Question 1

O que é um hemacitômetro e por que é usado para contagem de células?

Accepted Answer

Um hemacitômetro é uma câmara de contagem com uma grade gravada a laser originalmente projetada para contar células sanguíneas. Ele contém duas câmaras de contagem com grades divididas em quadrantes de tamanhos variados. A ferramenta permite que pesquisadores contem células sob um microscópio óptico e calculem a concentração total de células, tornando-o essencial para determinar números de células em experimentos biomédicos que requerem quantidades conhecidas de células.

Question 2

Como é a grade do hemacitômetro estruturada para contagem de células?

Accepted Answer

A grade do hemacitômetro consiste em 9 quadrantes principais. Os quatro quadrantes dos cantos são subdivididos em 16 quadrantes menores cada, enquanto o quadrante central contém 25 quadrantes menores, cada um ainda dividido em 16 micro-quadrantes. Cada quadrado grande tem uma área de 1 mm² e contém um volume de 0,1 mm³, ou 1/10.000 de um mililitro, o que é crítico para o cálculo da concentração total de células.

Question 3

Quais etapas de preparação são necessárias antes de carregar células em um hemacitômetro?

Accepted Answer

Limpe o lamínula e a câmara de contagem com etanol e um lenço de papel para remover fiapos, impressões digitais e marcas d'água. Aplique água nos suportes de montagem do lamínula para manter o lamínula no lugar usando tensão superficial. Triture suavemente a suspensão celular pipetando para cima e para baixo para deslocar os aglomerados celulares, depois aspire aproximadamente 10 microlitros e carregue-o em uma porta de introdução onde a ação capilar puxa a solução através da grade.

Question 4

Como você escolhe qual quadrante contar com base na densidade celular?

Accepted Answer

Selecione o tamanho do quadrante de acordo com a densidade celular: para números baixos de células, conte todas as células em um quadrante do canto; para densidade média, use um dos 16 quadrantes menores; para alta densidade, conte as células em um dos 25 quadrantes centrais. Sempre conte pelo menos 20-50 células por quadrante para garantir a precisão. Conte as células tocando as linhas superior e esquerda, mas desconsidere aquelas tocando as linhas inferior ou direita.

Question 5

Como você calcula o número total de células em sua amostra?

Accepted Answer

Multiplique a contagem de células por 10.000 (já que cada quadrado grande é igual a 1/10.000 de um mililitro). Aplique um fator de multiplicação baseado no tamanho do quadrante: multiplique por 1 para quadrantes grandes, por 16 para quadrantes de canto, ou por 25 para quadrantes centrais. Se você diluiu a amostra, multiplique pelo fator de diluição. Finalmente, multiplique pelo volume total da amostra para determinar o número total de células na sua amostra experimental.

Question 6

O que é a exclusão do azul tripano e como ela determina a viabilidade celular?

Accepted Answer

O azul de tripano é uma coloração vital que distingue células vivas de células mortas. Células vivas têm membranas intactas e excluem o corante, aparecendo brilhantes e douradas sob microscopia de contraste de fase. Células mortas não têm integridade de membrana, permitindo que o azul de tripano entre e manche o citoplasma de azul. Conte apenas células vivas e multiplique a contagem final pelo fator de diluição do azul de tripano para determinar a concentração de células viáveis em sua amostra.

Question 7

Por que a contagem precisa de células é importante em experimentos biomédicos?

Accepted Answer

Contagem precisa de células garante dados estatisticamente relevantes em ensaios baseados em células. Os pesquisadores precisam de números precisos de células ao isolar células do tecido, misturar diferentes populações celulares em experimentos de co-cultura, realizar imunoensaios como ELISPOT, ou extrair mRNA de células. Conhecer quantidades exatas de células permite a devida diluição e padronização das condições experimentais entre replicatas e suporta o passaging de células linhas métodos de subcultivo e aplicações.

Uso de um hemacitômetro para contar células - Questionário de avaliação