Name: Largo-campo microscopia de fluorescência e citometria de fluxo fluorescente de imagens em um telefone celular (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-11T09:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Aprenda a converter câmeras de celular em plataformas de microscopia de fluorescência e citometria de imagens usando acessórios ópticos compactos. Este método permite análise citométrica em ambientes com recursos limitados.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

A. Ozcan agradece o apoio do Prémio Carreira presidencial antecipada para Cientistas e Engenheiros (PECASE), Army Research Office (ARO) Young Investigator Award, National Science Foundation (NSF) Prémio Carreira, o Office of Naval Research (ONR) Young Investigator Award e National Institutes of Health (NIH) Prêmio Diretor Innovator Nova DP2OD006427 do Escritório do Diretor, National Institutes of Health.

Nesta seção, apresentamos os protocolos experimentais para o nosso telefone celular baseado microscopia de fluorescência de campo largo 13 e opto-fluídico plataforma de citometria de imagem 14. Nós vamos usar partículas fluorescentes e fluorescente etiquetado células brancas do sangue para testar essas plataformas de imagem. A. Preparação do telemóvel Baseado Largo-campo microscópio de fluorescência e Opto-fluídico citômetro de fluxo de imagem O telemóvel baseado microscópio de campo amplo fluorescente ou citômetro de fluxo consiste de duas partes principais: um celular com câmera e um compacto opto-fluídico add-on acessório. 1. A câmera do telefone Enquanto as técnicas apresentadas são aplicáveis ​​a quase qualquer câmera de telefone, escolhemos Sony Erickson Aino como a base para estes dispositivos. Este celular tem um ~ 8 Megapixels RGB sensor CMOS instalado e uma lente interna que tem uma distância focal (f 1) de ~ 4,65 milímetros. </p&gt; 2. Opto-fluídico anexo para Wide-field Microscopia fluorescente O acessório óptico é projetado pela Autodesk e é impresso por uma elite Dimensão 3-D impressora usando ABSplus material termoplástico. Neste processo de impressão, e materiais de suporte de modelo são aquecidas em uma cabeça de extrusão no interior da impressora e são depositados camada por camada sobre uma base de modelação. Quando este passo é completado, o material de suporte pode ser dissolvida, deixando um modelo robusto 3D do protótipo desejado nossa concepção acessório óptico é composto por LEDs (centro de comprimento de onda de 470 nm, ~, Digikey), um filtro de plástico (# NT54-46, Edmund Optics), um tabuleiro de amostras, e uma lente plano-convexa f 2 = 15 mm (# NT45-302, Edmund Optics). Todos os LEDs e filtros de plástico podem ser facilmente alterados com base em espectros de fluoróforos. Os passos para montar esse apego opto-fluídico incluem: <ol><li> Coloque a lente na sua posição de fixação no interior da lente específica titular. </li><li> Coloque o filtro de plástico sobre a bandeja do filtro e deslize-o anexo; ou fita o filtro de plástico na frente da lente da câmera de telefone celular. </li><li> Insira a bandeja de LED para o anexo. </li><li> Coloque as lâminas de vidro de amostra na bandeja de amostra. Deslize a bandeja de amostra no anexo. Enfrentar os LEDs em direção à amostra. </li><li> Clipe da penhora para o telemóvel, de modo que a lente extra está diretamente em contato com a lente da câmera de telefone celular. </li><li> Use a chave no anexo para ligar os LEDs. </li><li> Imagem da amostra de interesse com a unidade de câmera de telefone celular, usando o seu &quot;modo noite&quot;. </li></ol> 3. Opto-fluídico Attachment para Citometria de imagem fluorescente Quando existe a necessidade de filtrar grandes volumes de amostras líquidas para a detecção de eventos raros, o dispositivo de citometria de fluxo optofluidic podia ser preferido. Nós podemos modificar a nossa grande área de design de microscópio de fluorescência e convertê-lo em um citômetro de fluxo, waqui um PDMS canal microfluídico base é usado para continuamente fornecer a amostra de líquido através do volume de imagem. O acessório óptico também é projetado pela Autodesk e impresso pela Dimensão impressora 3-D Elite. Também é composto por LEDs (centro de comprimento de onda de 470 nm, ~, Digikey), um filtro de plástico (# NT54-46, Edmund Optics), um tabuleiro de amostras, e uma lente asférica (f mm = 4,5) (produto # C230TME-A; Thorlab). Os passos para montar esse apego opto-fluídico incluem: <ol><li> Coloque a lente asférica para o anexo. </li><li> Coloque o filtro de plástico sobre a bandeja do filtro e deslize-o anexo; ou fita o filtro de plástico na frente da lente da câmera de celular. </li><li> Deslize o canal microfluídicos para a fixação opto-fluídico mesmo. </li><li> Clipe da penhora para o telemóvel de modo que a lente extra está diretamente em contato com a lente da câmera de telefone celular. </li><li> Use a chave no anexo para ligar os LEDs. </li><li> Conecte o microfluidic canal para a bomba de seringa e fornecer a amostra de líquido para dentro do dispositivo microfluidico a uma taxa de fluxo constante. </li><li> Capturar um filme das células fluorescentes / partículas que fluem através do canal microfluídicos usando o modo de vídeo da câmera de telefone celular. </li></ol> B. Preparação de Amostras 4. Preparação de Micro-partículas fluorescentes Amostras <ol><li> Esferas fluorescentes com 10 um de diâmetro (contas vermelhas: Produto # F8834 excitação / emissão 580nm/605nm; grânulos verdes: Produto # F8836: excitação / emissão 505nm/515nm) são adquiridos a partir de Invitrogen (Carlsbad, CA). </li><li> Misturar 10 ul de contas fluorescentes verdes, 10 ul de contas fluorescentes vermelhas com 40 ul de água desionizada. </li><li> Place10 ul desta mistura de pérolas sobre uma lâmina de vidro usando uma micropipeta e colocar uma outra lâmina de vidro sobre o topo do mesmo a fazer uma estrutura de sanduíche. </li><li> Insira esta estrutura sanduíche na bandeja de amostra e deslize-o no acessório de celular. </li&gt; </ol> 5. Preparação de fluorescência leucócitos marcados <ol><li> Tome SYTO16 ácido nucleico rotulagem fluorescente kit (# S7578, Tecnologia Vida) e tampão fosfato salino (PBS) para fora do refrigerador e trazê-los à temperatura ambiente. </li><li> Transferir 200 uL da amostra de sangue inteiro a partir de tubo de colheita de sangue EDTA a 1,5 ml tubo de polistireno (# 05-408-129, Fisher Scientific). </li><li> Adicionar 1 ml de tampão de lise de células vermelhas do sangue (# R7757, Sigma-Aldrich) para a amostra de sangue total e 200 ul homogeneizar. </li><li> Após 5 minutos, centrifugar a amostra de sangue lisada e remover a solução sobrenadante. </li><li> Ressuspender o sedimento de células brancas do sangue em 200 ul de tampão PBS e gentilmente misturá-los. </li><li> Adicionam-se 5 ul de solução de 1 mM SYTO16 para a amostra de glóbulos brancos. Enrole a amostra com uma folha de alumínio e incuba-se em ambiente escuro, durante ~ 30 min. </li><li> Centrifugar novamente a amostra. O sobrenadante é removido e as células brancas do sangue marcados pelota é re-Suspenso em tampão de PBS. </li><li> Colocar 5-10 ul rotulado brancas do sangue amostra de líquido de célula para uma lamela de cobertura, e colocar uma lamela segundo sobre o topo da amostra. </li><li> Inserir o slide amostra encaixados na bandeja de amostra e imagem-lo usando o microscópio de telefone celular fluorescente. </li></ol> Alternativamente <ol start="10"><li> Continuamente entregar as fluorescente etiquetado células brancas do sangue através de um canal microfluídicos usando uma bomba de seringa automatizada, além de capturar um filme fluorescente microscópica das células que fluem com a câmara de telemóvel no modo de vídeo. Devemos também enfatizar que uma bateria portátil movido a bomba de seringa ou até mesmo força da gravidade pode ser utilizada para conduzir o fluxo através do canal de microfluídica. </li></ol>

<ol><li>Sklar, L. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSklar%2C+LA+%22Flow+Cytometry+for+BioTechnology%22">Flow Cytometry for BioTechnology</a>. , Oxford University Press Inc. (2005).</li>
<li>Nunez, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNunez%2C+R+%22Flow+cytometry+for+research+scientists%3A+principle+and+applications%22">Flow cytometry for research scientists: principle and applications</a>. , Horizon Press. Wymondham, UK. (2001).</li>
<li>Mertz, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMertz%2C+J+%22Introduction+to+optical+microscopy%22">Introduction to optical microscopy</a>. , Roberts and company publishers. Colorado, USA. (2010).</li>
<li>Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Going+deeper+than+microscopy%3A+the+optical+imaging+frontier+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Going deeper than microscopy: the optical imaging frontier in biology.</a> Nature Methods. 7, 603-614 (2010).</li>
<li>Hell, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+fluorescence+nanoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Toward fluorescence nanoscopy.</a> Nature Biotechnology. 21, 1347-1355 (2003).</li>
<li>Gustafsson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+structured-illumination+microscopy%3A+wide-field+fluorescence+imaging+with+theoretically+unlimited+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Nonlinear structured-illumination microscopy: wide-field fluorescence imaging with theoretically unlimited resolution.</a> Proceedings of the National Academy of Science U.S.A. 102, 13081-13086 (2005).</li>
<li>Betzig, E., Patterson, G. H., Sougrat, R., Lindwasser, O. W., Olenych, S., Bonifacino, J. S., Davidson, M. W., Lippincott-Schwartz, J., Hess, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+intracellular+fluorescent+proteins+at+nanometer+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution.</a> Science. 313, 1642-1645 (2006).</li>
<li>Rust, M. J., Bates, M., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sub-diffraction-limit+imaging+by+stochastic+optical+reconstruction+microscopy+%28STORM%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Sub-diffraction-limit imaging by stochastic optical reconstruction microscopy (STORM.</a> Nature Methods. 3, 793-796 (2006).</li>
<li>Hess, S. T., Girirajan, T. P., Mason, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-high+resolution+imaging+by+fluorescence+photoactivation+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Ultra-high resolution imaging by fluorescence photoactivation localization microscopy.</a> Biophysical Journal. 91, 4258-4272 (2006).</li>
<li>Ma, Z., Gerton, J. M., Wade, L. A., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+near-field+microscopy+of+DNA+at+sub-10+nm+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Review+Letters%22%5BJournal%5D)">Fluorescence near-field microscopy of DNA at sub-10 nm resolution.</a> Physical Review Letters. 97, 260801(2006).</li>
<li>Chung, E., Kim, D., Cui, Y., Kim, Y., So, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-dimensional+standing+wave+total+internal+reflection+fluorescence+microscopy%3A+superresolution+imaging+of+single+molecular+and+biological+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Two-dimensional standing wave total internal reflection fluorescence microscopy: superresolution imaging of single molecular and biological specimens.</a> Biophysical Journal. 93, 1747-1757 (2007).</li>
<li>Greenbaum, A., Luo, W., Su, T. -W., Göröcs, Z., Xue, L., Isikman, S. O., Coskun, A. F., Mudanyali, O., Ozcan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+without+lenses%3A+achievements+and+remaining+challenges+of+wide-field+on-chip+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging without lenses: achievements and remaining challenges of wide-field on-chip microscopy.</a> Nature Methods. 9, 889-895 (2012).</li>
<li>Zhu, H., Yaglidere, O., Su, T. -W., Tseng, D., Ozcan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost-effective+and+compact+wide-field+fluorescent+imaging+on+a+cell-phone%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Cost-effective and compact wide-field fluorescent imaging on a cell-phone.</a> Lab on a Chip. 11 (2), 315-322 (2011).</li>
<li>Zhu, H., Mavandadi, S., Coskun, A. F., Yaglidere, O., Ozcan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optofluidic+fluorescent+imaging+cytometry+on+a+cell+phone%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Optofluidic fluorescent imaging cytometry on a cell phone.</a> Analytical Chemistry. 83, 6641-6647 (2011).</li>
<li>Suzuki, S., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+Visualand+Graphics%5BTitle%5D)+AND+%22Image+Processing%22%5BJournal%5D)">Computer Visualand Graphics.</a> Image Processing. 30, 32-46 (1985).</li>
<li>Zhu, H., Sikora, U., Ozcan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantum+dot+enabled+detection+of+Escherichia+coli+using+a+cell-phone%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Quantum dot enabled detection of Escherichia coli using a cell-phone.</a> Analyst. 137, 2541-2544 (2012).</li>
<li>Mudanyali, O., Dimitrov, S., Sikora, U., Padmanabhan, S., Navruz, I., Ozcan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+Rapid-Diagnostic-Test+Reader+Platform+on+a+Cellphone%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Integrated Rapid-Diagnostic-Test Reader Platform on a Cellphone.</a> Lab on a Chip. 12 (15), (2012).</li>
<li>Candes, E. J., Romberg, J. K., Tao, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+signal+recovery+from+incomplete+and+inaccurate+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Communication+of+Pure+and+Applied+Mathematics%22%5BJournal%5D)">Stable signal recovery from incomplete and inaccurate measurements.</a> Communication of Pure and Applied Mathematics. 59, 1207-1223 (2006).</li>
</ol>

Dr. Ozcan é o fundador de uma empresa start-up que pretende comercializar imagem computacional e ferramentas de microscopia.

Nós apresentamos nossos resultados recentes sobre celular baseado de campo amplo de microscopia fluorescente e opto-fluídico citometria de fluxo de imagens usando leve e compacto opto-fluídicos anexos para câmeras de telefones celulares. Utilizando esta tecnologia de plataforma que imaged objectos fluorescentes incluindo as micro-partículas e rotulados glóbulos brancos em amostras de sangue total. Portanto, este compacto e de baixo custo de telefone celular conjunto de ferramentas de imagem baseada fluorescente pode ser...

Microscopia e citometria de fluxo são amplamente utilizadas técnicas de 1-12 em pesquisa biomédica e científica, bem como o diagnóstico clínico para a contagem e caracterização de vários tipos celulares. No entanto, os microscópios convencionais e de citometria de fluxo-instrumentos são relativamente complexos e caros, o que limita a sua utilização para principalmente bem estabelecidas laboratórios centrais. Recentemente, temos desenvolvido uma citometria de imagem compacto e leve fluorescente e dispositivo microscopia integrados em um telefone celular, que mostra 13,14 promessa de custo-benefício traduzir microscopia de fluorescência, citometria de fluxo e análise relacionados com técnicas de micro-para ambientes de recursos limitados para várias aplicações de telemedicina que impactam a saúde global. Na configuração de citometria de fluxo optofluidic (ver Figura 1C e 1D por exemplo), um design personalizado polydimethysiloxane (PDMS) canal baseado microfluídico é positioned em frente com o telemóvel da unidade de câmara, em que emitem luz-diodos (LEDs) são acoplados à extremidade das bordas do canal. Este chip de microfluidos, juntamente com a amostra de líquido no interior, forma um guia de ondas planar opto-fluídica (composto de, por exemplo PDMS-líquido-PDMS) de tal modo que a luz de excitação é guiada para bombear uniformemente os espécimes fluorescentes marcados no interior do micro-canal. A emissão de fluorescência de esses objetos marcados, por exemplo, células, é mais trabalhada através de uma lente adicional colocada logo após o telemóvel câmera de unidade e é mapeado para o telemóvel Complementar sensor de imagem Metal-Oxide Semiconductor (CMOS). Uma vez que a emissão fluorescente é recolhido perpendicular ao percurso de luz de excitação, um filtro de absorção de plástico barato é suficiente para eliminar a luz de excitação espalhada e pode proporcionar uma base de campo escuro decente necessárias para imagens de fluorescência. Usando um projeto opto-fluídico semelhante, podemos também a imagem dos objetos fluorescentes em estatísticaic modo (ver Figura 1A e 1B), em que as partículas fluorescentes são prensadas entre duas lâminas de vidro, em vez de fluir através de um canal microfluídico e a emissão fluorescente a partir destas partículas fluorescentes são captadas pelo sensor de imagem CMOS celular para contagem de partículas e caracterização. Com base nos requisitos de aplicação diferentes, citometria de fluxo ou de campo amplo de microscopia fluorescente podem ser escolhidos. Por exemplo, o dispositivo celular por citometria de fluxo pode ser especialmente útil para o rastreio de grandes volumes de amostras de líquidos (por exemplo, alguns mililitros) para a detecção de células raras ou agentes patogénicos. Neste artigo, rever alguns dos nossos resultados recentes sobre a integração de microscopia de fluorescência e ferramentas de imagem de citometria de fluxo em um telefone celular usando compactos e de baixo custo opto-fluídicos anexos. Estas celular baseado micro-análise, citometria de imagens e plataformas de sensoriamento poderia fornecer várias oportunidadespara diagnóstico de telemedicina e de ponto-de-cuidado, especialmente impactando nossa luta contra os problemas globais de saúde em regiões com recursos limitados do mundo.

<table><tbody><tr><td>Celular:</td><td>Sony</td><td>Sony Ericsson Aino</td><td></td></tr><tr><td>, lente plano-convexa,</td><td>Edmund Optics</td><td># NT45-302</td><td></td></tr>, <tr><td>Lente asférica</td>, <td>Thorlab</td><td># C230TME-A</td><td></td></tr><tr><td>Filter</td>, <td>Edmund Optics</td><td>#NT54-46</td><td></td></tr><tr><td>Blue LED</td><td>Digikey</td><td>#365-1201-ND</td><td></td></tr><tr><td>Bateria</td><td>Digikey</td><td>#P032-ND</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de poliestireno</td><td>Fisher Scientific</td><td>#05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Tampão de lise de glóbulos vermelhos</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>SYLGARD 184 KIT DE ELASTÔMERO DE SILICONE</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Contas fluorescentes vermelhas (10 &mu; m)</td><td>Life Technologies</td><td>#F8834</td><td></td></tr><tr><td>Contas fluorescentes verdes (10 &mu; m)</td> <td>Life Technologies</td><td>#F8836</td><td></td></tr><tr><td>Rotulagem fluorescente de ácido nucleico SYTO16</td><td>Life Technologies</td> <td># S7578</td><td></td></tr></tbody></table>

largo-campo microscopia de fluorescência e citometria de fluxo fluorescente de imagens em um telefone celular

Wide-field Fluorescent Microscopy and Fluorescent Imaging Flow Cytometry on a Cell-phone

Microscopia de fluorescência e citometria de fluxo são amplamente utilizadas ferramentas na pesquisa biomédica e diagnóstico clínico. No entanto, estes dispositivos são, em geral, relativamente volumosos e dispendiosos, tornando-as menos eficazes para os ambientes com recursos limitados. Para potencialmente resolver estas limitações, que recentemente demonstraram a integração do grande campo de microscopia de fluorescência e ferramentas de imagem de citometria de fluxo em telefones celulares usando compacto, leve, e de custo-benefício opto-fluídicos anexos. Na nossa concepção de citometria de fluxo, as células marcadas por fluorescência são lavadas por meio de um canal microfluídico que está posicionado por cima da unidade de câmara existente telemóvel. Alimentados por bateria diodos emissores de luz (LEDs) são butt-acoplada ao lado do chip de microfluidos, que actua efectivamente como um guia de ondas multi-modo de laje, onde a luz de excitação é guiada para excitar uniformemente os alvos fluorescentes. A câmera de celular grava um filme lapso de tempo de as células fluorescentes que fluem atravéso canal microfluídico, onde os quadros digital deste filme são processados ​​para contar o número de células marcadas dentro de solução alvo de interesse. Usando um projeto opto-fluídico semelhante, também podemos imagem dessas células marcadas com fluorescência no modo estático, por exemplo, imprensando as partículas fluorescentes entre duas lâminas de vidro e capturar suas imagens fluorescentes usando a câmera de telefone celular, que podem atingir uma resolução espacial de ex ~ 10 m ao longo de um grande campo de visão de ~ 81 mm 2. Este celular baseado citometria de fluxo fluorescente imagem e plataforma de microscopia pode ser útil especialmente em ambientes com recursos limitados, por exemplo, para a contagem de células T CD4 + em direção acompanhamento de pacientes HIV + ou para a detecção de parasitas transmitidas pela água em água potável.

Com o nosso opto-fluídica bombagem / excitação esquema (Figuras 1C e 1D), as células marcadas com fluorescência pode ser continuamente fornecido para dentro do canal microfluídico utilizando uma bomba de seringa, enquanto a câmara celular grava um lapso de tempo de filme microscópico fluorescente das células de fluxo. Estes filmes fluorescentes pode depois ser rapidamente analisados ​​usando detecção de contorno e de algoritmos de rastreamento 14,15 para determinar automatica...

Analisamos nossos resultados recentes sobre a integração de microscopia de fluorescência e ferramentas de imagem de citometria de fluxo em um telefone celular usando compactos e de baixo custo opto-fluídicos anexos. Estes celular baseado micro-dispositivos de análise pode ser útil para a análise citométrica, como a realização de tarefas de contagem de células diferentes, bem como para rastreio de alto rendimento de amostras, por exemplo, água em ambientes com recursos limitados.

Largo-campo microscopia de fluorescência e citometria de fluxo fluorescente de imagens em um telefone celular

Fluorescent microscopy and flow cytometry are widely used tools in biomedical research and clinical diagnosis. However these devices are in general ...

O objetivo geral deste procedimento é converter a câmera de um telefone celular em uma plataforma de microscopia fluorescente ou em um citômetro de imagem fluorescente. Primeiro, a emissão fluorescente é coletada por meio de uma lente acoplada, posicionada entre o telefone celular, a unidade da câmera e a amostra de interesse. Em seguida, um filtro plástico simples dentro do acessório rejeita a luz de excitação espalhada, criando um fundo de campo escuro para a imagem fluorescente, transformando o telefone com câmera em um microscópio fluorescente ou citômetro de imagem.No passo final, é tirada uma foto ou vídeo das partículas fluorescentes de interesse usando a câmera no modo noturno. Em última análise, esferas ou células fluorescentes podem ser visualizadas e caracterizadas pela câmera do telefone celular. A principal vantagem dessa técnica em comparação com métodos convencionais, como o uso de microscópio fluorescente convencional, é que o microscópio baseado em telefone celular é compacto, leve, de baixo custo e possui potencial para uso em diagnósticos no ponto de atendimento.Em ambientes com recursos limitados onde os serviços convencionais de saúde não estão disponíveis, par

wide-field-fluorescent-microscopy-fluorescent-imaging-flow-cytometry

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Aqui demonstramos os protocolos para a realização de uma única molécula de microscopia de fluorescência em células vivas de bactérias para habilitar funcionais complexos moleculares a serem detectados, rastreados e quantificados.

Visualizando Único complexos moleculares In Vivo Usando microscopia de fluorescência avançada

Um sem lente no chip plataforma de microscopia fluorescente é demonstrado que pode objetos de imagem fluorescente através de uma ultra-wide campo de visão de, por exemplo,&gt; 0,6-8 cm2 com &lt;4μm resolução usando uma amostra de compressão baseada algoritmo de decodificação. Como um compacto e de campo amplo modalidade de imagem fluorescente on-chip poderia ser valioso para high-throughput citometria, raro de célula de pesquisa e análise de microarray.

Microscopia fluorescente sem lente em um Chip

Neste artigo, nós descrevemos um método utilizando multi-espectral citometria de fluxo de imagem para quantificar a internalização de nanopartículas polianidrido ou bactérias por células RAW 264.7.

Analisando internalização celular de nanopartículas e bactérias multi-espectral por Citometria de Fluxo Imagem

Medindo intracelular de Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Mudanças no esperma humano, utilizando quatro técnicas: fluorometria convencional, Parado Fluorometria fluxo, citometria de fluxo e única célula de imagem

Citometria de fluxo e de Complementação de fluorescência Bimolecular fornece um método quantitativo de alto rendimento para estudar a interação proteína-proteína. Esta metodologia pode ser aplicada ao mapeamento de locais de ligação de proteína e para o rastreio de factores que regulam a interacção proteína-proteína.

Citometria de fluxo e de Complementação de fluorescência Bimolecular: A alta taxa de transferência método quantitativo para estudo de interação proteína-proteína

A distribuição espacial e a dinâmica temporal das proteínas e lipídios da membrana plasmática são um tema quente na biologia. Aqui, esse problema é abordado por uma análise de flutuação de imagem espaço-temporal que fornece conceitualmente as mesmas quantidades físicas de rastreamento de partícula única, mas usa pequenos rótulos moleculares e configurações de microscopia padrão.

De fast imagens de fluorescência com a Lei difusão molecular em membranas de células vivas em um microscópio comercial

Estudos de biomoléculas in vivo são cruciais para a compreensão da função molecular em um contexto biológico. Aqui descrevemos um novo método que permite a internalização de biomoléculas fluorescentes, como DNA ou proteínas, em microrganismos vivos. A análise de dados in vivo registrados por microscopia de fluorescência também é apresentada e discutida.

Internalização e Observação de Fluorescent Biomoléculas em microorganismos vivos via Eletroporação

Este protocolo descreve a implementação de um sistema de microscopia óptica de estiramento de tempo de detecção assimétrica para imagens de célula única em fluxo microfluídico ultra-rápido e suas aplicações em citometria de fluxo de imagem.

Citometria de Fluxo de Imagem Microfluídica por Microscopia Óptica de Tempo-estiramento com detecção assimétrica (ATOM)

Compreender a função dos processos essenciais de bactérias é um desafio. Microscopia de fluorescência com corantes de destino específico pode fornecer insights-chave em progressão de crescimento e ciclo celular de células microbianas. Aqui, a Agrobacterium tumefaciens é usado como uma bactéria modelo para destacar métodos para geração de imagens de células vivas para a caracterização de processos essenciais.

Viver a microscopia de fluorescência da célula para observar os processos essenciais durante o crescimento de células microbianas

Aqui, é apresentado um protocolo para extração óptica e catalogação de assinaturas de fluorescência celular inata (ou seja, autofluorescência celular) de cada célula viva individual distribuída em um espaço tridimensional. Este método é adequado para estudar a assinatura de fluorescência inata de diversos sistemas biológicos em uma resolução unicelular, incluindo células de bactérias, fungos, leveduras, plantas e animais.

Reconstrução de assinaturas de fluorescência inata de células únicas por microscopia confocal

Aqui, descrevemos diferentes métodos de formação de esferóides multicelulares para realizar microscopia de células vivas multiparâmetros de acompanhamento. Usando microscopia de imagem de fluorescência (FLIM), autofluorescência celular, corantes de coloração e nanopartículas, é demonstrada a abordagem para análise do metabolismo celular, hipóxia e morte celular em câncer tridimensional (3D) vivo e esferoides derivados de células-tronco.

Produção e Microscopia de Imagem de Tempo de Vida de Fluorescência de Células Vivas Multiparâmetros (FLIM) de Esferoides Multicelulares

Aprenda a converter câmeras de celular em plataformas de microscopia de fluorescência e citometria de imagens usando acessórios ópticos compactos. Este método permite análise citométrica em ambientes com recursos limitados.

Largo-campo microscopia de fluorescência e citometria de fluxo fluorescente de imagens em um telefone celular

Explorar mais vídeos