Name: Isquemia Photothrombotic: Um Modelo de lesão cortical fotoquímica Minimamente Invasiva e reprodutível para mouse Estudos curso (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Aprenda a induzir isquemia cortical focal em camundongos usando o modelo fototrombótico com Rosa Bengala. Este método minimamente invasivo permite lesões reprodutíveis para estudar plasticidade cerebral e respostas celulares pós-AVC.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos Annalisa Buffo para sugestões e comentários perspicazes, e Maurizio Grassano, Marina Boido e Ermira Pajaj para o tiroteio. Este trabalho foi financiado pelo FP7-MC-214003-2 (Marie Curie Initial Training Rede AXREGEN) e da Compagnia di San Paolo, o projeto gliarep.

1. Pré-cirurgia <ol><li> Pesar Rose Bengal em um tubo de 1,5 ml e dissolvem-se em solução salina estéril até atingir uma concentração final de 15 mg / ml. Filtrar através de um filtro de esterilização de 0,2 um e armazenar no escuro à temperatura ambiente até dois meses. </li><li> Esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos em autoclave. A área cirúrgica deve ser higienizado menos de uma hora antes do início da cirurgia. </li><li> Anote o peso do corpo do mouse para ajustar a dose de Rosa Bengala para ser injetado. Nós injetado 10 ml / g de peso de animais em mulheres camundongos CD1 12 semanas de idade, no presente protocolo. A quantidade de Rosa de Bengala necessária para produzir o tamanho de lesões corticais desejada pode ser facilmente determinada de um conjunto separado de experiências preliminares, testando diferentes doses (tipicamente de 2 ul / g, 5 ul / g ou 10 ml / g de peso corporal). Note-se que a quantidade de Rosa de Bengala a ser injectado é altamente dependente das condições da experiência, em particular do tipo de fonte de luzutilizado e da duração da exposição à luz. No presente estudo, 10 ul / g (150 ug / g), a dose foi considerado necessário para induzir fototrombose após exposição à luz durante 15 minutos, ao passo que outros grupos relataram que, ou 50 ug / g de 6,8 e 100 mg / g 10 de injecção intraperitoneal era suficiente para induzir uma lesão photothrombotic. </li></ol> 2. Procedimento anestésico <ol><li> Anestesiar ratos com isoflurano numa câmara de indução transparente (3,5-4% para indução, 1,5-2% para manutenção) em 50% (v / v) oxygen/50% (v / v) de mistura de gás de monóxido de diazoto. Anestesia gasosa permite uma rápida wake up dos animais eo nível de gás anestésico pode ser ajustado facilmente. Alternativamente, os ratinhos podem também ser anestesiados com uma mistura de cetamina-xilazina. </li><li> Quando é atingida anestesia profunda, remover o animal anestesiado e a partir da câmara de indução, coloque-o na moldura estereotáxica e manter a anestesia utilizando uma máscara facial. Ajuste o isoflurane dose para atingir um nível de anestesia adequada. Monitorar a taxa de respiração durante todo o procedimento e verifique se ele é constante (40 - 60 respirações por minuto). </li><li> Use pitadas toe, a fim de assegurar que o animal é anestesiado profundamente. </li><li> Aplicar pomada ocular, a fim de evitar que os olhos sequem. </li><li> Suavemente inserir a sonda rectal para monitorizar a temperatura durante os procedimentos cirúrgicos. Definir a almofada de aquecimento controlada por realimentação associado para manter a temperatura do corpo do rato, a 37 ± 0,5 ° C. </li></ol> 3. Cirurgia para iluminação da área de destino <ol><li> Raspar o couro cabeludo do rato com um barbeador elétrico. </li><li> Fixe de forma segura a cabeça e coloque as barras de ouvido em meato externo. Tenha cuidado para não danificar os tímpanos. </li><li> Desinfectar a pele sobre a superfície com furtos de etanol a 70% e betadine usando cotonetes alternada. </li><li> É um bisturi para fazer uma incisão na linha média do olho level até o pescoço. Aplicar afastadores para manter a pele do crânio exposta. </li><li> Suavemente retrair o periósteo às bordas do crânio com um bisturi e deixar secar a superfície do crânio com cotonetes de algodão estéril. Identificar o bregma e lambda. Coloque uma micropipeta de vidro no bregma como ponto de referência, em seguida, movê-lo para as coordenadas da sua região de interesse. A região de interesse escolhido para este artigo é aproximadamente em forma redonda, centrada aproximadamente 2 mm lateral ao bregma, e que cobre uma área de cerca de 30 mm 2, que inclui uma grande parte do córtex sensorimotor de acordo com o atlas do cérebro do rato e por Franklin Paxinos 11. </li><li> Marque a posição de interesses com pontos de referência e colocar uma fibra óptica em estreito contacto com a superfície do crânio para evitar o espalhamento de luz, mas preste atenção para não exercer pressão sobre ele. A área de iluminação pode ser limitada pela aplicação sobre o crânio de uma máscara com uma pequena abertura ou uma tampa na extremidade da fibra óptica guide. </li></ol> 4. Rosa Bengala Injection e Ativação <ol><li> Carregar a solução Rosa Bengala, numa seringa de 1 ml e calcular a quantidade a ser injectado de acordo com uma dose de 10 ml / g de peso corporal. </li><li> Proceder a uma injeção intraperitoneal lento. </li><li> Deixe o difuso corante e entrar na corrente sanguínea. Após 5 min, ligar o iluminador luz fria. Evitar a iluminação do animal por qualquer outra fonte de luz. Usamos iluminador de fibra óptica de 150 W intensidade. </li><li> Após 15 min de iluminação, parar a exposição à luz e suturar a ferida. Cinco minutos de iluminação já produzem infarto e 10 min é provável que suficiente para obter um efeito máximo 12. A fim de minimizar a variabilidade, que escolhemos para iluminar por 15 min. </li></ol> 5. Sutura <ol><li> Remova os afastadores de pele e aplicar solução salina estéril para evitar a desidratação. </li><li> Fechar a ferida usando needl corte reversoe de seda ou fio de sutura nylon. </li><li> Interromper a entrega de anestesia, retire cuidadosamente o mouse do aparelho estereotáxico e colocá-lo em uma almofada de aquecimento pré-aquecido até que esteja totalmente desperto, em seguida, devolvê-lo à sua jaula. A temperatura do corpo devem ser cuidadosamente monitorizados durante os procedimentos para limitar a variabilidade da extensão do infarto. De acordo com a concentração e a via de administração, Rosa Bengala pode ainda ser detectado na corrente sanguínea, durante várias horas após a injecção 13. Prefere o cobertor de aquecimento para lâmpada de aquecimento para evitar possíveis danos secundários (Rosa Bengala absorção de comprimento de onda está no espectro verde). </li></ol>

<ol><li>Lopez, A. D., Mathers, C. D., Ezzati, M., Jamison, D. T., Murray, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+burden+of+disease+and+risk+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional burden of disease and risk factors.</a> Lancet. 367, 1747-1757 (2001).</li>
<li>Mathers, C. D., Boerma, T., Ma Fat, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+causes+of+death%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+Med.+Bull%22%5BJournal%5D)">Global and regional causes of death.</a> Br. Med. Bull. 92, 7-32 (2009).</li>
<li>Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+aggregation+in+the+cerebral+microcirculation%3A+effect+of+aspirin+and+other+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents.</a> Circ. Res. 40, 320-328 (1977).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Ann. Neurol. 17, 497-504 (1985).</li>
<li>Bergeron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+photochemical+cortical+lesions+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Inducing photochemical cortical lesions in rat brain.</a> Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9, Unit 9 16(2003).</li>
<li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+cerebral+ischemia+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced cerebral ischemia in a mouse model.</a> Surg. Neurol. 67, 620-625 (2007).</li>
<li>Dietrich, W. D., Watson, B. D., Busto, R., Ginsberg, M. D., Bethea, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+cerebral+infarction.+I.+Early+microvascular+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced cerebral infarction. I. Early microvascular alterations.</a> Acta Neuropathol. 72, 315-325 (1987).</li>
<li>Schroeter, M., Jander, S., Stoll, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+induction+of+focal+cerebral+ischemia+in+mice+by+photothrombosis+of+cortical+microvessels%3A+characterization+of+inflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Non-invasive induction of focal cerebral ischemia in mice by photothrombosis of cortical microvessels: characterization of inflammatory responses.</a> J. Neurosci. Methods. 117, 43-49 (2002).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice%3A+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 18, 570-579 (1998).</li>
<li>Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hardware+and+methodology+for+targeting+single+brain+arterioles+for+photothrombotic+stroke+on+an+upright+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope.</a> J. Neurosci. Methods. 170, 35-44 (2008).</li>
<li>Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 1st, Academic Press. New York. (1997).</li>
<li>Piao, M. S., Lee, J. K., Jang, J. W., Kim, S. H., Kim, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+photochemically+induced+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Korean+Neurosurg.+Soc%22%5BJournal%5D)">A mouse model of photochemically induced spinal cord injury.</a> J. Korean Neurosurg. Soc. 46, 479-483 (2009).</li>
<li>Silva, V. M., Corson, N., Elder, A., Oberdorster, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rat+ear+vein+model+for+investigating+in+vivo+thrombogenicity+of+ultrafine+particles+%28UFP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The rat ear vein model for investigating in vivo thrombogenicity of ultrafine particles (UFP).</a> Toxicol. Sci. 85, 983-989 (2005).</li>
<li>Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+spinal+cord+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced spinal cord injury in the rat.</a> Brain Res. 367, 296-300 (1986).</li>
<li>Van Reempts, J., Van Deuren, B., Van de Ven, M., Cornelissen, F., Borgers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flunarizine+reduces+cerebral+infarct+size+after+photochemically+induced+thrombosis+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Flunarizine reduces cerebral infarct size after photochemically induced thrombosis in spontaneously hypertensive rats.</a> Stroke. 18, 1113-1119 (1987).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li>
<li>Kleinschnitz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+of+platelets+or+intrinsic+coagulation+pathway-driven+thrombosis+does+not+prevent+cerebral+infarctions+induced+by+photothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blocking of platelets or intrinsic coagulation pathway-driven thrombosis does not prevent cerebral infarctions induced by photothrombosis.</a> Stroke. 39, 1262-1268 (2008).</li>
<li>Porritt, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photothrombosis-induced+infarction+of+the+mouse+cerebral+cortex+is+not+affected+by+the+Nrf2-activator+sulforaphane%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Photothrombosis-induced infarction of the mouse cerebral cortex is not affected by the Nrf2-activator sulforaphane.</a> PLoS One. 7, e41090(2012).</li>
<li>Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+effective+behavioral+tasks+for+evaluating+sensorimotor+dysfunction+following+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice.</a> J. Neurosci Methods. 129, 87-93 (2003).</li>
<li>Markgraf, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+histopathologic+consequences+of+photothrombotic+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery+in+Sprague-Dawley+and+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Comparative histopathologic consequences of photothrombotic occlusion of the distal middle cerebral artery in Sprague-Dawley and Wistar rats.</a> Stroke. 24, 286-292 (1993).</li>
<li>Wester, P., Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+photothrombotic+%27ring%27+model+of+rat+stroke-in-evolution+displaying+putative+penumbral+inversion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A photothrombotic 'ring' model of rat stroke-in-evolution displaying putative penumbral inversion.</a> Stroke. 26, 444-450 (1995).</li>
<li>Hu, X., Wester, P., Brannstrom, T., Watson, B. D., Gu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+and+reproducible+focal+cortical+ischemia+with+or+without+late+spontaneous+reperfusion+generated+by+a+ring-shaped%2C+laser-driven+photothrombotic+lesion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Brain+Res.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Progressive and reproducible focal cortical ischemia with or without late spontaneous reperfusion generated by a ring-shaped, laser-driven photothrombotic lesion in rats.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 7, 76-85 (2001).</li>
<li>Maxwell, K. A., Dyck, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+focal+ischemic+lesions+in+neonatal+mice+by+photothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible focal ischemic lesions in neonatal mice by photothrombosis.</a> Dev. Neurosci. 27, 121-126 (2005).</li>
<li>Kuroiwa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+model+of+photothrombotic+ischemia+and+infarction+within+the+caudoputamen%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Development of a rat model of photothrombotic ischemia and infarction within the caudoputamen.</a> Stroke. 40, 248-253 (2009).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

As modificações e substituições Por causa de seu pico de absorção em 562 nm, um laser de luz verde de uma lâmpada de arco de xenônio filtrada foi originalmente escolhido para irradiar o fotossensível Rosa Bengala. Apesar da excitação do laser ainda mediada recently5 foi utilizado, pode ser substituída pela lâmpada de luz fria também assegurar excitação corante 10,15. Fibras ópticas de luz fria são mais fáceis de manipular e menos dispendiosa do que as fontes de laser. No entanto, dev...

No início do século 21, acidente vascular cerebral isquêmico é uma doença devastadora que representa a segunda causa de incapacidade a longo prazo e uma a segunda causa de mortalidade no mundo, no qual AVC foi responsável por aproximadamente 5,7 milhões de mortes em 2004 2. Apesar dos muitos esforços que foram colocadas em, ainda não existe um tratamento eficaz disponível para melhorar a recuperação funcional após o acidente vascular cerebral. Os modelos animais de acidente vascular cerebral são amplamente utilizados no campo da pesquisa do curso, pois permitem a modelagem da patofisiologia da lesão isquémica e testar a eficácia de diferentes estratégias neuroprotectoras in vivo. A maioria destes modelos visam induzir infartos extensos, interrompendo (temporariamente ou permanentemente) o fluxo de sangue dentro da artéria cerebral média, enquanto que outros modelos foram desenvolvidos para o estudo de lesões de pequeno porte em áreas específicas, normalmente o motor eo córtex somatossensorial. No entanto, vários fatores podem contribuir para gerar acertain grau de variabilidade no curso estudos experimentais, incluindo a estirpe de ratinhos utilizada, a idade e o sexo dos animais incluídos no estudo e, acima de tudo, a técnica utilizada para induzir o dano isquémico. No que diz respeito a este último ponto, a duração e invasividade da cirurgia (isto é, a necessidade de uma craniotomia), assim como a habilidade cirúrgica necessária para o operador para induzir lesão isquémica de forma confiável são determinantes críticos para o sucesso e imparcial em estudo in vivo AVC . O conceito de fototrombose foi inicialmente proposto por Rosenblum e El-Sabban em 1977 3 e tornou-se famoso pela sua aplicação em cérebro de rato por Watson et al, em 1985, 4 em que a técnica foi amplamente melhorado e definir a base do atual modelo 3. - 6. A abordagem photothrombotic visa induzir um infarto cortical através da foto-ativação de um corante sensível à luz anteriormente entregue no sistema sanguíneo, which resulta em trombose de vasos local nas áreas expostas à luz. Quando o corante é iluminado circulando no comprimento de onda apropriado através de uma fonte de luz fria, liberta energia para as moléculas de oxigénio, o que, por sua vez, geram uma grande quantidade de produtos de oxigénio singlet altamente reactivos. Estes intermediários de oxigénio induzem a peroxidação da membrana de células endoteliais, que conduz à adesão e agregação plaquetária, e, eventualmente, para a formação de trombos, que determina a interrupção do fluxo local cerebral 7. Fototrombose é um modelo de isquemia não-canônico que não obstruir ou quebrar apenas uma artéria como normalmente acontece em acidente vascular cerebral humano, mas provoca lesões nos vasos mais superficiais, o que resulta em interrupção seletiva do fluxo de sangue nas áreas expostas à luz. Por esta razão, esta abordagem pode ser adequada para estudos celulares e moleculares da plasticidade cortical. A principal vantagem desta técnica reside na sua simplicidade de execução.Além disso, fototrombose pode ser facilmente realizado em cerca de 40 minutos por animal, incluindo a vinte minutos de espera (3 min para a anestesia, 1 min para raspar o couro cabeludo; 3 a 5 min a colocar o animal no aparelho estereotáxico, 2 min para esfregar a couro cabeludo com solução anti-séptica, fazer uma incisão e limpar o crânio; 2 a 4 min para colocar a fibra de luz fria, 1 min para injetar a solução de rosa de bengala, 5 min-espera para a difusão intraperitoneal, 15 min de iluminação, e 5 min para limpar a ferida e sutura do animal). Além disso, nenhum perícia cirúrgica é necessário para realizar esta técnica quanto à lesão é induzida através de simples iluminação do crânio intactos. Ao contrário de oclusão arterial clássica, este método determina oclusões seletivos de microvasos pial e intraparenquimatosa dentro da zona irradiada e reduz a variabilidade entre as lesões que nenhum navio garantia é deixada para fornecer oxigênio na área alvo. Apesar de sua natureza particular, oações danos photothrombotic mecanismos essenciais que ocorrem em acidente vascular cerebral. Similarmente à oclusão da artéria, em acidente vascular cerebral humano, a agregação de plaquetas e formação de coágulos de determinar a interrupção do fluxo de sangue na área irradiada 7. Do mesmo modo, este modelo também partes essenciais de respostas inflamatórias em oclusão da artéria cerebral média 8. No entanto, por causa dos limites bem delimitada, a zona de penumbra, o que corresponde a uma área de metabolismo parcialmente preservada, é muito reduzida ou inexistente após uma lesão photothrombotic. Esta fronteira clara pode facilitar o estudo de respostas celulares dentro isquêmico ou intacto área cortical. Modelo do rato Indocianina é particularmente adequada para estudos de acidente vascular cerebral em uma variedade de animais transgénicos. Na verdade os modelos clássicos não pode caber para todas as cepas e estudos de longo período na linhagem C57BL / 6 rato relataram uma alta taxa de mortalidade que pode causar viés 9.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Soluções e produtos químicos</td></tr><tr><td>Rose Bengal </td><td>Sigma, Itália</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano Vet </td><td>Merial</td><td>103120022</td><td></td></tr><tr><td>Betadine </td><td>Asta Medica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Material e equipamento cirúrgico</td></tr><tr><td>Fluosorber Filtro </td><td>Havard aparelho</td><td>340415</td><td></td></tr><tr><td>150W iluminador de fibra óptica</td><td>Fotônico</td><td>PL3000</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de Temperatura para Placa TCAT-2DF </td><td>Aparelho Havard</td><td>727561</td><td></td></tr><tr><td>Instrumento Estereotáxico </td><td>Stoelting</td><td>51950</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio operacional </td><td>Takagi</td><td>OM8</td><td></td></tr><tr><td>Almofada </td><td></td><td></td><td></td>de aquecimento</tr> Ferramentas de cirurgia <tr><td>de oxigênio e gás</td><td></td><td></td><td></td>nitrogênio</tr><tr><td></td><td>Instrumento</td><td></td> de precisão mundial <td>Torneiras de fibra óptica e máscara são feitas sob medida </td></tr></tbody></table>

isquemia photothrombotic: um modelo de lesão cortical fotoquímica minimamente invasiva e reprodutível para mouse estudos curso

Photothrombotic Ischemia: A Minimally Invasive and Reproducible Photochemical Cortical Lesion Model for Mouse Stroke Studies

O modelo de acidente vascular cerebral photothrombotic visa induzir um dano isquêmico dentro de uma determinada área cortical, por meio de foto-ativação de um corante sensível à luz anteriormente injetado. Após iluminação, o corante é activado e produz oxigénio singuleto que danifica os componentes das membranas das células endoteliais, com subsequente agregação de plaquetas e formação de trombos, a qual, eventualmente, determina a interrupção do fluxo sanguíneo local. Esta abordagem, inicialmente proposto por Rosenblum e El-Sabban em 1977, foi posteriormente melhorado por Watson em 1985, em cérebro de rato e definir a base do modelo atual. Além disso, o aumento da disponibilidade de linhas de camundongos transgênicos contribuiu ainda mais para aumentar o interesse no modelo fototrombose. Resumidamente, um corante fotossensível (Rosa de Bengala) é injectado intraperitonealmente e entra na corrente sanguínea. Quando iluminada por uma fonte de luz fria, o corante torna-se activada e induz lesão endotelial com a activação de plaquetas e trombose, resultando em locaisinterrupção do fluxo sanguíneo. A fonte de luz pode ser aplicada sobre o crânio intactos, sem necessidade de craniotomia, o que permite direccionamento de qualquer área cortical de interesse de uma forma reprodutível e não-invasiva. O rato é então suturada e permitiu acordar. A avaliação do dano isquémico pode ser rapidamente realizada por cloreto de trifenil-tetrazólio e de coloração com violeta cresil. Esta técnica produz enfarte de pequena dimensão e aos limites bem delimitadas, o que é altamente vantajosa para a caracterização de células precisas ou estudos funcionais. Além disso, é particularmente adequado para estudar as respostas celulares e moleculares subjacentes plasticidade cerebral em ratinhos transgénicos.

Este protocolo irá produzir uma lesão cortical que já é visível após dissecação do córtex para o olho nu (Figuras 1A-1C). A lesão photothrombotic desenvolve em superficiais e profundas camadas corticais em que o tecido é suficientemente transparente para permitir a foto-ativação da Rosa Bengala. Medição do grau de enfarte cerebral pode ser realizada rapidamente através de coloração histológica com cloreto de trifenil-tetrazólio (TTC) em tecido fresco ou de violeta cresil, após fixação em 4% de paraforma...

Fototrombose é uma técnica rápida, minimamente invasiva para induzir pequena e bem delimitada infarto em áreas de interesse de maneira altamente reprodutível. É particularmente adequado para o estudo de respostas celulares e moleculares subjacentes plasticidade cerebral em ratinhos transgénicos.

Isquemia Photothrombotic: Um Modelo de lesão cortical fotoquímica Minimamente Invasiva e reprodutível para mouse Estudos curso

The photothrombotic stroke model aims to induce an ischemic damage within a given cortical area by means of photo-activation of a previously injected ...

O objetivo geral deste procedimento é induzir trombose vascular e dano isquêmico em uma área cortical específica por meio da fotoativação de um corante sensível à luz previamente injetado. Isso é realizado primeiramente fazendo uma incisão na pele para expor o crânio. Em seguida, um corante fosfossensível, o verde de rosa bengala, é injetado por via intraperitoneal.Cinco minutos depois, a área cortical alvo é exposta a uma fonte de luz fria por 15 minutos. O Verde de Rosa circulou pelos vasos sanguíneos. Quando iluminado, o Verde de Rosa é ativado e produz oxigênio singlete.O dano é nos componentes das membranas das células endoteliais que, por sua vez, formam trombos em toda a superfície iluminada, levando à interrupção local do fluxo sanguíneo na RA. Ao final do procedimento, a pele é suturada para fechar o corte. A identificação de áreas isquêmicas pode ser realizada mais rapidamente por coloração com TT C ou cristal de C.Olá, eu sou v Abes. Olá, meu nome é Mon Maze. A foto-trombose é uma técnica rápida e não invasiva para induzir lesões isquêmicas corticais reprodutíveis em camundongos.É adequado para diversos estudos experimentais de acidente vascular cerebral, particularmente

photothrombotic-ischemia-minimally-invasive-reproducible

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra o procedimento para gerar AVC fototrombótico em um modelo de camundongo por iluminação a laser de um crânio intacto após a administração de corante fotossensível.

Modelagem de AVC Fototrombótico em Modelo de Camundongo: Uma Técnica de Iluminação a Laser Através do Crânio de Camundongo Após Administração de Corante Fotossensível para Induzir Fototrombose

Vários modelos murinos de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) são amplamente utilizados em pesquisas sobre o cérebro experimental. Aqui, demonstramos o modelo de transcraniana permanente distal MCAO que produz enfarte cortical consistente de um tamanho correspondente ao dano imposto pela maioria dos acidentes vasculares cerebrais isquémicos humanos.

Curso de modelagem em Ratos: Coagulação permanente da artéria distal Cerebral Média

Aqui, descrevemos uma abordagem de microscopia óptica semi-invasiva para a indução de um coágulo fototrombótico de Rosa Bengala no córtex somatossensorial de um camundongo in vivo.  Os aspectos técnicos do procedimento de imagem são descritos desde a indução de um evento fototrombótico até a aplicação e coleta de dados.

Rosa Bengala Fototrombose por imageamento óptico confocal<em&gt; In Vivo</em&gt;: Um Modelo de curso Veículo Individual

A fototrombose é um procedimento minimamente invasivo e altamente reprodutível para induzir isquemia focal na medula espinhal e serve como modelo de lesão medular em camundongos.

Fototrombose induzida por isquemia focal como um Modelo de Lesão Medular em Ratos

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Os modelos tradicionais de AVC fototrombótico (STP) induzem principalmente agregados plaquetários densos de alta resistência ao tratamento lítico com ativador do plasminogênio tecidual (tPA). Aqui um modelo de PTS murino modificado é introduzido pela co-injeção de trombina e corante fotossensível para fotoativação. O modelo de PTS com trombina produz coágulos mistos plaquetas:fibrina e é altamente sensível à trombólise tPA.

Modelo de AVC fototrombótico enriquecido com fibrina e sensível ao tPA

Descrito aqui é o modelo de derrame fototrombótico, onde um derrame é produzido através do crânio intacto induzindo a oclusão microvascular permanente usando iluminação laser após a administração de um corante fotossensível.

Modelagem de AVC em Camundongos: Lesões Corticais Focais por Fototrombose

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Usando uma abordagem totalmente óptica, o AVC isquêmico é induzido enquanto registra simultaneamente a atividade neuronal de Ca2+ usando um biossensor fluorescente no núcleo emergente do AVC de um camundongo acordado e comportado.

Fototrombose Simultânea e Fotometria de Fibra para Induzir e Monitorar AVC Isquêmico em Camundongos em Comportamento

Esse protocolo oferece um método integrado que inclui entrega viral, implantação de optrodo, indução fototrombótica, registro simultâneo da atividade de astrócitos e neurais, e estimulação optogenética de astrócitos. Esse método integrado visa fornecer investigação simultânea da relação astrócito-neurônio nos estágios agudo a crônico do AVC isquêmico.

Um Método Integrado para Modelagem de AVC Fototrombótico e Registro In Vivo de Optrode da Atividade Neuronal e Astrocítica em Ratos Comportando-se

Aprenda a induzir isquemia cortical focal em camundongos usando o modelo fototrombótico com Rosa Bengala. Este método minimamente invasivo permite lesões reprodutíveis para estudar plasticidade cerebral e respostas celulares pós-AVC.

Isquemia Photothrombotic: Um Modelo de lesão cortical fotoquímica Minimamente Invasiva e reprodutível para mouse Estudos curso

Explorar mais vídeos