Name: Caracterização de Respostas Inflamatórias Durante Colonização Intranasal com Streptococcus pneumoniae (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Aprenda a colonizar o nasofaringe murino com Streptococcus pneumoniae e extrair bactérias e células imunes usando lavagem nasal. Este método permite quantificar carga bacteriana e analisar respostas inflamatórias in vivo.

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Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Jeffery Weiser da Universidade da Pensilvânia por seu dom das cepas clínicas de Streptococcus pneumoniae. Este trabalho foi financiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde. Cv foi financiado por uma bolsa M. G. DeGroote e uma bolsa da Sociedade Torácica Canadense. Este trabalho foi financiado pela Ontário Lung Association e institutos canadenses de pesquisa em saúde (CIHR). O trabalho no laboratório Bowdish é apoiado em parte por Michael G. DeGroote Centre for Infectious Disease Research e pelo McMaster Imunology Research Centre.

<ol><li>Bogaert, D., de Groot, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+colonisation%3A+the+key+to+pneumococcal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae colonisation: the key to pneumococcal disease.</a> Lancet Infect. Dis. 4, 144-154 (2004).</li>
<li>Kadioglu, A., Weiser, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Streptococcus+pneumoniae+virulence+factors+in+host+respiratory+colonization+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6 (4), 288-301 (2008).</li>
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<li>Nelson, A., Roche, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsule+enhances+pneumococcal+colonisation+by+limiting+mucus-mediated+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Capsule enhances pneumococcal colonisation by limiting mucus-mediated clearance.</a> Infect. Immun. 75, 83-90 (2007).</li>
<li>van Rossum, A., Lysenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+and+bacterial+factors+contributing+to+the+clearance+of+colonisation+by+Streptococcus+pneumoniae+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Host and bacterial factors contributing to the clearance of colonisation by Streptococcus pneumoniae in a murine model.</a> Infect. Immun. 73, 7718-7726 (2005).</li>
<li>Barocchi, M. A., Ries, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pneumococcal+pilus+influences+virulence+and+host+inflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A pneumococcal pilus influences virulence and host inflammatory responses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 2857-2862 (2006).</li>
<li>Malley, R., Henneke, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+pneumolysin+by+Toll-like+receptor+4+confers+resistance+to+pneumococcal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Recognition of pneumolysin by Toll-like receptor 4 confers resistance to pneumococcal infection.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 1966-1971 (2003).</li>
<li>McCool, T. L., Weiser, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+role+of+antibody+in+clearance+of+Streptococcus+pneumoniae+in+a+murine+model+of+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Limited role of antibody in clearance of Streptococcus pneumoniae in a murine model of colonization.</a> Infect. Immun. 72, 5807-5813 (2004).</li>
<li>Gingles, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+genetic+resistance+in+invasive+pneumococcal+infection%3A+identification+and+study+of+susceptibility+and+resistance+in+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of genetic resistance in invasive pneumococcal infection: identification and study of susceptibility and resistance in inbred mouse strains.</a> Infect. Immun. 69 (1), 426-434 (2001).</li>
<li>Jeong, D., Jeong, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Difference+in+resistance+to+Streptococcus+pneumoniae+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim.+Res%22%5BJournal%5D)">Difference in resistance to Streptococcus pneumoniae infection in mice.</a> Lab Anim. Res. 27, 91-98 (2011).</li>
<li>Wu, H. Y., Virolainen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Streptococcus+pneumoniae+nasopharyngeal+colonization+model+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microb.+Pathog%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Streptococcus pneumoniae nasopharyngeal colonization model in adult mice.</a> Microb. Pathog. 23, 127-137 (1997).</li>
<li>Southam, D. S., Dolovich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+intranasal+instillations+in+mice%3A+effects+of+volume%2C+time%2C+body+position%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+Physiol%22%5BJournal%5D)">Distribution of intranasal instillations in mice: effects of volume, time, body position.</a> Lung Physiol. 282, 833-839 (2002).</li>
<li>Miller, M. A., Stabenow, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+Murine+Intranasal+Dosing+Efficiency+Using+Luminescent+Francisella+tularensis%3A+Effect+of+Instillation+Volume+and+Form+of+Anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Visualization of Murine Intranasal Dosing Efficiency Using Luminescent Francisella tularensis: Effect of Instillation Volume and Form of Anesthesia.</a> PLoS ONE. 7 (2), (2012).</li>
<li>Briles, D. E., Novak, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+Colonization+with+Streptococcus+pneumoniae+includes+subpopulations+of+surface+and+invasive+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Nasal Colonization with Streptococcus pneumoniae includes subpopulations of surface and invasive pneumococci.</a> Infect. Immun. 73 (10), 6945-6951 (2005).</li>
<li>Wu, H. -Y., Virolainen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Streptococcus+pneumoniae+nasopharyngeal+colonization+model+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microb.+Pathog%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Streptococcus pneumoniae nasopharyngeal colonization model in adult mice.</a> Microb. Pathog. 23, 127-137 (1997).</li>
<li>Mo, Y., Wan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+reverse+transcription-PCR+and+real-time+PCR+in+nanotoxicity+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Application of reverse transcription-PCR and real-time PCR in nanotoxicity research.</a> Methods Mol. Biol. 926, 99-112 (2012).</li>
<li>Kuper, C. F., Koornstra, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nasopharyngeal+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of nasopharyngeal lymphoid tissue.</a> Trends Immunol. 13, 219-224 (1992).</li>
<li>Zhang, Q., Leong, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+regulatory+T+cells+in+nasal+associated+lymphoid+tissue+in+children%3A+relationships+with+pneumococcal+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Characterisation of regulatory T cells in nasal associated lymphoid tissue in children: relationships with pneumococcal colonization.</a> PLoS Pathog. 7, (2011).</li>
<li>Briles, D. E., Novak, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+colonization+with+Streptococcus+pneumoniae+includes+subpopulations+of+surface+and+invasive+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Nasal colonization with Streptococcus pneumoniae includes subpopulations of surface and invasive pneumococci.</a> Infect. Immun. 73, 6945-6951 (2005).</li>
<li>Weinberger, D. M., Trzcinski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+capsular+polysaccharide+structure+predicts+serotype+prevalence%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal capsular polysaccharide structure predicts serotype prevalence.</a> PLoS Pathog. 5, (2009).</li>
<li>Bryant, W. P., J,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+Pneumococcal+Serogroups+Cause+the+Most+Invasive+Disease%3A+Implications+for+Conjugate+Vaccine+Formulation+and+Use%2C+Part+I.%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Which Pneumococcal Serogroups Cause the Most Invasive Disease: Implications for Conjugate Vaccine Formulation and Use, Part I.</a> Clin. Infect. Dis. 30, 100-121 (2000).</li>
<li>Hausdorff, W. P., Feikin, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiological+differences+among+pneumococcal+serotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Epidemiological differences among pneumococcal serotypes.</a> Lancet Infect. Dis. 5, 83-93 (2005).</li>
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<li>Cohen, J. M., Khandavalli, S., Camberlein, E., Hyams, C., Baxendale, H. E., Brown, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+contributions+against+invasive+Streptococcus+pneumoniae+pneumonia+of+antibody+and+Th17-Cell+responses+to+nasopharyngeal+colonisation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Protective contributions against invasive Streptococcus pneumoniae pneumonia of antibody and Th17-Cell responses to nasopharyngeal colonisation.</a> PLoS One. 6 (10), (2011).</li>
<li>Cohen, J. M., Khandavalli, S., Camberlein, E., Hyams, C., Baxendale, H. E., Brown, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+contributions+against+invasive+Streptococcus+pneumoniae+pneumonia+of+antibody+and+Th17-Cell+responses+to+nasopharyngeal+colonisation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Protective contributions against invasive Streptococcus pneumoniae pneumonia of antibody and Th17-Cell responses to nasopharyngeal colonisation.</a> PLoS One. 6 (10), (2011).</li>
<li>Richards, L., Ferreira, D. M., Miyaji, E. N., Andrew, P. W., Kadioglu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunising+effect+of+pneumococcal+nasopharyngeal+colonisation%3B+protection+against+future+colonisation+and+fatal+invasive+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">The immunising effect of pneumococcal nasopharyngeal colonisation; protection against future colonisation and fatal invasive disease.</a> Immunobiology. , 215-251 (2010).</li>
<li>Lanie, J. A., Ng, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+sequence+of+Avery%27s+virulent+serotype+2+strain+D39+of+Streptococcus+pneumoniae+and+comparison+with+that+of+unencapsulated+laboratory+strain+R6%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Genome sequence of Avery's virulent serotype 2 strain D39 of Streptococcus pneumoniae and comparison with that of unencapsulated laboratory strain R6.</a> J. Bacteriol. 189, 38-51 (2007).</li>
<li>Robertson, G. T., Ng, W. L., Foley, J., Gilmour, R., Winkler, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+transcriptional+analysis+of+clpP+mutations+of+type+2+Streptococcus+pneumoniae+and+their+effects+on+physiology+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Global transcriptional analysis of clpP mutations of type 2 Streptococcus pneumoniae and their effects on physiology and.</a> 184, 3508-3520 (2002).</li>
<li>Orihuela, C. J., Gao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J. Infect. Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li>
<li>Orihuela, C. J., Gao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-specific+models+of+Streptococcus+pneumoniae+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scand.+J.+Infect.+D%22%5BJournal%5D)">Organ-specific models of Streptococcus pneumoniae disease.</a> Scand. J. Infect. D. 35, 647-652 (2003).</li>
<li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325, 612-616 (2009).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Neste estudo, foram apresentados métodos detalhados para a colonização intranasal de camundongos utilizando uma cepa de streptococcus pneumoniae e o subsequente isolamento e caracterização das células imunes recrutadas para nasofaringe em resposta à bactéria. Demonstramos como um inóculo bacteriano pode ser cultivado em mídia rica em nutrientes e usado para estabelecer um evento de colonização em camundongos, que é inicialmente restrito à nasofaringe. Em seguida, mostramos como os tipos de células imunes que são...

<table><tbody><tr><td>Anti-Mouse Ly6C FITC</td><td>BD Pharmingen</td><td>553104</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse Ly6G PE</td><td>BD Pharmingen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD45.1 eFluor 450</td><td>eBioscience</td><td>48-0453-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse F4 / 80 Antígeno APC</td><td>eBioscience</td><td>17-4801-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD11c PerCP-Cy5.5</td><td>eBioscience</td><td>45-0114-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD11b PE-Cy7</td><td>eBioscience</td><td>25-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD3 Alexa Fluor 700</td><td>eBioscience</td><td>56-0032-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD4 eFluor 605NC eBioscience</td><td></td><td>93-0041-42</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de Polietileno Intramédico - PE20</td><td>Becton Dickinson</td><td>427406</td><td></td></tr><tr><td>BD Seringa de 1 ml</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>BD 26 G 3/8 Bisel Intradérmico</td><td>Becton Dickinson</td><td>305110</td><td></td></tr><tr><td>Tampão RLT Lise Buffer</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td></td></tr><tr><td>Ágar Soja Tríptica Difco</td><td>Becton Dickinson</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Sangue de Ovelha Desfibrinado</td><td>PML Microbiológicos</td><td>A0404</td><td></td></tr><tr><td>RNAqueous-Micro Kit</td><td>Ambion</td><td>AM1931</td><td></td></tr><tr><td>M-MuLV Transcriptase</td> <td>ReversaNew England Biolabs</td><td>M0253L</td><td></td></tr><tr><td>GoTaq qPCR Master Mix</td><td>Promega</td><td>A6001</td><td></td></tr></tbody></table>

caracterização de respostas inflamatórias durante colonização intranasal com streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

A colonização nasofaríngea por Streptococcus pneumoniae é um pré-requisito para a invasão aos pulmões ou corrente sanguínea1. Este organismo é capaz de colonizar a superfície mucosa da nasofaringe, onde pode residir, multiplicar e eventualmente superar as defesas hospedeiras para invadir outros tecidos do hospedeiro. O estabelecimento de uma infecção no trato respiratório normalmente inferior resulta em pneumonia. Alternativamente, as bactérias podem se disseminar na corrente sanguínea causando bacteremia, que está associada a altas taxas de mortalidade2, ou então levar diretamente ao desenvolvimento de meningite pneumocócica. Entender a cinética e as respostas imunológicas à colonização nasofaríngea é um aspecto importante dos modelos de infecção por S. pneumoniae.
Nosso modelo de camundongos de colonização intranasal é adaptado dos modelos humanos3 e tem sido usado por vários grupos de pesquisa no estudo de respostas hospedeiras-patógenos na nasofaringe4-7. Na primeira parte do modelo, utilizamos um isolado clínico de S. pneumoniae para estabelecer uma colonização bacteriana auto-limitante que seja semelhante aos eventos de transporte em adultos humanos. O procedimento aqui detalhado envolve a preparação de um inóculo bacteriano, seguido da criação de um evento de colonização através da entrega do inóculo através de uma via intranasal de administração. Macrófagos residentes são o tipo de célula predominante na nasofaringe durante o estado estável. Normalmente, há poucos linfócitos presentes em camundongos não infectados8, no entanto a colonização mucosa levará a inflamações de baixo a alto grau (dependendo da virulência das espécies bacterianas e da cepa) que resultarão em uma resposta imune e o subsequente recrutamento de células imunes hospedeiras. Essas células podem ser isoladas por um lavado do conteúdo traqueal através das nares, e correlacionadas com a densidade das bactérias de colonização para entender melhor a cinética da infecção.

A Figura 1 representa uma visão geral que resume os principais passos do protocolo. As figuras 2-3 fornecem visualização da metodologia microbiológica inerente aos protocolos aqui descritos. A Figura 4 representa o posicionamento adequado de um rato para realizar uma colonização intranasal, enquanto a Figura 5 retrata tipicamente mudanças no peso de camundongos colonizados com cepa de S. pneumoniae P1547. As figuras 6-7 represen...

A colonização da nasofaringe murina com Streptococcus pneumoniae e a subsequente extração de células aderentes ou recrutadas é descrita. Esta técnica envolve a lavagem da nasofaringe e a coleta do fluido através das nares e é adaptável para várias leituras, incluindo quantificação celular diferencial e análise da expressão mRNA in situ.

Caracterização de Respostas Inflamatórias Durante Colonização Intranasal com Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Este procedimento envolve a colonização do nasofaringe murino com Streptococcus pneumoniae e a subsequente extração das bactérias colonizadoras, bem como das células aderentes ou recrutadas. Isso é realizado primeiramente pela preparação de um inóculo bacteriano da cepa de S. pneumoniae de interesse.As bactérias vivas são então administradas por via intranasal em camundongos anestesiados enquanto estão em um aparelho de contenção. Após o período desejado de colonização, os camundongos são eutanasiados e lavagens nasais são realizadas por meio da cânula inserida nas traqueias expostas, com a lavagem do conteúdo através das narinas. Os números bacterianos presentes nas lavagens nasais podem ser quantificados utilizando técnicas microbiológicas. Alternativamente, as respostas imunes podem ser analisadas utilizando técnicas de citometria de fluxo para fenotipar as células recrutadas ou técnicas de PCR quantitativa.Para medir os níveis de mRNA expresso de interesse antes de iniciar, você precisará preparar restritores para camundongos para a parte de colonização intranasal do procedimento e agulhas canuladas para as lavagens nasais. Um restritor para camundongos pode ser preparado simpl

characterization-inflammatory-responses-during-intranasal

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra o estabelecimento de infecção pulmonar em um modelo de roedor imunocompetente por meio de intubação e instalação de suspensões bacterianas nos lobos pulmonares. Este modelo permite estudos de eficácia antibacteriana em animais imunocompetentes.

Instilação Intrabrônquica de Streptococcus pneumoniae em Modelos de Roedores Imunocompetentes

Transporte pneumocócica Experimental humano oferece um modelo natural de transporte e um modelo potencial para uso no desenvolvimento de vacinas. Esta técnica é útil mas complexo e envolve o risco clínico através da introdução de um agente patogénico para um ser humano. Nós desenvolvemos um protocolo detalhado.

Transporte pneumocócica experimental humana

Streptococcus pneumoniae é o patógeno principal causador da pneumonia adquirida na comunidade grave e responsável por mais de 2 milhões de mortes em todo o mundo. O impacto dos fatores bacterianos implicados em fitness ou virulência pode ser monitorado em tempo real em uma pneumonia ou bacteremia modelo aguda mouse usando bactérias bioluminescentes.

A seguir em tempo real o impacto de fatores de virulência do pneumococo em um mouse Pneumonia aguda Modelo Usando bactérias bioluminescentes

A resposta imune do hospedeiro à infecção do agente patogénico é um processo fortemente regulado. Utilizando um modelo de exposição do pulmão lipopolissacarídeo em ratos, é possível realizar avaliações de alta resolução dos complexos mecanismos associados à patogênese da doença.

A utilização de orofaringe Intratraqueal Administração PAMP e Lavagem Broncoalveolar para avaliar a resposta imune do hospedeiro em camundongos

Streptococcus pneumoniae forma lesões microscópicas discretas e não purulentas no coração. Está delineado o protocolo para um modelo murino de formação de microlesões cardíacas. São fornecidas instruções sobre visualização de microlesões usando microscopia, discriminação entre microlesões precoces e tardias e métodos para detectar remodelação cardíaca em corações de animais convalescentes.

Visualização de<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Dentro Microle- cardíacas e remodelação cardíaca Subsequente

Embora o estudo in vitro das interações patógeno-hospedeiro permita a caracterização de respostas imunes específicas, modelos in vivo são necessários para observar os efeitos de respostas complexas. Usando a exposição a Candida albicans seguida de infecção pulmonar mediada por Pseudomonas aeruginosa, estabelecemos um modelo murino de interações microbianas envolvidas na patogenicidade da pneumonia associada à ventilação mecânica.

Estudar comunidades microbianas<em&gt; In Vivo</em&gt;: Um modelo de interação mediada por anfitrião entre<em&gt; Candida Albicans</em&gt; E<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Nas Airways

Demonstramos o procedimento para inoculação intratraqueal de Haemophilus influenzae no trato respiratório inferior de camundongos. Esta é uma ferramenta muito útil para estudar as vias de sinalização que regulam a inflamação das vias aéreas em modelos de camundongos.

Administração intra-traqueal de<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; No mouse modelos para o Estudo de inflamação das vias aéreas

Vários métodos foram descritos na literatura para a modelagem de pneumonia bacteriana em murganhos. Aqui, nós descrevemos um método de baixo custo, rápida não-invasiva para induzir pneumonia por aspiração (isto é, por inalação) de um inoculo bacteriano pipetados para a orofaringe. métodos a jusante para avaliação da resposta imune inata pulmonar também são detalhados.

Um método não-invasivo e tecnicamente não-intensivo para indução e fenotipagem of Experimental pneumonia bacteriana em ratos

Haemophilus influenzae induz inflamação no trato respiratório. Este artigo se concentrará no uso da citometria de fluxo e microscopia confocal para definir respostas imunes por fagócitos e linfócitos em resposta a essa bactéria.

Avaliando as respostas imunes respiratórias ao Haemophilus influenzae

Este manuscrito descreve o estabelecimento de um modelo infeccioso de pneumonia em camundongos e a respectiva caracterização da resolução da lesão juntamente com métodos de crescimento de bactérias e instilação intratraqueal. Uma nova abordagem usando citometria de fluxo de alta dimensão para avaliar a paisagem imune também é descrita.

Modelo experimental para avaliar a resolução da pneumonia

Este artigo descreve um novo modelo de camundongo para a transição de pneumococo de um colonizador assintomático para um patógeno causador de doença durante a infecção viral. Este modelo pode ser facilmente adaptado para estudar interações polimicrobianas e patógeno-hospedeiro durante as diferentes fases de progressão da doença e em vários hospedeiros.

Um modelo de camundongo para a transição de Streptococcus pneumoniae de colonizador para patógeno após coinfecção viral recapitula a doença exacerbada pela idade

Aprenda a colonizar o nasofaringe murino com Streptococcus pneumoniae e extrair bactérias e células imunes usando lavagem nasal. Este método permite quantificar carga bacteriana e analisar respostas inflamatórias in vivo.

Caracterização de Respostas Inflamatórias Durante Colonização Intranasal com Streptococcus pneumoniae

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