Angiogênese no pulmão de rato Isquêmica

O objetivo geral deste procedimento é ligar a artéria pulmonar esquerda. Isso é feito primeiro intubando e ventilando um rato anestesiado. Em seguida, é realizada uma toracotomia e a artéria pulmonar esquerda é ligada.

Após a ligadura, o tórax é fechado e o rato pode se recuperar. Em última análise, a extensão da neovascularização no pulmão esquerdo pode ser avaliada medindo o nível de fluorescência no tecido ou por outros métodos histológicos. A principal vantagem dessa técnica é que ela oferece uma oportunidade para estudar o desenvolvimento in vivo e a neovascularização da circulação brônquica no pulmão.

Isso fornece uma oportunidade de estudar a complexa estrutura 3D dessa nova vasculatura em um pulmão em ventilação. Agora, isso é muito diferente do que é feito atualmente pela maioria dos investigadores que formam a OMS, que realizam estudos in vitro estudando a proliferação de células endoteliais e quimiotaxia ou formação de tubos. Geralmente, os indivíduos novos neste procedimento terão dificuldade em tentar fazer a dissecção entre a artéria pulmonar esquerda e o brônquio esquerdo.

O único conselho que posso oferecer é praticar, ser paciente e assistir a este vídeo com frequência para ver se há pequenos ajustes na abordagem cirúrgica. Demonstrando este procedimento está John Jenkins, um técnico do meu laboratório. Para começar, coloque um rato anestesiado em uma tábua de cirurgia e prenda um cone de nariz para a continuação da anestesia, intube o animal com um cateter plástico e conecte o rato a um ventilador.

Depois de aplicar pomada nos olhos, coloque o rato do lado direito e prenda os apêndices. Remova os pelos sobre a área cirúrgica e prepare a pele com repetidas esfoliações de Betadine e álcool. Quando estiver pronto, faça uma incisão transversal através da pele.

Em seguida, disseque as camadas de gordura e tecido para revelar a caixa torácica. Uma vez exposto, identifique o terceiro espaço intercostal e use uma pinça para fazer uma incisão romba entre a terceira e a quarta costela. Insira separadores de costelas na abertura e puxe as nervuras suavemente até que o pulmão fique visível.

Fixe a abertura. Primeiro, mova o pulmão esquerdo para trás com a mão direita. Em seguida, com uma pinça reta, agarre a artéria pulmonar esquerda e as vias aéreas com a esquerda.

A artéria pulmonar esquerda deve ficar no topo das vias aéreas e a pinça deve estar perpendicular à mesa. Uma vez alinhado, use adequadamente uma pinça esculpida para separar a artéria do brônquio principal esquerdo em suas bordas naturais. Esta linha de separação parece fina e branca entre as duas estruturas individuais.

Tomando cuidado para não passar pelo navio. Deslize as pontas da pinça ao longo da separação. Continue dessa maneira até que a artéria pulmonar esquerda fique na curva da pinça.

Com a mão esquerda, solte suavemente a pinça reta e pegue um pedaço de sutura pré-cortada. Abra a pinça curva, embalando a artéria o suficiente para agarrar a sutura. Puxe suavemente a sutura em um movimento ascendente em relação à curva da pinça.

Uma vez terminado, aperte a sutura para ocluir a artéria pulmonar esquerda e corte qualquer sutura restante enquanto as mantém juntas com uma pinça. Suturar as costelas. Tomando cuidado para não suturar a pele frouxamente.

Dê um nó quadrado que mais tarde fechará as costelas. Hiperinflar o pulmão ocluindo brevemente a linha expiratória do ventilador e, em seguida, apertar a sutura. Prenda a sutura fazendo outro nó completo antes de cortar as pontas.

Remova a pressão do expirador final e observe por 30 segundos para garantir que os pulmões não entrem em colapso. Por último, aplique cinco gotas. Bupivacaína, feche a pele com cola de tecido.

Desligue o gás flúor, mas continue a ventilar o rato por um a dois minutos em ar ambiente até que a respiração espontânea retorne ao estado estacionário. Em seguida, desconecte o tubo traqueal do ventilador e certifique-se de que o rato esteja respirando espontaneamente antes de removê-lo. Administre um analgésico local periodicamente nas próximas 24 horas.

Por fim, limpe a pomada dos olhos e monitore o animal até que ele seja recuperado no momento desejado. Pontos após microesferas marcadas com isquemia podem ser injetados. Para avaliar a magnitude da perfusão brônquica, uma bomba de infusão de pequeno volume é usada para fornecer microesferas marcadas na artéria carótida esquerda a uma taxa constante.

Conecte o cateter a uma agulha cega de calibre 25 e uma torneira de quatro vias. Para começar, siga os preparativos cirúrgicos demonstrados anteriormente. Quando estiver pronto, faça uma incisão na linha média ao longo do pescoço sem corte.

Disseque o tecido para revelar a traqueia e a artéria carótida esquerda. Uma vez isolado após duas suturas sob a artéria carótida, amarre a sutura proximal com firmeza. Em seguida, faça um pequeno corte na artéria e insira um cateter cheio de solução salina.

Prenda-o no lugar com a sutura a montante. Este gesso vascular fornece uma visualização notável da angiogênese brônquica no pulmão. 28 dias após a ligadura da artéria pary esquerda aqui, uma secção das vias aéreas do pulmão esquerdo três dias após a ação é mostrada.

Observe os dois vasos brônquicos proeminentes cheios de glóbulos vermelhos localizados dentro da parede das vias aéreas. A inserção é corada para mostrar células endoteliais em proliferação da artéria brônquica. Este exemplo mostra uma secção do pulmão esquerdo feita 14 dias após a ligadura.

Observe que o tamanho aumentado dos vasos brônquicos neste momento e a fluorescência da artéria pulmonar murcha usada para avaliar a magnitude da perfusão sistêmica praticamente não foi detectada no pulmão esquerdo de ratos virgens. No entanto, houve um nível substancial, significativo e consistente medido no pulmão esquerdo de ratos. Estudou 14 dias após a ligadura Uma vez dominado.

Essa técnica pode ser feita em menos de uma hora se for executada corretamente. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como intubar o rato, realizar a toracotomia e ligar com sucesso a artéria pulmonar. Dependendo da variável de resultado, você deve ser capaz de canular a artéria carótida esquerda e infundir microesferas marcadas para análise de perfusão.