Um procedimento para estudar o efeito da restrição alimentar prolongada em heroína Buscando em ratos abstinentes

O objetivo geral deste procedimento é estudar os efeitos de manipulações ambientais, como a restrição crônica de alimento, sobre a recaída na busca de heroína em ratos de laboratório sob condições de abstinência. Isso é alcançado primeiramente pela inserção cirúrgica de um cateter intravenoso na veia jugular do rato, permitindo a automedicação com heroína após um período de recuperação. Os ratos são treinados para automedicar-se com heroína em câmaras de condicionamento operante durante um período de 10 dias.

O próximo passo do procedimento é a fase de abstinência, na qual os ratos são transportados para o biotério e submetidos a um período de acesso restrito ou irrestrito à comida. Por fim, os ratos são devolvidos às câmaras de condicionamento operante para realizarem um teste de busca por heroína, no qual respostas na alavanca associada à heroína acionam uma luz e um tom como estímulo, na ausência de administração de heroína. Em última análise, ratos com restrição crônica de alimento e histórico de automedicação de heroína exibirão um aumento acentuado na procura por heroína sob condições de abstinência, resultante da reexposição ao ambiente de consumo da droga e aos estímulos associados à droga.

A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como o procedimento de reinstauração, é a ausência de extinção operante explícita, que não é observada na condição humana. Além disso, o uso de manipulações crônicas em vez de agudas permite uma validade de construto maior em relação à condição humana. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais no campo da dependência química, como os mecanismos neurológicos comuns subjacentes aos comportamentos de busca por drogas e por alimentos.

Os cateteres são preparados em grande quantidade e esterilizados em autoclave para uso durante um longo período. Para construir um cateter, corte primeiro um tubo elástico em pedaços de 12 centímetros de comprimento. Use um palito ou uma agulha de calibre 18 para colocar uma pequena gota de silicone ao redor do cateter a três centímetros da ponta.

Deixe o silicone secar por 24 horas antes da autoclavação. Dobre o tubo longo da cânula five up, que servirá como conector em ângulo reto com o pedestal de plástico, antes da autoclavação. Para montar os cateteres no dia da cirurgia, empurre o lado longo do tubo scholastic sobre o tubo metálico dobrado da cânula five up até cerca da metade do pedestal de plástico. Conecte o tubo five up, por meio de tubo tigon e uma agulha blendida de 22 gauge, a uma seringa de um mililitro cheia com solução salina estéril.

Enxágue o cateter com soro fisiológico para garantir fluxo desobstruído. Para iniciar, anestesie o animal antes de raspar e limpar a área do ombro direito e da cabeça com álcool e um anti-séptico cirúrgico. Após aplicar gel nos olhos para prevenir ressecamento, penicilina e soro fisiológico são injetados para proteger contra infecção e desidratação.

Utilize técnicas padrão para expor a veia jugular externa após isolá-la do tecido circundante. Insira uma pinça curva sob a veia para mantê-la elevada e levemente esticada. Faça um pequeno corte em forma de V na veia e mantenha o corte aberto.

Usando um dilatador de vaso, avance a curta ponta de três centímetros do cateter para dentro da veia em direção ao coração até que a gota de silicone esteja no ponto de incisão. Amarre o cateter à veia com três suturas, uma o mais próximo possível da região caudal, outra logo à frente (rostral) da gota de silicone e a terceira o mais rostral possível.

Passe soro fisiológico através do cateter para garantir que ele permaneça desobstruído e que os pontos não estejam muito apertados. Em seguida, posicione a rata com a face ventral voltada para baixo. Faça uma incisão na cabeça e insira um hemostato para separar a pele do tecido subjacente e criar um bolsão subcutâneo.

Guie o hemostato sob a pele em direção à abertura nos ombros onde o cateter foi inserido. Atravesse o tecido conjuntivo e prenda firmemente o cateter no ponto mais rostral abaixo da base do cinco para cima. Solte o cinco para cima e passe a extremidade longa do cateter sob a pele, saindo pela incisão localizada no topo da cabeça.

Use uma tesoura para cortar o cateter abaixo do ponto onde o hemostato estava preso e reconecte a extremidade longa do cinco para cima. Puxe o cateter ao longo do eixo metálico do cinco para cima até a base plástica e passe soro fisiológico para garantir fluxo livre. Após fechar as feridas com pontos, coloque a rata em um aparelho estereotáxico.

Uma vez que o crânio exposto esteja limpo e seco, utilize uma broca manual para fazer quatro a cinco furos na superfície. Em seguida, insira parafusos máquina nos furos para servir como estrutura de sustentação para o capacete craniano. Posicione o conector cinco para cima entre os parafusos e enrole o excesso de comprimento do cateter no bolso subcutâneo feito anteriormente.

Por fim, utilize cimento dental para fixar o cinco à parte superior do crânio. Remova a rata do aparelho estereotáxico após a secagem completa do cimento e monitore até a recuperação total. Os ratos são mantidos individualmente em câmaras de condicionamento operante.

Enclausurado em compartimentos atenuadores de som equipados com um ventilador. Duas alavancas retráteis são montadas a nove centímetros acima do piso na parede lateral direita, com uma luz indicadora acima de cada alavanca. Um módulo de tom é colocado acima da alavanca ativa e uma luz ambiente vermelha está posicionada no centro superior da parede lateral esquerda.

Comida e água são fornecidas à vontade. A bomba de medicamento é conectada ao cateter por meio de um rotor líquido e tubo tigon protegido com uma mola de metal. A automedicação com heroína é iniciada após a recuperação da cirurgia e um período de habituação de 24 horas.

Para começar, lave o cateter com uma solução de heparina e gentamicina. Em seguida, conecte o conector cinco vias ao tubo Tigon e prenda a mola de metal. Inicie cada sessão no início da fase escura com a extensão das alavancas ativa e inativa, bem como com a iluminação da luz da caixa e a ativação do complexo sonoro da luz Q.

Por 30 segundos, as ratas podem automedicar heroína durante 10 dias em três sessões de três horas separadas por intervalos de três horas. As respostas na alavanca ativa resultam na ativação da bomba de droga e no início de um período de tempo limite de 22 segundos, durante o qual a luz da caixa é desligada e o complexo de tom de luz Q acima da alavanca ativa é ativado. As respostas na alavanca inativa são registradas, mas não têm consequências programáveis.

Após o treinamento de automedicação, retire os ratos das câmaras de condicionamento operante e aloje-os individualmente na instalação animal com acesso irrestrito a alimento e água. No dia seguinte, durante um dia de lavagem do fármaco, reduza a quantidade de alimento para o grupo com restrição alimentar para iniciar o período de abstinência, mantendo o acesso irrestrito a alimento no grupo saciado. Realize o teste de busca pelo fármaco na manhã do período de abstinência.

Dia 14, retorne as ratas às câmaras de condicionamento operante e conecte-as à mola metálica. Permita uma sessão de uma ou três horas, durante a qual as respostas na alavanca ativa e inativa terão as mesmas consequências que no treinamento de automedicação, exceto pela disponibilidade da droga. Esses resultados demonstram que os pesos corporais permanecem estáveis durante toda a administração de heroína.

Treinamento de automedicação Durante o período de abstinência, ratos com acesso irrestrito à ração aumentam seu peso corporal, enquanto aqueles submetidos à restrição alimentar reduzem seu peso corporal em aproximadamente 10 a 15%. Como visto aqui, as infusões e as respostas na alavanca ativa aumentaram ao longo dos dias de treinamento, enquanto as respostas na alavanca inativa não aumentaram. Após o período de abstinência, a resposta na alavanca ativa pelos ratos com restrição alimentar aumentou significativamente em comparação com os ratos saciados. Já as respostas na alavanca inativa são mínimas e comparáveis entre os grupos após este procedimento.

Outros métodos, como injeções intracranianas, microdiálise, western blot e técnicas imunohistoquímicas, podem ser utilizados para direcionar sistemas neuroquímicos e farmacológicos específicos. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma compreensão clara de como implantar cirurgicamente um cateter intravenoso na veia jugular do rato, bem como de como conduzir um procedimento de automedicação com heroína em câmaras de condicionamento operante padrão.