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DOI: 10.3791/50259-v
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Peixe-zebra são um sistema emergente para modelar doenças humanas do músculo esquelético. Nós descrevemos um método rápido e eficiente para isolar fibras musculares do músculo esquelético de peixe-zebra embrionário e larval. Este método conduz a uma preparação de alta densidade de células musculares adequado para o estudo da morfologia da fibra muscular esquelética única, a localização subcelular de proteínas, e da fisiologia do músculo.
O objetivo geral deste procedimento é isolar eficientemente as fibras musculares esqueléticas de peixes-zebra embrionários e larvais. Isso é feito preparando primeiro lamínulas revestidas de poli L lisina um a quatro dias após a fertilização, os embriões de peixe-zebra são dissociados. Em seguida, as fibras de mio isoladas dos embriões dissociados são revestidas nas lamínulas de polilisina.
Finalmente, as fibras miogênicas são fixadas, coradas e fotografadas para análise de proteínas musculares. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram a localização subcelular das proteínas musculares por meio de microscopia de imunofluorescência. A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como a análise de embriões inteiros, é que ela permite o estudo da morfologia e fisiologia de uma única fibra muscular com mais detalhes.
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