Name: À base de ácido Polymalic Nano Biopolímeros para Segmentação de múltiplos marcadores tumorais: uma oportunidade para a medicina personalizada? (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 20 s
Description: Aprenda a sintetizar nanofármacos de ácido polimálico para terapia personalizada do câncer de mama Her2-positivo em modelo animal. Este método biotecnológico permite entrega direcionada com alta pureza óptica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Reconhecemos muito o apoio financeiro do NIH R01 CA123495, U01 CA151815, R01 CA136841, subsídios do Departamento de Neurocirurgia do Cedars-Cedars Medical Center e Arrogene Technology Inc.

Todos os experimentos cumprir com os regulamentos oficiais, incluindo animais de procedimentos cirúrgicos e não cirúrgicos realizados in vivo e estão em plena conformidade com os protocolos IACUC. 1. Bioprodução de ácido Polymalic <ol><li> Crescer uma cultura de sementes de esférulas em agar e transferir plasmódios a 100 ml de meio de cultura com a 25 ° C thermo afirmou incubadora e meio de cultura basal 8,9. </li><li> Produzir uma quantidade de repleto de gravidade de 500 ml plasmódios micro, com exclusão de luz, a fim de evitar a esporulação. </li><li> Prepare 80 g CaCO3 suspensas em 8 L meio basal em 10 L navio biorreator. Transferir 500 ml de micro plasmódio embalados dentro do recipiente de reacção e permitem a montagem de bioprocessos para 75 horas a 25 ° C, de 10 L / min, fluxo de ar filtrado e 150 rpm de agitação por um agitador segmento. </li><li> Termina quando o caldo de cultura tem pH 4,8, indicando o fim da produção de MPLA e medir o teor de PMLA por tele hidroxamato / Fe (III) de ensaio. </li><li> Arrefece-se o caldo a 17 ° C e permitir que as células assentar por gravidade. </li><li> Arrefece-se até 4 ° C e o pH ajustado a 7,5, utilizar NaOH 2 M. Bombear o sobrenadante através de uma coluna cheia com 1,5 L de DEAE-celulose, em direcção ao fundo para o topo (DEAE grãos grosseiros, equilibrada com 20 mM Tris-HCl pH 7,5 a 5 ° C). </li><li> Lavar com 3 colunas de tampão contendo 0,3 M de NaCl, após a alteração da direcção de cima para baixo e eluir PMLA na presença de 0,7 M de NaCl. </li><li> Ajuste a 0,1 M CaCl 2 e precipitar PMLA-Cálcio com 80% de gelo etanol frio. Fraccionar sobre Sephadex G25 em PMLA-cálcio de 80-300 kDa, 50 - 80 kDa, e 10 - 50 kDa, usar água na ausência de tampão e de sal. </li><li> Passar cada fracção através de uma Amberlite IR 120H + coluna, e congelar imediatamente o ácido polymalic fluxo através de azoto líquido para a liofilização. </li><li> Dissolve-se em acetona seca. Após filtração, remover solventeno fluxo de ar seco, Liofilizar e loja a menos 20 ° C. </li></ol> 2. Síntese de base de ácido Polymalic Nano droga <ol><li> Activar os grupos carboxilo de MPLA (P) através da mistura de 116 mg (1 mmol unidades malil) de MPLA-H em 1 ml de acetona anidra e 1 mmol de N-hidroxissuccinimida e 1 mmol de diciclo-carbodiimida em 2 ml de dimetil formamida (DMF). Agita-se a 20 ° C durante 3 hr. Adicionar 0,05 mmol de mPEG 5000-NH 2 (0,05% em moles de unidades malil) em 1 mL de DMF seguido de 0,05 mmol de trietilamina (TEA). </li><li> Adicionar gota a gota, dissolvido em DMF de 0,4 mmoles de éster etílico leucina (Loet) (40% em mol de unidades malil), 0,1 mmol de 2-tiol-1-etilamina (2-MEA) (10% em mol de unidades malil) e 0,5 mmol de TEA, tudo dissolvido em DMF. Após cada adição, deixe 1 hora e verificar a existência de final da reacção negativa por ninidrina resposta (layer-cromatografia de camada delgada, TLC). </li><li> Não remover restos de NHS-éster por hidrólise espontânea com solução salina tamponada com fosfato (30 min, pH 6,8). Dessalinizar sobre PD-10 Coluna, obter &quot;preconjugate&quot;, como um pó branco por liofilização. Seco loja a menos 20 ° C. </li><li> Dissolve-se 30 mg de anticorpos (mAb, IgG2a-κ) em 4,5 ml de fosfato de sódio 100 mM, NaCl 150 mM, pH 5,5. </li><li> Reduzir ligações dissulfureto com 5 mM de tris (etil-2-carboxi) de cloridrato de fosfina durante 30 min a 20 ° C e purifica-se sobre coluna de PD-10. </li><li> Dissolve-Mal-PEG 3400-Mal em 2 ml do mesmo tampão e adicionar o mAb reduzida a um volume final de 10 ml e agitou-se durante a noite a 4 ° C. Concentre-se para 2,5 ml sobre Vivaspin 20, a exclusão de 30 kDa, e purificar sobre Sephadex G75. Verifique produto sobre seg-HPLC e medir quantidade fotometria no comprimento de onda de 280 nm. </li><li> Anexar Mal-PEG-Mal-mAb &quot;preconjugate&quot; tióis obtenção P / PEG 5000 (5%) / Loet (40%) / mAb (0,2%) / 2-MEA (10%). Para fazer isso, a mistura de 5 ml de 200 nmol de mAb 3400-PEG-MAL de 50 mg (P / mPEG 5000 / LOEt/2-MEA) no tampão de pH acima de 5,5, ajustar a concentração de sulfhydryl a 2 mM e incuba-se a 20 ° C durante 3 horas (rendimento de 98%). </li><li> Solubiliza-3&#39;-H2N-AON em DMF / PBS (pH 7,2) e reagem com N-succinimidil-3-(2-piridilditio) propionato (SPDP), em (1:1, v / v) de DMF / metanol (teste da ninidrina ) e purificar AON-PDP sobre Sephadex-LH20 em metanol, em seguida, em água e Liofilizar. </li><li> Incubar 800 nmol AONs activados no tampão de pH 5,5 com o acima preparado Mal-PEG 3400-Mal-Acm-preconjugate durante a noite, até a reacção de permuta de dissulfureto é terminada. </li><li> Incorporar fluorescente Alexa Fluor 680-maleimide formando tioer com polímero-2-MEA-SH. Bloqueie sulfídrilos excesso com 3-piridiltio-propionato (PDP) e purificar sobre Sephadex G75. Armazenar a 4 ° C ou congelados rapidamente à temperatura de -80 ° C até à sua utilização. </li></ol> 3. Ensaios e Propriedades <ol><li> Realizar testes de pureza e estabilidade em PBS e soro a 4 ° C e 37 ° C por meio de análise de SEC-HPLC. Use sulfonato de poliestireno como MolecOs padrões de peso Ular. Medir a distribuição de tamanho de nano-zeta e potenciais. Utilizar sistemas comerciais. </li><li> Adicionar a 320 mL de amostra 160 mL de 10% (w / v) de cloreto de hidroxilamónio e 160 mL de 10% (w / v) de NaOH. Depois de 10-15 minutos, se misturar com 160 ul de 5% (w / v), Fe (III) Cl 3 em 12% (v / v) de HCl e 540 de ler um hidroxamato / Fe (III). Calcular PMLA assumindo 1 mg / ml PMLA corresponde a 2,5 A 540. </li><li> Hidrolisar a droga nano durante a noite em HCl 2M a 110 ° C e de ácido málico no ensaio de cromatografia em fase inversa, com referência a amostras contendo padrões de ácido málico. Cleave a droga nano com 100 mM ditiotreitol e medir Morfolino-AON por HPLC de fase reversa quantitativa em relação aos padrões Morfolino AON. </li><li> Tome drogas nano sem clivagem e medir anticorpo usando um kit de ensaio de proteína. Quantificar mPEG, permitindo sua reação com ferrothiocyanate de amônio, em seguida, extrair com clorofórmio e ler a absorvância a 510 nm de comprimento de onda de 10 </sup&gt;. </li><li> Realize ELISA com 5 mL de droga nano (1-10 mg mAb) por poço testar atividade de anticorpos e coligação. Use 0,5 ug / poço receptor de transferrina e de HER2, respectivamente, como os antigénios revestidos por placa e anticorpos secundários acoplados com peroxidase. </li><li> Calcule% obtidos para AON, MPEG e mAb no que diz respeito ao ácido málico (100%) e comparar com o% pretendida pelo projeto (ver exemplos Tabelas 1 e 2). </li></ol> 4. Testes in vitro <ol><li> Incubar a droga nano com células cancerígenas cultivadas e medida de células sobreviventes ao longo do tempo, pela sua actividade para reduzir amarelo reagente [3 - (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5 - (3-carboximetoxifenil) -2 - (4-sulfofenil )-2H-tetrazólio, sal interno] (MTS) de um corante azul e ler a absorbância em relação com um fotómetro. Siga as instruções do fornecedor kit. </li><li> Preparar extractos de células in vitro ou ex vivo para a transferência de Western. Use gelada extração bpode ser prejudicado que contém SDS e cocktail inibidor de protease. Proteínas separadas por electroforese em gel de redução de SDS-poliacrilamida. </li><li> Do western blotting para as proteínas de interesse nos extratos das amostras. Use anticorpos secundários conjugados com a fosfatase alcalina. </li><li> Use microscopia confocal para demonstrar a captação celular e co-localização de nano plataforma polímero de drogas, AON e endosomes usando rotulagem de fluorescência. Anexar Alexa Fluor 680 para a plataforma conjugado nano e Lissamine para AONs como rótulos de fluorescência. Usar um scanner de 5X espectral microscópio e as células cancerosas vivas para visualizar a distribuição das moléculas marcadas </li><li> Membranas endossoma mancha com tinta fluorescente Estiril Red e demonstrar co-localização endosome ou liberação. </li></ol> 5. Testes in vivo <ol><li> Prepare o modelo do rato de câncer de mama HER2-positivo humano (Tac nu mouse: Cr: (MCR)-Foxnnm). Insira um 0,72 mg 17β-estradiol liberando pellet (liberação de 90 dias) subcutaneously no pescoço de cada rato. </li><li> Em seguida, injetar 1 x 10 7 células tumorais BT-474 por via subcutânea no flanco direito e deixar o tumor crescer. </li><li> Iniciar o tratamento quando os tumores são de 120 mm 3 de tamanho através da injecção na veia da cauda de 150 conjugado nano ul contendo 2,5 mg / kg de AON e / ou 4,5 mg / kg de cada anticorpo. Para o tratamento injetar duas vezes por semana, num total de seis vezes. </li><li> Meça o tamanho do tumor com pinças de duas vezes o fraco e calcular volumes usando a fórmula (comprimento x largura x profundidade) x (π / 6). Eutanásia animais 2 semanas após a última injecção e após sedação com uma solução de cetamina e dexmedetomidina, seguido por deslocação cervical. </li><li> Isolar tumores e seções mancha com H &amp; E para análise morfológica. </li><li> Para avaliar a distribuição de medicamentos em escala animal, usar um sistema de imagens de fluorescência. Injectar a Alexa Fluor 680 nano rotulado de drogas e de imagem em 24 e 48 horas. </li><li> Eutanásia do animal e detectar o fluorescence em tumores e órgãos isolados e perfundidos. </li></ol>

<ol><li>Koboldt, D. C., Fulton, R. S., McLellan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumors.+Cancer+Genome+Atlas+Network%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Comprehensive molecular portraits of human breast tumors. Cancer Genome Atlas Network.</a> Nature. 490, 61-70 (2012).</li>
<li>Kwong, L. N., Costello, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+NRAS+signaling+differentially+regulates+survival+and+proliferation+in+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Oncogenic NRAS signaling differentially regulates survival and proliferation in melanoma.</a> Nat. Med. 18, 1503-1510 (2012).</li>
<li>Gerlinger, M., Rowan, A. J., et al. Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGerlinger%2C+M+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. Gerlinger, M., Rowan, A. J. 366, 883-892 (2012).</li>
<li>Yap, T. A., Workman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+cancer+genome%3A+strategies+for+the+discovery+and+clinical+development+of+targeted+molecular+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Pharmacol.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Exploiting the cancer genome: strategies for the discovery and clinical development of targeted molecular therapies.</a> Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 52, 549-573 (2012).</li>
<li>Chatterjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Biomarkers%3A+Knowing+the+Present+and+Predicting+the+Future%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncol%22%5BJournal%5D)">Cancer Biomarkers: Knowing the Present and Predicting the Future.</a> Future Oncol. 1, 37-50 (2005).</li>
<li>Suh, K. S., Sarojini, S., Youssif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Banking%2C+Bioinformatics%2C+and+Electronic+Medical+Records%3A+The+Front-End+Requirements+for+Personalized+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tissue Banking, Bioinformatics, and Electronic Medical Records: The Front-End Requirements for Personalized Medicine.</a> J. Oncology. , (2013).</li>
<li>Ljubimova, J. Y., Holler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatible+nanopolymers%3A+the+next+generation+of+breast+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Medicine%2C+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Biocompatible nanopolymers: the next generation of breast cancer treatment.</a> Future Medicine, Nanomedicine. 7, 1-4 (2012).</li>
<li>Lee, B. -S., Vert, M., Holler, E. Water-soluble aiphatic polyesters: poly(malic acid)s. Biopolymers 3a. Steinbüchel, A. , Wiley VCH. Weinheim (Bergstrasse). 75-103 (2002).</li>
<li>Lee, B. -S., Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycefin%2C+a+new+prototype+of+multifunctional+nanoconjugate+based+on+poly%28beta-L-malic+acid%29+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Polycefin, a new prototype of multifunctional nanoconjugate based on poly(beta-L-malic acid) for drug delivery.</a> Bioconjugate Chem. 17, 317-326 (2006).</li>
<li>Nag, A., Mitra, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+colorimetric+assay+for+estimation+of+polyethylene+glycol+and+polyethylene+glycolated+protein+using+ammonium+ferrothiocyanate%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochem%22%5BJournal%5D)">A colorimetric assay for estimation of polyethylene glycol and polyethylene glycolated protein using ammonium ferrothiocyanate.</a> Analytical Biochem. 237, 224-231 (1996).</li>
<li>Ding, H., Inoue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+brain+tumor+growth+by+intravenous+poly%28beta-L-malic%29+acid+nanobioconjugate+with+pH-dependent+drug+release%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Inhibition of brain tumor growth by intravenous poly(beta-L-malic) acid nanobioconjugate with pH-dependent drug release.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107, 18143-18148 (2010).</li>
<li>Inoue, S., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanobioconjugate+inhibition+of+HER2%2Fneu+signaling+and+synthesis+provides+efficient+mouse+breast+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Nanobioconjugate inhibition of HER2/neu signaling and synthesis provides efficient mouse breast cancer treatment.</a> Cancer Research. 71, 1454-1464 (2011).</li>
<li>Maeda, H., Sawa, T., Konno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+tumor-targeted+delivery+of+macromolecular+drugs%2C+including+the+EPR+effect+in+solid+tumor+and+clinical+overview+of+the+prototype+polymeric+drug+SMANS%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Mechanism of tumor-targeted delivery of macromolecular drugs, including the EPR effect in solid tumor and clinical overview of the prototype polymeric drug SMANS.</a> J. Control. Release. 74, 47-61 (2001).</li>
<li>Ljubimova, J. Y., Fujita, M., Ljubimov, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28malic+acid%29+nanoconjugates+containing+various+antibodies+and+oligonucleotides+for+multitargeting+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomed%22%5BJournal%5D)">Poly(malic acid) nanoconjugates containing various antibodies and oligonucleotides for multitargeting drug delivery.</a> Nanomed. 3, 247-265 (2008).</li>
<li>Inoue, S., Patil, R., Portilla-Arias, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+nanobioconjugate+inhibiting+EGFR+expression+in+triple+negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Novel nanobioconjugate inhibiting EGFR expression in triple negative breast cancer.</a> PLoS One. 7, 1-9 (2012).</li>
<li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Delivery+of+Doxorubicin+via+pH-Controlled+Hydrazone+Linkage+Using+Multifunctional+Nano+Vehicle+Based+on+Poly%28%CE%B2-L-malic+Acid%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Mol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cellular Delivery of Doxorubicin via pH-Controlled Hydrazone Linkage Using Multifunctional Nano Vehicle Based on Poly(β-L-malic Acid).</a> Int. J. Mol. Sci. 13, 11681-11693 (2012).</li>
<li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temozolomide+delivery+to+tumor+cells+by+a+multifunctional+nano+vehicle+based+on+poly%28%CE%B2-L-malic+acid%29%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Temozolomide delivery to tumor cells by a multifunctional nano vehicle based on poly(β-L-malic acid).</a> Pharm. Res. 27, 2317-2329 (2010).</li>
<li>Ljubimova, J. Y., Portilla-Arias, J., Patil, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+and+efficacy+evaluation+of+multiple+targeted+polymalic+acid+conjugates+for+triple-negative+breast+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Drug+Target%22%5BJournal%5D)">Toxicity and efficacy evaluation of multiple targeted polymalic acid conjugates for triple-negative breast cancer treatment.</a> J. Drug Target. 21, 956-967 (2013).</li>
</ol>

Os autores Julia Y. Ljubimova, Keith L. Preto, e Eggehard Holler são acionistas da Arrogene Technology Inc.

A via experimental para a preparação de medicamentos de nano a partir de um polímero natural biodegradável é apresentado que possa ser usado na síntese de medicina personalizada. A descrição inicia-se com a produção controlada e purificação de ácido polymalic, que é uma plataforma versátil para a síntese de drogas nano. Usando técnicas reprodutíveis, o polímero é obtido com elevado peso molecular e em extrema pureza adequada para a síntese de produtos farmacêuticos. A síntese é descrita para uma droga nano que é mostrada para o tratamento eficaz do cancro da mama HER2-positivos. A descrição pode ser traduzida em síntese da maioria dos outros medicamentos nano para o tratamento de cancro. Direccionamento envolve anticorpos, tais como Herceptin que se ligam a um antigénio específico de tumor, tais como a proteína HER2 ou qualquer outro marcador de tumor que é eficientemente interiorizado. A droga nano proporciona uma selecção de oligonucleótidos anti-sentido e quimioterápicos que irá inibir eficientemente o crescimento do cancro sob tretamento. No exemplo, a ligação Herceptin para HER2 e recozimento oligonucleotídeo antisense específico com mRNA resultou no bloqueio sustentada de HER2-sinalização e redução grave de câncer de mama HER2-positivo de codificação HER2. Com base no princípio subjacente de segmentação tumor ea inibição da expressão gênica por oligonucleotídeos antisense temos a data sintetizados vários outros medicamentos nano e com sucesso inibido glioblastoma humano pré-clínico e triplo-negativo câncer de mama 11,14-18. O trabalho de síntese começa com a preparação de altamente purificada plataforma droga nano, que é ácido polymalic do sobrenadante da cultura de Physarum polycephalum (uma espécie de família &quot;fungo&quot;). A preparação enfatiza elevados pesos moleculares do polímero, permitindo que, em princípio, a ligação de vários anticorpos, péptidos, oligonucleótidos e outras moléculas que funcionam na entrega da droga activa e inibição do crescimento do tumor. Following a cultura controlada e purificação, qualidade reprodutível de polímero em rendimentos previsíveis foi produzido. O polímero é armazenado em condições convenientes para a qualquer momento. A síntese de conjugados de PMLA nano começando com a activação química dos carboxilatos de polímero-pendentes é realizada em alguns passos de síntese. Entre passos, a síntese pode ser opcionalmente colocados em espera que permite a preparação de quantidades arbitrárias de intermediários e, assim, pode ser utilizado na extrapolação. O progresso da síntese é seguida por TLC e os seg-HPLC, e tanto a composição e actividade da droga nano é controlado por ensaios específicos para grupos químicos quantitativo, ELISA, e uma variedade de medições físicas. Nossa experiência é que essas sínteses foram progrediu bem e reproduzível com excelentes rendimentos e pureza. Ao escolher a especificidade de anticorpos e anti-sentido oligonucleótidos qualquer variante de droga nano é sintetizado favoravelmente como necessário em eprsonalized medicina. As modalidades do sucesso do tratamento do câncer de mama HER2-positivo humano são representantes válidos para elaboração de modelos de câncer mouse, aplicação de medicamentos nano, imagem e análise do crescimento do tumor. Os resultados dos testes de viabilidade in vitro são úteis na escolha da linha de células e o líder da droga a ser utilizada na experiência animal. Xenogen imagiologia in vivo confirma que a droga nano é efectivamente entregues no tumor. Os resultados de western blotting revela se o nível de certas proteínas respondeu da maneira prevista durante o tratamento do câncer. Medição do tamanho do tumor informa sobre o sucesso do tratamento, ou seja, cerca de inibição, recessão ou de regressão. O exemplo descrito reflecte a nossa experiência com outras polymalic à base de ácido nano drogas indicando um elevado grau de previsibilidade e reprodutibilidade notável ausência de toxicidade. Os resultados recentes sobre a toxicidade ea eficácia de vários targeted conjugados de ácido polymalic para o tratamento triplo-negativo câncer de mama estão em forte apoio a esta hipótese 18. Uma característica fundamental é que nossa droga nano é capaz de penetrar bio-barreiras: a barreira endotelial por extravasamento para o interstício tumoral, a membrana da célula tumoral por captação endosome e ruptura da membrana endosome pela ação dos grupos etílico leucina ou trileucina. Extravasamento e absorção endosome são realizadas de forma confiável pelos anticorpos específicos associados à droga nano. Anticorpo para o receptor da transferrina anti-ratinho medeia influxo eficiente para o tumor por transcitose, provavelmente, porque o receptor está sobre-expresso na maioria dos vasos do tumor. Um anticorpo diferente ligado nas mesmas funções da molécula de conjugado em nano especificamente dirigir a droga nano na célula tumoral destinatário. A presença de ambos os anticorpos, o outro para a transcitose e o outro para a absorção do endossoma, é essencial para o funcionamento óptimo. A análise quantitativa de mácido álicos e anticorpo é altamente recomendado, a fim de controlar a composição ótima da droga nano. Finalmente, deve notar-se que a droga covalente nano tudo-em-um liberta o fármaco na forma quimicamente ligada rota através da vasculatura para o hospedeiro de células de tumor receptor. Fixação química torna a maioria das drogas inativo (pró-fármacos), até que sejam reconstituídos como medicamentos gratuitos por clivagem da plataforma conjugado nano no local alvejado. Isto é importante porque a modalidade reactivação fornece um alto grau de segurança durante a distribuição e a oportunidade mínima de evocar efeitos secundários nocivos. Versatilidade, eficácia e segurança são atributos indispensáveis ​​de um bom remédio personalizado.

Na era pós-genômica quando genomas de câncer já foram desvendados (Centro Nacional de Biotecnologia e The Cancer Genome Atlas), o tratamento futuro de câncer serão responsáveis ​​pela diversidade genética dos tumores, muitas vezes dentro de um mesmo tumor 1-4. Bioinformática e rápido, não é caro sequenciamento de DNA permite a aquisição de genes malignos / mutações em um nível pessoal 2,4,5. Uma vez que os genes foram identificados, os pacientes serão tratados com a medicina personalizada para modificar ou silenciar a expressão de genes malignas 6. A necessidade de atingir as células cancerosas e entregar drogas para essas células exige sistemas de entrega polifuncionais. Obviamente, as drogas nano pode atender a essa exigência 7. Em uma onda de afluência de descobertas as nanopartículas têm provado adequado para trazer cargas de fármacos quimioterapêuticos, proteínas e / ou de material geneticamente activa para células cancerosas. No entanto, os efeitos adversos continuam a ser advestida. Um deles relacionado com a ausência de biodegradabilidade pode causar deposição de material no tecido e órgãos saudáveis ​​com o risco de provocar doenças. Para minimizar a deposição, é introduzido ácido polymalic não-tóxico e não imunogénico, o que é de origem microbiana e biodegradável a H 2 O e CO 2 8. Nós usamos o polímero para sintetizar um tipo de droga nano covalente tudo-em-um. Ela contém substâncias quimioterápicas quimicamente ligados, como Temozolomida, doxorrubicina, ou oligonucleótidos anti-sentido e os grupos funcionais que servem extravasamento, segmentação do tecido, entrega endosomolytic. As drogas estão intrinsecamente separado da plataforma nano quando chegaram na célula tumoral alvo, regenerando assim a sua actividade farmacêutica integral. Descreve-se o método de produção microbiana da plataforma nano polímero, a sua purificação, e a síntese química de um fármaco que contém nano Trastuzumab (Herceptin) para o cancroA segmentação e um oligonucleótido anti-sentido para a inibição da sobreprodução de HER2. Ao aplicar o medicamento nano para HER2-positivo câncer de mama humano xenogénicos em camundongos nude, demonstramos alta eficácia do tratamento do câncer. Os princípios de direccionamento de tumor e o silenciamento do gene introduzido aqui para polymalic drogas nano ácido pode ser aplicado no tratamento de outros casos de cancro.

<table><tbody><tr><td>2-Mercapto-1-etilamina (Cysteamine; 2MEA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>30078-25G</td><td></td></tr><tr><td>4 ', 6-Diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td> <td>Vector Laboratories, Burlingame, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Liberação de 90 dias 17&beta;-estradiol pellet&nbsp;</td><td>Innovative Research of America</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 680 C2 maleimida</td><td>Invitrogen</td><td>A20344</td><td></td></tr><tr><td>Amberlite IR 120H</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6428</td><td></td></tr><tr><td>Antiespumante Y-30 Emulsão</td><td>Sigam-Aldrich</td><td>A5758</td><td></td></tr><tr><td>Anti-laminina-411 cadeia mAbs</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-59980</td><td></td></tr><tr><td>Anti-pAkt mAb</td><td>Sinalização Celular</td><td>9271S</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PARB mAb</td><td>BD Biosciences</td><td>556494</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-fator de von Willebrand&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>AB6994</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de Levedura Bacto</td><td>Bacto, Dickinson/Sparks, MD</td><td>212720</td><td></td></tr><tr><td>Sinalização Celular</td><td>de Beta-actina</td><td>3700</td><td></td></tr><tr><td>BT-474&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>HTB-20</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato de Cálcio</td><td>Alfa Aesar</td><td>36337</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Ensaio de Proliferação Celular</td><td>Promega, Madison, WI, EUA</td><td>PR-G3580</td><td></td></tr><tr><td>Centriplus 100&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>4414</td><td></td></tr><tr><td>Diciclohexilcarbodimida</td><td>Fluka</td><td>36650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Cardinal Health</td><td>S7439-4</td><td></td></tr><tr><td>Galardin (inibidores de MMP)&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-994</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH</td><td>Sinalização Celular&nbsp;</td><td>2118</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Cardinal Health</td><td>S7439-3</td><td></td></tr><tr><td>Hemina de suíno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>51280</td><td></td></tr><tr><td>Herceptin</td><td>Genentech</td><td>15534</td><td></td></tr><tr><td>Herceptin (Western blotting)</td> <td>Sinalização Celular</td><td>2165S</td><td></td></tr><tr><td>IgG2a-kappa malignoma murino</td><td>Sigma</td><td>M77695X5m</td><td></td></tr><tr><td>Immun-Star AP Pacote de Substrato</td><td>Biorad</td><td>170-5012</td><td></td></tr><tr><td>Immun-StarTM AP Pacote de Substrato&nbsp;</td><td>Biorad</td><td>170-5012</td><td></td></tr><tr><td>LAL Água reagente&nbsp;</td><td>Lonza, MD</td><td>W50-1000</td><td></td></tr><tr><td>Laminin-411 mAbs</td><td>Abcam</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leucina ethyl ester (LOEt)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>61850-10G-F</td><td></td></tr><tr><td>Limulus Amebocyte Lysate (LAL) PYROGENT-5000 testa</td><td>Cambrex BioScience</td><td>N384</td><td></td></tr><tr><td>Lissamin-Morpholino AON</td><td>Gene Tools</td> Ácido L-málico <td>feito sob medida</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6413</td><td></td></tr><tr><td>Malato desidrogenase&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2634</td><td></td></tr><tr><td>Mal-PEG-Mal</td><td>Laysan</td><td>mal-PEG-mal-3400</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>Leite, pó desnatado&nbsp;</td><td>Proteômica</td><td>M203-10G</td><td></td></tr><tr><td>Oligonucleotídeos morfolinos&nbsp;</td><td>GeneTools</td><td>custom made</td><td></td></tr><tr><td>mPEG5000</td><td>Lysan</td><td>mPEG-NH2-5000</td><td></td></tr><tr><td>N-hydroxysuccinimde (NHS)&nbsp;</td><td>ACROS Organics</td><td>15727100</td><td></td></tr><tr><td>Ninhydrin</td><td>Merck</td><td>1.06762.0100</td><td></td></tr><tr><td>Papel de Filtro de Membrana de Nitrocelulose Sanduíche</td> de Papel de Filtro de Membrana de Nitrocelulose <td>Invitrogen</td><td>LC2001</td><td></td></tr><tr><td>, 0.45 &micro; m&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>LC2001</td><td></td></tr><tr><td>Novex &reg; Tampão de Transferência de Tris-Glicina (25x)</td><td>Invitrogen</td><td>LC3675</td><td></td></tr><tr><td>Camundongos Nus [Tac:Cr:(MCr)-Foxnnm]&nbsp;</td><td>Taconic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.2 10x</td><td>Gibco</td><td>10010-49</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.2 1x</td><td>Gibco</td><td>70013</td><td></td></tr><tr><td>PD-10 colunas de dessalinização</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0851</td><td></td></tr><tr><td>Physarum polycephalum M3CVII</td><td>ATCC</td><td>204388</td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA protein assay&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Coquetel de inibidores de protease</td><td>Roche</td><td>1.18362E+11</td><td></td></tr><tr><td>Kit ELISA de Detector de Proteínas</td><td>KPL</td><td>54-62-18</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G-25 superfino</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0031</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G-75&nbsp;</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0050</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex-LH20&nbsp;</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0090</td><td></td></tr><tr><td>SKBR-3&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>HTB-30</td><td></td></tr><tr><td>SPDP</td><td>Proteochem&nbsp;</td><td>C1116</td><td></td></tr><tr><td>Streamline-DEAE</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0994</td><td></td></tr><tr><td>Styryl Red FM 1-43&nbsp;</td><td>Tecnologias de Vida&nbsp;</td><td>T-3163</td><td></td></tr><tr><td>TBS 10x</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6435</td><td></td></tr><tr><td>TCEP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4706-2G</td><td></td></tr><tr><td>TLC, folhas de alumínio revestidas com sílica</td><td>Merck, Darmstadt, DE</td><td>60F254</td><td></td></tr><tr><td>Trileucina (LLL)</td><td>Bachem</td><td>H-3915</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-114&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X114</td><td></td></tr><tr><td>Tween&reg; 20&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 20&nbsp;</td><td>VWR</td><td>14005-302</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vector Laboratories, Burlingame, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dexmedetomidina</td><td>Pfizer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole</td><td>Pfizer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td>Pfizer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Foster and Smith, Wisconsin</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

À base de ácido polymalic nano biopolímeros para segmentação de múltiplos marcadores tumorais: uma oportunidade para a medicina personalizada?

Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

Tumores com grau e morfologia semelhantes geralmente respondem de maneira diferente ao mesmo tratamento devido a variações no perfil molecular. Para dar conta dessa diversidade, a medicina personalizada é desenvolvida para silenciar genes associados à malignidade. Os nano medicamentos atendem a essas necessidades, visando o tumor e fornecendo oligonucleotídeos antisense para silenciamento de genes. Como os medicamentos para o tratamento são frequentemente administrados repetidamente, a ausência de toxicidade e a resposta imune insignificante são desejáveis. No exemplo apresentado aqui, um nanomedicamento é sintetizado a partir da plataforma biodegradável, não tóxica e não imunogênica ácido polimálico por ligação química controlada de oligonucleotídeos antisense e moléculas direcionadas a tumores. A síntese e o tratamento são exemplificados para câncer de mama humano Her2-positivo usando um modelo experimental de camundongo. O caso pode ser traduzido para síntese e tratamento de outros tumores.

Um exemplo de uma droga baseada em nano ácido polymalic é apresentado para o desenho racional de medicina personalizada que é aplicável para o cancro. Ela descreve a síntese de um fármaco nano para tratar o cancro da mama humano HER2-positivos em um ratinho nu.

À base de ácido Polymalic Nano Biopolímeros para Segmentação de múltiplos marcadores tumorais: uma oportunidade para a medicina personalizada?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

O objetivo geral é estabelecer uma plataforma em escala nanométrica aberta para um protocolo universal de síntese de medicina personalizada com base no perfil genético da doença de uma pessoa, especialmente no câncer. Primeiro, produza e purifique o ácido polimalico a partir do microrganismo frum polycephalum, ative quimicamente o PMLA purificado em seus grupos carboxílicos laterais. Prenda grupos funcionais pequenos e o ligante MEA pela substituição dos grupos ativados e reverta os grupos ativados não utilizados em grupos carboxílicos por hidrólise.Em seguida, adicione os anticorpos e as moléculas antissenso por meio dos grupos sulfidrila do espaçador, MEA e tampa. O espaçador não utilizado pela reação com PDP ao final do teste avalia a composição e a função do eletrodo. Os resultados com nanofármacos derivam de um modelo animal, como camundongos portadores de tumores humanos agressivos.O câncer de mama positivo para HER2 pode determinar a eficácia do tratamento e também se o tratamento ocorre sem efeitos colaterais indesejados. A principal vantagem da bioprodução em relação aos métodos sintéticos existentes, como a polimerização convencional, é que o biopolímero mantém pureza óptica completa e não é contaminado por subprodutos. Essa família de nanofármacos PolyPhen pode direcionar-se a qualquer tipo celular com base em direcionamento específico e regular a expressão proteica.De modo geral, o tratamento do câncer por nano fármacos à base de PHE é muito eficiente em diversos modelos animais, especialmente em cânceres primários do cérebro e da mama. Tivemos inicialmente a ideia deste método para bloquear a síntese da laminina específica de glioblastoma em suas formas isoformas e, posteriormente, demonstramos o direcionamento e a inibição das proteínas HER2 e de câncer de mama triplo negativo para impedir o crescimento tumoral. As implicações desta técnica estendem-se ao diagnóstico do câncer por meio de imagem óptica e ressonância magnética.As nano drogas poliméricas podem fornecer informações sobre a entrega de medicamentos para o tratamento do câncer. Elas também podem ser aplicadas a outras condições patológicas, como doenças infecciosas, alívio da dor e distúrbios neurológicos. Após cultivar uma cultura inicial de plasmódio a partir de spial em auger, inocular 100 mililitros de meio de cultura basal e cultivar a cultura a 25 graus Celsius.O incubador Thermos indicado produz uma quantidade de microplasma modia compactada por gravidade, sob exclusão de luz. Para evitar esporulação em um biorreator de 10 litros, dissolva 80 gramas de carbonato de cálcio em oito litros de meio basal, transfira então o microplasma modia compactado para o vaso de reação montado e configure o biorreator por 75 horas. A 25 graus Celsius, com fluxo de ar filtrado de 10 litros por minuto e agitação de 150 RPM por um agitador segmentado.Quando o caldo de cultura atingir um pH de 4,8, interrompa o cultivo para medir a produção de ácido polimaléico. Agora, resfrie o caldo a 17 graus Celsius e deixe as células sedimentarem por gravidade, removendo o sobrenadante da cultura do reator. Ajuste o pH para 7,5.Agora, aspire o sobrenatante a partir da base através de uma coluna de celulose DEAE de 1,5 litro equilibrada com cloreto de tris 20 milimolar pH 7,5 a cinco graus Celsius. Em seguida, passe três volumes de coluna do tampão de lavagem contendo cloreto de sódio 0,3 molar de baixo para cima na coluna e elua a PMLA na presença de cloreto de sódio 0,7 molar. Ajuste a fração eluída de PMLA para cloreto de cálcio 0,1 molar e adicione etanol gelado a 80% para precipitar o cálcio de PMLA. Em seguida, fracione por tamanho o cálcio de PMLA usando cidex G 25 e água.Finalmente, passe cada fração por uma coluna de luz âmbar e congele imediatamente o fluxo de ácido polimalico em nitrogênio líquido, liofilize e armazene a menos 20 graus Celsius. Para ativar os grupos carboxila do PMLA, misture um milimol de unidades de ácido málico do P-M-L-A-H em um mililitro de acetona anidra e um milimol, de cada, de anidrido hidroxissucínico e carbodiimida cicloexílica, em dois mililitros de dimetilformamida; após agitar a 20 graus Celsius por três horas, adicione 0,05 milimol de metil-Pega em um mililitro de DMF, seguido por 0,05 milimol de trietilamina.Em seguida, adicione gota a gota 0,4 milimol de éster etílico da leucina e, após uma hora, verifique a conclusão da reação por meio da resposta negativa ao teste de hyn em cromatografia em camada delgada. De maneira semelhante, adicione 0,1 milimol de dois mercapto, 1-etilamina e 0,5 milimol de TEA. Remova o éster NHS remanescente por hidrólise espontânea com solução salina tamponada com fosfato.Desalinize em uma coluna PD 10 e liofilize para obter um pó branco; armazene este pré-conjugado seco a menos 20 graus Celsius. Em seguida, adicione 30 miligramas de anticorpo em 4,5 mililitros de cloreto de sódio 150 milimolar em fosfato de sódio 100 milimolar, pH 5,5. Reduza as ligações dissulfeto com tris 5 milimolar, cloreto de tris(2-carboxietil)fosfina, e purifique em uma coluna PD 10.Agora, dissolva o IDE PEG IDE em dois mililitros do tampão acima, mas a pH 6,3. Adicione o anticorpo reduzido e agite a 20 graus Celsius por uma hora. Concentre até 2,5 mililitros sobre AVEVA spin 20 com exclusão de 30 quilodaltons e, em seguida, purifique sobre cidex G 75.Agora, verifique o produto por meio de CLAE em coluna de exclusão por tamanho. Meça a quantidade em 280 nanômetros e também confirme a ausência de impurezas em outros comprimentos de onda. Em seguida, misture 50 miligramas do pré-conjugado com 200 UMEs do PEG IDE conjugado ao anticorpo em cinco mililitros do tampão pH 6,3.Ajuste a concentração de sulfidrila para dois milimolares e incube a 20 graus Celsius por três horas. Para obter um rendimento de 98%, solubilize o oligonucleotídeo antissenso amino trissubstituído reagindo com um volume de SPDP, purifique o A-O-N-P-D-P em coluna de Sephadex LH-20 em metanol, evapore então o metanol, dissolva o produto em água e liofilize. Incube agora 800 nanomols do aos ativado com o conjugado anticorpo-PEG prévio a MEA-SH durante a noite. Quando a reação de troca de dissulfetos for concluída, incorpore então o bloqueio com corante fluorescente, remova o excesso de sulfidrilas com PDP e purifique em coluna de Sephadex G-75.Armazene o nano fármaco final à base de ácido polimalico a menos 20 graus Celsius para estimar o teor de ácido polimaléico durante a produção, proceda da seguinte forma: a 320 microlitros da amostra, adicione 160 microlitros de cloreto de hidroxilamônio a 10% e 160 microlitros de hidróxido de sódio a 10%. Após 10 a 15 minutos, misture com 160 microlitros de solução de cloreto férrico a 5% e visualize a formação de uma coloração roxa escura a 540 nanômetros. Em seguida, hidrolise o nano fármaco durante a noite em ácido clorídrico dois molar a 110 graus Celsius usando um ensaio com ampola selada para ácido maléico por cromatografia de fase reversa.Utilizando amostras enriquecidas com padrões de ácido maleico. Agora, clive o nano fármaco com dietiol a 100 milimolar e meça os oligonucleotídeos antisense morpholino por CLAE reversa quantitativa contra padrões de ON morpholino. Utilizando o nano fármaco clivado, meça o teor de anticorpo utilizando um kit de ensaio proteico para quantificar o teor de PEG Malik.Primeiro, reaja com tiocianato de amônio OT, depois extraia com clorofórmio e meça a absorbância em 510 nanômetros. Teste a atividade do anticorpo e a codiligação por ELISA, utilizando cinco microlitros de nanofármaco por poço e 0,5 microgramas por poço de HER2 como antígeno revestido na placa. Por fim, calcule a porcentagem alcançada para o oligonucleotídeo antisense, EG e anticorpo em relação ao ácido maleico.Compare com a porcentagem prevista pelo design do fármaco. Essa abordagem estratégica bimodal para o fármaco nano emprega Herceptin para inibir a via de sinalização HER2 e um oligonucleotídeo antisense específico para HER2 para bloquear a transcrição do receptor HER2. Os anticorpos facilitam a transcitose por meio do TFR endotelial dos vasos tumorais. A plataforma nanoconjugada de ácido polimaléico foi produzida por microplasma cultivado e purificada, e a ativação dos grupos carboxílicos do PMLA facilitou a síntese do esqueleto pré-conjugado.E, finalmente, o conjugado nano com chumbo. Ensaios Eli SA demonstraram a retenção de anticorpos monoclonais ativos durante toda a síntese do nano fármaco. Com ambos os anticorpos montados na mesma plataforma polimérica, a microscopia confocal de fluorescência acompanhou a captação celular do nano fármaco.As imagens sobrepostas no tempo zero e após três horas foram analisadas em conjunto com os endossomos marcados. Os coeficientes de correlação de Pearson para colocalização indicam a liberação do nano fármaco a partir dos endossomos para o citoplasma e a dissociação de um ON do nano fármaco por clivagem de dissulfeto dependente de glutationa no citoplasma. In vitro, o nano fármaco líder inibiu significativamente o crescimento de forma mais eficaz na linhagem celular que superexpressa HER2.Experimentos in vivo em camundongos portadores de câncer de mama humano BT 4 74, com superexpressão de HER dois, mostraram inibição de crescimento superior a 95% pelo nanofármaco líder contendo Herceptin. E HER dois específico A ON, análises ex vivo por Western blot indicaram inibição tanto da síntese de HER dois quanto da fosforilação de a KT e clivagem de PARP, marcando apoptose. A regressão tumoral em resposta ao tratamento com o fármaco é demonstrada pela redução do tumor e esgotamento das células tumorais por exame histológico.Agora você deve ter um bom entendimento de como utilizar uma plataforma nano biocompatível para obter um tratamento personalizado eficaz sem efeitos colaterais e alcançar uma nano droga com composição controlada e atividades funcionais verificadas. Uma vez dominados, esses sensores podem ser realizados com alta reprodutibilidade após seu desenvolvimento. Esta técnica, que utiliza uma plataforma nano de ácido poliácido para entrega direcionada de oligonucleotídeos antissenso, abre caminho para pesquisadores na área de medicina nano personalizada explorarem o tratamento de tumores direcionado a marcadores moleculares tumorais específicos identificados por análise genética personalizada. Farmacologicamente, agentes ativos e células podem ser extremamente perigosos.Precauções como o uso de máscara e luva devem sempre ser tomadas ao realizar este procedimento.

polymalic-acid-based-nano-biopolymers-for-targeting-multiple-tumor

Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

O objetivo deste protocolo é descrever a preparação e caracterização de fármacos fisicamente aprisionados e pouco solúveis em água em sistemas micelares de liberação de fármacos compostos por copolímeros em bloco anfifílico.

Preparação e caracterização de Individual e Multi-carregadas com droga Fisicamente Entrapped poliméricos Micelles

Aqui, apresentamos um protocolo para a síntese de sulfato de condroitina placentária A peptídeo de vinculação (plCSA-BP)-conjugados lipid-polímero nanopartículas através de etapa única sonication e bioconjugate técnicas. Estas partículas constituem uma nova ferramenta para a entrega de alvo da terapêutica de tumores mais humanos e trophoblasts da placenta para tratar cancros e anormalidades da placenta.

Síntese e caracterização de placentária Condroitina sulfato de uma (plCSA) - Targeting Lipid - nanopartículas de polímero

Câncer de ovário forma metástases em toda a cavidade peritoneal. Aqui, apresentamos um protocolo para fazer e uso folato receptores alvo superfície melhorada ressonância nanosondas de espalhamento Raman que revelam estas lesões com alta especificidade através de ratiometric de imagem. As nanosondas são administradas intraperitonealmente com ratos vivos, e as imagens derivadas se correlacionam bem com a histologia.

Ressonância de superfície melhorada Raman dispersão nano-sonda Ratiometry para detecção de câncer de ovário microscópico através do Receptor de folato como alvo

Aqui apresentamos um protocolo para estudar a localização in vivo de anticorpos em modelos de xenoenxerto de tumores de camundongos.

Analisando tumor e distribuição de tecidos de anticorpo terapêutico específico de antígeno alvo

Neste protocolo, as nanopartículas de ouro modificadas AS1411-g-PEI-g-PEG são sintetizadas através de reações de meio-médio de três etapas. Em seguida, a doxorubicina é carregada e entregue às células cancerígenas alvo para a terapia contra o câncer.

Síntese de Nanopartículas de ouro modificada Aptamer-PEI-g-PEG carregadas com doxorubicina para entrega de drogas direcionadas

Neste trabalho, fornecemos um protocolo para biofuncionalizar nanomateriais magnéticos com anticorpos para direcionamento celular específico. Como exemplos, utilizamos nanofios de ferro para atingir células cancerígenas.

Biofuncionalização de Nanomateriais Magnéticos

Um passo necessário no desenvolvimento do aptâmero anticâncer é testar sua ligação ao alvo. Demonstramos um ensaio baseado em citometria de fluxo para estudar essa ligação, enfatizando a importância de incluir um aptâmero de controle negativo e células cancerígenas que são positivas ou negativas para essa proteína em particular.

Um ensaio de ligação de proteínas de superfície celular baseado em citometria de fluxo para avaliar a seletividade e a especificidade de um Aptamer anticancerígeno

A barreira hematoencefálica é um obstáculo significativo na entrega de terapias para o glioblastoma, uma doença para a qual não há cura. Aqui, relatamos uma nano plataforma terapêutica de óxido de ferro guiada por imagem in vivo que pode contornar essa barreira fisiológica em virtude do tamanho e se acumular no tumor.

Entrega de nanopartículas de uma carga útil de oligonucleotídeo em um modelo animal de glioblastoma multiforme

Este artigo apresenta uma forma aprimorada de uma nova técnica de glicômica de baixo para cima projetada para analisar o perfil de composição agrupado de glicanos em biofluidos não fracionados por meio da decomposição química de glicanos em seus monossacarídeos específicos de ligação constituinte para detecção por GC-MS. As aplicações potenciais incluem a detecção precoce de câncer e outros distúrbios afetivos glicanos.

Glicanos Análise Node: uma abordagem de baixo para cima para Glycomics

Esquemas de síntese para preparar nanopartículas peludas à base de fibra de madeira altamente estáveis e biopolímeros funcionais à base de celulose foram detalhados.

Altamente estável, funcional Hairy Nanopartículas e Biopolímeros de fibras de madeira: Rumo a nanotecnologia Sustentável

Aprenda a sintetizar nanofármacos de ácido polimálico para terapia personalizada do câncer de mama Her2-positivo em modelo animal. Este método biotecnológico permite entrega direcionada com alta pureza óptica.

À base de ácido Polymalic Nano Biopolímeros para Segmentação de múltiplos marcadores tumorais: uma oportunidade para a medicina personalizada? (Vídeo) | JoVE Journal

À base de ácido Polymalic Nano Biopolímeros para Segmentação de múltiplos marcadores tumorais: uma oportunidade para a medicina personalizada?

Explorar mais vídeos