Name: Registro da atividade elétrica dos neurônios identificados no cérebro intacto de peixes transgénicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Aprenda a registrar a atividade elétrica de neurônios identificados em cérebro intacto de peixes transgênicos usando eletrofisiologia de patch clamp. Este método preserva circuitos neurais para análise de propriedades celulares in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Agradecemos ao Dr. Meng-Lin Chin e Sra. Yuan Dong para assistência técnica. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa da National Institutes of Health HD053767 (subcontrato para NLW) e por fundos do Departamento de Fisiologia e Gabinete do Vice-Reitor de Pesquisa, Universidade da Califórnia-Los Angeles (NLW).

1. Dissecação de cérebros de adultos Medaka <ol><li> Anestesiar adulto do sexo masculino ou do sexo feminino (Figura 1A) por imersão em 5 ml MS-222 (150 mg / L, pH 7,4), aguarde alguns minutos após movimentos brânquias cessaram antes de decapitar. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Institutional Animal Care e do Comitê Use da Universidade da Califórnia-Los Angeles. </li><li> Decapitar o peixe em solução salina peixe na extremidade caudal do opérculo com uma tesoura em um diâmetro de 60 mm placa de Petri. </li><li> Transferência de cabeça de peixe até um diâmetro de 35 mm de uma placa de Petri, a metade cheio com solução salina e peixes revestida com Sylgard que tem uma depressão na mesma para posicionar e fixar a cabeça de dissecção cérebro. Posição e garantir a cabeça do lado dorsal com pinos de insetos. </li><li> Corte com cuidado a parte dorsal do crânio em torno do seu perímetro com uma tesoura fina e retire-o delicadamente com uma pinça, expondo a parte dorsal do cérebro, incluindo completamente a parte anterior da medula espinhal. </li> &lt;li&gt; Levante a medula espinhal delicadamente com uma pinça de ponta fina e cortar os nervos conjuntivo bilaterais com uma tesoura de ponta fina: nervos cranianos, nervos espinhais e nervos ópticos no lado ventral do cérebro e dos nervos olfativos na parte anterior do o cérebro. </li><li> Coloque o cérebro totalmente dissecada em uma placa de Petri fresco preenchido com solução salina peixe e verifique cuidadosamente sob o microscópio para garantir todo o cérebro está intacto (incluindo a glândula pituitária), sem quaisquer cortes ou perfurações. Cérebros danificados, não são utilizados para a experimentação. </li></ol> 2. Montagem do cérebro em uma câmara de gravação <ol><li> Colocar uma pequena gota de cianoacrilato ou algum outro tipo de cola de acção rápida com uma agulha no centro da câmara de registo e para espalhar a cola de cerca de 1 cm 2. </li><li> Transferir rapidamente o cérebro e cola-lo em uma posição ventral up-side. </li><li> Adicionar 1 ml de solução salina de peixe de modo que ele preenche a câmara de registo e cobre o cérebro. Perfundir continuamenteo cérebro com salino gaseificado peixe a uma taxa de pelo menos 200 ul / min. </li><li> Usando a ponta fina forceps remover cuidadosamente as meninges sobre a superfície da área de gravação do cérebro. </li></ol> 3. Eletrofisiologia <ol><li> Gravação remendo solto da ação potencial de queima <ol><li> Microeletrodos de vidro (6-10 mohms) são construídos a partir de pipetas de vidro de borosilicato (1B150F-4, Instrumentos de Precisão Mundial), utilizando um extrator de eletrodo (por exemplo, Sutter P-87), e de volta preenchido com a solução de gravação solta-patch no meio do caminho até o eletrodo. </li><li> Usando um microscópio de fluorescência na posição vertical com a charge-coupled device refrigerado (CCD) da câmera, encontrar o GFP-expressando TN-GnRH3 neurônios através de 10x (Figura 1B), então os objetivos de imersão em água 40x (Figura 1C). Eles estão localizados em ou perto da superfície ventral dos bulbos olfativos, anteriormente ao telencéfalo. </li><li> Mudar para um monitor de vídeo que está fornecendoimagens em tempo real a partir do microscópio para localizar o cluster neurônio TN-GnRH3 (Figura 1C). </li><li> Posicionar o microeléctrodo no banho de modo que a ponta do eléctrodo está acima do neurónio alvo. Aplicar constante leve pressão positiva para o microeléctrodo de modo que ela não se torne obstruído, e aproximar-se suavemente o neurónio alvo com a ponta do eléctrodo. </li><li> Controlar e monitorar a resistência do eletrodo no modo tensão-clamp usando software AxoGraph e amplificador Axoclamp 200B com software Axograph (Axon Instruments). Quando você pode ver a partir do monitor de vídeo que a ponta do eletrodo está na superfície do neurônio e da exibição de AxoGraph que a resistência muda um pouco, solte a pressão positiva e aplique uma ligeira pressão negativa se necessário, para fazer um selo de baixa resistência em neurônio (&lt;100 mohms). </li><li> Alternar para o modo atual-clamp, e registrar a tensão de membrana continuamente, sem qualquer entrada de corrente, ajustando a escalada tensão e da velocidade de gravação, se necessário. Os dados são coletados e analisados ​​por software Powerlab (ADInstruments Inc.). </li><li> Actividade da ficha eléctrica da linha de base em solução salina normal para peixes cerca de 5 minutos antes de qualquer tratamento (Figura 2A). Banheira de perfusão de medicamentos, hormônios peptídeos, etc. adicionada a solução salina de peixe continua a uma taxa de 200 ul / min, seguido por um período de lavagem em solução salina normal, peixes 5, 6, 11. </li></ol></li><li> Gravação do potencial de membrana de células inteiras O adesivo de fixação procedimento electrofisiologia célula total é a mesma que a do processo de gravação solta-remendo extracelular acima descrito, a partir das etapas 3.1.1 - 3.1.4. Em seguida, os procedimentos de desviar de acordo: <ol><li> Controlar e monitorar a resistência do eletrodo no modo tensão-clamp. Quando você pode ver a partir do monitor de vídeo que a ponta do eletrodo está na superfície do neurônio e do osciloscópio que a resistência muda um pouco, solte o positivoaplicar pressão e um pouco de pressão negativa para fazer uma vedação de alta resistência no neurónio (~ 3 Giga Ω). Aplicar sucção suave pela boca a ruptura da membrana remendado, você vai ver uma queda brusca da resistência à cerca de 120-250 mohms. </li><li> Alternar para o modo atual-clamp, e registrar a tensão de membrana continuamente, sem qualquer entrada de corrente, ajustando a escala de tensão e taxa de gravação, se necessário. </li><li> Actividade da ficha eléctrica da linha de base em solução salina normal para peixes cerca de 5 minutos antes de qualquer tratamento, como acima descrito no 3.1.7 (Figura 2B). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Kah, O., Lethimonier, C., Lareyre, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gonadotrophin-releasing+hormone+%28GnRH%29+in+the+animal+kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Soc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Gonadotrophin-releasing hormone (GnRH) in the animal kingdom.</a> J. Soc. Biol. 198 (1), 53-60 (2004).</li>
<li>Ramakrishnan, S., Wayne, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+cues+from+conspecifics+alter+electrical+activity+of+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+in+the+terminal+nerve+via+visual+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Social cues from conspecifics alter electrical activity of gonadotropin-releasing hormone neurons in the terminal nerve via visual signals.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 297 (1), R135-R141 (2009).</li>
<li>Abe, H., Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+neuromodulation+by+a+nonhypophysiotropic+GnRH+system+controlling+motivation+of+reproductive+behavior+in+the+teleost%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of neuromodulation by a nonhypophysiotropic GnRH system controlling motivation of reproductive behavior in the teleost.</a> 57 (6), 665-674 (2011).</li>
<li>Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrodotoxin-resistant+persistent+Na%2B+current+underlying+pacemaker+potentials+of+fish+gonadotrophin-releasing+hormone+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tetrodotoxin-resistant persistent Na+ current underlying pacemaker potentials of fish gonadotrophin-releasing hormone neurones.</a> J. Physiol. 482 (Pt. 1), 1-6 (1995).</li>
<li>Zhao, Y., Wayne, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Kisspeptin1+on+Electrical+Activity+of+an+Extrahypothalamic+Population+of+Gonadotropin-Releasing+Hormone+Neurons+in+Medaka%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of Kisspeptin1 on Electrical Activity of an Extrahypothalamic Population of Gonadotropin-Releasing Hormone Neurons in Medaka.</a> PLoS One. 7 (5), e37909(2012).</li>
<li>Wayne, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-cell+electrophysiology+of+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+that+express+green+fluorescent+protein+in+the+terminal+nerve+of+transgenic+medaka+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Whole-cell electrophysiology of gonadotropin-releasing hormone neurons that express green fluorescent protein in the terminal nerve of transgenic medaka (Oryzias latipes).</a> Biol. Reprod. 73 (6), 1228-1234 (2005).</li>
<li>Okubo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forebrain+gonadotropin-releasing+hormone+neuronal+development%3A+insights+from+transgenic+medaka+and+the+relevance+to+X-linked+Kallmann+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Forebrain gonadotropin-releasing hormone neuronal development: insights from transgenic medaka and the relevance to X-linked Kallmann syndrome.</a> Endocrinology. 147 (3), 1076-1084 (2006).</li>
<li>Okubo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+form+of+gonadotropin-releasing+hormone+in+the+medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">A novel form of gonadotropin-releasing hormone in the medaka, Oryzias latipes.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 276 (1), 298-303 (2000).</li>
<li>Ramakrishnan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquisition+of+spontaneous+electrical+activity+during+embryonic+development+of+gonadotropin-releasing+hormone-3+neurons+located+in+the+terminal+nerve+of+transgenic+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Gen.+Comp.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Acquisition of spontaneous electrical activity during embryonic development of gonadotropin-releasing hormone-3 neurons located in the terminal nerve of transgenic zebrafish (Danio rerio).</a> Gen. Comp. Endocrinol. 168 (3), 401-407 (2010).</li>
<li>Abraham, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gonadotropin-releasing+hormone-3+neuron+ablation+in+zebrafish%3A+effects+on+neurogenesis%2C+neuronal+migration%2C+and+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Targeted gonadotropin-releasing hormone-3 neuron ablation in zebrafish: effects on neurogenesis, neuronal migration, and reproduction.</a> Endocrinology. 151 (1), 332-340 (2010).</li>
<li>Wayne, N. L., Kuwahara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-endorphin+alters+electrical+activity+of+gonadotropin+releasing+hormone+neurons+located+in+the+terminal+nerve+of+the+teleost+medaka+%28Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Gen.+Comp.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Beta-endorphin alters electrical activity of gonadotropin releasing hormone neurons located in the terminal nerve of the teleost medaka (Oryzias latipes.</a> Gen. Comp. Endocrinol. 150 (1), 41-47 (2007).</li>
<li>Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+types+of+gonadotrophin-releasing+hormone+neurones+and+steroid-sensitive+sexually+dimorphic+kisspeptin+neurones+in+teleosts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroendocrinol%22%5BJournal%5D)">Three types of gonadotrophin-releasing hormone neurones and steroid-sensitive sexually dimorphic kisspeptin neurones in teleosts.</a> J. Neuroendocrinol. 21 (4), 334-338 (2009).</li>
<li>Molleman, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMolleman%2C+A+%22Patch+Clamping%3A+An+Introductory+Guide+To+Patch+Clamp+Electrophysiology%22">Patch Clamping: An Introductory Guide To Patch Clamp Electrophysiology</a>. , Wiley & Sons. England. (2003).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

GnRH 3: GFP peixes transgênicos oferecem modelos exclusivos para estudar os mecanismos neurofisiológicos subjacentes à integração e regulamentação de controle central de comportamentos que estão direta e indiretamente envolvidos na reprodução 3, 8-10 neuronal. Uma das vantagens significativas deste sistema modelo é que muitas GnRH3 neurónios expressando GFP estão perto da superfície ventral do cérebro, o que permite um acesso relativamente fácil para os neurónios para o registo electrofisiológico sem...

<table><tbody><tr><td>Microscópio</td><td>Olympus</td><td></td><td>BX50W (Vertical)</td></tr> <tr><td>Amplificador</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td>Axoclamp 200B </td></tr><tr><td>Conversor A-D Computer</td><td>Interference Corp.</td><td></td><td>Digidata ITC-18 </td></tr><tr><td>refrigerou a lâmpada</td> de xênon <td>de Sensicam</td><td>da câmera PCO do CCD</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Instruments Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Conjunto de filtros GFP</td> Software de imagem <td>Chroma Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr>Software de<td></td><td>imagem inteligente Inovações</td><td></td> de imagem Software <td>de slidebook </td></tr><tr><td>Software de aquisição de dados de eletrofisiologia</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td>Software de axógrafo </td></tr><tr><td>Software de aquisição de dados de eletrofisiologia</td><td>AD Instruments Inc.</td><td></td><td>PowerLab </td></tr><tr><td>Headstage para eletrofisiologia</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td>CV 203BU </td></tr><tr><td>Micromanipulador</td><td>Sutter Instrument Co</td><td>MP-285</td><td></td></tr><tr><td>Recording Chamber Platform</td><td>Warner Instrument Corp.</td><td></td><td>Câmara de Gravação P1 </td></tr><tr><td></td><td>Warner Instrument Corp.</td><td></td><td>Extrator de Eletrodos RC-26G </td></tr><tr><td></td><td>Instrumentos</td><td></td><td>Sutter P87 </td></tr><tr><td>Filamento para extrator de eletrodos</td><td>Sutter Instruments</td><td>FB330B</td><td>3.0 mm de largura através do filamento</td></tr><tr><td>1.5 mm capilares de vidro</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B150-4</td><td>Micr&#8211; lectrode para gravação</td></tr><tr><td>Seringa</td><td>Becton Dickinson</td><td>309586</td><td>3 ml</td></tr><tr><td>MS-222 </td><td>Sigma</td><td>E10521-10G</td><td>Etil 3-aminobenzoato metanossulfonato sal</td></tr><tr><td>Salino</td><td></td><td></td> de peixe <td>mM: 134 NaCl; 2,9 KCl; 2,1 CaCl2; 1,2 MgCl2; 10 HEPES </td></tr><tr><td>Solução de eletrodo (adesivo solto) </td><td></td><td></td><td>mM: 150 NaCl; 3,5 KCl; 2,5 CaCl2; 1,3 MgCl2; 10 HEPES; 10 </td></tr><tr><td>glicose Solução de eletrodo (adesivo de célula inteira) </td><td></td><td></td><td>mM: 112,5 K-gluconato; NaCl; 17,5 KCl; 0,5 CaCl2; 1 MgCl2; 5 MgATP; 1 EGTA; 10 HEPES; 1 GTP; 0,1 leupeptina; 10 fosfo-creatina </td></tr></tbody></table>

registro da atividade elétrica dos neurônios identificados no cérebro intacto de peixes transgénicos

Recording Electrical Activity from Identified Neurons in the Intact Brain of Transgenic Fish

Compreendendo a fisiologia da célula de circuitos neurais que regulam comportamentos complexos é muito maior usando sistemas de modelo em que este trabalho podem ser realizados em uma preparação cérebro intacto, onde o circuito neural do SNC permanece intacta. Usamos peixe transgênico no qual hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) neurônios são geneticamente marcados com proteína fluorescente verde para identificação no cérebro intacto. Os peixes têm múltiplas populações de neurónios da GnRH, e as suas funções são dependentes da sua localização no cérebro e o gene de GnRH que expressam um. Nós nos concentramos em nossa demonstração GnRH3 neurônios localizados nos nervos terminais (TN) associados aos bulbos olfatórios usando o cérebro intacto de transgênicos medaka peixe (Figura 1B e C). Estudos sugerem que medaka TN-GnRH3 neurónios são neuromodulador, agindo como um transmissor de informação a partir do ambiente externo para o sistema nervoso central; they não desempenham um papel direto na regulação das funções hipofisário-gonadal, assim como o bem conhecido hipotálamo GNRH1 neurônios 2, 3. padrão A tônica do potencial de ação espontâneo disparo de TN-GnRH3 neurônios é uma propriedade intrínseca 4-6, a freqüência de que é modulada por pistas visuais de dois membros da mesma espécie e do neuropeptídeo Kisspeptin 1 5. Neste vídeo, usamos uma linha estável de transgênicos medaka em que TN-GnRH3 neurônios expressam um transgene contendo a região promotora de Gnrh3 ligado ao aumento da proteína verde fluorescente 7 para mostrar a você como identificar neurônios e monitorar a atividade elétrica em todo o cérebro preparação 6.

Um exemplo de grupos bilaterais de GFP marcadas com TN-GnRH3 neurónios do cérebro excisada de medaka peixes são apresentados nas Figuras 1B e 1C. Cada cluster contém cerca de 8-10 neurônios GnRH. As actividades neuronais espontâneas do destino TN-GnRH3 foram registrados no modo de corrente-braçadeira (I = 0), com taxas de queima típicas de 0,5-6 Hz. O padrão de ação potencial de queima é tipicamente um padrão tônico ou batendo, com um intervalo bastante regular interspike. Vestígios Exe...

Neste vídeo, vamos demonstrar como para registrar a atividade elétrica dos neurônios individuais identificados em uma preparação do cérebro inteiro, o que preserva os circuitos neurais complexos. Usamos peixe transgênico no qual hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) neurônios são geneticamente marcadas com uma proteína fluorescente para identificação na preparação cérebro intacto.

Registro da atividade elétrica dos neurônios identificados no cérebro intacto de peixes transgénicos

Understanding the cell physiology of neural circuits that regulate complex behaviors is greatly enhanced by using model systems in which this work can be ...

O objetivo geral deste procedimento é registrar atividades elétricas de neurônios em uma preparação de cérebro de peixe intacto. Isso é realizado primeiramente anestesiando um peixe transgênico meca de quatro a seis meses de idade em MS 2 22 e, em seguida, dissecando seu cérebro. Em seguida, um dos neurônios de interesse marcados com GFP é contatado com um eletrodo de registro e suas atividades elétricas são registradas por meio de eletrofisiologia com grampo de patch solto ou grampo de patch de célula inteira.No fim, os resultados podem mostrar alterações na frequência de disparo de potenciais de ação ou mudanças no potencial de membrana em resposta a diferentes tratamentos no cérebro intacto. A principal vantagem dessa técnica em relação aos métodos existentes, como a eletrofisiologia de células em cultura ou preparações de fatias cerebrais, é que podemos caracterizar as propriedades elétricas dos neurônios em uma preparação de cérebro inteiro com circuitos neurais intactos. Embora esta técnica forneça insights sobre a neuroendocrinologia reprodutiva, ela também pode ser aplicada a outros sistemas neurais utilizando peixes transgênicos, como no estudo de neurônios que controlam m

recording-electrical-activity-from-identified-neurons-intact-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Neste vídeo, técnicas de imagem multicolor de lapso de tempo confocal e ablação de células alvo são fornecidos. Lapso de tempo de imagem é usado para monitorar o comportamento de vários tipos de células de...

Multicolor imagem em tempo-lapso de Transgênicos Zebrafish: Visualizando Células-Tronco da retina Ativado por Ablação célula-alvo Neuronal

Transporte retrógrado de corante fluorescente rotula uma sub-população de neurónios baseado em projecção anatómica. Axônios rotulados pode ser alvo...

Labeling fluorescentes retrógrada Permite alvejado Extracelular Gravação Single-unidade dos neurônios identificados<em&gt; In vivo</em

O protocolo descreve o procedimento para realizar eletrofisiologia em peixe-zebra adulto. Este método pode ser usado para medir a atividade neural in vivo.

Eletrofisiologia do peixe-zebra adulto: um método para medir a atividade elétrica extracelular de neurônios in vivo

Este vídeo demonstra a gravação de sinais elétricos dos neurônios aferentes em uma larva de peixe-zebra paralisada, posicionando uma micropipeta perto do gânglio da linha lateral e formando uma vedação solta para captura de sinal. A solução extracelular mantém a viabilidade neuronal durante esse processo.

Monitorando sinais elétricos dos neurônios aferentes em uma larva de peixe-zebra imobilizada

Um método simples para gravar os potenciais de campo extracelulares no larval do peixe-zebra é descrita prosencéfalo. O método proporciona um...

Prosencéfalo gravação eletrofisiológico em larval Zebrafish

Este artigo descreve como um peixe-zebra adulto podem ser imobilizados, entubado, e usado para experimentos in vivo eletrofisiológicos para permitir gravações e manipulação da atividade neural em um animal intacto.

Gravação eletrofisiológica no cérebro de Intacta Zebrafish Adulto

Este manuscrito descreve métodos para registos electrofisiolicos de neurónios espinais de embriões de peixe-zebra e larvas. A preparação mantém neurónios in situ e muitas vezes envolve a dissecção mínima. Estes métodos permitem o estudo electrofisiológico de uma variedade de neurónios espinais, a partir da aquisição inicial excitabilidade eléctrica através dos primeiros estádios larvares.

zebrafish<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Preparação para gravações eletrofisiológicas da Spinal Sensorial e Motor Neurons

Uma nova técnica sem fio para a gravação de sinais neurais extracelulares do cérebro de peixinho dourado livremente natação é apresentado. O dispositivo de gravação é composto por dois tetródos, um microdrive, um registrador de dados neurais e uma caixa impermeável. Todas as peças são feitas medida, exceto para o registrador de dados e seu conector.

Gravação eletrofisiológica sem fio dos neurônios por tetrodes móveis em peixes livremente da natação

Aqui apresentamos um método para a imagem do cérebro embrionário de zebrafish in vivo upto larval e juvenil estágios. Este procedimento microinvasivo, adaptado a partir de abordagens eletrofisiológicas, fornece acesso a detalhes celulares e subcelulares de neurônio maduro e pode ser combinado com estudos optogenéticos e neurofarmaológicos para caracterização da função cerebral e intervenção medicamentosa.

In vivo Imagem de Tecido Cerebral Totalmente Ativo em Larvas de Zebrafish Acordados e Juvenis por Remoção de Crânio e Pele

Aqui, apresentamos um protocolo detalhado para examinar a atividade neural em regiões cerebrais de peixes-zebra transgênicos que expressam indicadores de cálcio GCaMP usando microscopia confocal.

In vivo Imagem de fluorescência confocal da atividade neural induzida por estimulação sensorial em peixes-zebra larvais parcialmente contidos

Aprenda a registrar a atividade elétrica de neurônios identificados em cérebro intacto de peixes transgênicos usando eletrofisiologia de patch clamp. Este método preserva circuitos neurais para análise de propriedades celulares in vivo.

Registro da atividade elétrica dos neurônios identificados no cérebro intacto de peixes transgénicos

Explorar mais vídeos