Name: Protocolos para Avaliação de radiofreqüência Interações com Nanopartículas de Ouro e Sistemas biológicos para terapia não-invasiva Câncer Hipertermia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-28T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 51 s
Description: Aprenda a avaliar as propriedades de aquecimento de nanopartículas de ouro em campos de radiofrequência de 13,56 MHz para aplicações em hipertermia não invasiva no tratamento do câncer.

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Este trabalho foi financiado pelo NIH (U54CA143837), o NIH MD Anderson Cancer Center, Suporte Grants (CA016672), a Fundação V (SAC), e uma bolsa de investigação irrestrito da Fundação Kanzius Pesquisa (SAC, Erie, PA). Agradecemos Kristine Ash, do Departamento de Oncologia Cirúrgica, MD Anderson Cancer Center, de assistência administrativa.

Uma visão geral experimental completo está representado na Figura 1. Mais detalhes são descritos nas etapas 1-3 abaixo. 1. Avaliando Aquecimento RF de NP Colóides: AuNPs como exemplo <ol><li> Em geral, para cada amostra a ser investigada NP, primeiro lavar várias vezes as amostras por meio de um filtro de centrifugação com água desionizada (DI) de água para remover os iões de fundo e contaminantes. Todos os iões e contaminantes terá sido removida da suspensão AUNP quando o líquido a ser lavado para fora tem taxas semelhantes de aquecimento RF (HR) como água DI. Este processo de purificação permite também que para as concentrações mais elevadas de PN a ser obtidos. Vale a pena notar que, embora utilizando AuNPs neste exemplo, os princípios fundamentais podem ser aplicados a outros materiais NP. </li><li> Como um exemplo, purificar um frasco de 500 ml de AuNPs disponíveis comercialmente de diâmetro de 5 nm e, em seguida, submetê-los a um campo de RF de 13,56 MHz de eletro-field força de 90 kV / m. <ol><li> Tome ~ 125 ml da solução estoque AUNP e divisão entre seis a 50 kDa tubos de filtro de centrífuga. Centrifugar a 3.000 rpm. durante 2 min 5 seg. Remover filtros de buffer e de recarga filtrados com mais solução estoque. Repita até que todos os 500 ml foi filtrada. </li><li> Substituir o tampão filtrado com um volume similar de água DI e repetir cerca de 8 vezes (ou até que as HRs RF tampão filtrados são equivalentes a água Dl). Nota, a análise por UV-Vis, também pode ser utilizado para monitorar os picos de absorção de contaminantes. Uma vez que os contaminantes tampão ter sido totalmente removido, pipeta de aproximadamente 0,5 ml de água Dl para cada filtro e ressuspender as AuNPs por pipetagem repetida. Isto deve remover completamente os AuNPs do filtro e para permitir a ressuspensão completa. Misture todos os seis suspensões em um tubo de 15 ml Eppendorf. </li><li> Uma vez que os AuNPs foram purificadas e concentradas, analisar a amostra utilizando ICP-OES e / ou ICP-MS, UV-vis e potencial Zeta de dados sobre concentration e estabilidade NP, respectivamente. SEM e / ou análise de TEM, também pode ser utilizado para obter os dados morfológicos. A preparação da amostra detalhada para estas técnicas podem ser encontrados na literatura 4. </li></ol></li><li> Usando o sistema de Kanzius RF descrito em estudos anteriores 8, ou derivações deste sistema, coloque um 1,3 ml cilíndrico quartzo tina de modo que o campo elétrico RF no ar (sem amostra presente) seria a 90 kV / m no interior da cuba. Para uma amostra de soro fisiológico normal (0,9% NaCl) a-campo eléctrico será reduzida para ~ 1,1 kV / m. Estas são as condições aproximadas utilizadas para permitir que sejam feitas comparações entre diferentes sistemas. <ol><li> Pipetar 1,3 ml de uma amostra de 1000 mg / l de colóide AUNP purificada na cuvete de quartzo e introduzi-la em a-campo RF. Isto pode ser feito por meio de um suporte de amostra de Teflon construído sob encomenda. Expor amostra para o campo de RF durante um período de 120 segundos ou até a amostra atingir 70 ° C para evitar a formação de arco eléctrico ou de ebulição rápida. Capture os dados de imagens térmicas (bem como as áreas de controle) usando uma câmera IR e software associado. Repita este procedimento três vezes. </li><li> Filtrar a amostra através de um outro filtro de centrífuga de 50 kDa para extrair os AuNPs do tampão de água DI. Re-expor o tampão para o campo de RF, novamente três vezes. A diferença de horas entre o colóide AUNP eo buffer de água DI fundo determina o HR devido aos próprios AuNPs. Esperar obter horas de ~ 0,3 ° C / seg e 0,05 ° C / seg a dar um AUNP dependente de HR de ~ 0,25 ° C / seg. Volte a suspender as AuNPs restantes do filtro em 1,3 ml de água para experimentos in vitro in vivo /. </li></ol></li></ol> 2. Hipertermia induzida pela RF assistida por Nanopartículas: Estudos in vitro <ol><li> Estes estudos in vitro, pode ser aplicado a qualquer tipo de tipo de célula cancerosa que formam monocamadas 2D. Neste experimento usar carcinoma hepatocelular humano derivado de células Hep3B. <ol><li> Placa ~ 50.000 cells nas três dianteiros cavidades de uma placa de 12 poços com 1 ml de meio de crescimento. Repita este 6 vezes (usar três placas para estudos NP e três placas como controles). Incubar a 37,5 ° C por 24 horas antes de introduzir os NPs. Esterilizar PN primeiro usando BioSafety Gabinete exposição UV-luz por 5 min. </li><li> Em cada poço introduzir 0,1 ml de uma solução 1,000 mg / L AUNP e deixar durante mais 24 horas. Adicionar 0,1 ml de água em cada poço das placas de três células de controlo e também deixar durante 24 horas. </li><li> Após 24 horas ter passado, aspirar os meios de comunicação das células e lavagem com PBS para remover quaisquer AuNPs ligadas à superfície. Substitua a mídia celular. As células estão prontas para a exposição RF. </li></ol></li><li> Coloque cada pacote de células de 12 poços dentro do campo de RF. Espere até que as células tenham arrefecido a 31 ° C. Ligue o gerador de RF e expor para 3,5 min. A temperatura final do meio celular será ~ 37 ° C. Desligue o campo de RF. Remover as células e colocá-los em uma incubadora por 24 horas antes da análise. <ol> &lt;li&gt; Retirar células da incubadora e media célula aspirado. Adicionar 1,6 ml de meio de células de cada poço, assim, de 0,4 ml de reagente MTT. Incubar as células durante 4 horas. Aspirar a mídia e substituir com 2 ml de dimetilsulfóxido (DMSO). Colocar as placas da célula num agitador de bancada e deixar durante 10 minutos para permitir que o DMSO, para solubilizar os reagentes MTT. Finalmente, uma pipeta de 100 uL de cada poço para uma placa de 96 poços e opticamente lido do poço a 570 nm utilizando um leitor de placas, tais como o leitor de placas SPECTROstar Nano. </li></ol></li></ol> 3. Hipertermia induzida pela RF assistida por Nanopartículas: estudos in vivo <ol><li> Estes estudos in vivo, pode ser aplicado a qualquer tipo de cancro que formam tumores sólidos, em um modelo murino ortotópico ou ectópica. Este experimento utiliza células de câncer de fígado Hep3B em um modelo de camundongo ectópica tumor BALB-C Nude. </li><li> Nota: todos os experimentos in vivo são executadas em conformidade com todas as diretrizes, regulamentos e agências reguladoras. Além disso, o protocolo que está sendo demonstrada foi realizada sob a orientação e aprovação do Animal Care and Use Committee University of Texas MD Anderson Cancer Centers Institucional (IACUC). <ol><li> Crescer um número apropriado de células (~ 100 k) em um balão de cultura de tecidos com meio de crescimento adequado. Incubar numa incubadora a 37 ° C com 5% de CO 2 durante o período de cultura de células. </li><li> Tratar as células com tripsina (para separar do balão) e produzir uma solução de 2 milhões de células para cada 25 ul. Adicionar uma quantidade igual de Matrigel (no gelo) e misture bem para preparar a solução de injeção final. Injectar esta solução para a posição desejada na parte traseira do rato e esperar uma quantidade apropriada de tempo para os tumores crescerem até ao tamanho desejado (2-4 semanas para a maioria das células). Antes da exposição RF, BALB-C camundongos nus deve ter tumores sólidos ectópica 0,5-1 cm de diâmetro. </li></ol></li><li><ol><li> Preparar os ratos para ser utilizado (neste caso de BALB-C ratinhos nu) por anaesthetizing los com uma solução de cetamina e xilazina por injecção IP. Enquanto os ratos estão caindo no sono, mantê-los em uma câmara com temperatura controlada a 37 ° C. Serão necessários 20 camundongos no total, todos os tumores de tamanho semelhante de rolamento. Dez ratos será usado em conjunto com e sem AuNPs (sendo este último apenas injeções de PBS), enquanto os restantes 10 ratos serão divididos entre os controles expostos à RF não RF-expostos e ambos os grupos: sem injeções AUNP. </li><li> Uma vez devidamente anestesiados, injetar os AuNPs diretamente no tumor, utilizando uma seringa de 1 cc com uma agulha G 27. A solução AUNP deve estar a uma concentração de 200 mg de Au / L em 0,1 mL de PBS. Após a injeção, use um cotonete cirúrgico para absorver o sangue e limpar o local da injecção com um algodão embebido em álcool. </li><li> Em seguida, montar o mouse para ser tratada na cabeça de recepção do gerador de RF. O rato tem de ser posicionado de modo a que o tumor é o mais próximo da cabeça de transmissão. Proteja as áreas que não estão a ser tratados, bem como a sensibilidadetiva áreas como olhos, ouvidos, mãos e pés, com fita de cobre. Certifique-se de que a fita de cobre é apropriadamente entrar em contato com o plano de terra para que não ocorra o acúmulo de carga. Além disso, a área de exposição tem de ter um espaço de pelo menos 1 cm maior do que a dimensão do local de tratamento desejado. </li><li> Posição IV câmara térmica de modo a que o tumor e a área de tratamento são visíveis. Ligue RF por 5 min. Registre a curva da temperatura resultante. Se a terapia atinge temperaturas superiores a 42 ° C de tratamento de parar imediatamente. </li></ol></li><li><ol><li> Após a exposição RF recuperar os ratos da anestesia em uma câmara quente até que eles são conscientes. </li><li> Repita a experiência com o mesmo camundongos 48 horas mais tarde (etapas 3.3.1 - 3.4.1). </li><li> Após a experiência, a eutanásia dos ratos de acordo com os protocolos e procedimentos institucionais. Registar o peso do tumor. Para a análise histológica corrigir os tumores usando formalina e incorporá-los em parafina. Seções tumorais são normalmente manchado sagacidadeh hematoxilina e eosina e para alvos relevantes para medir a eficácia terapêutica, por exemplo, Ki-67, caspase-3, etc. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Gannon, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotube-enhanced+thermal+destruction+of+cancer+cells+in+a+noninvasive+radiofrequency+field%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotube-enhanced thermal destruction of cancer cells in a noninvasive radiofrequency field.</a> Cancer. 110, 2654(2007).</li>
<li>Curley, S. A., Cherukuri, P., Briggs, K., Patra, C. R., Upton, M., Dolson, E., Mukherjee, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+radiofrequency+field-induced+hyperthermic+cytotoxicity+in+human+cancer+cells+using+cetuximab-targeted+gold+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Ther.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive radiofrequency field-induced hyperthermic cytotoxicity in human cancer cells using cetuximab-targeted gold nanoparticles.</a> J. Exp. Ther. Oncol. 7, 313(2008).</li>
<li>Gannon, C. J., Patra, C. R., Bhattacharya, R., Mukherjee, P., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+gold+nanoparticles+enhance+non-invasive+radiofrequency+thermal+destruction+of+human+gastrointestinal+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Intracellular gold nanoparticles enhance non-invasive radiofrequency thermal destruction of human gastrointestinal cancer cells.</a> Journal of Nanobiotechnology. 6, 2(2008).</li>
<li>Raoof, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+antibody-conjugated+gold+nanoparticles+in+the+endolysosomal+nanoenvironment%3A+implications+for+noninvasive+radiofrequency-based+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Stability of antibody-conjugated gold nanoparticles in the endolysosomal nanoenvironment: implications for noninvasive radiofrequency-based cancer therapy.</a> Nanomedicine. 8, 1096(2012).</li>
<li>Glazer, E. S., Massey, K. L., Zhu, C., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+carcinoma+cells+are+susceptible+to+noninvasive+radio+frequency+fields+after+treatment+with+targeted+gold+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic carcinoma cells are susceptible to noninvasive radio frequency fields after treatment with targeted gold nanoparticles.</a> Surgery. 148, 319(2010).</li>
<li>Glazer, E. S., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+field-induced+thermal+cytotoxicity+in+cancer+cells+treated+with+fluorescent+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency field-induced thermal cytotoxicity in cancer cells treated with fluorescent nanoparticles.</a> Cancer. 116, 3285(2010).</li>
<li>Glazer, E. S., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+radiofrequency+ablation+of+malignancies+mediated+by+quantum+dots%2C+gold+nanoparticles+and+carbon+nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Delivery%22%5BJournal%5D)">Non-invasive radiofrequency ablation of malignancies mediated by quantum dots, gold nanoparticles and carbon nanotubes.</a> Therapeutic Delivery. 2, 1325(2011).</li>
<li>Corr, S. J., Raoof, M., Mackeyev, Y., Phounsavath, S., Cheney, M. A., Cisneros, B. T., Shur, M., Gozin, M., McNally, P. J., Wilson, L. J., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Citrate-Capped+Gold+Nanoparticle+Electrophoretic+Heat+Production+in+Response+to+a+Time-Varying+Radiofrequency+Electric-Field%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+C%22%5BJournal%5D)">Citrate-Capped Gold Nanoparticle Electrophoretic Heat Production in Response to a Time-Varying Radiofrequency Electric-Field.</a> J. Phys. Chem. C. 116, 24380(2012).</li>
<li>Kruse, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Radio-Frequency+Coupling+Network+for+Heating+of+Citrate-Coated+Gold+Nanoparticles+for+Cancer+Therapy%3A+Design+and+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Transactions+on+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">A Radio-Frequency Coupling Network for Heating of Citrate-Coated Gold Nanoparticles for Cancer Therapy: Design and Analysis.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 58, 10(2011).</li>
<li>Li, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negligible+absorption+of+radiofrequency+radiation+by+colloidal+gold+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Colloid+Interf.+Sci%22%5BJournal%5D)">Negligible absorption of radiofrequency radiation by colloidal gold nanoparticles.</a> J. Colloid Interf. Sci. 358, 47(2011).</li>
<li>Liu, X., Chen, H. J., Chen, X., Parini, C., Wen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+frequency+heating+of+gold+nanoparticle+dispersions+for+non-invasive+thermal+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Low frequency heating of gold nanoparticle dispersions for non-invasive thermal therapies.</a> Nanoscale. , (2012).</li>
<li>Sassaroli, E., Li, K. C. P., O'Neill, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radio+frequency+absorption+in+gold+nanoparticle+suspensions%3A+a+phenomenological+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+D+App.+Phys%22%5BJournal%5D)">Radio frequency absorption in gold nanoparticle suspensions: a phenomenological study.</a> J. Phys. D App. Phys. 45, 075303(2012).</li>
<li>Worle-Knirsch, J. M., Pulskamp, K., Krug, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oops+they+did+it+again%21+Carbon+nanotubes+hoax+scientists+in+viability+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Oops they did it again! Carbon nanotubes hoax scientists in viability assays.</a> Nano Lett. 6, 1261(2006).</li>
</ol>

Não temos nada a divulgar.

Estes protocolos permitem o experimentalista completamente a analisar a medida em que os nanomateriais (neste caso AuNPs) pode aumentar a hipertermia induzida por RF para o tratamento do cancro. O primeiro protocolo trata especificamente analisando a produção de calor a partir de amostras AUNP altamente concentrada e purificada. Embora outros grupos relataram a produção de calor, principalmente a partir dos tampões que os AuNPs são suspensos e não as próprias 9-11 AuNPs, os seus sistemas de RF utilizadas conc...

A absorção de energia de RF por um tecido biológico (devido à sua permitividade eléctrica inerente) resulta em temperaturas elevadas do tecido em função do tempo, o que eventualmente leva a morte celular por hipertermia. Supõe-se que a hipertermia pode ser optimizado para o cancro através da utilização de nanomateriais segmentados que internalizam dentro da célula cancerosa e actuar como transdutores de RF-térmicos, deixando as células normais vizinhas, saudáveis ​​intactas. Vários relatos já mostraram que uma variedade de NPs podem atuar como fontes de calor RF eficaz que ajuda na necrose câncer 1-4. Nestes aspectos, NPs de ouro (AuNPs) 3-5, os nanotubos de carbono 1, e pontos quânticos 6, 7 exibiram características emocionantes, quando utilizado em estudos in vitro e in vivo em experimentos de RF. Embora a natureza exata do mecanismo de aquecimento dessas NPs quando expostos a um campo de RF ainda está sendo debatido, uma série deexperiências fundamentais usando AuNPs tem colocado grande importância tanto tamanho NP e os estados de agregação. Foi demonstrado que apenas AuNPs com diâmetros &lt;10 nm aquecerá quando expostos a um campo de RF-8. Além disso, este mecanismo de aquecimento é atenuada significativamente quando os AuNPs são agregados. Esta condição agregação também foi validado dentro de modelos in vitro que colocaram importância sobre otimização AUNP estabilidade coloidal dentro de compartimentos intracelulares endolysomal para a terapia eficaz RF 4. No entanto, as técnicas e os princípios experimentais utilizados para coletar e avaliar esses dados pode ser problemático, especialmente no caso de validar perfis calor RF de colóides NP. Vários estudos têm mostrado que o aquecimento Joule da suspensão iônica fundo que os NPs são suspensas pode ser a principal fonte de produção de calor de RF e não os próprios 9-12 PN. Embora o nosso trabalho recente 8 validou tA utilização da RF interações na geração de calor a partir AuNPs de diâmetro inferior a 10 nm, pretendemos descrever esses protocolos com mais detalhes ao longo deste artigo. Nós também demonstramos os protocolos e as técnicas necessárias para avaliar a eficácia de AuNPs como agentes térmicos hipertermia, tanto in vitro e in vivo para os modelos de câncer de fígado. Embora nos concentrar-se principalmente no colóides simples de AuNPs cobertas de citrato, as mesmas técnicas podem ser aplicadas a outros híbridos AUNP tais como complexos anticorpo-e quimioterapia conjugado. Ao aderir a esses princípios o experimentalista deve esperamos ser capazes de avaliar rapidamente o potencial de qualquer nanomaterial para ser um agente hyperthermic térmica induzida pela RF eficaz.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent/Material</td></tr><tr><td>500 ml nanopartículas de ouro (5 nm)</td><td>Ted Pella, INC</td><td>15702-5</td><td></td></tr><tr><td>Amicon Ultra-4/-15 Unidades de Filtro Centrífugo (50 kDa)</td><td>Millipore</td><td>UFC805024/UFC910096</td><td>(volumes de 4 ml e 15 ml)</td></tr><tr><td>MEM X1 Cell Culture Media</td><td>Cellgro</td><td>10-101-CV</td><td>(adicione nutrientes extras conforme necessário)</td></tr><tr><td>Fetal Bovino Fita de Cobre Serum</td><td>Sigma</td><td>F4135-500 ml</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ted Pella</td><td>16072</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>Kanzius RF System (13.56 MHZ)</td><td>ThermMed, LLC, Inc. (Erie, PA, EUA)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Câmera IR</td><td>FLIR SC 6000, FLIR Systems, Inc. (Boston, MA, EUA)</td><td>Contato FLIR</td><td></td></tr><tr><td>1.3 ml Quartz Cuvette</td><td>ThermMed, LLC, Inc. (Erie, PA, EUA)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Suporte de amostra de teflon com estágio rotativo</td><td>ThermMed, LLC, Inc. (Erie, PA, EUA)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leitor de microplacas SPECTROstar Nano</td> Espectrômetro UV-Vis da <td>BGM Labtech</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nanofluorescência aplicada, Houston, TX)</td><td>NS1 NanoSpectralyzer</td><td></td></tr><tr><td>ICP-&#8211; S</td><td>PerkinElmer</td><td>Optima 4300 DV</td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer</td><td>Malvern</td><td>Zen 3600 Zetasizer</td><td></td></tr></tbody></table>

protocolos para avaliação de radiofreqüência interações com nanopartículas de ouro e sistemas biológicos para terapia não-invasiva câncer hipertermia

Protocols for Assessing Radiofrequency Interactions with Gold Nanoparticles and Biological Systems for Non-invasive Hyperthermia Cancer Therapy

Terapias do cancro, que são menos tóxicos e invasivo do que os seus homólogos existentes são altamente desejáveis. O uso de RF-campos elétricos que penetram profundamente no corpo, causando toxicidade mínima, estão actualmente a ser estudada como um meio viável de tratamento do câncer não-invasivo. Prevê-se que as interações de energia de RF com nanopartículas internalizadas (PN) pode libertar calor que pode causar superaquecimento (hipertermia) da célula, em última análise, que termina em necrose celular. No caso de sistemas não-biológicos, apresentamos protocolos detalhados relativos a quantificação do calor liberado por colóides NP altamente concentrados. Para os sistemas biológicos, no caso de experimentos in vitro, descrevemos as técnicas e as condições que devem ser observadas, a fim de expor eficazmente as células cancerosas à energia de RF, sem mídia artefatos de aquecimento a granel obscurecendo significativamente os dados. Finalmente, damos uma metodologia detalhada fou em modelos in vivo de mouse com tumores de câncer hepático ectópica.

1. Avaliando aquecimento RF de colóides NP: AuNPs como exemplo. Depois de seguir a seção 1.1 - 1.2.3 esperamos ter uma solução estável e purificada altamente concentrado de 5 nm e 10 nm de diâmetro AuNPs. A partir dos 500 ml de solução de estoque-comprados, esperamos obter, pelo menos, 4 ml de solução, a uma concentração de 1,000 mg / L. A diferença de horas entre a AuNPs e a solução tampão de água DI fundo com esta concentração deve ser ~ 0,25 ° C / seg e 0,1 ° C / seg a 5 nm e 10 nm AuNPs, re...

Descrevemos os protocolos utilizados para investigar as interações de 13,56 MHz de radiofreqüência (RF) elétricos campos com colóides de nanopartículas de ouro em ambos os sistemas não-biológicos e biológicos (in vitro / in vivo). Essas interações estão sendo investigados para aplicações na terapia do câncer.

Protocolos para Avaliação de radiofreqüência Interações com Nanopartículas de Ouro e Sistemas biológicos para terapia não-invasiva Câncer Hipertermia

Cancer therapies  which are less toxic and invasive than their existing counterparts are highly  desirable. The use of RF electric-fields that penetrate ...

O objetivo geral deste procedimento é avaliar as propriedades térmicas de nanopartículas de ouro em um campo elétrico de radiofrequência de 13,56 megahertz, in vitro e in vivo. Isso é realizado primeiramente avaliando a taxa de aquecimento de nanopartículas de ouro concentradas e seu tampão em um vial de quartzo. O segundo passo do procedimento é realizar estudos de toxicidade in vitro de nanopartículas de ouro com células cancerígenas cultivadas.O terceiro passo é realizar estudos in vivo de nanopartículas de ouro em um modelo de câncer ectópico em camundongo. Em última análise, os resultados podem demonstrar se a nanopartícula investigada poderia ser um agente eficaz para uso com hipertermia mediada por radiofrequência, por meio da análise das nanopartículas em suspensão, in vitro e in vivo. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais em um campo de hipotermia não invasiva mediada por nanopartículas com radiofrequência, como se o aquecimento é devido às próprias partículas e se ele pode ser utilizado com fins terapêuticos.De modo geral, indivíduos novos neste método enfrentarão dificuldades, pois existem poucos protocolos bem estabelecidos para a realização desse t

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Este documento descreve um protocolo para a hipertermia de corpo inteiro em camundongos que podem estimular a febre como condições até 12-24 horas.

Protocolo para Longa Duração Hipertermia corpo inteiro em Ratos

Este protocolo descreve como usar o aquecimento transitório associado à absorção óptica de nanobastões de ouro para estimular a diferenciação e a atividade intracelular de cálcio em células neuronais. Esses resultados potencialmente abrem novas aplicações em próteses neurais e estudos fundamentais em neurociência.

Ouro nanorod assistida estimulação óptica de Neuronal Cells

Descrevemos a síntese e as propriedades de nanopartículas multifuncionais de Fe2O3-Au produzidas por uma abordagem química úmida e investigamos suas propriedades fototérmicas usando irradiação a laser. As nanopartículas compostas de Fe2O3-Au retêm as propriedades de ambos os materiais, criando uma estrutura multifuncional com excelentes propriedades magnéticas e plasmônicas.

Híbrido multifuncional Fe<sub&gt; 2</sub&gt; ó<sub&gt; 3</sub&gt; -au Nanopartículas para Aquecimento plasmonic Eficiente

Apresentado aqui é um protocolo para a fabricação de microbolhas com nanopartículas de óxido de ferro (NSMs) através de auto-montagem, sinergizando a capacidade de resposta magnética, acústica e óptica em uma plataforma nanoterapêutica para hipertermia magnética e terapia de câncer de combinação fototérmica.

Microbolhas magnéticas, acústicas e óptica-tripla-responsivas para hipertermia magnética e terapia de câncer de combinação pothototérmica

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Membranas lipídicas de bicamadas tethered para monitorar a transferência de calor entre nanopartículas de ouro e membranas lipídicas

Apresentamos aqui um protocolo para usar hipertermia controlada, gerada por ultrassom focalizado de alta intensidade guiado por ressonância magnética, para desencadear a liberação de drogas de lipossomas sensíveis à temperatura em um modelo de rabdomiossarcoma em camundongos.

Hipertermia gerada por ultrassom focalizado de alta intensidade guiado por ressonância magnética: um método de tratamento viável em um modelo de rabdomiossarcoma murino

O artigo descreve um protocolo para simular os perfis de temperatura transiente e a variação espaço-temporal acoplada da pressão do fluido intersticial após o aquecimento fornecido por um sistema de hipertermia por radiofrequência dipolar. O protocolo pode ser utilizado para avaliar a resposta de parâmetros biofísicos que caracterizam o microambiente tumoral a técnicas de hipertermia intervencionista.

Uma abordagem de modelagem computacional para investigar a influência da hipertermia no microambiente tumoral

Este artigo apresenta o protocolo de preparação de simuladores tumor-tecido que replicam propriedades ópticas para terapia fototérmica plasmônica. Ele detalha a preparação do simulador, as avaliações fototérmicas e a validação do modelo numérico desenvolvido com base em medições de temperatura fototérmica para avaliar parâmetros terapêuticos, oferecendo uma alternativa ética e econômica aos estudos in vivo para testes preliminares.

Terapia Plasmônica Fototérmica do Câncer: Fantasmas que imitam o tecido tumoral embebido em nanopartículas para visualizar a distribuição fototérmica da temperatura

Este protocolo apresenta técnicas e metodologia necessárias para terapia hipertérmica direcionada em modelos de tumores sólidos. A abordagem aproveita a conversão fototérmica da luz infravermelha próxima por nanobastões de ouro injetados intratumoralmente para induzir o aquecimento localizado dentro do microambiente tumoral.

Induzindo hipertermia leve direcionada em modelos de tumores murinos por meio da conversão fototérmica de luz infravermelha próxima por nanobastões de ouro intratumorais

Aprenda a avaliar as propriedades de aquecimento de nanopartículas de ouro em campos de radiofrequência de 13,56 MHz para aplicações em hipertermia não invasiva no tratamento do câncer.

Protocolos para Avaliação de radiofreqüência Interações com Nanopartículas de Ouro e Sistemas biológicos para terapia não-invasiva Câncer Hipertermia (Vídeo) | JoVE Journal

Protocolos para Avaliação de radiofreqüência Interações com Nanopartículas de Ouro e Sistemas biológicos para terapia não-invasiva Câncer Hipertermia

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