de PDMS e um grama de agente de cura em um copo descartável e misture por alguns minutos.Em seguida, coloque a mistura em uma câmara de vácuo até que todas as bolhas desapareçam. Depois, despeje 1,5 gramas de PDMS em uma placa de Petri com diâmetro de nove centímetros. Aplique o PDMS no fundo da placa de Petri por meio de spin coating a 950 RPM durante 65 segundos, seguindo o procedimento de centrifugação.A espessura não é crítica, desde que seja inferior a 80 micrômetros. Coloque suavemente três a cinco lamínulas número 1,5 sobre o PDMS de modo que não se sobreponham e faça a evacuação por 30 minutos.Se durante a evacuação as lamínulas se moverem e ficarem empilhadas umas sobre as outras, mova-as suavemente para separá-las. Certifique-se de manter a camada de PDMS sob as lamínulas fina e uniforme. Em seguida, evacue a placa de Petri novamente por 30 minutos.Retire a placa de Petri da câmara de vácuo e aqueça-a em uma placa aquecedora por 20 minutos a 85 graus Celsius para curar o PDMS. Uma vez que o PDMS esteja solidificado, use uma lâmina de barbear para cortar ao longo das bordas de uma das lamínulas. Em seguida, com pinça de ponta fina ou uma lâmina, levante cuidadosamente a lamínula; uma fina camada de PDMS aderirá à lamínula.Coloque a lamínula com PDMS em um novo recipiente de Petri. Em seguida, utilizando uma lâmina de barbear, recorte uma janela de três milímetros por três milímetros no PDMS. Esta janela formará a câmara onde a solução de nanopartículas será mantida.Use um cortador a laser para fabricar um suporte de lâmina de microscópio de acrílico com um orifício de três quartos de polegada de diâmetro no centro. Fixe a circunferência do orifício com fita adesiva dupla face. Use uma lâmina de barbear para cortar qualquer excesso de fita.Coloque a lâmina de microscópio fabricada sobre uma das lamínulas revestidas com PDMS preparadas, de modo que o PDMS fique sanduichado entre o vidro e o acrílico. Usando uma pipeta microliterada, adicione algumas gotas de uma solução de nanoesferas de poliestireno a 0,05% em peso por volume à janela de PDMS.Adicione uma gota sobre a película de ouro onde estão localizados os nano orifícios. Coloque a amostra de ouro sobre lamínulas, com os nano orifícios dentro da janela de PDMS. Certifique-se de que não haja bolhas na câmara.Em seguida, pressione a amostra dourada contra a lamínula. Remova com cuidado qualquer solução em excesso, pois será utilizado um objetivo de imersão em óleo. Adicione uma gota de óleo no outro lado da lamínula, sobre a janela de PDMS.Observe atentamente a localização dos nano orifícios. Insira o microscópio. Deslize a lâmina no porta-lâmina com o óleo voltado para baixo e, em seguida, abaixe o porta-lâmina até que o óleo de imersão entre em contato com o microscópio.Com o objetivo, alinhe aproximadamente a platina de modo que as marcas de registro gravadas no filme de ouro fiquem sob o objetivo. Utilizando um software de aquisição de imagens, como o Thor site, que é fornecido como parte do kit de aprisionamento, localize as marcas de registro no filme de ouro e siga as linhas indicadoras até os nanoorifícios.Posicione a lâmina de modo que as marcas indicadoras e outras áreas abertas sejam removidas do centro da tela. A transmissão excessiva de luz pode danificar o A PD ligado ao laser. Como o espelho dicróico não é perfeito, deve aparecer um ponto próximo ao centro da tela proveniente do feixe do laser.Usando o software de controle do estágio piezoelétrico, refine ainda mais o alinhamento nos três eixos. Quando o alinhamento estiver correto, observar-se-á a tensão máxima em um fotodiodo, indicando a maior transmissão através da nanoabertura.Agora que o sistema está configurado e a amostra foi carregada, podem-se adquirir dados de aprisionamento óptico. Com a ajuda das marcas indicadoras, posicione o ponto próximo a uma localização conhecida de nano furo. Os duplos nano furos serão pequenos demais para serem resolvidos com clareza e aparecerão como pequenos pontos na tela.A transmissão de luz através da amostra é indicada pelo nível do sinal no osciloscópio. Alinhe ainda mais a amostra para maximizar a transmissão de luz. Tenha cuidado com marcas indicadoras e arranhões visíveis e não visíveis, pois a transmissão de luz será alta nessas áreas; nano orifícios mostrarão saltos súbitos na transmissão de luz, enquanto arranhões não.Exiba mudanças mais graduais utilizando a placa de onda. Ajuste a polarização da luz para obter a máxima transmissão de luz quando a estrutura de duplo nano orifício estiver polarizada. Para adquirir dados, amostra a tensão dos APDs usando o módulo de aquisição de dados durante o tempo desejado.Os tempos de aquisição geralmente estão na faixa de centenas de segundos. Nesse caso, utiliza-se um software personalizado para a aquisição de dados e a tensão é amostrada a 2000 vezes por segundo. Utilizando o MATLAB, filtre os dados adquiridos com um filtro KY Gole e plote-os em função do tempo em um gráfico para demonstrar a captura de nanopartículas de poliestireno de 20 nanômetros; a transmissão através do duplo nano-orifício foi medida como uma função do tempo.Utilizando a transmissão óptica de PD, foi então traçado um gráfico. Ao longo do tempo, o evento de aprisionamento é caracteristicamente súbito, com uma borda acentuada que mostra uma comutação clara entre dois níveis de potência de transmissão, como ilustrado neste exemplo; frequentemente ocorre um aumento no ruído do sinal no estado aprisionado. Esse aumento do ruído decorre do movimento browniano da partícula aprisionada.Note que, sem a partícula aprisionada, essa fonte de ruído não está presente. Alguns artefatos podem aparecer nos resultados e não indicam eventos de aprisionamento. Resultados que mostram deriva, observada como mudanças lentas na transmissão ao longo de um período de minutos, como mostrado aqui, devem ser descartados. Após este procedimento, outros métodos, como espectroscopia Raman e espectroscopia de fluorescência, podem ser realizados para responder perguntas adicionais sobre a natureza da nanopartícula que está aprisionada após seu desenvolvimento.Essa técnica abriu caminho para que pesquisadores estudem nanopartículas biologicamente relevantes no nível de molécula única. Por exemplo, para detectar ligação proteica e estudar infecção viral, ambos no nível de molécula única. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como integrar uma armadilha óptica dupla nho a um sistema a laser de microscópio invertido para aprisionar nanopartículas individuais.

Research

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Engineering

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