Um método eficaz para Desossa manual Prepare Intacto Rato tecido nasal com organização anatômica preservada

Olá, sou David Dunton do laboratório do Dr. Wung Lynn na UMBC. Neste vídeo, mostramos uma técnica eficaz para preparar tecido nasal de camundongo com a organização anatômica preservada. Esta técnica permite obter um único espécime contendo quase a totalidade do tecido nasal, incluindo os tecidos respiratório e olfativo, epiteliais e subepiteliais.

Apresentamos a remoção passo a passo de vários ossos faciais que envolvem o tecido nasal, preservando até mesmo os tecidos mais delicados, como as terminações do epitélio olfativo principal. Nosso método apresenta vantagens significativas em relação aos métodos de descalcificação, pois evita tratamentos químicos agressivos e a remoção do osso pode ser realizada em 20 a 30 minutos. Outras vantagens dessa técnica são que ela não é limitada pela idade do camundongo e pode ser realizada utilizando tecido fixado ou fresco.

Essas vantagens tornam nossa técnica ideal para estudos morfológicos, imunohistoquímicos e fisiológicos. Aqui mostramos um diagrama esquemático da face dorsal dos ossos do crânio e do nariz. Neste vídeo, focaremos na dissecação dos ossos do nariz.

Este é um diagrama esquemático da vista ventral dos ossos do crânio e do nariz. Esta é uma vista dorsal com um crânio e nariz não dissecados na parte superior e um nariz dissecado na parte inferior. Agora são mostrados os terminações do epitélio olfativo principal.

Aqui mostramos os ossos do nariz começando pelo aspecto dorsal. Esta é a parte dorsal da placa zigomática, seguida pelo arco zigomático. Este é o osso nasal, e a seguir é mostrada a placa cribiforme localizada posteriormente.

O local mais anterior é a posição do gânglio de Grüneberg. A partir da vista lateral, mostramos a porção do osso etmoide que cobre o turbinate do epitélio olfativo humano, o gânglio de Grüneberg, a maxila e os incisivos anteriores. Ao mudar para uma vista ventral, mostramos os molares, os incisivos anteriores, o osso palatino e o osso vomer.

Inicie a remoção do osso vulner observando a face ventral do nariz. Para remover o osso vulner, utilize pinça para quebrar o osso ao longo de seu comprimento e, em seguida, retire os fragmentos ósseos virando-os para longe do tecido subjacente, a fim de evitar danos ao órgão nasal RO. Para esta tarefa, utilize jurados para quebrar a parte ventral dos incisivos frontais.

Utilize um movimento de compressão e quebre os incisivos anteriores em direção à localização do osso ulmar. Uma vez quebrados os incisivos anteriores, remova os fragmentos ósseos remanescentes que estão conectados ao tecido utilizando pinça. Para soltar o maxilar, comece pelo aspecto ventral e quebre o maxilar logo abaixo do arco zigomático.

Gire o focinho para a face dorsal e quebre o maxilar logo anteriormente ao arco zigomático. Para soltar o maxilar e remover o lado direito do osso nasal, retire o restante do osso frontal adjacente ao lado direito do osso nasal. Você usará pinças Ron para esta tarefa.

É necessário ter cautela ao usar os afastadores Ron para evitar danificar a placa cribriforme fina, pois lesões na placa cribriforme podem causar a divisão do nariz ao meio. Levante e remova o osso quebrado. Em seguida, vire a parte dorsal da placa zigomática para longe do tecido subjacente.

Seccione o osso nasal ao longo da sua linha média. Usando uma pinça ou uma borracha, segure este osso com a pinça e mova-o suavemente de um lado para o outro enquanto o levanta. Este procedimento deve ser realizado com certa delicadeza, pois é fácil danificar o tecido subjacente durante a remoção do osso. Uma vez removido o osso, é possível visualizar separadamente o tecido subjacente, conforme mostrado nesta imagem fixa.

Para remover o osso, basta cortá-lo usando pinça ou tesoura. Agora prossiga e remova a maxila anterior. Se ainda não tiver sido removida neste momento, a maxila anterior já está solta, portanto remova-a rompendo quaisquer conexões restantes com o tecido.

De uma vista dorsal em U, remova o osso frontal que está posicionado logo ao lado esquerdo do osso nasal. Utilize os alicates Ron para quebrar o osso frontal. Você pode usar mandíbulas ou pinças para remover esse fragmento do osso frontal.

Você também pode soltar a maxila neste momento, embora isso não seja necessário. Para remover o lado esquerdo do osso nasal, use a pinça e separe suavemente o osso nasal de muitos dos ossos circundantes. Em seguida, segure este osso com a pinça e mova-o geralmente de um lado para o outro enquanto o levanta para separar o osso nasal do tecido subjacente.

À medida que o tecido subjacente se separa do osso, às vezes é possível usar uma visão lateral para observar o tecido conectado ao osso. Use a pinça para separar suavemente o tecido ligado ao osso e, em seguida, remova o osso com tesoura ou pinça. Com o osso nasal removido, retire o maxilar anterior no lado esquerdo do nariz utilizando a mesma técnica empregada para remover o maxilar anterior no lado direito do nariz.

O próximo passo é remover a placa zigomática no lado esquerdo do nariz. Pode ainda haver alguma aderência entre a placa zigomática e o tecido subjacente, e, nesse caso, você pode usar os afastadores crus para prender suavemente e soltar a parte dorsal da placa zigomática. Observe o aspecto ventral do nariz.

Para identificar os molares e o osso palatino, pode-se remover ou os molares ou o osso palatino. Primeiro, esta é uma visão do aspecto lateral do nariz, e esta visão mostra a remoção dos molares no lado direito do nariz. Usando o crânio com o lado direito da maxila removido, o osso palatino é removido.

Em seguida, quebre a maxila e os molares remanescentes e remova todos os fragmentos ósseos grandes do osso palatino ou da maxila. Quebre e remova quaisquer partes restantes do osso etmoide que se projete próximo ao epitélio olfativo. Coloque a pinça fina sob o osso e levante-o para separá-lo do tecido subjacente.

Alternativamente, utilize o bisturi conforme mostrado aqui para quebrar o osso e, em seguida, use a pinça fina para separar o osso do tecido subjacente. Assim é como fica o corneto do epitélio olfativo humano. Com o osso úmido removido, este osso será retirado.

Em seguida, ele é medial e adjacente ao osso nasal, e esse osso será removido utilizando gessos. Tenha cautela durante este passo para evitar danificar a lâmina cribiforme. Uma vez que o osso esteja quebrado, utilize uma pinça para removê-lo.

A seguir é uma vista do nariz. Uma vez que este osso tenha sido removido, resta uma última região para verificar ao redor do órgão nasal V. Porque há um osso separando os tubos pareados do órgão nasal V, que estou removendo agora nesta dissecação.

Esta é a vista dorsal de um nariz que foi dissecado utilizando nossa técnica. Em seguida, rotacionamos um nariz para mostrar seus diferentes aspectos. Esta é a vista dorsal, seguida pela vista lateral do lado esquerdo do nariz e pela vista ventral.

Agora mostramos em detalhes as características de um nariz totalmente dissecado utilizando nossa técnica, começando pela face dorsal do nariz. A primeira parte que mostramos são as conchas do epitélio olfativo principal. Há bolhas de ar no tecido subjacente aos ossos nasais, e essas bolhas de ar são removidas por aspiração da amostra a partir da vista lateral.

Mostramos a concha nasal intacta do epitélio olfativo humano. Observe que há bolhas de ar presentes dentro das conchas nasais. O tecido glandular está localizado na região anterior da concha e o epitélio respiratório é visível a partir desta vista lateral.

A partir da vista ventral, o órgão nasal vulnerável é visível. Esta imagem mostra uma extensão da nossa técnica de dissecação, removendo os bulbos olfativos cerebrais e o nariz em um único espécime. Para preparar o tecido para o corte, primeiro pegue um molde de plástico e preencha-o com meio de temperatura ideal para corte.

Coloque o tecido de interesse dentro do molde cheio e posicione o molde dentro de um círculo de graxa de silicone em um recipiente plástico, onde será colocado um frasco sobre o círculo de graxa de silicone para criar um selo para o vácuo. Nosso laboratório utiliza um vácuo gerado pela passagem de água. Assim que o vácuo for criado pela passagem da água, as bolhas são retiradas do tecido.

O vácuo é interrompido desligando a água e liberando a tubulação. Em seguida, recupere o molde de plástico. Aqui estou movendo o tecido para a orientação desejada antes de congelar o tecido.

Nosso laboratório utiliza gelo seco para congelar tecidos. Estes são resultados representativos do corte de um nariz utilizando nossa técnica de dissecação e coloração com vermelho neutro. Esta é uma seção horizontal mostrando as conchas do epitélio efetor, tecido glandular e epitélio respiratório.

A segunda seção é uma secção coronal que mostra o padrão de dobramento convoluto das turbinas do epitélio olfativo principal. Neste vídeo, apresentamos uma técnica para desossar manualmente o nariz e obter um espécime ideal para estudos morfológicos, imunohistoquímicos ou fisiológicos.