A administração intranasal de Terapêutica do SNC para Ratos Awake

O objetivo geral deste procedimento é direcionar drogas para o sistema nervoso central usando administração intranasal em camundongos sem anestesia. Isso é feito primeiro aclimatando o mouse ao manuseio. O segundo passo é usar uma pegada de nuca modificada para imobilizar a cabeça do animal.

Em seguida, gotículas de medicamento são administradas por via intranasal com um pipetador. Na etapa final, o rato é devolvido à sua gaiola com uma recompensa. As principais vantagens dessa técnica são que a administração intranasal direciona os medicamentos para o sistema nervoso central sem exposição sistêmica e que a administração intranasal acordada dos medicamentos permite o tratamento crônico em camundongos sem anestesia.

Este método pode ser usado para ajudar a responder a questões-chave no desenvolvimento de medicamentos para o tratamento de doenças neurológicas. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades porque é difícil segurar a boca com segurança para evitar o movimento da cabeça. A demonstração visual deste método é crítica, pois a colocação dos dedos para a pegada adequada é fundamental e difícil de explicar por meio de texto e fotografias Duas a quatro semanas antes da dosagem intranasal, aclimate os camundongos ao manuseio executando as seguintes etapas ao longo de dois a três dias cada, confirmando que o camundongo não exibe sinais de estresse antes de passar para a próxima etapa.

Para a primeira etapa de aclamação, coloque o mouse na palma da mão por um período de dois a três minutos. Não mais do que um pé acima da gaiola. Em seguida, coloque o rato na palma da mão por três minutos e acaricie o animal suavemente da cabeça à cauda, permitindo que o animal se mova livremente.

Uma vez que o animal tolere acariciar, coloque o mouse na palma da mão por três minutos e, em seguida, use o polegar e o indicador para apertar levemente a pele na parte de trás do pescoço do animal. Para a próxima etapa de aclimatação, levante o mouse pela nuca por 30 segundos. Em seguida, deixe o animal descansar no topo da gaiola por mais 30 segundos antes de repetir o golpe novamente.

Agora pratique a pegada intranasal usando primeiro o polegar e o indicador da mão dominante para segurar o mouse pela cauda. Em seguida, use os dedos anelar e mindinho do meio para prender levemente a parte inferior do corpo do animal na gaiola. Deixe o rato agarrar as barras esticando levemente o animal para fora Para melhor agarrar a nuca.

Usando o polegar e o dedo médio na mão não dominante, prossiga beliscando o mouse firmemente na nuca atrás do pescoço e dos ombros, puxando a pele solta da parte superior das costas para fazer uma tenda nas omoplatas. Em seguida, coloque rapidamente o dedo indicador da mão não dominante na cabeça do rato o mais próximo possível do nariz e puxe a pele para trás. Ao mesmo tempo, deslize o polegar e os dedos médios em direção à cabeça para um posicionamento ideal.

Idealmente, o mouse não deve ser capaz de mover a cabeça vertical ou horizontalmente. Durante a próxima sessão, execute a preensão intranasal conforme demonstrado. Desta vez, invertendo o animal de forma que seu lado ventral fique voltado para o teto e seu pescoço fique paralelo ao chão.

Quando o mouse estiver confortável com a pegada intranasal invertida, pratique colocar brevemente uma micropipeta com a ponta vazia perto de cada narina. Finalmente, administre seis microlitros de solução salina, primeiro para apenas um nare e, em seguida, na próxima sessão, para ambos, usando o procedimento de administração intranasal de medicamentos, demonstrado mais plenamente na próxima seção antes de iniciar a administração intranasal de medicamentos. Primeiro, organize as gaiolas e os instrumentos de dosagem para facilitar o acesso.

Em seguida, remova o primeiro camundongo de sua gaiola e use a empunhadura intranasal recém-demonstrada para pegar o animal. Em seguida, usando a mão dominante, carregue a micropipeta com seis microlitros de medicamento. Coloque a ponta da pipeta cheia perto da narina esquerda do camundongo em um ângulo de 45 graus.

Em seguida, ejete lentamente a droga para formar uma pequena gota com cerca de metade do volume na ponta, coloque a gota perto o suficiente da narina do camundongo para que o camundongo possa inalá-la imediatamente após o camundongo inalar a gota, ejete o resto da droga na ponta da pipeta para formar outra pequena gota para o camundongo inalar pela mesma narina cerca de dois a três segundos depois, Mantenha o mouse nessa posição por 15 segundos e, em seguida, administre o medicamento na narina direita da mesma maneira. Agora, coloque o camundongo de volta em cima da gaiola por dois minutos e, em seguida, entregue a droga novamente em ambas as narinas, como demonstrado exatamente dois minutos após a administração na primeira narina para dosar um ou dois camundongos de uma vez. Este cronograma de amostra pode ser seguido após o camundongo ter recebido a dose completa do medicamento.

Devolva o animal à sua gaiola. Após cada sessão de aclimatação ou de dosagem intranasal, os ratos devem receber uma guloseima como um cheerio como reforço positivo para reduzir o stress, restaurar sempre os ninhos aos seus estados originais antes de devolver os animais às suas gaiolas, trocar as luvas entre gaiolas quando dosar os animais alojados em grupo de modo a não transferir o cheiro de uma colónia de gaiola para outra, o que induziria um comportamento agressivo do companheiro de gaiola. Uma vez dominado, uma pessoa pode administrar medicamento por via intranasal a 15 a 20 camundongos em uma hora Ao tentar este procedimento com mais de um camundongo por vez.

É importante tomar precauções para evitar que os ratos troquem acidentalmente de gaiola. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como usar a administração intranasal em camundongos sem anestesia. Para direcionar drogas para o sistema nervoso central.

Lembre-se de sempre tomar precauções ao trabalhar com ratos, como usar uma máscara N95 e luvas para evitar a exposição a alérgenos.