Um procedimento para estudar o efeito da restrição alimentar prolongada em heroína Buscando em ratos abstinentes

Um procedimento que permite uma demonstração de aumento robusto de droga que procura, em ratos com restrição de alimentos é descrito. Após o treinamento de auto-administração de heroína, os ratos passam por um período de abstinência, em um ambiente livre de drogas, durante a qual eles são levemente restrição alimentar. Procura de droga é então testada no ambiente associadas à droga.

O objetivo geral deste procedimento é estudar os efeitos de manipulações ambientais, como restrição alimentar crônica na recaída à busca de heroína em embalagens de laboratório sob condições de abstinência. Isso é conseguido primeiro inserindo cirurgicamente um cateter intravenoso na veia jugular do rato para permitir a autoadministração de heroína após um período de recuperação. Os ratos são treinados para autoadministrar heroína em câmaras de condicionamento operante por um período de 10 dias.

A próxima etapa do procedimento é a fase de abstinência, onde os ratos são transportados para o biotério e submetidos a um período de acesso restrito ou irrestrito aos alimentos. Finalmente, os ratos são devolvidos às câmaras de condicionamento operante para serem submetidos a um teste de busca de heroína, onde as respostas na alavanca prejudicada pela heroína resultam na ativação de uma pista, luz e tom na ausência de entrega de heroína. Em última análise, ratos com restrição alimentar crônica Com histórico de heroína, a autoadministração exibirá um aumento robusto na busca de heroína em condições de abstinência, resultante da reexposição ao ambiente de uso de drogas e pistas associadas à droga.

A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como o procedimento de reintegração, é a ausência de extinção operante explícita, que não é observada na condição humana. Além disso, o uso de manipulações crônicas versus agudas permite maior validade de construto em relação à condição humana. Esse método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da dependência de drogas, como os mecanismos neurológicos comuns subjacentes aos comportamentos de busca de drogas e alimentos.

Os cateteres são preparados a granel e esterilizados em autoclave para uso por um longo período de tempo. Para construir um cateter, primeiro corta o tubo elástico em pedaços de 12 centímetros de comprimento. Use um palito de dente ou uma agulha de calibre 18 para colocar uma pequena gota de silicone ao redor do cateter a três centímetros da ponta.

Deixe o silicone secar por 24 horas antes de autoclavar o tubo longo da cânula de cinco ups, que servirá como um conector em ângulo reto com o pedestal de plástico antes da autoclavagem. Para montar os cateteres no dia da cirurgia, empurre o lado longo do tubo escolar sobre o tubo de metal dobrado da cânula de cinco para cima até a metade do pedestal de plástico. Conecte o tubo de cinco polegadas por meio de um tubo tigon e uma agulha de calibre 22 misturada a uma seringa de um mililitro cheia de solução salina estéril.

Lave a solução salina através do cateter para garantir o fluxo desobstruído. Para começar, anestesie o animal antes de raspar e limpar a área do ombro direito e da cabeça com álcool e uma esfoliação cirúrgica. Após a aplicação do gel nos olhos para evitar o ressecamento, penicilina e solução salina são injetadas para proteger contra infecções e desidratação.

Use técnicas padrão para expor a veia jugular externa, uma vez isolada do tecido circundante. Insira uma pinça curva sob a veia para mantê-la levantada e ligeiramente esticada. Faça um pequeno corte em forma de V na veia e mantenha o corte aberto.

Usando um dilatador de vaso, avance a ponta curta de três centímetros do cateter na veia em direção ao coração até que a gota de silicone esteja no ponto de incisão. Amarre o cateter à veia com três suturas, uma o mais longe possível. Um apenas rostral à gota de silicone e o terceiro o mais rostral possível.

Passe soro fisiológico pelo cateter para garantir que ele permaneça obstruído e que as suturas não estejam muito apertadas. Em seguida, coloque o lado ventral do rato para baixo. Incise a cabeça e insira um hemostático para separar a pele do tecido subjacente e criar uma bolsa subcutânea.

Guie o hemostático sob a pele em direção à abertura nos ombros onde o cateter foi inserido. Rompa o tecido conjuntivo e prenda firmemente o cateter no ponto mais rostral abaixo da base dos cinco para cima. Retire os cinco para cima e enfie a extremidade longa do cateter sob a pele e para fora da incisão localizada no topo da cabeça.

Use uma tesoura para cortar o cateter abaixo de onde o hemostático foi preso e recoloque a extremidade longa dos cinco. Puxe o cateter ao longo do eixo de metal dos cinco até o pedestal de plástico, passe solução salina para garantir o fluxo livre. Depois de fechar as feridas com suturas, coloque o rato em um aparelho estereotáxico.

Quando o crânio exposto estiver limpo e seco, use uma broca manual para fazer de quatro a cinco furos na superfície. Em seguida, insira os parafusos da máquina nos orifícios para atuar como andaime para a tampa da cabeça. Coloque o conector de cinco para cima entre os parafusos e coloque o excesso de comprimento do cateter na bolsa subcutânea feita anteriormente.

Por fim, use cimento dental para fixar os cinco até o topo do crânio. Remova o rato do aparelho estereotáxico depois que o cimento estiver totalmente seco e monitore até que esteja totalmente recuperado. Os ratos são alojados individualmente em câmaras de condicionamento operante.

Fechado em compartimentos atenuantes de som equipados com um ventilador. Duas alavancas retráteis são montadas nove centímetros acima do piso da parede lateral direita com uma luz de sinalização acima de cada alavanca. Um módulo de tom é colocado acima da alavanca ativa e uma luz vermelha da casa é posicionada na parte superior central da parede lateral esquerda.

Comida e água estão disponíveis no libitum. A bomba de medicamentos é conectada ao cateter por meio de um giro de líquido e um tubo tigônico protegido com uma mola de metal. A autoadministração de heroína é iniciada após a recuperação da cirurgia e um período de habituação de 24 horas.

Para começar, lave o cateter com uma solução de heparina gentamicina. Em seguida, conecte o conector de cinco para cima ao tubo Tigon e conecte a mola de metal. Comece cada sessão no início da fase escura com a extensão das alavancas ativas e inativas, bem como a iluminação da luz da casa e a ativação do complexo de tons de luz Q.

Por 30 segundos, os ratos podem auto-administrar heroína por 10 dias durante três sessões de três horas separadas por intervalos de três horas. As respostas na alavanca ativa resultam na ativação da bomba de medicamentos e no início de um 22º período de tempo limite durante o qual a luz da casa é desligada e o complexo de tom de luz Q acima da alavanca ativa é ativado. As respostas inativas da alavanca são registradas, mas não têm consequências programáveis.

Após o treinamento de autoadministração, remova os ratos das câmaras de condicionamento operante e aloje-os individualmente no biotério com acesso irrestrito a comida e água. Para um dia de lavagem de drogas no dia seguinte, reduza a quantidade de comida para o grupo com restrição alimentar para iniciar o período de abstinência, mantendo o acesso irrestrito aos alimentos no grupo saciado. Realize o teste de busca de drogas na manhã da abstinência.

Dia 14, devolva os ratos às câmaras de condicionamento operante e prenda-os à mola de metal. Permita uma sessão de uma ou três horas durante a qual as respostas de alavanca ativa e inativa tenham as mesmas consequências que no treinamento de autoadministração, excluindo a disponibilidade do medicamento. Esses resultados demonstram que os pesos corporais permanecem estáveis em toda a heroína.

Treinamento de autoadministração Durante a abstinência, os ratos com acesso irrestrito à ração aumentam seu peso corporal, enquanto aqueles com restrição alimentar diminuem seu peso corporal em aproximadamente 10 a 15%Como visto aqui, as infusões e as respostas ativas da alavanca aumentaram ao longo dos dias de treinamento, enquanto as respostas inativas da alavanca não. Após o período de abstinência, a alavanca ativa que responde aos ratos com restrição alimentar aumentou significativamente em comparação com os ratos saciados. Considerando que a resposta da alavanca inativa é mínima e comparável entre os grupos Seguindo este procedimento.

Outros métodos, como injeções intracranianas, microdiálise, western blotting e técnicas imuno-histoquímicas, podem ser usados para atingir sistemas neuroquímicos e farmacológicos específicos. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma compreensão clara de como implantar cirurgicamente um cateter intravenoso na veia jugular do rato, bem como conduzir um procedimento de autoadministração de heroína em câmaras de condicionamento operante padrão.