Name: Promoção da sobrevivência e diferenciação de células-tronco neurais com fibrina e Fator de Crescimento Cocktails após Spinal Cord Injury grave (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Aprenda a promover a sobrevivência e diferenciação de células-tronco neurais usando matrizes de fibrina e coquetéis de fatores de crescimento em lesões graves da medula espinhal em ratos. Este método aprimora a retenção celular e a regeneração axonal.

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Agradecemos ao Resource Rat e Centro de Pesquisa da Universidade de Missouri, Columbia, Missouri, para a prestação de ratos GFP; Neuralstem Inc. para fornecer células-tronco neurais. Este trabalho foi apoiado pela Administração dos Veteranos, NIH (NS09881), da Organização de Pesquisa Spinal canadense, a Fundação Craig H. Nielsen, eo Bernard e Anne Spitzer Charitable Trust.

Todos os protocolos de animais são aprovados pela VA-San Diego Institutional Animal Care e do Comitê Use (IACUC). Diretrizes do NIH para cuidados com animais de laboratório e segurança sejam rigorosamente seguidas. Os animais têm livre acesso a comida e água ao longo do estudo e são tratados de forma adequada para minimizar a dor eo desconforto. 1. Preparação de Fibrina componentes contendo Fator de Crescimento Cocktails <ol><li> Dissolver 25 mg de fibrinogênio rato em 0,5 ml de PBS para obter / ml 2x solução estoque de 50 mg (ver tabela de materiais). O fibrinogénio é difícil de dissolver e deve ser colocado numa incubadora a 37 ° C ou banho de água e agitou-se a cada 5-10 min durante 1-2 horas. </li><li> Dissolver 100 trombina rato ONU em 2 ml de 10 mM estéril CaCl2 obter 50 U ml de solução / 2x. </li><li> Dissolve-se os factores de crescimento em PBS a concentrações que se seguem para se obter uma solução de 100 ul de estoque de 1 mg / ml: BDNF; NT-3 (concentração estoque elevado como infusão intratecal in vivo <sup&gt; 19); 200 ug / ml: GDNF; IGF; bFGF; EGF; PDGF; aFGF; HGF (cerca de 1000 x mais elevada do que utilizado para cultura de células). </li><li> Dissolve-se 25 mg de MDL28170 (inibidor da calpaína) em 1,3 mL de DMSO para se obter uma solução estoque de 50 mM de DMSO e, em seguida, dilua 50 vezes em PBS para obter a solução estoque 1 mM. </li><li> Misturar 100 ml de cada componente do factor de crescimento e de 100 ul de MDL28170 (solução de reserva 1 mM) para produzir 1,000 ul solução de factor de crescimento de cocktail (Figura 1). </li><li> Misturar 500 mL de solução stock de fibrinogénio 2x com 500 ul de coquetel de factor de crescimento para se obter uma solução a 25 mg / ml de fibrinogénio contendo os factores de crescimento de trabalho e alíquota em 10 ou 20 ul de armazenamento a -70 ° C. A solução é estável durante até 12 meses a -70 ° C. </li><li> Do mesmo modo, misturar 500 ul de trombina solução estoque 2x com 500 ul de factor de crescimento de coquetel para obter a solução de trabalho de 25 U / ml de trombina, contendo factores de crescimento e alíquota em volumes de 10 ul ou 20 semelhantes, para armazenamento de umt -70 ° C durante até 12 meses. </li><li> No dia do enxerto, colocar cocktails fibrinogénio e do factor de crescimento contendo trombina em gelo até misturados com as células. </li></ol> 2. T3 Spinal Cord transecção <ol><li> Anestesiar fêmea adulta Fischer 344 ratos ou ratos pelados atímicos usando métodos aceitáveis. Os assuntos são profundamente anestesiado, quando a capacidade de resposta à cauda e pata pitada estão completamente ausentes. Nota: normalmente usam 150-200 g ratos Fischer ou 180-220 g ratos atímicos, e um cocktail de anestesia (2 ml / kg) de cetamina (25 mg / ml), xilazina (1,3 mg / mL) e acepromazina (0,25 mg / ml). </li><li> Aplicar pomada para evitar ressecamento ou lesão de olhos, enquanto os animais estão sob anestesia. </li><li> Raspar a área torácica superior e limpar a pele com Betadine. </li><li> Cortar a pele eo músculo usando # 15 blade, expor T3 vértebra usando um afastador cirúrgico e realizar uma laminectomia em T3 vértebra para expor T3 / 4 medula espinhal usando um rongeur. </li><li> Faça um longitudinal incisão na linha média na dura de aproximadamente 2 mm de comprimento utilizando uma lâmina de # 11. </li><li> Coloque Iridectomia tesoura debaixo da dura para cortar toda a medula espinhal lateral direito. Faça outro corte no mesmo lado 1,5 milímetros mais cadually. </li><li> Aspirar o tecido da medula espinal entre os dois segmentos de corte com um romba 23 L agulha conectada a vácuo intensidade moderada. Use a verificação visual para garantir a transecção completa ventral e lateralmente. Isto irá completar a hemissecção lateral. </li><li> Para estender a lesão a um transecção da medula espinhal de largura total, coloque incisões espelho no hemicord esquerda. Tente deixar a dura intacto, diferente do primeiro corte, para manter a matriz de enxerto / fibrina firme no local da lesão, quando enxertados duas semanas depois. </li><li> Suturar o músculo, aplique pó antibiótico e grampo da pele. </li><li> Injetar de Ringer com lactato (3 ml), Bannamine (2,5-5 mg / kg) e Ampicilina (80-100 mg / kg) (ver tabela de Materiais), imediatamente após a cirurgia e mairatos ntain em uma incubadora quente até termorregulação é re-estabelecida. </li><li> Esvazie a bexiga e injetar a solução de Ringer e Ampicilina duas vezes por dia por cerca de duas semanas, até o estabelecimento de bexiga reflexo esvaziamento (Figura 1B). </li></ol> 3. Preparação de Freshly Dissociated dia embrionário 14 Medula Espinhal Neural Stem Cells <ol><li> Obter consanguinidade transgênicos GFP ratos F344 (F344-Tg (UBC-EGFP) F455Rrrc) de rato de Recursos e Centro de Pesquisa da Universidade de Missouri. </li><li> Injectar 40 ug des-Gli 10, [D-Ala 6]-Leuteinizing Hormone Releasing Hormone etilamida (LHRH) diluído em PBS a uma concentração de 200 ug / ml, por via intraperitoneal (IP) por rato fêmea madura (8 semanas ou mais), após 2 -3 hr luz indução para a sincronização da colheita de embriões. </li><li> Companheiro com um maduro GFP overnight rato macho homozigoto ou heterozigoto 4 dias após a injecção. </li><li> Coletar embriões nos dias pós-coito 13,5-14,5(Pc) em tampão HBSS frio, examinar a expressão GFP sob um &quot;NightSea&quot; lanterna e filtro óculos (BLS1 - BlueStar Lanterna e filtro barreira Modelo VG1) ou um microscópio fluorescente. </li><li> Dissecar medula espinhal em condições assépticas de cada feto GFP-positivo e remover sobrejacentes meninges e gânglios espinhais anexado com uma tesoura Iridectomia e joalheiros pinça fina. </li><li> Recolha as medulas espinhais dissecadas em 2 ml de tampão HBSS frio em um tubo de 15 ml cornical e manter em gelo. </li><li> Siga referência n º 20 dissociar medulas espinhais dissecados: <ol><li> Resumidamente, adicionar 2 ml de 0,25% de tripsina-EDTA para o tubo contendo medulas dissecadas (vários cordões pode ser digerido em conjunto, um cabo pode gerar células suficientes para enxerto de um sujeito) e digestão a 37 ° C durante 10-12 min. </li><li> Parar a reacção de tripsina por adição de 10 ml de DMEM contendo FBS a 10% para o tubo centrifugador e o tecido a 2500 rpm durante 2 min. </li><li> Ressuspender o tecido em 2 ml de meio neurobasal containing 2% B27, e triturar o tecido da medula espinhal usando progressivamente menores pipetas Pasteur polido-fogo. </li><li> Centrifugar as células a 2.500 rpm durante 2 min, ressuspender em 2 ml de meio neurobasal contendo B27, e as células do filtro com um filtro de 40 um filtro de células. </li></ol></li><li> Contar as células com um hemocitómetro e as células dividem igualmente em dois tubos Eppendorf. </li><li> Centrifugar as células e remover completamente o sobrenadante (1-2 min são obrigados a retirar todo o sobrenadante com uma ponta de baixo vácuo) para que os coquetéis de fatores de crescimento não será diluída pela sobrenadante remanescente após célula re-suspensão. </li><li> Ressuspender cada metade das células, em que o fibrinogénio ou a solução de trabalho de trombina contendo factores de crescimento, respectivamente, a uma concentração de 250.000 células / mL (contagens da pelota celular durante cerca de ⅓ volume final) e colocá-los em gelo antes do transplante (Figura 1A). Note-se que o fibrinogénio pode gel espontaneamente quando misturado com celulars antes de combinar com trombina no local da lesão / enxerto; para evitar a gelificação prematura, misture pilhas em fibrinogênio imediatamente antes de enxerto de células in vivo. </li></ol> 4. Transplantation <ol><li> Reexpose a lesionada T3 / 4 medula espinal de duas semanas após a transecção da medula espinal. </li><li> 5 fibrinogénio células ul e 5 ul de trombina células pode ser injectado directamente nove pontos do local da lesão, através de tecido da cicatriz e selado dura intacta, sem re-abertura do local da lesão. </li><li> Use uma agulha de 27 G para criar 9 buracos na superfície do tecido da cicatriz e dura intacta 1-2 semanas após lesão: 3 no centro (uma no ponto médio e duas em laterais, e espaçadas 0,5 milímetros de intervalo) e 3 em ambos rostral e 3 na interface de caudal (cerca de 0,5 mm rostral caudal ou para o centro da lesão). </li><li> Em seguida, metade do volume de injectar a solução da célula de fibrinogénio em três pontos centrais do local da lesão e um quarto do volume em três pontos da interface rostral e aqvolume de uarter em três pontos da interface do caudal. </li><li> Em seguida, injetar imediatamente células throbmbin nos mesmos pontos. A mistura de células de fibrinogénio e de trombina de células dentro do local da lesão irá formar um gel de fibrina para manter as células no local da lesão e os cocktails de factor de crescimento que suporta a sobrevivência de células. As células são injectadas usando pipetas de vidro puxado ligados a um Picospritzer (Geral válvula, Inc.). </li><li> Transplant cultivadas NSC humanos 21 no mesmo procedimento descrito acima, e utilizam de fibrina e do factor de crescimento cocktails feitos a partir de reagentes humanos. </li></ol>

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Não temos nada a divulgar.

Um dos principais obstáculos para o transplante de NSC na lesão medular é pobre sobrevivência no centro da lesão. Quaisquer lacunas ou cavidades no local da lesão pode potencialmente reduzir ou enfraquecer a formação de relés neuronais funcionais entre axônios supraespinhais e separados segmentos da medula espinhal abaixo da lesão. Além disso, a baixa sobrevivência de NSCs enxertadas pode afectar a sua integração com o tecido hospedeiro, e, portanto, reduzir a conectividade dos neurônios enxertadas com neurônios de acol...

A lesão medular (LM), muitas vezes danos não só tratos da substância branca que levam os sinais de e para o cérebro, mas também a matéria cinzenta central, causando perda segmentar de interneurônios e neurônios motores. A conseqüência da SCI é a perda de ambos função motora e sensorial abaixo da lesão. Infelizmente, o sistema nervoso central adulto (CNS) não regenerar-se espontaneamente, resultando em défices funcionais permanentes 1. Portanto, a reconstrução do adulto ferido medula espinhal e melhoria no motor, sensorial e função autonômica é uma meta importante da pesquisa SCI. Células-tronco neurais (NCCC), seja diretamente isolado do embrionário ou adulto CNS, são células candidatos atraentes para substituir neurônios perdidos e glia. Além disso, estas células têm o potencial para formar novos centros funcionais para restaurar a condução axonal, através de um local de lesão de 2,3. Até o momento, não houve um esclarecimento detalhado da anatomia, electrophysiological e efeitos comportamentais da formação relé neuronal por NSC transplantadas após grave SCI. Há várias razões para isso: primeiro, NSCs ou tecido transplantado fetal CNS sobreviver mal quando enxertados em grandes cavidades lesão. Estudos anteriores mostram perda de células no início substancial, deixando grandes cavidades vazias lesão cística 4,5. Em alguns estudos, as células enxertadas seria posteriormente dividir e preencher a cavidade lesão 4,5, mas isso pode ocorrer após um atraso de dias ou semanas, e posterior enchimento local da lesão pode não ser completa ou consistente. Em segundo lugar, um sistema de rastreamento eficiente que fornece dados de som na sobrevivência celular, diferenciação / maturação, e conseqüência do transplantado NSCs faltava. A maioria dos estudos iniciais utilizados anterógrada e marcação retrógrada traçar projeções axonais de transplantes 2,3. No entanto, essas técnicas apenas parcialmente e, muitas vezes, as projeções axonais unclearly rotulados decorrentes de células enxertadas e métodos de rastreamento são subjetividadet às interferências provocadas por fugas de corante para além das células implantadas. Outros grupos utilizaram marcadores neuronais humanas específicas para rotular projeções axonal após o transplante de NSCs fetais humanos em roedor feridos medula espinhal 5,6. No entanto, nesses estudos, os xenotransplantes não consistentemente sobreviver bem. Recentemente, a entrega viral do gene GFP repórter foi utilizada para rotular NSC cultivadas 7,8. No entanto, a expressão da GFP foi muitas vezes inconsistentes e pode ser regulada para baixo 7. Recentemente, a utilização de ratinhos transgénicos ou ratos doadores de forma estável que expressam o gene repórter, GFP, ou a fosfatase alcalina da placenta humana, melhorou dramaticamente o rastreamento de transplantadas células estaminais neurais / progenitoras in vivo 9,11. Em terceiro lugar, muitos estudos indicam que, in vitro NSC rato cultivados derivados a partir de qualquer embrionário ou SNC adulto exclusivamente diferenciar em linhagens gliais quando transplantadas para o meio do adulto intacta ou lesada cor espinald 7,12,13, apesar do facto de essas células estaminais neurais são capazes de se diferenciar em ambos os neurónios e células da glia in vitro, indicando que os ambientes locais podem ditar o destino das células estaminais. Alternativamente, NSC cultivadas, especialmente os derivados de SNC adulto, pode ter propriedades defaulty intrínseca de se diferenciar em linhagens da glia in vivo 13. Por causa das limitações discutidas acima, o nosso grupo desenvolveu recentemente um novo protocolo para melhorar embrionário rastreamento NSC, sobrevivência e diferenciação / maturação no adulto medula espinhal gravemente ferido. Resumidamente, começamos com um transgênico linha Fischer 344 consanguinidade rato estável expressando um gene repórter GFP que sustenta expressão GFP após o transplante in vivo 14. Em seguida, utilizamos NSCs recém-isoladas de dia embrionário 14 Fischer 344 medula espinhal, um estágio de desenvolvimento que mantém o potencial de gerar neurônios e células gliais. Finalmente, incorporadoNSC recém-dissociada em uma matriz de fibrina contendo fatores de crescimento 15-17 para reter as células e uniformemente distribuí-los dentro de uma grande cavidade da lesão, com o objetivo de apoiar a sobrevivência das células do enxerto, diferenciação e integração. Os enxertos foram colocados em locais de T3 transecção completa, duas semanas após a lesão medular. Estas células enxertadas preenchido de forma consistente locais transecção completa e diferenciada em neurônios abundantes que estenderam um grande número de axônios em acolhimento medula espinhal através de longas distâncias 18. Resultados semelhantes foram obtidos com enxertos de células-tronco neurais humanas cultivadas para imunodeficientes ratos 18.

<table><tbody><tr><td>Fibrinogênio (rato)</td> <td>Sigma</td><td>F6755-25MG</td><td>2 horas a 37 &graus; C para dissolver Concentração de estoque: 50 mg/ml Concentração final: 25 mg/ml</td></tr><tr><td>Trombina (rato)</td><td>Sigma</td><td>T5772-100UN</td><td>Dissolução em 10 mM CaCl2 Concentração de estoque: 50 U/ml Concentração final: 25 mg/ml</td></tr><tr><td>bFGF (humano)</td><td>Sigma</td><td>F0291 (25 &#956; g)</td> <td>Concentração de Estoque: 200 ng/&mu; l Concentração Final: 10 ng/&mu; l</td></tr><tr><td>EGF (murino)</td><td>Sigma</td><td>E1257 (0,1 mg)</td><td>Concentração de estoque: 200 ng/&mu; l Concentração Final: 10 ng/&mu; l</td></tr><tr><td>BDNF (humano)</td><td>Peprotech</td><td>452-02 (1 mg)</td><td>Concentração de estoque: 1.000 ng/&mu; l Concentração Final: 50 ng/&mu; l</td></tr><tr><td>NT-3 (humano)</td><td>Peprotech</td><td>452-03 (1 mg)</td><td>Concentração de estoque: 1.000 ng/&mu; l Concentração Final: 50 ng/&mu; l</td></tr><tr><td>GDNF (rato)</td> <td>Sigma</td><td>G1401 (10 &# 956; g)</td> <td>Concentração de Estoque: 200 ng/&mu; l Concentração Final: 10 ng/&mu; l</td></tr><tr><td>IGF-1 (mouse)</td><td>Sigma</td><td>I8779 (50 &#956; g)</td> <td>Concentração de Estoque: 200 ng/&mu; l Concentração Final: 10 ng/&mu; l</td></tr><tr><td>aFGF (humano)</td><td>Sigma</td><td>F5542 (25 &#956; g)</td> <td>Concentração de Estoque: 200 ng/&mu; l Concentração Final: 10 ng/&mu; l </td></tr><tr><td>PDGF-AA (humano)</td> <td>Sigma</td><td>P3076 (10 &# 956; g)</td> <td>Concentração de Estoque: 200 ng/&mu; l Concentração Final: 10 ng/&mu; l</td></tr><tr><td>HGF (humano)</td> <td>Sigma</td><td>H9661 (5 &# 956; g)</td> <td>Concentração de Estoque: 200 ng/&mu; l Concentração Final: 10 ng/&mu; l</td></tr><tr><td>MDL28170</td><td>Sigma</td><td>M6690 (25 mg)</td><td>Estoque em DMSO Concentração de estoque: 1 mM Concentração final: 50 &mu; M</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Millipore</td><td>BSS-1005-B</td><td>Concentração de estoque: 1x Concentração final: 1x</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Putney de cetamina</td><td></td><td>26637-411-01</td><td>40-80 mg/kg Concentração de estoque: 100 mg/ml Concentração final: 25 mg/ml</td></tr><tr><td>de xilazina</td><td>Lloyd</td><td>0410,</td><td>2,5-8 mg/ml Concentração de estoque: 100 mg/ml Concentração final: 5,8 mg/ml</td></tr><tr><td>Acepromazina</td><td>Butler</td><td>003845</td><td>0,5-4 mg/ml Concentração de estoque: 10 mg/ml Concentração final: 0,25 mg/ml</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Healthpets</td><td>BET16OZ</td><td></td></tr><tr><td>Ringers</td><td>Abbott</td><td>04860-04-10</td><td>2-3 ml/inj</td></tr><tr><td>Banamine</td><td>Schering-Plough</td><td>0061-0851-03</td><td>2,5-5 mg/kg Concentração de estoque: 50 mg/ml Concentração final: 0,5 mg/ml</td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Sandoz</td><td>0781-3404-85</td><td>80-100 mg/kg Concentração final: 50 mg/ml</td></tr><tr><td>LH-RH</td><td>Sigma</td><td>L4513</td><td>200 &mu; g/kg Concentração Final: 200 &mu; g/ml</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco</td><td>14175-096</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Concentração de Estoque: 0,25 % Concentração Final: 0,125 %</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11995073</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Concentração de Estoque: 100 % Concentração Final: 10 %</td></tr><tr><td>Meio Neurobasal</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Concentração de estoque: 100x Concentração final: 1x</td></tr><tr><td colspan="4">Nota, use reagentes humanos para enxertos de NSCs humanos</td></tr></tbody></table>

promoção da sobrevivência e diferenciação de células-tronco neurais com fibrina e fator de crescimento cocktails após spinal cord injury grave

Promotion of Survival and Differentiation of Neural Stem Cells with Fibrin and Growth Factor Cocktails after Severe Spinal Cord Injury

Células-tronco neurais (NCCC) pode se auto-renovar e diferenciar em neurônios e células gliais. NSC transplantados pode substituir neurônios perdidos e glia após lesão medular (LM), e podem formar relés funcionais para re-conectar segmentos da medula espinhal acima e abaixo de uma lesão. Estudos anteriores de enxerto de células estaminais neurais têm sido limitados pela sobrevivência do enxerto incompleto no interior da cavidade da lesão da medula espinal. Além disso, o controle de sobrevivência do enxerto de células, diferenciação, e extensão do processo não tinha sido optimizada. Finalmente, em estudos anteriores, NSC de rato em cultura foram tipicamente relatada para se diferenciarem em células da glia, quando enxertado na medula espinal ferida, em vez de neurónios, a menos que o destino foi conduzido para um tipo de célula específico. Para tratar dessas questões, desenvolvemos novos métodos para melhorar a sobrevivência, integração e diferenciação de NSC para os locais de mesmo grave SCI. NSC foram recentemente isoladas de embriões dia 14 de medula espinhal (E14) de um transgênico Fischer 344 linhagem de ratos estável expressando fl verdeproteína uorescent (GFP) e foram incorporados numa matriz de fibrina contendo factores de crescimento; esta formulação destinada a reter as células enxertadas na cavidade lesão e apoiar a sobrevivência da célula. NSC no fator de fibrina / crescimento cocktail foram implantadas duas semanas após torácica nível 3 (T3) completos transecções da medula espinhal, evitando os períodos de pico de inflamação. Enxertos resultantes completamente preenchida a cavidade lesão e diferenciado em ambos os neurônios, que se estenderam axônios para o acolhimento da medula espinhal mais notavelmente longas distâncias, e glia. Enxertos de NSC humanas cultivadas que expressam GFP revelou resultados semelhantes. Assim, os métodos são definidos para melhorar o enxerto de células estaminais neuronais, de sobrevivência e de análise de resultados in vivo.

Rotulagem imuno GFP demonstra que NSC rato enxertado ressuspensas em tampão fosfato salino (PBS) (falta de uma matriz de fibrina e os factores de crescimento) sobreviveram mal no local transecção T3, apenas inerente à margem da lesão / hospedeiro e deixando a maior parte do local da lesão, sem vazios As células enxertadas (Figura 2A). A sobrevivência de NSC melhorada quando co-enxertados com matrizes de fibrina por si só, mas o enxerto não encher completamente uma cavidade grande lesão (dados não mostra...

Matrizes de fibrina que contêm factores de crescimento foram utilizados para reter as células estaminais neurais enxertados em locais de completa a transecção da medula espinal. Células enxertadas encheu completamente a cavidade lesão e diferenciado em vários tipos de células neurais, incluindo neurônios que se estenderam axônios em acolhimento medula espinhal através de longas distâncias.

Promoção da sobrevivência e diferenciação de células-tronco neurais com fibrina e Fator de Crescimento Cocktails após Spinal Cord Injury grave

Neural stem cells (NSCs) can self-renew and differentiate into neurons and glia. Transplanted NSCs can replace lost neurons and glia after spinal cord ...

O objetivo geral deste procedimento é aumentar a sobrevida e a diferenciação de células-tronco neurais transplantadas em lesões de medula espinhal gravemente lesionada em ratos. Isso é feito primeiro fazendo uma lesão na medula espinhal, como uma transecção em T três, com a maior parte da dura-máter intacta, exceto uma pequena abertura para reter as células enxertadas. A segunda etapa do procedimento é colher células-tronco neurais recém-dissociadas do feto embrionário de ratos do dia 14.O terceiro passo é o Resus suspendendo células-tronco neurais em cada componente das matrizes de fibrina contendo coquetéis de fator de crescimento. A etapa final é o transplante de células-tronco neurais em matrizes de fibrina e fatores de crescimento para o centro da lesão subaguda, microscopia de imunofluorescência de medula espinhal transfectada e enxertada. Sete semanas após o enxerto pode mostrar excelente sobrevivência de células-tronco neurais e sua diferenciação em neurônios maduros, que estendem um número notável de axônios para o hospedeiro.A principal vantagem desta técnica sobre o método existente, como a célula de enxerto no meio de cultura celular ou PBS, é que o gel de fibrina pode

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Neurociência

Isso detalhes o trabalho de preparação de fibrina scaffolds 3D para cultura e diferenciação das células-tronco plutipotent. Tais suportes podem ser usados ​​para examinar os efeitos de vários compostos biológicos sobre o comportamento das células estaminais, bem como modificada para conter sistemas de entrega de drogas.

Preparação de fibrina Andaimes 3D para aplicações de cultura de células-tronco

O tratamento da lesão medular cervical com peptídeos de automontagem (SAP) e células precursoras neurais (NPC), juntamente com fatores de crescimento, é uma abordagem promissora para promover a regeneração e a recuperação. Um modelo de rato clipe de aneurisma de contusão/compressão de SCI cervical e tratamento combinado envolvendo injeção de SAP e transplante de NPC é estabelecido.

Use Synergetic de células neuronais precursoras e Peptídeos de auto-montagem em Experimental Cervical Spinal Cord Injury

A lesão medular é uma condição traumática que causa grave morbidade e mortalidade elevada. Neste trabalho, descrever em detalhes um modelo contusão de lesão medular em ratos, seguido por um transplante de células-tronco neurais.

Neural Stem Cell Transplantation em Experimental contusão Model of Spinal Cord Injury

Lesões graves na medula espinhal geralmente resultam em defeitos teciduais. Duas possibilidades são descritas para preencher com sucesso essas lacunas para promover a adaptação tecidual, respostas regenerativas e melhora funcional em ratos por meio do implante de um sistema de microconectores mecânicos após lesão aguda e cinco semanas após a transecção completa da medula espinhal.

Estratégias experimentais para Ponte grandes lacunas de tecido na medula espinhal ferido após aguda e lesão crônica

Este manuscrito detalha a fabricação de redes neurais manipuladas com micro-tecidos: construções tridimensionais de tamanho micrométrico, constituídas por longos trilhos axonais alinhados que abrangem a (s) população (s) neuronal agregada (s) envolvida (s) em um hidrogel tubular. Esses andaimes vivos podem servir como relés funcionais para reconstruir ou modular circuitos neurais ou como bancas biofidais que imitam a neuroanatomia de matéria cinza-branca.

Redes neuronais modificadas por micro-tecidos tridimensionais com inspiração anatômica para a reconstrução, modulação e modelagem do sistema nervoso

Vamos mostrar o desenvolvimento de feixes Self montados, tridimensionais do somata hamartomas alinhado longitudinalmente e processos dentro de um invólucro de biomaterial romance. Estas engenharia "vida andaimes", exibindo o diâmetro do mícron-escala ainda estendendo centímetros de comprimento, pode servir como teste-camas para estudar os mecanismos do desenvolvimento neurológico ou facilitar Epilepsias pelo diretor de migração neuronal e/ou axonal Pathfinding.

Engenharia de tecidos tridimensionais alinhado Astrocyte redes para recapitular os mecanismos do desenvolvimento e facilitar a regeneração do sistema nervoso

Este artigo descreve uma técnica para inserir um canal oco entre os cotos de medula espinhal após a transecção completa e preenchimento com células de Schwann (SCs) e matriz de injetável membrana basal para ponte e promover a regeneração do axônio através da abertura.

Transplante de Schwann células dentro de conduítes de PVDF-TrFE a ponte rato necrosante tocos de medula espinhal para promover a regeneração do axônio através da abertura

Aqui, vamos demonstrar o desempenho de um modelo de lesão medular mínima em um rato adulto que poupa o nicho central canal habitação endógena células tronco neurais (NSCs). Mostramos como o ensaio de neurosphere pode ser usado para quantificar a ativação e migração de NSCs definitivos e primitivos, após lesão.

Um ensaio de Neurosphere para avaliar a ativação de células-tronco neurais endógena em um modelo do rato da lesão medular mínima

O AVC é um problema global com opções mínimas de tratamento e nenhuma terapia clínica atual para regenerar o tecido cerebral perdido. Aqui descrevemos métodos para criar um derrame fototrombótico preciso no córtex motor de roedores e posterior injeção de biomateriais de hidrogel para estudar seus efeitos na regeneração tecidual após o acidente vascular cerebral.

Injeção de andaimes biomaterial de hidrogel no cérebro após o derrame

Neste artigo, fornecemos um método reprodutível para gerar e manter fatias organotípicas da medula espinhal de longo prazo transplantadas com células-tronco neurais como um modelo ex vivo para testar terapias de reposição celular.

Cultura de fatias organotípicas da medula espinhal de camundongo de longo prazo como plataforma para validação de transplante de células em lesão medular

Neste estudo, foram desenvolvidos e caracterizados hidrogéis compostos miméticos de nervos que podem ser utilizados para investigar e capitalizar o comportamento pró-regenerativo de células-tronco derivadas do tecido adiposo para reparo de lesões medulares.

Desenvolvimento de Terapêutica Combinatória para Lesão Medular usando Entrega de Células-Tronco

Aprenda a promover a sobrevivência e diferenciação de células-tronco neurais usando matrizes de fibrina e coquetéis de fatores de crescimento em lesões graves da medula espinhal em ratos. Este método aprimora a retenção celular e a regeneração axonal.

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Promoção da sobrevivência e diferenciação de células-tronco neurais com fibrina e Fator de Crescimento Cocktails após Spinal Cord Injury grave

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