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DOI: 10.3791/50159-v
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Complexos proteína de catalisar as funções celulares importantes. Caracterização estrutural e funcional detalhada de muitos complexos essenciais exige a produção recombinante. MultiBac é um sistema de células de baculovirus / insecto particularmente adaptado para a expressão de proteínas eucarióticas e seus complexos. MultiBac foi implementado como uma plataforma de acesso aberto, e procedimentos operacionais padrão desenvolvidos para maximizar a sua utilidade.
O objetivo geral deste procedimento é produzir complexos de proteínas usando o sistema de células de insetos do vírus multi back baula. Isso é feito gerando primeiro a construção multigênica, codificando o complexo proteico de escolha. O segundo passo é fazer um vírus baula composto que contenha a construção multigênica, transformando células bacterianas e rastreando os médios traseiros corretos.
Em seguida, isole o genoma viral do baula e use-o para infectar células de insetos em pequena escala em uma placa de seis poços após o teste de produção de proteínas. O complexo proteico de escolha é expresso em maior escala e purificado. Em última análise, o complexo de proteínas purificadas é usado para descobrir sua estrutura e função e, potencialmente, para a descoberta de medicamentos.
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