Question 1

Qual é a diferença entre linhagens celulares imortalizadas e linhagens de células-tronco?

Accepted Answer

Linhas celulares imortalizadas derivam de organismos multicelulares com mutações que afetam a regulação do ciclo celular, permitindo proliferação indefinida. Linhas de células-tronco são geradas pela isolação de células multipotentes, autorrenováveis, de tecidos adultos ou embrionários. Ambas podem ser mantidas indefinidamente em cultura sob condições apropriadas, mas as células-tronco retêm a pluripotência enquanto as células imortalizadas não.

Question 2

Por que é importante mudar a mídia de cultura celular regularmente?

Accepted Answer

Metabolitos tóxicos se acumulam nos meios de cultura celular ao longo do tempo, diminuindo o pH e reduzindo a disponibilidade de nutrientes. Meios frescos mantêm a saúde celular e apoiam a expansão contínua. Indicadores de cor de meio como o vermelho fenol sinalizam quando mudanças são necessárias—laranja indica meio fresco, amarelo indica condições ácidas que requerem mudança imediata de meio, e rosa sugere que o pH está muito básico.

Question 3

O que significa 90% de confluência e por que isso é importante para o passageamento celular?

Accepted Answer

A confluência refere-se à porcentagem da superfície do contêiner de cultura coberta pelas células. Em 90% de confluência, as células aderentes cobrem a maior parte do fundo do contêiner e devem ser passadas para evitar o supercrescimento e manter a saúde celular. Monitorar a confluência garante que as células sejam divididas no momento ideal para expansão e previne o acúmulo de metabólitos tóxicos.

Question 4

Quais são os componentes essenciais dos meios completos de cultura celular?

Accepted Answer

A mídia completa requer soro como o Soro Fetal Bovino tratado termicamente para fatores de crescimento, antibióticos como penicilina e streptomicina para prevenir contaminação, e fatores de crescimento adicionais como o fator de crescimento de fibroblastos para prolongar a expansão. Cada linha celular requer um coquetel específico de suplemento de crescimento adaptado às suas necessidades. Armazene a mídia completa a 4°C quando não estiver em uso.

Question 5

Como é que a tripsina é usada para remover células aderentes das placas de cultura?

Accepted Answer

A tripsina é uma enzima digestiva que cliva as proteínas que ligam as células às superfícies plásticas. As células são primeiro lavadas com solução salina tamponada com fosfato livre de cálcio e magnésio, então a tripsina é adicionada e incubada a 37°C por aproximadamente 5 minutos. O tempo cuidadoso é crítico para evitar danos às proteínas da superfície celular. Mídia fresca é adicionada para parar a proteólise antes de transferir as células para um tubo cônico para contagem usando métodos e aplicações de hemacitômetro.

Question 6

Quais são os métodos alternativos para remover células que são muito aderentes para o tratamento padrão com tripsina?

Accepted Answer

Para células sensíveis à digestão enzimática ou extremamente aderentes aos pratos, um raspador de células pode remover suavemente as células do fundo do recipiente de cultura. Alternativamente, uma pipeta serológica pode ser usada em um movimento de raspagem firme enquanto se enxagua com meio. A dissociação mecânica requer cuidado, pois células delicadas podem ser danificadas por esses métodos.

Question 7

Como as culturas celulares podem ser expandidas mais rapidamente do que os frascos de camada única permitem?

Accepted Answer

Frascos multicamadas expandem culturas celulares 3-5 vezes em comparação com frascos de camada única, permitindo uma escalada mais rápida e mais reproduzível da expansão celular. Estes vasos de cultura especializados fornecem uma área de superfície aumentada para o crescimento celular, tornando-os ideais para gerar grandes números de células de forma eficiente, mantendo as condições de cultura apropriadas.

Passagem de células - Questionário de avaliação