Name: Permanente oclusão vascular cerebral Via Dupla ligadura e transecção (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Aprenda a ocluir permanentemente vasos cerebrais em roedores com craniotomia e dupla ligadura. Esta técnica garante redução do fluxo sanguíneo ≥75% e infartos consistentes no córtex, com baixa mortalidade.

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Este trabalho foi apoiado pela American Heart Association Predoctoral Fellowship 788808-41910, o NIH-NINDS NS-NS-066001 e 055832, e O Centro de Investigação Fonoaudiológica NIH Training Grant 1T32DC010775-01.

1. Introdução: Instrumentos cirúrgicos requeridos Veja a Figura 4 <ol><li> Broca de dentista (Kavo Equipamentos Odontológicos, Modelo: UMXL-TM), 2-broca e furadeira de 3 bits </li><li> Agulhas hipodérmicas dois ~ calibre 30 </li><li> Serrilhada pinça, curvo ponta opcional (pode ser útil, mas não essencial) </li><li> Dois pinça de ponta fina </li><li> cortadores de fio </li><li> Fio de sutura </li><li> Micro tesoura </li></ol> 2. Criando a janela Surgical <ol><li> Anestesia: procedimentos estão em conformidade com as diretrizes do NIH e foram aprovados pela UC Irvine Animal Care e do Comitê Use. São sujeitos experimentais 295-400 g machos Sprague Dawley (Charles River Laboratories, Wilmington, MA, EUA) e o seguinte procedimento de anestesia deve ser utilizado: <ol><li> Injectar rato intraperitonealmente com um bolus de pentobarbital sódico (55 mg / kg de peso corporal) seguida por uma injecção intramuscular de atropina (0,05 mg / kg de peso corporal), no hind perna, e administrados 3,0 cc de 5% de dextrose em água, por via subcutânea. </li><li> Suplemento de pentobarbital de sódio (27,5 mg / kg de peso corporal) como injecções necessárias. Administrar uma pomada antibiótica oftálmica para os olhos para proteger as córneas durante os procedimentos seguintes. Administrar dextrose a 5% (3 mL) e atropina (0,05 mg / kg de peso corporal) a cada seis horas diminuir as secreções respiratórias durante a anestesia. Medir a temperatura do corpo por meio de uma sonda rectal, e manter a temperatura corporal a 37 ° C por uma manta térmica de auto-regulação. </li></ol></li><li> Localize a MCA por meio de: <ol class="lalpha"><li> Desbaste a 2 x 2 mm de imagens / janela de visualização sobre o córtex somatossensorial usando um tamanho de HP 3 broca até que o crânio é quase transparente e, em seguida, diluindo a total transparência usando um tamanho de HP 2 broca. A localização do MCA pode ser visto através desta janela e a sua trajectória proximal usada para aproximar a localização do segmento inicial. MCA geralmente executado em diagonal estajanela em uma rostral para caudal / ventral à direção dorsal (por exemplo, esquerda para a direita / para cima ao ver hemisfério esquerdo do ponto de vista do cirurgião). A janela cirúrgica pode então ser criada acima, onde o observador estima o segmento M1 (proximal cortical ramificação) a ser localizado com base nas ramificações distais visíveis através da primeira janela. A fim de minimizar a quantidade de crânio que é removido a fim de obter acesso a MCA / janela de visualização da imagem deve ser posicionado próximo a, mas separada da janela cirúrgica. Ou </li><li> Uma pequena janela cirúrgica deve ser posicionado aproximadamente 3 mm anterior e de 1 mm lateral ao forame oval ou o nervo mandibular, perto da tribuna arco 30,33,34. Para aceder efectivamente a haste do MCA (também conhecida como o segmento M1), o músculo temporal é reflectida temporariamente afastado da superfície do crânio. (Nota: No caso de cirurgias de sobrevivência a longo prazo, a experiência de nosso laboratório foi that, permitindo que o músculo temporal permanecer ligado na sua âncora, o músculo irá re-de recozimento para a superfície do crânio, permitindo comportamento alimentar saudável e eficaz manutenção do peso corporal. </li></ol></li><li> Siga MCA ao canto do rostral ventral da janela de imagem (se estiver a utilizar como referência), a fim de estimar a sua ramificação cortical onde inicial reside. </li><li> Criar uma nova região thin-crânio (nos referimos a isso como a janela cirúrgica) levemente rostral e ventral para a janela de imagem (se estiver usando isso como uma referência), onde o segmento M1 (pré-cortical ramificação) do MCA deve ser. IMPORTANTE: Deixe aproximadamente um intervalo de 2 mm entre a janela de imagem (se estiver usando isso como uma referência) ea janela cirúrgica. </li><li> Localizar a haste do MCA (também conhecida como o segmento M1) pouco antes cortical ramificação da artéria, como mostrado nas Figuras 1A e 1B. </li><li> Usando um tamanho HP-3 broca, fino o crânio acima da localização estimada segmento M1. Quando ocrânio torna-se um pouco transparente, mude para o tamanho mais delicada pouco HP-2 broca e fina do crânio até que seja completamente transparente. Confirmar visualmente como uma área cirúrgica janela torna-se fina o suficiente para exibir a vasculatura, e avaliar a localização do M1 neste ponto e completar a janela de tal modo que não é de 2-3 mm de cada lado do comprimento do segmento de M1 (isto permite espaço para a inserção e de saída da agulha de sutura de cada lado da MCA). </li></ol> NOTA IMPORTANTE: Pare desbaste quando a espessura do crânio é semelhante à da película de plástico. O navio se romperá se a broca rompe através do crânio e dura. Se o crânio não é suficientemente fina, por outro lado, removendo-o para a oclusão será difícil e pode resultar em danos para o córtex ou artéria. <ol start="7"><li> Tomar uma agulha hipodérmica de calibre 30 (30 L) e dobrar a ponta da agulha, utilizando pinças serrilhada. </li><li> Use a agulha de 30 G para perfurar o crânio cuidadototalmente em uma área não diretamente acima de uma artéria. Utilize este buraco punção para permitir uma pinça para agarrar crânio e retire cuidadosamente a área de desbaste da janela cirúrgica. </li><li> Dê um novo 30 G necessidade, dobre sua ponta como no Passo 6, e remova cuidadosamente a dura. </li></ol> NOTA: Cortando a dura fará com que ele descascar e MCA vai se tornar mais proeminente, como resultado da pressão reduzida. 3. Oclusão da MCA <ol><li> Use o alicate para cortar um reverse meia curva corte agulha de sutura (round 3/8, agulha de sutura 16 mm) até cerca de 3-5 mm. </li><li> Passe a agulha de sutura recortada, como mostrado na figura na Figura 4E. NOTA IMPORTANTE: É importante que a agulha é enroscada para ambas as extremidades do fio de sutura são de tamanho equivalente. Isto permite que o puxar do fio termina tanto sob M1, ao mesmo tempo, a agulha pode ser então cortado deixando livre a dois comprimentos de fio para amarrar os dois nós em torno de MCA. </li><li> Use o serrilhado a pinça escorregar a agulha de sutura sob M1. Inserir com cerca de 0,5-1 mm de distância da MCA, ficando tão superficial quanto possível de modo a minimizar os danos ao córtex, mas evitando demasiada pressão sobre o MCA bem. </li><li> Quando a agulha de sutura sai do outro lado de tal forma que ela está sob a MCA, utilizar uma pinça de ponta fina (como mostrado abaixo) para puxar a ponta da agulha de sutura a partir do lado oposto ao continuar a alimentar ou que empurra a outra extremidade do fio de sutura agulha com a ponta serrilhada pinças. </li><li> Uma vez que a agulha de sutura é passado completamente sob a MCA e foi puxado para fora, de continuar a puxar o fio de sutura e agulha até que o comprimento do fio é igual em ambos os lados da MCA. Ao pressionar para baixo sobre a linha medida que é alimentado através de minimizar a tensão sobre o MCA pode ser útil para impedir a ruptura como o fio passa por baixo da artéria. </li><li> Cortar o fio perto da agulha de sutura. </li><li> Use as duas pinças de ponta fina para desembaraçar os dois fios de sutura resultantes de modo que existem dois segmentos independentes enfiadas sob a MCA que não se tocam. Idealmente, os tópicos serão de cerca de 1 mm de distância, onde eles passam sob MCA. </li><li> Use as duas pinças de ponta fina para amarrar dois nós separados (duas ligaduras), com os fios em torno MCA tentando manter esse ~ 1 mm de espaço entre os nós para permitir espaço para transecção. </li></ol> NOTA: Se um controlo interno sham for desejado, preparar a oclusão deixando os nós de oclusão solto de modo a que eles não se contraem MCA em tudo e recolher os dados antes de apertar os nós e corte do recipiente. Corte a linha para evitar que pegar em qualquer coisa antes da oclusão, mas deixar fio suficiente para permitir o aperto dos nós mais tarde. Desta forma, qualquer imagem de linha de base ou de recolha de dados pode ser executada com todos da mesma invasão cirúrgica como a oclusão e os nós apertados no ponto de tempo apropriado, com pouco atraso. <ol start="9"><li> Uma vez que os nós já estaren bem apertada, use o micro tesoura para cortar através de M1, entre os dois nós. </li><li> No caso de estudos de sobrevivência a longo prazo: <ol class="lalpha"><li> Sutura de incisão aba couro cabeludo de volta no lugar com fio cirúrgico estéril ou proteger o tecido usando clipes ferida estéreis. </li><li> Administrar antibióticos localmente à área da ferida (tal como bacitracina pomada) e sistemicamente por injecção profilático de ampicilina (150 mg / kg, IM). </li><li> Enquanto o sujeito é ainda anestesiados administra uma pomada antibiótica oftálmica para os olhos. </li><li> Administrar suplementar de atropina (0,05 mg / kg IM) para diminuir as secreções respiratórias durante a anestesia. </li><li> Injectar flunixin meglumine (1,1 mg / kg) por via subcutânea, na conclusão da cirurgia e novamente na manhã seguinte (~ 12 horas depois) para controle da dor. </li><li> Colocar o animal em uma superfície seca, quente, inclinada de tal forma que o nariz animais está acima de sua cauda na inclinação (isso facilita a respiração até que o animal está acordado). &lt;/ Li&gt; <li> Monitorar o animal até que ele está acordado e mover com segurança por conta própria. </li><li> Uma vez que o animal está de volta no viveiro, a atividade do animal, aparência, vocalização e comportamento alimentar e beber deve ser monitorada diariamente. </li></ol></li></ol> 4. Eutanásia <ol><li> No final de cada experiência, os ratos devem ser sacrificados com pentobarbital de sódio (2-3 ml, por via intraperitoneal). </li></ol>

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<li>Kuge, Y., Minematsu, K., Yamaguchi, T., Miyake, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nylon+monofilament+for+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Nylon monofilament for intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 26, 1655-1657 (1995).</li>
<li>Laing, R. J., Jakubowski, J., Laing, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.+Which+method+works+best%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Which method works best?</a> Stroke. 24, 294-297 (1993).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li>
<li>Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+reevaluation+of+the+intraluminal+thread+model+of+focal+cerebral+ischemia%3A+evidence+of+inadvertent+premature+reperfusion+and+subarachnoid+hemorrhage+in+rats+by+laser-Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry.</a> Stroke. 29, 2162-2170 (1998).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar neste momento.

Este protocolo foi desenvolvido a fim de induzir isquemia dentro do córtex roedor, e a fazê-lo com o mínimo de impacto periférica sujeitos experimentais. A dupla oclusão e método transecção permite a confirmação visual de que o recipiente foi permanentemente obstruída, e pode ser realizado sem invasão excessiva ou danos no tecido, e com uma elevada taxa de sobrevivência. Este protocolo de oclusão pode ser aplicada a qualquer recipiente cortical que podem ser acedidas através craniotomia para induzir isquemia cortical de...

A fim de induzir eficazmente condições isquémicas que imitam AVC isquémico humano, existem vários modelos animais tempos são amplamente empregados, com diversos volumes de enfarte resultantes. No modelo photothrombotic, o cérebro é irradiada através do crânio intactos utilizando iluminação do laser após a injecção intravenosa de uma substância fotossensível (como cor-de-bengala), resultando em coagulação fotoquímica, obstrução dos vasos irradiados, e isquemia no tecido circundante 6, 7. Indocianina pode resultar em regiões muito pequenas, isolados de enfarte e é tipicamente utilizado como um meio de modelação &quot;mini-derrames&quot;, ou &quot;micro-enfartes&quot;. A técnica mais frequentemente adoptada para a indução de acidente vascular cerebral isquémico, particularmente na artéria cerebral média (MCA), é o modelo de monofilamentos intraluminal 8, na qual um filamento é introduzido cirurgicamente para dentro da artéria carótida externa e avançou até a ponta oclui a base da MCA. A primary desafio de oclusão filamento intraluminal é a alta taxa de mortalidade (70% quando a MCA está obstruído por 3 horas, um ponto de tempo relevantes para a investigação AVC) 9. Outros problemas com o método incluído possível hemorragia subaracnóide, oclusão incompleta, e volume de infarto variável 10,11. Este modelo resulta num grande grau de enfarte, tanto no córtex e subcorticalmente 12 e os modelos de um acidente vascular cerebral humano. Maciça Embora ambos micro e acidente vascular cerebral maciço modelos são importantes, traços humanos são normalmente algures no meio. Em grandes estudos clínicos, acidente vascular cerebral infarto varia em tamanho 28-80 cm 3, o que se traduz em 4,5-14% do hemisfério ipsi-ishemic 9. Em comparação, os ratos pMCAO enfarte tamanho varia de cerca de 9-35 mm 3, a qual é constituída por 3 a 12% do hemisfério ipsi ishemic. Nosso modelo pMCAO, portanto, se assemelha volumes infarto AVC isquêmico humanos pela porcentagem de cérebrovolume. Além de modelar o dano estrutural do curso, resultados pMCAO nos défices funcionais e comportamentais semelhantes à condição humana. No mínimo, um modelo eficaz de resultados do curso em déficits de movimento contralateral à lesão AVC 13-15, perda ou interrupção da função motora e sensorial 16,17, perda ou interrupção de atividade neuronal evocada 16,18, a redução no fluxo sanguíneo cerebral 19, 20, e do infarto 21,22. Dessa forma, os modelos pMCAO uma oclusão grave de MCA, resultando em incapacidade física, perda da função dentro do córtex sensorial (e córtices vizinhos), a interrupção da atividade neuronal, uma severa redução no fluxo sanguíneo MCA e atributos infarto característicos da AVC isquêmico 23 -25, portanto, servir como um modelo eficaz de acidente vascular cerebral humano. Processualmente, pMCAO envolve uma pequena craniotomia em que remova cuidadosamente o crânio e dura deum mm x &quot;janela cirúrgica&quot; 2 2 sobre o segmento inicial (M1) de MCA, imediatamente antes da bifurcação primária de MCA em ramos corticais anterior e posterior (Figuras 1A e 1B). Passamos um reverso agulha de sutura de corte semi-curva e linha (6-0 seda) através da camada pial das meninges, MCA abaixo e acima da superfície cortical (ver Tabela de reagentes e equipamentos específicos para os suprimentos cirúrgicos necessários para realizar pMCAO ). Em seguida, dê um duplo ligadura, aperte os dois nós em torno de MCA, e transecto o navio entre os dois nós. A ligadura dupla e transecção através M1 ocorre apenas distal à ramificação lentículo, de tal modo que apenas os ramos corticais de MCA-são afectados, assim, apenas enfarte cortical (nenhum dano subcortical) ocorre 26,27 (Figura 2). Apesar de AVC humano muitas vezes envolve enfarte subcortical, modelando isso em roedores requer aumento da capacidade de invasão (oclusão de vasos cerebrais antes cortical Branching requer acesso artérias através da artéria carótida no pescoço e necessita de oclusões adicionais) na técnica e aumento da variabilidade no tamanho do infarto. O modelo descrito aqui não pode ser realizada mais proximal como o acesso aos ramos anteriores do MCA não é possível através de uma craniotomia simples. Embora possa ser possível para induzir cirurgicamente um enfarte sub-cortical através pMCAO, oclusão implicaria um procedimento extremamente invasivo e, por conseguinte, não é o ideal. Eficácia de oclusão pode ser confirmada através de Doppler a laser, ou laser salpico imagiologia 12,24,25 (Figura 3), ou histologicamente post mortem (Figura 2). Deve notar-se que a pesquisa anterior tem mostrado que a estimulação sensorial pode desempenhar um papel importante na evolução e resultado de enfarte; conferir protecção contra danos quando administrados dentro de 2 horas de pMCAO e causando um aumento no dano do curso, quando administrado a 3 horas após pMCAO 24,25,28. Confirmámos que a 5 horas após a pMCAO, a estimulação já não tem um efeito sobre os resultados (dados não publicados). Assim, a estimulação sensorial de sujeitos deverá ser minimizada durante 5 horas seguindo pMCAO obter volumes de enfarte com uma variabilidade mínima. Assim, o nosso grupo vai &quot;controles não tratados&quot; deste tipo, mantendo os ratos anestesiados por 5 horas pós-pMCAO, no escuro, com a estimulação sensorial mínima, e expressamente nenhum estímulo triz. Deve-se ainda notar que a variação ocasional na estrutura MCA, incluindo a excessiva ramificação, vários segmentos primários, ou a ausência de artérias comunicantes pode ocorrer em uma freqüência de 10 a 30% no sexo masculino adulto Sprague Dawley 29,30. Se anormalidades na MCA são observados, é aconselhável não usar esse assunto em particular como a adição de animais com tais anomalias vasculares vão aumentar a variabilidade do infarto. Além disso, há vários aspectos práticos de oprocedimento ur que tornam este método de oclusão vantajoso para a investigação derrame. Em primeiro lugar, as suturas podem ser colocados ao redor da artéria, mas não apertou a fim de recolher a avaliação inicial, seguido de avaliação pós-isquêmica após ligadura e transecção. Nesta forma, a preparação cirúrgica necessária para a oclusão é efectivamente controlada por, entre os indivíduos. Como os indivíduos podem permanecer estacionária ou dentro de um quadro estereotáxico durante a oclusão, é possível realizar uma avaliação experimental de cada sujeito, antes, durante, e após a oclusão, sem mover o objecto ou perturbar qualquer equipamento em uso experimental 25,28. Além disso, este procedimento resulta em uma taxa de mortalidade muito baixa, mesmo dentro de assuntos roedores idade 21-24 meses de idade (o equivalente a um humano idoso) 31, e pode, portanto, ser usados ​​para avaliar tratamentos acidente vascular cerebral em ratos que mais de perto o modelo mais comum faixa etária dos portadores de acidente vascular cerebral 25,28. Vessel transection também serve a vários propósitos práticos. A falta de sangramento depois da transecção confirma que o recipiente foi completamente ocluído em ambos os locais de ligadura. Além disso, transection garante uma interrupção permanente do fluxo de sangue. Finalmente, a transecção assegura que qualquer fluxo de sangue detectado nas porções distais do vaso ocluído deve vir de uma fonte alternativa. Finalmente, embora especificamente descrever a técnica de oclusão para MCA neste manuscrito e vídeo, a mesma técnica transection ligadura dupla pode ser aplicado a qualquer vaso cerebral que pode ser acessado via craniotomia. O nosso laboratório, por exemplo, utilizado em conjunto com pMCAO várias oclusões adicionais permanentes MCA distais dos ramos, a fim de bloquear tanto primário, e do fluxo de sangue colateral 24 de uma maneira semelhante à das técnicas destinadas a induzir selectivamente isquemia no córtex somatossensorial primário 32. Em conclusão, to seu método de oclusão permanente, tal como aplicado a MCA modela estreitamente três facetas primárias de acidente vascular cerebral humano: a localização mais comum (MCA), tipo (isquemia), e grau de dano (enfarte), associada com a literatura clínica humana de acidente vascular cerebral. Além disso, este método de oclusão pode ser aplicada aos locais de oclusão simples ou múltiplo ao longo do cérebro, e pode ser realizado em doentes idosos com uma elevada taxa de sobrevivência. Dada a natureza dinâmica, permanente e relativamente não-invasivo desta oclusão, esta técnica representa uma ferramenta adicional para os pesquisadores pré-clínicos avaliando novas abordagens para a protecção e tratamento de acidente vascular cerebral.

<table><tbody><tr><td>Pinça Graefe Extra Fina - Pontas de 0,5 mm Curva Ligeira (1)</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>11151-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dumont #5 Revestida de Cerâmica (2)</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>11252-50</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Bonn Extra Fina, reta (1)</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas de Sutura Redonda 3/8 (16 mm)</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>12050-02</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Seda Trançada Ferramentas</td><td>de Ciência Fina</td> de Sutura <td>NC9071061 Aparelho Harvard No.:510461</td><td></td></tr><tr><td>agulha de calibre 30, &frac12; " comprimento</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>NC9867376 No.:ZT-5-030-5-L/COL</td><td></td></tr></tbody></table>

permanente oclusão vascular cerebral<em&gt; via</em&gt; dupla ligadura e transecção

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

O AVC é a principal causa de morte, invalidez e perda socioeconômicas em todo o mundo. A maioria de todos os acidentes vasculares cerebrais resultam de uma interrupção do fluxo sanguíneo (isquemia) 1. Artéria cerebral média (MCA) fornece uma grande maioria de sangue para a superfície lateral do córtex 2, é o local mais comum de acidente vascular cerebral humano 3, e isquemia no seu território pode resultar em disfunção extensa ou morte 1,4,5. Sobreviventes de acidente vascular cerebral isquêmico, muitas vezes sofrem perda ou rompimento das capacidades motoras, deficiências sensoriais e infarto. Em um esforço para capturar estas características fundamentais de acidente vascular cerebral e, assim, desenvolver um tratamento eficaz, uma grande ênfase é colocada em modelos animais de isquemia em MCA. Aqui apresentamos um método de oclusão permanentemente uma cortical dos vasos sanguíneos da superfície. Vamos apresentar este método usando um exemplo de uma oclusão do vaso relevante que modela o tipo mais comum, localização e outcome de acidente vascular cerebral humano, oclusão da artéria cerebral média permanente (pMCAO). Neste modelo, expomos cirurgicamente MCA no rato adulto e, subsequentemente, através de ocluir ligadura dupla e transecção da embarcação. Isto bloqueia o ramo pMCAO cortical proximal do MCA, causando isquemia em todos MCA território cortical, uma grande porção do córtex. Este método de oclusão pode também ser utilizado para ocluir porções mais distais dos vasos corticais, a fim de alcançar mais de isquemia focal como alvo uma região menor do córtex. As principais desvantagens da pMCAO são que o procedimento cirúrgico é pouco invasivo como uma pequena craniotomia é necessário para aceder MCM, no entanto, isso resulta em dano mínimo do tecido. As principais vantagens deste modelo, no entanto, são os seguintes: o local de oclusão está bem definida, o grau de redução do fluxo sanguíneo é consistente, funcional e disfunção neurológica ocorre rapidamente, o tamanho do enfarte é consistente, e a elevada taxa de sobrevivência a longo permite avaliação crônica prazo.

Oclusão de sucesso de um navio pode ser confirmado usando laser de salpico de imagem (LSI), entre outras técnicas de imagem do fluxo sanguíneo. O fluxo de sangue nos principais ramos corticais da MCA deve cair para ~ 25% da linha de base ou menos após oclusão, dependendo do nível de ruído no sistema de gravação e a sensibilidade da técnica. Ver Figura 3 para uma imagem representativa de um LSI segmento de um ramo cortical da MCA, antes e após a oclusão MCA. Quando a técnica da oclusão d...

Nós descrevemos um método altamente reprodutível para a oclusão permanente de um roedor grande vaso sanguíneo cerebral. Esta técnica pode ser realizado com muito pouco dano periférica, a perda de sangue mínima, uma elevada taxa de sobrevivência a longo prazo, e o volume de enfarte consistente comensurável com a população de clínica humana.

Permanente oclusão vascular cerebral<em&gt; Via</em&gt; Dupla ligadura e transecção

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

O objetivo geral deste procedimento é ocluir permanentemente um vaso cerebral principal de roedor. Isso é realizado primeiramente realizando uma craniotomia de dois por dois milímetros acima do vaso. Em seguida, uma sutura é passada abaixo e ao redor do vaso-alvo.Em seguida, duas ligaduras são fixadas ao redor do vaso sanguíneo e, por fim, o vaso é seccionado entre os nós da sutura. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram uma redução no fluxo sanguíneo maior ou igual a 75%, avaliada por imagem de speckle a laser ou por tomografia de coerência óptica. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como o método de oclusão com monofilamento, é a obtenção de regiões consistentes de infarto na córtex de roedores, variabilidade limitada no tamanho do infarto e baixa mortalidade dos animais.As implicações dessa técnica estendem-se ao diagnóstico e tratamento do acidente vascular cerebral, pois novas terapias podem ser avaliadas durante a fase aguda e ao longo da recuperação nos mesmos indivíduos. Para se preparar para a cirurgia, utilize um esterilizador de contas de vidro para esterilizar os seguintes instrumentos: um torno dentário com brocas de dois e três milímetros, duas agulhas hipodérmicas de calibre 30, pinças serrilhadas, duas pinças de ponta fina, uma agulha de sutura curva reversa com corte, alicate de corte para fio de sutura, fio de sutura e tesoura microcirúrgica.Após anestesiar uma rata Sprague dolly, de acordo com um método aprovado pelo comitê de cuidados e uso de animais da sua instituição, insira uma sonda retal para medir a temperatura corporal e posicione a rata sobre um cobertor térmico autorregulável. Em seguida, coloque uma agulha de calibre 26 em uma broca dentária. Para acessar a artéria cerebral média ou ACM, use hemostatos para refletir temporariamente o músculo temporal para longe da superfície do crânio.Após localizar a ACM, use a broca para criar uma pequena janela cirúrgica cerca de três milímetros anterior e um milímetro lateral ao forame val ou ao nervo mandibular. Próximo ao arco rostral, estime onde está localizado o ramo cortical da ACM e siga-o até o canto ventral rostral da janela de imagem. Em seguida, crie uma região de crânio fino, ligeiramente rostral e ventral à janela de imagem, onde o segmento M1 da ACM deve estar, deixando uma lacuna de quase dois milímetros entre a janela de imagem e a janela cirúrgica.Usando uma broca de tamanho três, adelgace o crânio acima da localização estimada do segmento M1. Quando o crânio se tornar parcialmente transparente, mude para a broca mais delicada de tamanho dois e continue a adelgaçar o crânio. Até que fique completamente transparente, a espessura do crânio deve ser semelhante à de um filme plástico.Em seguida, utilizando pin&ccedil;as serrilhadas, dobre a ponta de uma agulha de calibre 30 e use a agulha para perfurar cuidadosamente o cr&acirc;nio em uma &aacute;rea que n&atilde;o esteja diretamente acima de uma art&eacute;ria. Depois, utilize o orif&iacute;cio como ponto de entrada para as pin&ccedil;as. Para remover cuidadosamente a janela cir&uacute;rgica afinada usando uma nova agulha de calibre 30, remova cuidadosamente a dura-m&aacute;ter, o que far&aacute; com que a art&eacute;ria cerebral m&eacute;dia (MCA) se torne mais proeminente em raz&atilde;o da redu&ccedil;&atilde;o da press&atilde;o.Em seguida, localize o tronco da ACM ou segmento M1. A ACM será distinta das veias que frequentemente a acompanham por ser o vaso de cor vermelho mais brilhante. Confirme que expôs a ACM logo antes da ramificação cortical da artéria, conforme mostrado aqui.Avalie a localização da M1 e confirme que a janela apresenta dois a três milímetros em cada lado do comprimento do segmento M1. Para ocluir a artéria cerebral média, use tesoura de corte para cortar metade da curvatura de uma agulha de sutura com corte reverso, deixando-a com cerca de três a cinco milímetros. Passe a agulha cortada na sutura, garantindo que ambas as extremidades da sutura tenham comprimentos iguais, sob um microscópio cirúrgico.E, usando a pinça serrilhada, deslize a agulha de sutura sob M1 a cerca de 0,5 a um milímetro da artéria cerebral média (MCA) e o mais superficial possível para minimizar danos à camada cortical, sem tensionar a MCA, continuando a guiar e introduzir a agulha sob a MCA com a pinça serrilhada. Use uma pinça de ponta fina para puxar a agulha do lado oposto. Uma vez que a agulha tenha passado completamente sob a MCA, continue puxando a sutura até a metade, pressionando-a para baixo.Para minimizar a tensão na artéria, corte o fio próximo à agulha de sutura, resultando em dois fios independentes, com cerca de um milímetro de distância entre si, usando pinças de ponta fina. Faça dois nós separados ao redor da ACM, mantendo-os a cerca de um milímetro de distância após terem sido firmemente apertados. Use tesoura microcirúrgica para seccionar o segmento M1 entre os dois nós.Uma vez que a artéria cerebral média (MCA) seja com sucesso transeccionada, mantenha os animais sedados, aquecidos e em um ambiente tranquilo por um período de cinco horas para garantir que não ocorra proteção induzida por estimulação contra acidente vascular cerebral. Após confirmar oclusão bem-sucedida por meio de imagem de padrão de laser ou outra técnica de imagem, permite-se que o animal se recupere da anestesia e administram-se antibióticos e analgesia. Os danos provocados pelo acidente vascular cerebral se desenvolverão ao longo de 24 a 48 horas.A oclusão bem-sucedida de um vaso pode ser confirmada utilizando técnicas de imagem de fluxo sanguíneo, como a imagem de speckle a laser ou LSI. Abaixo são apresentadas imagens representativas de LSI de um segmento de um ramo cortical da artéria cerebral média (MCA) antes e após a oclusão da MCA. O fluxo sanguíneo nos principais ramos corticais da MCA deve cair para cerca de 25% do valor basal ou menos após a oclusão, dependendo do nível de ruído do sistema de gravação e da sensibilidade da técnica. Quando a técnica de oclusão descrita é aplicada à MCA no segmento M1, bloqueando todos os ramos corticais da MCA e impedindo estímulo sensorial, o resultado após uma oclusão permanente e cinco horas sem estímulo é um infarto cortical de 28,4 ± 2,4 milímetros cúbicos.Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em 20 minutos ou menos. Após este procedimento, diversas outras técnicas podem ser empregadas, como imagem funcional, imagem de espelho a laser e gravação neuronal, com o objetivo de responder perguntas como: qual é o estado funcional e estrutural da córtex após a oclusão.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra o procedimento de realização da oclusão permanente da artéria cerebral média distal, ou MCAO, com a artéria carótida comum, ou ligadura CCA, em ratos idosos para modelar o AVC isquêmico. Isso bloqueia o fluxo sanguíneo para o cérebro, levando à morte neuronal e gerando um modelo para estudar os mecanismos do AVC e possíveis tratamentos.

Induzindo isquemia via oclusão do cérebro médio e da artéria carótida comum em um modelo de rato

Fonte: Larpthaveesarp, A., et. al. Modelo transitório de oclusão da artéria cerebral média de acidente vascular cerebral neonatal em ratos P10. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra o estabelecimento do modelo de oclusão da artéria cerebral média em um filhote de rato. A artéria carótida interna (ACI) é exposta e uma ligadura é fixada para restringir a inundação do sangue. Um ocluído é inserido através da ACI para atingir a Artéria Cerebral Média. O filhote é então autorizado a se recuperar...

Gerando uma oclusão da artéria cerebral média em um filhote de rato para induzir isquemia cerebral local

Este protocolo descreve o pré-condicionamento hipóxico repetitivo ou breves exposições à hipóxia sistêmica que reduzem os volumes de infarto e a ruptura da barreira hematoencefálica após oclusão transitória da artéria cerebral média em camundongos. Ele também detalha a quantificação dupla do volume do infarto e da ruptura da barreira hematoencefálica após o AVC para avaliar a eficácia da proteção neurovascular.

Quantificação de Proteção Neurovascular sequência repetitiva Hypoxic Pré-condicionamento e Transient Oriente oclusão da artéria cerebral em ratos

Aqui apresentamos um protocolo para produzir oclusão média distal permanente da artéria cerebral em ratos fêmeas idosos com oclusão simultânea das artérias carótidas de gerar grandes infartos corticais e déficits sustentados. Mostramos confirmação do tamanho da lesão utilizando MRI estrutural às 24 h e 8 semanas após o acidente vascular cerebral.

Realizando Permanente Distal Oriente cerebral com carótida comum Oclusão da Artéria em ratos idosos para estudar Cortical Isquemia com Deficiência Sustentada

O AVC neonatal é uma causa significativa de lesão cerebral precoce, exigindo um modelo translacional com padrões consistentes de lesão focal e alta reprodutibilidade para permitir o estudo. Este estudo descreve o procedimento cirúrgico detalhado para a criação de uma lesão de isquemia-reperfusão focal unilateral não hemorrágica em roedores equivalentes a termo.

Transiente Artéria Cerebral Média Oclusão Modelo de AVC neonatal em ratos P10

O objetivo geral deste procedimento é fornecer uma técnica altamente reprodutível para avaliação na vivo do rompimento da barreira hemato - encefálica em modelos do rato de acidente vascular cerebral isquêmico.

Uma avaliação In Vivo do rompimento da barreira hemato - encefálica em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

Este protocolo descreve o modelo de isquemia cerebral focal transitória em camundongos através da oclusão intraluminal da artéria cerebral média. Além disso, exemplos de avaliação de resultados são mostrados usando ressonância magnética e testes comportamentais.

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

Este protocolo descreve o processo de preparação para a reperfusão da oclusão da artéria cerebral média através da artéria carótida comum.

Preparação de um modelo modificado para reperfusão de oclusão da artéria cerebral média

Este protocolo descreve o processo de indução de um modelo de coma isquêmico cerebral usando um método modificado de oclusão de quatro vasos.

Modelo de Coma Isquêmico Cerebral Induzido por Oclusão Modificada de Quatro Vasos

Aprenda a ocluir permanentemente vasos cerebrais em roedores com craniotomia e dupla ligadura. Esta técnica garante redução do fluxo sanguíneo ≥75% e infartos consistentes no córtex, com baixa mortalidade.

Permanente oclusão vascular cerebral

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