Renal Capsule xeno e subcutânea Pellet Implantação de Avaliação de próstata Carcinogênese e hiperplasia benigna da próstata

As técnicas ilustradas neste vídeo são úteis em experimentos, avaliando a regulação hormonal da carcinogênese e o crescimento benigno da próstata. As primeiras prensas de apelação costumavam fazer pellets hormonais que permitirão a administração contínua. Em seguida, pipetas de vidro com pontas arredondadas são preparadas após a exteriorização do rim.

A ponta da pipeta é usada para auxiliar na inserção do enxerto. Os grânulos de hormônio comprimidos são então implantados por via subcutânea. Por fim, são obtidos resultados que mostram os efeitos do tratamento hormonal no crescimento de xenoenxertos de tecido benigno.

As técnicas apresentadas neste vídeo são simples de executar e reprodutíveis. Esse método pode ajudar a responder a questões-chave no campo, como como os hormônios estão implicados na transformação de células benignas em malignidade, bem como como o crescimento benigno da próstata é regulado por hormônios. As implicações dessa técnica se estendem a novas terapias e estratégias de prevenção para hiperplasia protética benigna e câncer de próstata.

Geralmente, os indivíduos que são novos nessa técnica terão dificuldades com o aspecto técnico da cápsula renal. Os pellets de xenoenxerto são preparados em uma capa de segurança química enquanto usam equipamento de proteção adequado para começar a limpar completamente o equipamento de fabricação de pellets com 70% de etanol para evitar contaminação cruzada. Em seguida, pese a quantidade desejada de pó hormonal, permitindo aproximadamente 5% de material extra para acomodar a perda durante a prensagem.

Alguns hormônios requerem um agente de ligação ou enchimento, que é misturado antes do fabricante do pellet. Aqui, o estradiol é combinado com o enchimento de colesterol, resultando em um pellet de 25 miligramas. Depois que tudo estiver pesado e combinado, transfira o pó para o dset.

Coloque o corante sob a prensa e empurre a alavanca para baixo com firmeza para comprimir o pellet. Use pressão consistente para manter a proporção constante da área de superfície para o volume. Em seguida, inverta o porta-corante e empurre a alavanca para baixo novamente para liberar o pellet.

Inspecione a integridade do pellet e determine se a massa final está dentro da faixa desejada. Os pellets podem ser feitos antes da cirurgia e armazenados de acordo com a estabilidade do hormônio ou medicamento usado enquanto estiver usando proteção adequada. Passe a ponta de uma pipeta de pastel de vidro pela chama, um bico de bunsen para criar uma ponta arredondada e polida a fogo.

Mantenha um movimento constante e leve da pipeta para evitar pontos quentes. Em seguida, coloque a pipeta na chama em um ângulo de aproximadamente 60 graus para criar uma ponta arredondada curva. Esta ponta será usada para criar uma bolsa para enxerto sob a cápsula renal.

Antes de iniciar o procedimento cirúrgico, esterilize todos os instrumentos necessários e prepare a área de trabalho. Uma vez que o animal esteja devidamente anestesiado, desinfete o local da cirurgia com aplicações repetidas de Betadine e álcool. Depois que os campos estéreis são aplicados na área, é realizada uma incisão na linha média dorsal de dois a três centímetros.

Em seguida, separe a derme subjacente da parede do corpo. Separe os dois lados da incisão para enxerto bilateral ou apenas um para enxerto unilateral. Uma vez separado, coloque o mouse em uma posição lateral e localize o rim visualizando o perfil renal através da parede muscular.

Aplicar uma leve pressão com o polegar e o indicador pode ajudar a visualizar os órgãos internos usando uma tesoura de íris fina e tomando cuidado para evitar os principais vasos e nervos espinhais. Faça uma incisão de um centímetro na parede do corpo paralela à coluna. Amplie essa incisão para um e meio a dois centímetros, abrindo suavemente a tesoura.

Depois de colocá-los na incisão inicial, exteriorize o rim aplicando uma leve pressão fora da parede muscular em ambos os lados do rim. Em seguida, dobre as bordas da pele abaixo do rim exteriorizado, que ficará na parede do corpo. Se outras estruturas também estiverem presentes, elas podem ser suavemente dobradas enquanto o rim é exteriorizado.

Mantenha a hidratação da cápsula renal aplicando solução salina estéril. Levante suavemente a cápsula renal e faça uma incisão de dois a quatro milímetros. O tamanho da incisão é determinado pelo tamanho do enxerto, mas deve ser minimizado para manter a integridade da cápsula.

Insira a extremidade arredondada e fechada da pipeta preparada anteriormente sob a cápsula tangencial à superfície do rim. Uma vez inserido, abra suavemente uma pequena bolsa para os enxertos com muito cuidado para não danificar o rim. Os enxertos de tecido parênquima são preparados a partir de tecido prostático fresco obtido durante a ressecção cirúrgica.

Levante a borda cortada da cápsula renal e insira o enxerto na bolsa. Usando a ponta da pipeta, vários enxertos podem ser colocados sob a cápsula renal e espaçados uniformemente na superfície do rim. Quando o enxerto estiver completo, levante suavemente os lados da incisão da parede muscular para recolocar o rim de volta na cavidade corporal.

Certifique-se de que o enxerto não escorregue por baixo da cápsula. Uma única sutura é usada para fechar a parede muscular antes de prosseguir com o implante subcutâneo do pellet. Quando o enxerto estiver completo, separe a derme subjacente da parede do corpo na direção cranial.

Levante suavemente o aspecto cranial da incisão na pele para criar uma bolsa enquanto segura o pellet de hormônio Delicadamente, com uma pinça serrilhada reta, insira o pellet na nuca. Usando uma pinça dentada, alinhe as bordas da pele e aplique dois a três clipes de ferida cirúrgica para fechar a incisão. Neste exemplo, xenoenxertos de tecido primário de pacientes com hiperplasia prostática benigna foram suplementados com testosterona exógena.

Durante um mês, as pontas das setas denotam os locais dos xenoenxertos. A enxertia da cápsula renal também pode ser usada para avaliar a carcinogênese hormonal. Aqui, os recombinantes celulares contendo epitélio benigno da próstata e mechy urogenital indutivo formam crescimentos benignos em camundongos não tratados.

Neste exemplo, o mesmo enxerto é cultivado em um hospedeiro que recebeu pastilhas subcutâneas de testosterona e estradiol por quatro meses e escolheu o carcinoma de próstata que invade a cápsula renal. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como fabricar e implantar pastilhas hormonais comprimidas, bem como criar uma pipeta de vidro polido para cirurgia e realizar xenoenxerto de cápsula renal. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de manusear suavemente a cápsula renal, manter a umidade e evitar danificar o parênquima renal após este procedimento.

Outros métodos, como histologia, imuno-histoquímica e técnicas moleculares para detectar R-N-A-D-N-A ou proteínas de interesse, podem ser realizados. Isso permitirá uma melhor avaliação da natureza do crescimento benigno ou maligno observado. Não se esqueça de que os hormônios utilizados nesses experimentos são potencialmente teratogênicos e cancerígenos.

O fabricante de pellets de hormônio comprimido deve sempre ser executado em uma capa de segurança química. Equipamento de proteção individual adequado deve sempre ser usado para cada etapa do procedimento descrito neste vídeo.