Transplante para a câmara anterior do olho para longitudinal, não-invasivo Em vivo Imaging com uma única célula de resolução em tempo real
March 10th, 2013
Uma nova abordagem combinando transplantação intra-ocular e microscopia confocal permite longitudinal, não-invasivo de imagem em tempo real, com uma única célula de resolução dentro dos tecidos enxertados In vivo. Demonstramos como transplantar ilhéus pancreáticos para dentro da câmara anterior do olho do rato.
Olá, sou eu Doretta, do Instituto de Pesquisa em Diabetes da Escola de Medicina Miller da Universidade de Miami. Vou demonstrar neste vídeo como transplantar ilhós pancreáticos para a câmara interna do olho do rato. O procedimento envolve duas etapas.
O primeiro passo é carregar os ilhós pancreáticos isolados na cânula e o segundo passo é o procedimento de transplante real. Para obter detalhes sobre instrumentação e reagentes, consulte o texto anexo. Destacamos aqui, o acionador de seringa motorizado com a seringa montada e os acessórios do reservatório e da cânula, que serão focados no vídeo a seguir.
Começamos carregando os ilhós na cânula. Todos os procedimentos são realizados sob o estereoscópio. Comece centralizando os ilhós girando ou girando o prato em círculos.
Quando centrada, desconecte a cânula do reservatório e lave quaisquer bolhas de ar conduzindo a chave de seringa motorizada para frente. E isso é feito pisando no pedal dianteiro. Quando estiver pronto, comece a aspirar os ilhós para dentro do reservatório, conduzindo agora o acionador de seringa motorizado para trás.
E, novamente, isso é feito pisando no pedal para trás. Observe como os ilhós tendem a se acumular no fundo do reservatório. Em seguida, reconecte a cânula ao reservatório e ejete os ilhós para fora do reservatório.
Em seguida, o tubo na cânula para desalojar os ilhós do reservatório e incentivá-los a permanecer embalados no tubo. Bata no reservatório enquanto dirige o driver de seringa motorizado para frente. Observe como os ilhós estão compactados no tubo quando começam a entrar na parte de trás da cânula.
Até agora, você deve estar pronto para transplantar os ilhós. Coloque o mouse do tamanho de NS em uma almofada e exponha ou estoure o olho a ser transplantado puxando a pele da cabeça com o dedo indicador e o polegar. Usando uma nova agulha como bisturi.
Aproxime-se do olho com a extremidade chanfrada voltada para baixo para evitar contato e ferimentos da íris. Penetre a ponta da agulha na córnea e faça uma incisão lateral. Em seguida, introduza a cânula, pré-carregada com pálpebras na câmara interna através da incisão, e comece a infundir os ilhós na câmara novamente, conduzindo a chave de seringa motorizada para frente.
Não se preocupe com bolhas de ar que possam ficar presas dentro da cânula, pois elas se dissiparão mais tarde. E eles atuarão como uma barreira natural para minimizar ou prevenir o refluxo das pálpebras para fora da câmara. Retraia lenta e cuidadosamente a cânula para fora da câmara interna.
Agora lave o olho com PBS estéril. Injete seu analgésico preferido e, finalmente, aplique pomada antibiótica oftálmica. O transplante está terminado.
Agora mostramos resultados representativos com pálpebras pancreáticas transplantadas para a câmara interna do olho. Para estudos de imagem longitudinal dos ilhós individuais no sétimo dia. Após o transplante, os ilhós são claramente enxertados no topo da íris no dia 28.
Os ilhós estão nos mesmos locais vistos anteriormente 42 dias após o transplante. Os ilhós são claramente visíveis nos mesmos locais. Observe também como a incisão cicatrizou, impedindo qualquer possibilidade de interferir na imagem dos ilhós individuais.
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Visão Geral
Este artigo apresenta um novo método para transplantar ilhotas pancreáticas na câmara anterior do olho do rato, utilizando transplantação intraocular e microscopia confocal. Esta abordagem permite a imagem longitudinal, não invasiva de tecidos enxertados com resolução de célula única in vivo.
Principais Componentes do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia do Transplante
- Técnicas de Imagem
Fundo
- O transplante de ilhotas pancreáticas é um tratamento potencial para diabetes.
- Métodos tradicionais de monitoramento de enxertos podem ser invasivos e limitados.
- A microscopia confocal fornece capacidades de imagem de alta resolução.
- A transplantação intraocular oferece um ambiente único para monitoramento de enxertos.
Objetivo do Estudo
- Demonstrar um método para transplantar ilhotas pancreáticas no olho do rato.
- Permitir a imagem em tempo real de tecidos transplantados.
- Avaliar a viabilidade e integração das ilhotas pós-transplante.
Métodos Utilizados
- Isolamento de ilhotas pancreáticas.
- Carregamento de ilhotas em uma cânula para transplante.
- Realização do transplante sob um estereomicroscópio.
- Uso de microscopia confocal para imagem pós-transplante.
Principais Resultados
- Transplante bem-sucedido de ilhotas pancreáticas na câmara anterior.
- As ilhotas permaneceram visíveis e viáveis para imagem até 42 dias pós-transplante.
- A cicatrização do local da incisão foi observada, permitindo uma imagem clara.
- O enxerto das ilhotas foi confirmado através de estudos de imagem longitudinal.
Conclusões
- O método permite o monitoramento eficaz de transplantes de ilhotas pancreáticas.
- A microscopia confocal fornece insights valiosos sobre a dinâmica do enxerto.
- Esta abordagem pode melhorar a compreensão da biologia das ilhotas e aprimorar tratamentos para diabetes.
