Name: Gavaging Zebrafish Adulto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 9 s
Description: Aprenda a técnica de gavagem oral em peixes-zebra adultos para entrega precisa de soluções. Este método é essencial para estudar organismos patogênicos transmitidos pela via oral-fecal em pesquisas científicas.

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A Universidade comparativa Centro de Biociências Rockefeller deu apoio para este projeto. Agradecemos Janelle Monnas para assistência técnica.

1. Preparar a solução anestésica <ol><li> Prepara-se uma solução de 150 mg / L de MS-222, em água do sistema a partir de uma solução estoque ou a partir da forma em pó. </li><li> Verifique se o pH com um medidor de pH. </li><li> Tampão de bicarbonato de sódio, como necessário, até que o pH está entre 7-7,5. </li><li> Prepare um tanque de água do sistema livre de MS-222 para o peixe para se recuperar dentro O tempo de recuperação é normalmente menos de 1 min. </li></ol> 2. Preparando o aparelho Gavage <ol><li> Corte a clara 22-G implantação tubulação para um pouco mais do que o comprimento aproximado da boca para o bulbo intestinal do peixe. Inicialmente, sugerimos anestesiar um peixe para cada novo grupo que está sendo usado para obter a melhor estimativa do comprimento necessário. </li><li> Empurrar o tubo de implante de corte clara para a agulha 22 G ½ polegada até que seja segura e não há risco de separar. Se uma agulha ½ 22-C não estiver disponível, cortar uma agulha mais longa approximately esse comprimento. </li><li> Quando completa, a implantação tubo do cateter deve estender-se a cerca de 1 cm da ponta da agulha, ou mais curtos, se os peixes são menores. </li><li> Conecte o hub agulha 22-G para um luerlok seringa de 1 cc. </li></ol> 3. Preparando-se para Gavage <ol><li> Corte um sulco em uma esponja com uma lâmina de bisturi. </li><li> Mergulhe a esponja na água sistema livre de MS-222. </li><li> Coloque a esponja humedecida sobre uma superfície plana. </li><li> Desenha-se a 5 mL de solução adequada para a administração por sonda para o tubo do cateter 22-G e uma seringa de 1 cc. </li></ol> 4. Anestesia e Gavage <ol><li> Rápido o peixe, pelo menos, 24 horas antes do procedimento. </li><li> Coloque o peixe na solução de MS-222 até perder a sua reflexo de endireitamento, e não responde a uma aleta de aperto da cauda, ​​mas mantém a circulação opérculo. Isso normalmente leva cerca de 2-3 min. </li><li> Retire o peixe da solução anestésica e colocá-lo ema ranhura na esponja com a cabeça ligeiramente saliente a partir da esponja, mas as guelras cobertos por esponja. </li><li> Mover a esponja para uma posição vertical. </li><li> Abra a boca do peixe-zebra com o tubo do cateter 22-G. </li><li> Inserir o tubo suavemente até que a ponta é passado as guelras (cerca de 1 cm ou o comprimento do tubo). O tubo de implantação não precisa ser forçado. Resistência sugere o tubo pode ser batendo o arco ou coração branquial. </li><li> Se houver resistência, retirar delicadamente, reposicionar e tente novamente. </li><li> Injectar o material lentamente. </li><li> Enquanto está a injectar, certifique-se de que a solução não sair através das guelras ou a boca. </li><li> Retire o peixe da esponja e colocar no tanque de recuperação. </li><li> A recuperação ocorre tipicamente em menos de 1 min, e é indicado pelos peixes nadando na vertical e manter o equilíbrio. </li><li> Monitorar peixe para regurgitação, como mostrado, visualizando o peixe expulsar ativamente material de sua boca, ou nenhum movimento opercular. </li><li> Os peixes podem ser devolvidos ao seu tanque regularmente, uma vez que eles se recuperaram. </li></ol>

<ol><li>Royes, J. -A. B., Chapman, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoyes%2C+J-AB+%22Preparing+Your+Own+Fish+Feeds%22">Preparing Your Own Fish Feeds</a>. , Department of Fisheries and Aquatic Sciences, Florida Cooperative Extension Service, Insitute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. (2009).</li>
<li>Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+the+bioencapsulation+of+enrofloxacin+and+oxytetracycline+in+Artemia+fransciscana+Kellogg%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg.</a> Aquaculture. 196, 1-12 (1906).</li>
<li>Langdon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microparticle+types+for+delivering+nutrients+to+marine+fish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae.</a> Aquaculture. 227, 259-275 (2003).</li>
<li>Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+wax+spray+beads+for+delivery+of+low-molecular+weight%2C+water+soluble+nutrients+and+antibiotics+to+Artemia%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia.</a> Aquaculture. 284, 151-158 (2008).</li>
<li>Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Protocol+for+the+Oral+Administration+of+Test+Chemicals+to+Adult+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish.</a> Zebrafish. 8, 203-210 (2011).</li>
<li>Goldsmith, J. R., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Think+Small%3A+Zebrafish+as+a+Model+System+of+Human+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).</li>
<li>Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+expermients+on+use+of+zebrafish+as+a+laboratory+model+for+Giardia+duodenalis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Parasitologica%22%5BJournal%5D)">Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection.</a> Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).</li>
<li>Marie, B., Huet, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+toxic+cyanobacterial+bloom+%28Planktothris+agardhii%29+on+fish%3A+Insights+from+histopathological+and+quantitative+proteomic+assessments+following+the+oral+exposure+of+medaka+fish+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes).</a> Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).</li>
<li>Canadian Council on Animal Care. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CCAC+guidelines+on%3A+the+care+and+use+of+fish+in+research%2C+teaching+and+testing%22">CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing</a>. , CCAC. Ottawa, Ontario, Canada. (2005).</li>
<li>Harper, C., Lawrence, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarper%2C+C+%22The+Laboratory+Zebrafish%22">The Laboratory Zebrafish</a>. , CRC Press. Boca Raton, Florida, USA. (2011).</li>
<li>De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+Care+and+Use+of+Fish+in+Research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the Care and Use of Fish in Research.</a> ILAR Journal. 37 (4), (1995).</li>
<li>Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricaine+methane-sulfonate+%28MS-222%29+application+in+fish+anaesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Ichthyology%22%5BJournal%5D)">Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia.</a> Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).</li>
<li>Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+gastrointestinal+physiology+using+a+novel+intestinal+transit+assay+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+%26+Motility%22%5BJournal%5D)">Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish.</a> Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Significado Esta técnica é um aperfeiçoamento e oferece várias vantagens em relação a ambas as técnicas descritas anteriormente para o peixe-zebra gavaging adulto. Em primeiro lugar, o uso de uma esponja para restringir os peixes permite que uma pessoa para realizar o procedimento, em oposição a uma técnica previamente descrita exige duas pessoas. Segunda 7, o cateter de implante de tubagem é mais flexível do cateter IV, que pode ajudar a minimizar o trauma secundário devido a perfur...

Os métodos atuais para a administração de compostos oralmente para zebrafish incluem compostos administração top-revestidos para alimentação, misturados em dietas de gelatina 1, bioencapsulated em salmoura camarão 2, misturado com dietas lipídicas encapsuladas 3, cera contas de pulverização 4 e via dietas à base de glúten. 5 Limitações estes métodos de administração oral incluem altas taxas de lixiviação e consumo composto incompleta ou imprevisível por peixes individual. Essas variáveis ​​são problemáticas porque em estudos de doenças infecciosas, sabendo que a dose infecciosa administrado ao peixe pode ser fundamental para o sucesso do estudo. Além disso, o trabalho anterior tenha mostrado que certos compostos administrados em banhos de água causar lesão tóxica para as guelras do peixe-zebra intestinais antes que os efeitos que podem estar sob estudo ocorrem 6. Gavage é um método padrão usado em outras espécies de animais de laboratório para administrar quantidades precisas de um produto com akconcentração nown para estudo na investigação biomédica e farmacêutica. Só recentemente os métodos para gavaging peixe-zebra foram descritos na literatura. Uma técnica descrita é um método de duas pessoas utilizando uma bainha de cateter 24 G ligada a uma pipeta de 2-20 ul de entregar 5 ul de solução. 7 O método descrito teve uma taxa de mortalidade de 8,7% e 39% no primeiro e segundo ensaio, respectivamente, a maioria da mortalidade foi atribuída a fêmeas grávidas. A segunda técnica gavage descrito seringas gavage atraumáticas usados ​​para administrar 5 ml de solução para medakas (Oryzias latipes). 8 Informações sobre a mortalidade não foi fornecido eo processo exato de realizar a sonda não foi descrita. De acordo com a Canadian Council on Animal Care e do peixe-zebra de Laboratório, até 1% de peso do corpo do peixe, podem ser administrados através de sonda esofágica. 9,10 nosso objectivo foi desenvolver um método repetitivo, segura e eficiente de fornecer volumes precisos de ptlibras por via oral para zebrafish adultos de ambos os sexos e em todas as fases de reprodução. Este procedimento seria aplicável para qualquer estudo em que é necessária a administração oral de um composto precisas.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>A esponja</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>seringa luer lock de 1 cc</td> Tubo de implantação de micro-renatano <td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-G (corte)</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 agulha de 22 G (corte, se necessário)Medidor de</td> pH <td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sonda</td><td></td><td></td>Hanna</tr><tr><td>1 lâmina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr> de bisturi<td colspan="4">[cabeçalho]</td></tr><tr><td colspan="4">Reagent/Material</td></tr><tr><td>MS-222 (Finquel)</td><td>Argent Laboratories</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gavaging zebrafish adulto

Gavaging Adult Zebrafish

O peixe-zebra tornou-se um importante modelo in vivo na pesquisa biomédica. Métodos eficazes devem ser desenvolvidos e utilizados para fornecer compostos ou agentes em soluções para a investigação científica. Os métodos atuais para a administração de compostos oralmente para zebrafish adultos são imprecisos devido à variabilidade no consumo voluntário pelos peixes. Um procedimento de gavagem foi desenvolvido para entregar quantidades precisas de agentes infecciosos para peixe-zebra para o estudo em pesquisa biomédica. Peixe-zebra adultos com mais de 6 meses de idade, foram anestesiados com 150 mg / L de tamponada MS-222 e gavaged com 5 mL de solução usando implantação tubo flexível do cateter ligada a um corte de 22 L da ponta de agulha. O tubo flexível foi baixada para dentro da cavidade oral do peixe-zebra, até a ponta do tubo estendida para além das guelras (aproximadamente 1 cm). A solução foi então injectada lentamente no tracto intestinal. Este método foi eficaz 88% do tempo, com peixe recuperação sem intercorrências. Esteprocedimento também é eficaz como uma pessoa pode gavagem 20-30 peixes em uma hora. Este método pode ser utilizado para administrar agentes precisamente para estudos de doenças infecciosas, ou estudos de outros compostos em peixes-zebra adultos.

Ambos os sexos, de peixe, incluindo fêmeas grávidas foram gavaged com sucesso (Figura 1). Um procedimento bem sucedido, leva menos de um minuto com o líquido não visto saindo as brânquias ou a boca. A tubulação entra facilmente, sem força, sem sangue visto após a remoção do cateter. O procedimento é rápido, necessitando de aproximadamente 10 min, a administração por sonda 3-4 peixes, com uma média de 30-45 seg por peixe. Peixe-zebra não deve ser gavaged com mais de 5 ul de u...

O uso crescente de peixe-zebra como um modelo animal requer o desenvolvimento de métodos eficazes para a entrega de quantidades conhecidas de compostos e soluções. O procedimento de gavagem descrito abaixo permite a distribuição oral de volumes precisos de solução fiável, segura e eficiente de peixe-zebra adultos.

Gavaging Zebrafish Adulto

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

O objetivo geral deste vídeo é demonstrar uma técnica para gavetagem de peixes-zebra adultos. Desenvolvemos esta técnica com o intuito de estudar organismos patogênicos que são transmitidos pela via oral-fecal. Pode ser utilizada para administrar uma quantidade precisa de solução.Para estudo em peixes-zebra adultos. O processo inteiro envolve quatro etapas. A primeira é preparar o aparelho de gavagem.O segundo passo é anestesiar o peixe com 150 miligramas por litro de MS 222 tamponado. O terceiro passo é administrar o peixe por gavagem com sua solução. E o último é a recuperação do peixe e o monitoramento de efeitos adversos.Para montar o aparelho de gavagem, corte o tubo de implantação de calibre 22 no comprimento apropriado para o peixe, conecte-o à agulha de calibre 22 e fixe-o à seringa de trava de 1 ml. Quando a sua solução estiver pronta, ela pode ser aspirada para dentro do aparelho. Para a administração ao peixe-zebra, deve-se fazer um corte no formato de fenda na esponja com lâmina de bisturi ou tesoura, de modo que, ao colocar o peixe dentro da esponja, ele fique firmemente fixado.A esponja deve ser previamente embebida em água do sistema para mantê-la úmida. Um tanque de recuperação composto por água do sistema, livre de anestésico, também deve ser preparado para acomodar os peixes após a conclusão do procedimento. Jejue os peixes por pelo menos 24 horas antes do procedimento.Usando uma rede, transfira o peixe para o tanque de anestesia com MS 222. Uma vez que o peixe esteja anestesiado, demonstrado pela ausência de resposta a um aperto na nadadeira caudal, remova-o da solução anestésica e coloque-o na esponja de modo que a cabeça esteja levemente projetada para fora da esponja, mas com as brânquias cobertas. Coloque a esponja em posição vertical e, utilizando o tubo de implantação de 22 gauge, abra a boca do peixe-zebra.Insira suavemente o tubo até que a ponta ultrapasse o nível do coração. O comprimento varia conforme o tamanho do peixe, e se houver resistência, recue suavemente, reposicione e tente novamente. Não deve ser necessário forçar o tubo ao longo do trato intestinal do peixe-zebra.Uma vez na posição correta, injete a solução e remova o tubo. Coloque o peixe no tanque de recuperação liberando-o da esponja. Se realizado corretamente, o tubo deverá deslizar facilmente para dentro do trato intestinal do peixe-zebra.Nenhuma solução será vista saindo pelas brânquias ou pela boca. Nenhum sangue será visualizado na ponta do tubo ou saindo das brânquias do peixe. O problema mais comum é o líquido sair pela boca ou pelas brânquias, o que indica que o tubo não foi introduzido suficientemente para dentro do peixe.Este procedimento apresenta uma taxa de sucesso geral de 88%. Quando realizado corretamente, não mais do que cinco microlitros de fluido devem ser administrados, pois isso reduz drasticamente a taxa de sucesso do procedimento. Quando tentamos administrar 10 microlitros de solução, a taxa de sucesso geral caiu para 50%. Neste vídeo, demonstramos como realizar a gavagem em peixes-zebra adultos. Este procedimento pode ser usado para entregar com precisão quantidades conhecidas de soluções aos peixes-zebra.As vantagens desta técnica em comparação com técnicas previamente descritas são o uso de um material mais flexível e a possibilidade de realizar a gavagem em fêmeas grávidas de forma mais eficaz. Obrigado por assistir e boa sorte em seu trabalho.

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