Name: Técnica de Estudos de Artrópodes e comunidades microbianas dentro Árvore Tecidos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Aprenda a técnica do sanduíche de floema para estudar artrópodes e comunidades microbianas em tecidos de árvores. Este método permite observar besouros, ácaros, nematoides e fungos em ecossistemas florestais.

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Agradecemos a Eli Jensen, Stefano Padilla e Kasey Yturralde pela ajuda, e a Karen London e revisores anônimos do manuscrito. Agradecemos a Jake Baker e Karla Torres pelas imagens de vídeo. O financiamento foi fornecido à RWH pela Escola de Silvicultura da NAU e pelo Fundo de Iniciativa de Tecnologia e Pesquisa da NAU (TRIF).

1. Floema Seleção e remoção de árvore <ol><li> Escolha uma árvore com características particulares. Colete floema de pinheiros (ou seja, árvores do gênero Pinus), como eles têm uma camada distinta floema que é de vários milímetros de espessura. 18,27 Uma vez que uma árvore está localizado que tem poucos ramos mais baixos, verifique se existem outros defeitos, tais como ataques de insetos e / ou patógenos. Como alternativa, use floema de outras árvores coníferas, como abetos em sanduíches floema. 9 Outras espécies árvores pode ser adequado para a remoção do floema, como madeiras. NOTA: As árvores coníferas com grandes coroas têm tipicamente o mais grosso tecido floema. Para maximizar a quantidade de floema, o melhor é cortar árvores que têm poucos defeitos e galhos no tronco (fuste). Espécies de pinus que são obra de auto-poda melhor. Floema é tipicamente mais espesso durante a estação de crescimento e é mais espessa mais acima no tronco do que perto do chão. Floema às vezes é difícil remove das árvores durante o outono ou inverno. </li><li> Cortar uma árvore para baixo ou usar os logs recentemente cortadas para obter floema. Escolha uma direção de queda que irá minimizar os danos à árvore, bem como árvores próximas. Ramos cortar o tronco para facilitar o acesso a materiais de casca durante a remoção do floema. </li><li> Uma vez que uma árvore é cortada (derrubadas; caiu no chão) começar a raspar a casca do tronco com uma lâmina afiada empate (Fig 1A.). Raspe uma área da casca fora até que a camada de floema é atingido. NOTA: A camada de floema é tipicamente de cor mais clara (por exemplo, cor de creme) e úmido, enquanto a casca externa é mais seco e de cor mais escura (Fig 1B.). Tome especial cuidado para não raspar o floema. A área raspada da casca depende do tamanho da peça (s) necessária floema. </li><li> Depois que a casca é removida, cortar um esboço da peça floema com uma faca afiada. Certifique-se que a faca corta todo o caminho para o xilema (Fig. 2A). </li><li> Para remover o floema, começar em um canto da peça floema usando os dedos para descascar cuidadosamente de volta o floema. Use uma faca para ajudar a raspar o floema fora do xilema. Continue puxando o floema fora até que toda a peça é removida. NOTA: Floema normalmente descasca fora da árvore mais fácil no verão. Para floema que é extremamente difícil de remover, uma ferramenta em forma de espátula pode auxiliar no esforço. </li><li> Coloque o pedaço floema imediatamente em um saco estéril. Para melhores resultados, feche o saco de vácuo (Fig. 2B) ou, se o uso de sacos Ziploc, retire todo o ar do saco. Isto aumenta a longevidade do floema. Opcionalmente, colocar várias peças de floema em um saco. Floema loja em sacos hermeticamente fechados ligeiramente acima de zero (entre 1 e 10 ° C) para manter a sua frescura. </li></ol> 2. Criar o sanduíche Floema <ol><li> Corte dois pedaços iguais de acrílico transparente, policarbonato ou material similar duro, claro (por exemplo, vidro), um pouco grander que o pedaço de floema (Fig. 2C). Redondo as bordas do acrílico para prevenir os cantos de rasgar o selo Parafilm. Este protocolo usa um 1/8 em. Acrílico transparente de espessura. NOTA: O tamanho das peças cortadas depende das necessidades do organismo e sujeito a duração do estudo. Por exemplo, um par de besouros utiliza 4 dm 2 de floema durante um período de meses, mas só vai precisar de um dm 2 se o estudo tem lugar dentro de alguns dias. </li><li> Perfurar um furo em uma das peças de acrílico para permitir a entrada de organismo (s) de estudo. O tamanho e número de furos depende dos objectivos (Fig. 2D). </li><li> Antes de colocar o floema entre as peças de acrílico, esterilizar a superfície de acrílico (com&gt; 70% de etanol), ou, se estiver usando o novo acrílico, retire a película protetora. </li><li> Coloque o pedaço de queijo fresco de floema entre as peças acrílicas estéreis. Oriente a parte acrílica com o furo (s) no lado interior ou exterior do floema, whichever é necessária. Tipicamente, voltado para a parte exterior do floema (lado que tinha nele casca) para os orifícios de entrada. </li></ol> 3. Vedação da Sandwich Floema <ol><li> Para criar um selo temporário em torno da sanduíche floema, em utilizar 2. Parafilm tiras largas puxados em torno dos bordos da sanduíche de floema (Fig. 2C). Como alternativa, usar um envoltório de cloreto de polivinilideno para selar as arestas. 6 Em seguida, colocar um grampo de cada lado da sanduíche para espremer o acrílico para o floema. Certifique-se que toda a superfície é apertado para baixo para evitar o espaço aéreo entre o acrílico e floema (Fig 2C). Se não fixada corretamente, as amostras podem mover-se entre o acrílico e floema. </li><li> Para criar um selo semi-permanente adicionar um epoxi ou vaselina não-colagem em torno do floema. Certifique-se de que o material envolve completamente o floema. Em seguida, use grampos ou parafusos com parafusos (pode precisar de fazer furos antes do tempo) para manter o acrílico apertado ao floema.Os sanduíches apenas permanecer viáveis ​​por até um ou dois meses. </li><li> Dependendo das necessidades de oxigénio dos organismos de estudo, adicionar um filtro de ar em um ou mais lados da sanduíche. Isto irá permitir que o ar a entrar na sanduíche floema, mas limitar a perda de água a partir do floema. Nós usamos filtros de carvão simples que também reduzem o risco de contaminação fúngica e bacteriana. </li><li> Para as amostras de estudo que exigem a entrada e saída à vontade, substituir uma das peças de acrílico com madeira ou material similar que um inseto pode penetram. Isto é particularmente importante para a observação das sondas de madeira, porque, depois de o seu estado larval é completado na camada de floema, em seguida, eles perfuram o xilema. </li><li> Para evitar cobaias de sair dos orifícios de entrada, coloque pequenas placas de petri (ou outros objetos, fita) sobre os buracos, fuga de bloqueio. Desde organismos que residem nesses espaços são habituar a níveis baixos de luz, pode ser necessário colocar os sanduíches em um quarto escuro ou caixa, ou o lugarmaterial de paque em cima para bloquear a luz. </li></ol> 4. Observando organismos no Sandwich Floema <ol><li> Introduzir espécimes de estudo no orifício de entrada do sanduíche floema (Fig. 2D). Observe as amostras usando um microscópio de dissecação sob uma luz vermelha ou luz branca fixada em um nível baixo (Fig. 2E). </li><li> Para gravar as atividades ou o crescimento de espécimes dentro do sanduíche floema anexar uma câmera ou câmera de vídeo para o microscópio. Anexar câmeras de vídeo especiais para a ocular do microscópio (Fig. 2E &amp; F). Por muito pequenos organismos, como ácaros, nematóides e pseudoscorpions, use uma câmera de vídeo de alta definição acoplada ao microscópio. </li><li> Para gravar sons, microfones inserir dentro do orifício de entrada do floema sanduíche ou através do lado da sanduíche de floema. Uma vez que o orifício de entrada é pequena, utilizar um pequeno microfone tal como um microfone de condensador de electreto. </li><li> Para gravar a partir do lado ou a superfície deo floema sanduíche usar um elemento piezo (Fig. 3B). Para reproduzir o som, use o mesmo elemento piezo ou anexar um transdutor tátil (excitador) para a superfície da parte superior ou inferior do acrílico. </li></ol>

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</ol>

Não foram declarados conflitos de interesse

O sanduíche floema permite a introdução e observação de artrópodes, micróbios e outros pequenos organismos que habitam os tecidos do floema 1,7,8,9,17,18 Esta técnica tem resultado em novas descobertas e uma melhor compreensão dos comportamentos., Vida traços de história, desenvolvimento e interações de organismos dentro do floema da árvore. 1,5,10 O protocolo sanduíche descrito aqui é um híbrido de projetos anteriores, e irá fornecer um sanduíche econômico que é facilmente construído com equipamentos e materiais mínima. As peças de vidro, acrílico ou policarbonato podem ser reutilizados, e os únicos materiais de consumo são o Parafilm e floema. Apesar de todas as etapas do protocolo são importantes, algumas etapas devem ser seguidas estritamente para garantir o mais alto grau de sucesso. Em primeiro lugar, uma árvore deve ser localizada, que tem uma parte do fuste livre, ou relativamente livre, de ramos. As árvores que têm muitos ramos são difíceis de fazer a barba e vontade yalgumas peças do floema viáveis ​​ield, como todos os ramos devem ser cortados em torno ao remover o floema. Em seguida, é importante para minimizar a exposição ao ar do floema. Nós rapidamente colocar cada peça floema em um saco em cima da remoção. Depois de 3-6 peças são removidos, eles são transferidos para um saco selado a vácuo; usamos um inversor de potência para executar o aferidor de uma bateria de veículo no campo. Por último, saneantes as peças acrílicas e limpeza geral ao executar este protocolo irá reduzir o crescimento de fungos no sanduíche. Isto é especialmente importante para as observações estendidos. Como mencionado acima, existem limitações do aparelho de sanduíche floema. Uma vez que a camada de floema é fina, apenas pequenos organismos que normalmente permanecem no floema pode ser introduzido na sanduíche. Insetos maiores, como brocas de madeira (ou seja, Buprestid, espécies Cerambycid) pode ser introduzido e observados para as fases iniciais do seu ciclo de vida. Este prazo é geralmente limitada a dois paratrês semanas; após este ponto as larvas necessitam de madeira xilema para perfurar para pupação. Em contraste, para besouros, especialmente aqueles no gênero Ips, um ciclo de vida completo pode ser observado, inclusive acasalamento, eclosão dos ovos, alimentação, pupating e eclosão em um besouro adulto. Neste ponto, a viabilidade da sanduíche é normalmente esgotado devido à dessecação e crescimento de fungos. 28 Além disso, este aparelho não permite a insectos livremente e colonizam naturalmente ou sair do floema sanduíche. 27 Nosso protocolo é flexível em termos de tamanho, forma, e tipo de floema utilizado. Estudos curtos exigem menos material floema e tamanho sanduíche pode ser adaptado em conformidade. Muitas espécies de coníferas foram utilizados como doadores de floema em um sanduíche floema (por exemplo, ponderosa pine 12, Douglas-fir 2, abeto 29, Pinus taeda 27, longleaf pinho 27). Materiais do sanduíche também pode ser alterada; para examplas, placas de vidro podem ser utilizados em vez de acrílico e epoxi ou fita, em vez de Parafilm. A parte mais difícil deste protocolo é o processo de remoção do floema. Árvores ao lado da outra podem diferir em quão difícil seu floema é remover. Quando uma árvore tem floema difícil, paciência é fundamental. Nestes casos, executar cuidadosamente uma faca entre o xilema duro e floema esponjoso. Este processo se sente literalmente como esfola a árvore. Depois de dominar a técnica básica sanduíche, alterações ao protocolo pode ajudar a necessidades específicas de ajuste. Por exemplo, por aperfeiçoar as técnicas necessárias para remover o floema, pedaços maiores podem ser removidos e usados ​​para criar sanduíches maiores. Além disso, alterações podem ser feitas para acomodar instrumentos específicos, por exemplo, furos adicionais para monitorar as emissões químicas (Fig. 3), ou gravar ou reproduzir sons (Fig. 3B). As modificações podem ser feitas para permitir a preservação de semi-permanente do floema e seu órgãoismos, ou para observações temporárias de organismos que podem mais tarde ser deixado livre.

Floema e casca tecidos de coníferas são hospedeiras de milhares de organismos. Phloeophagy, a alimentação em tecidos do floema da casca interna, é um hábito normalmente associado com besouros, woodborers, e vários outros táxons de invertebrados e micróbios que vivem dentro de árvores 23 besouros. (Coleoptera: Curculionidae) desenvolver e viver dentro de floema, exceto para períodos curtos quando os adultos procuram novas árvores hospedeiras. 31 Casca besouros têm sido extensivamente estudadas devido aos seus impactos econômicos sobre árvores 18,19, mas observações comportamentais dos insetos dentro de materiais de árvores têm sido limitadas. 4 Além disso, as galerias construídas por besouros tornar-se o habitat de uma infinidade de espécies. 11 Um vasto número de fungos, bactérias 30 3, ácaros e nematóides 10,21, 16,19, juntamente com outros artrópodes predadores e parasitas 22,24 habitam o material floema. As técnicas fornecidas aquipermitem a observação direta de besouros, ácaros e brocas de madeira que normalmente vivem em ambientes subcorticais. Ligeiras alterações ao protocolo pode ser feita para estudar os fungos e bactérias. Besouros e organismos associados, dentro dos tecidos de árvores foram estudadas utilizando um &quot;sanduíche floema.&quot; O uso precoce dessa técnica podem ser encontrados na literatura, que remonta a 1933, quando foi usado para observar os estádios larvais de Douglas-fir beetle (Dendroctonus pseudotsugae). 2 O sanduíche floema passou por muitas derivações como diferentes materiais se tornaram disponíveis. Originalmente, este dispositivo consistia de um pedaço de floema colocado entre duas placas de vidro, pressionadas em conjunto por bandas elásticas. 2 Mais tarde, grampos, fita adesiva, cola, plástico, e outros materiais têm sido utilizados na construção da sanduíche. 13,14 , 15,17,26,28 O protocolo descrito aqui oferece melhorias sobre alguns dos projetos anteriores. Por exemplo, emAntigamente, as espécies de teste foram inseridos no lado da sanduíche, entre as placas de vidro ou de plástico. Isto restringiu a construção de galerias para uma direção. A utilização de orifícios de entrada na placa de topo permite uma maior liberdade para a espécie de ensaio para iniciar galeria construção natural. Uma outra vantagem do protocolo apresentado é o seu desenho simplificado, que pode ser facilmente construída com poucas ferramentas. O uso do sanduíche floema permitiu observações diretas do comportamento alimentar, reprodução, desenvolvimento e interações de organismos que de outra forma não teria sido possível. 1,5, 22 Este método também é uma excelente ferramenta para a K-12 educação e ciência programas e exibida. Existem várias subtilezas na criação de uma sanduíche de floema que são difíceis de interpretar a partir ou não relatada em manuscritos. Cremos que um (isto é, vídeo) Descrição visual da produção de um sanduíche de floema é necessário e seriade valor para os cientistas e educadores interessados ​​em estudar organismos phloeophagous. Nosso protocolo fornece uma maneira simples e barata para observar artrópodes, micróbios e outros organismos que habitam os tecidos do floema.

<table><tbody><tr><td>Lâmina de Tração</td><td>Big Horn Marca&nbsp;</td><td>20265</td> Faca de Filetar <td>de 11" lâmina</td></tr><tr><td>American Angler</td><td>30530</td><td>9" lâmina</td><td></td></tr><tr><td>Policarbonato</td><td>Nexan</td><td>GE-33</td><td>0.093 in. espessura</td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Fisher Scientific</td><td>S37441</td><td>2" de largura</td></tr><tr><td>Grampos de</td><td>Abertura de Mandíbula de Pônei</td><td>3201-HT-K</td><td>4" x 1"</td></tr><tr><td>Seladora a Vácuo&nbsp; e sacos</td><td>FoodSaver</td><td>V2840; FSFSBF0742-015</td><td>Aspirador VacLoc sacos em rolos</td></tr></tbody></table>

técnica de estudos de artrópodes e comunidades microbianas dentro Árvore tecidos

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Os tecidos do floema do pinheiro são habitats para muitos milhares de organismos. Artrópodes e micróbios usam tecidos de floema e câmbio para procurar parceiros, botar ovos, criar filhotes, se alimentar ou se esconder de inimigos naturais ou condições ambientais adversas fora da árvore. Organismos que persistem dentro do habitat do floema são difíceis de observar devido à sua localização sob a casca. Fornecemos uma técnica para preservar o floema intacto e prepará-lo para experimentação com invertebrados e microorganismos. O aparelho é chamado de 'sanduíche de floema' e permite a introdução e observação de artrópodes, micróbios e outros organismos. Essa técnica resultou em uma melhor compreensão dos comportamentos alimentares, características da história de vida, reprodução, desenvolvimento e interações dos organismos dentro do floema das árvores. Os pontos fortes dessa técnica incluem o uso de materiais baratos, variabilidade no tamanho do sanduíche, flexibilidade para reabrir o sanduíche ou introduzir vários organismos através de orifícios perfurados e a preservação e manutenção da integridade do floema. O sanduíche de floema é uma excelente ferramenta educacional para descobertas científicas em cursos de ciências K-12 e laboratórios de pesquisa universitários.

O protocolo descrito acima irá permitir que um investigador observar os organismos que vivem no ambiente críptico por baixo da casca de uma árvore. Para ilustrar o uso desta técnica, descrevemos um estudo representativo de nosso laboratório que usa esta técnica. 12 Nesta experiência, sanduíches floema foram usados ​​para observar os efeitos de tratamentos acústicos na produção de descendência, distância de tunelamento, ea sobrevivência de besouros (Fig . 2E e 2F). A observação directa dos besouros, tornada possível pela utilização de uma sanduíche de floema, revelaram várias conclusões interessantes. Em primeiro lugar, nós gravamos distâncias tunelamento diárias, marcando a localização dos besouros no acrílico com um marcador a cada 24h. Este processo revelou diferenças significativas entre os tratamentos de som que teriam sido escondidos sem o sanduíche floema. Em seguida, observou-se uma redução na produção de ovos com determinados tratamentos de som. A natureza móvel do sanduíche floema permitiu eobservações gg para ser concluída sob um microscópio de dissecação, sem perturbar os besouros. Durante estas observações, capturado, que o comportamento do ovo besouro com uma câmera de alta definição acoplada ao microscópio. Outras observações notáveis ​​incluíram o assassinato de companheiros eo início de voo associado com tratamentos acústicos particulares. O ensaio sanduíche floema foi crucial para o nosso estudo das respostas besouro casca para tratamentos acústicos. Estas descobertas, o que seria impossível observar debaixo da casca de uma árvore, são contribuições valiosas para o desenvolvimento de opções de gestão para combater surtos casca do besouro. <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/50793/50793fig1highres.jpg" /> Figura 1. A) Ferramentas necessárias para remover a casca da árvore. Itens 1 e 2 são lâminas de tração usados ​​para raspar casca fora da árvore. Os itens 3 (machado) e 4 (pull-serras) são úteis para remover galhosárea de barbear próximo. B) O uso de lâmina empate para remover a casca de árvore. Observe a cor da luz do floema por baixo da casca avermelhada. <img alt="A Figura 2" src="/files/ftp_upload/50793/50793fig2highres.jpg" /> Figura 2. A) Remoção de floema após casca foi raspado de árvore. B) floema fresca armazenada em saco selado a vácuo. C) sanduíche Floema com grampos segurando as peças de acrílico em conjunto e Parafilm em torno das bordas para evitar a contaminação e dessecação de floema. D ) Besouro de casca buraco perto perfurado em acrílico. E) que usam o microscópio para observar sanduíche floema. exibição F) Vídeo de besouros dentro sanduíche floema. <img alt="A Figura 3" src="/files/ftp_upload/50793/50793fig3highres.jpg" /> Figura 3. <strong&gt; A) aquisição feromônio dos besouros em sanduíche floema. Air está sendo puxado através de tubos contendo Super-Q B) A gravação ea reprodução de som absorvente. Através de um transdutor piezo-elétrico (centro da foto) para besouros montanha de pinheiros dentro de sanduíche floema.

Fornecemos uma técnica para preservar o floema intacto da árvore e prepará-lo para observação. Criamos um aparelho chamado sanduíche de floema que permite a introdução e observação de artrópodes, micróbios e outros organismos que habitam os tecidos do floema.

Técnica de Estudos de Artrópodes e comunidades microbianas dentro Árvore Tecidos

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

O objetivo geral deste procedimento é criar um aparato chamado sanduíche AOL, que permite a introdução e observação de artrópodes, micróbios e outros organismos que habitam tecido em queda. O protocolo fornecido, às vezes com pequenas variações, tem sido uma ferramenta eficaz para pesquisadores e educadores estudarem besouros-da-casca, ácaros, nematoides e fungos. Primeiro, localiza-se uma árvore adequada.Em seguida, a casca é removida para expor a camada F flom. Após a remoção do flom, ele é levado de volta ao laboratório ou colocado entre duas placas de plexiglass. Uma vez selado e firmemente preso, você estará pronto para introduzir o organismo.Estudando-se, as árvores de pinheiro possuem uma camada de fluxo distinta que pode ter vários milímetros de espessura. O organismo em estudo determinará qual espécie de F fluxo será necessária. Aqui estamos em uma floresta de pinheiro Ponderosa no norte do Arizona.Estamos procurando uma árvore ideal que seja de tamanho moderado, tenha uma copa grande e poucas galhos inferiores. Aqui localizamos uma árvore adequada. Essas características provavelmente proporcionarão um fluxo espesso e mais fácil de remover, pois cada galho deve ser cortado ao redor ao se remover o fluxo.Aqui está um exemplo do equipamento que utilizamos para derrubar uma árvore. Lembre-se, derrubar uma árvore é perigoso e deve ser feito apenas por um indivíduo experiente e com os equipamentos de segurança adequados. Uma vez que a árvore esteja segura no solo, comece a remover os galhos.Em seguida, corte a tora em pedaços manejáveis, geralmente com cerca de seis a oito pés de comprimento, dependendo do diâmetro da árvore. Agora é a hora de remover a casca. Este é um exemplo das ferramentas que utilizamos para realizar essa tarefa.Os pedaços de gelo são indispensáveis durante esse processo; remova cuidadosamente a casca até surgirem sinais de branco ou marrom claro visíveis, indicando a camada de fluxo. É importante não escavar essa camada, pois isso reduz muito sua utilidade posterior. Após uma parte da árvore ser descascada adequadamente, use uma faca para cortar o pedaço de fulam.Puxe cuidadosamente esta camada para cima, cortando na parte inferior, se necessário. Observe que algumas árvores são mais fáceis de remover do que outras. A paciência é fundamental.Ao trabalhar com uma árvore difícil, o verão geralmente é o período do ano mais adequado para remover os frutos caídos. Depois de coletar de cinco a sete pedaços no saco plástico, transferimos isso para um saco para seladora a vácuo que levamos ao campo. É melhor armazenar esses sacos ligeiramente acima do ponto de congelamento.Agora concluímos a componente de campo deste Protocolo e voltamos ao laboratório para montar o sanduíche. Veja o que utilizamos para montar o sanduíche. Na parte inferior há várias placas de plexiglass e pares.O Paraform é usado para selar as bordas e grampos são utilizados para garantir que não haja espaço entre o plexiglás e o fluxo. Depois que as peças de plexiglás são cortadas e perfuradas, elas são então esterilizadas com etanol a 90% ou superior. Comece a montar o sanduíche removendo uma nova peça de fluxo e ajustando o tamanho.É apropriado para o pedaço de plexiglás. O vidro também pode ser usado em substituição ao plexiglás. Diferentes tamanhos de montagens podem ser feitos para adequar-se a diversos organismos e durações de experimento.Por exemplo, um par de besouros da casca pode utilizar um pedaço caído de quatro metros quadrados ao longo de um mês, mas precisará apenas de um pedaço de um metro quadrado se o estudo ocorrer em alguns dias. Observe que você também pode alterar o número de pontos de entrada no plexiglás para introduzir múltiplos organismos ao mesmo tempo. Isso é útil para observar competição ou predação entre espécies diferentes.Agora, utiliza-se parafina de duas polegadas para selar as bordas. Outros materiais podem ser usados para selar, como epóxi não condutivo ou vaselina. Em seguida, coloque um número suficiente de grampos ao redor da borda para prender firmemente o plexiglás à camada de fluxo.Agora estamos prontos para apresentar o organismo de estudo. Em nosso laboratório, frequentemente utilizamos o protocolo fornecido para observar besouros-cascudos e organismos associados. Ele oferece uma excelente oportunidade para observar aspectos como o comprimento diário de escavação de túneis e a produção de ovos, entre muitas outras coisas.Também podemos extrair as emissões químicas, besouros-fagulha, produzi-los e analisá-los posteriormente, ou podemos iniciar um tratamento e observar a resposta. Aqui, um besouro-da-casca está tentando se afastar de um tratamento acústico. Também observamos ácaros, nematoides e predadores de insetos utilizando este protocolo.Após assistir a este vídeo, você deverá ser capaz de construir um sanduíche de fluxo e modificá-lo para atender às necessidades específicas do seu estudo. Além de ser uma ferramenta de pesquisa eficaz, este procedimento é excelente para fins educacionais e de descoberta para estudantes de nível fundamental até o nível universitário.

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Research

JoVE Journal

Environment

Ambiente

Este vídeo ilustra a técnica para a extração de DNA das espécies de micróbios residentes no intestino posterior de cupins. A preparação de uma lâmina de montagem molhada, o que é útil para visualizar a comunidade microbiana do intestino também é ilustrado, e um tour pela espécie ambiente rico intestino é dado.

Extração de DNA a partir do Micróbios Gut da térmita (Zootermopsis Angusticollis) e Visualizing micróbios do intestino

Jared Leadbetter explica por que a comunidade microbiana do intestino de cupins é um excelente sistema para estudar as complexas interações entre os micróbios. A relação simbiótica existente entre o inseto hospedeiro e de degradação de lignocelulose micróbios do intestino é explicado, bem como os usos industriais desses micróbios de biomassa vegetal e de biocombustíveis gerando degradante.

Investigando a comunidade microbiana no intestino grosso da térmita - Entrevista

Aqui apresentamos um protocolo descrevendo como amostrar amostras de madeira para a avaliação geral de suas estruturas de crescimento. São descritas as técnicas de preparação e visualização macro e microscópicas necessárias para gerar conjuntos de dados anatômicos e dendroecológicos de madeira bem replicados e altamente resolvidos.

Uma perspectiva técnica em Modern Tree-anel Research - Como superar dendroecologia e Madeira anatômicas Desafios

Escavação de raízes de plantas do campo, bem como processamento de amostras em endosphere, rizosfera e solo são descritas em detalhes, incluindo os métodos de análise de dados e extração de DNA. Este papel é projetado para permitir que outros laboratórios de usar essas técnicas para o estudo do solo, endosphere e microbiomes da rizosfera.

Isolamento e análise de comunidades microbianas na rizosfera, solo e raízes em experiências de grama perene

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Método de preparação de amostras de microscópio eletrônico de varredura e transmissão para os apêndices do Besouro Woodboring

Nós descrevemos como quantificar artrópodes da moradia de folha selando as folhas e a extremidade das filiais em um saco, cortando e congelando o material ensacado, e enxaguando o material previamente congelado na água para separar artrópodes do substrato para a quantificação.

Um método para quantificar artrópodes da folhagem-habitação

Descrevemos uma abordagem semi-quantitativa de medir características das comunidades artrópodes corticolous (corifitas). Colocamos armadilhas pegajosas fabricadas comercialmente em boles de árvores para estimar abundância, comprimento total (um substituto para biomassa), riqueza e diversidade de Shannon para comparação entre espécies de árvores.

Quantificando corticolous artrópodes usando armadilhas pegajosas

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Este protocolo visa fornecer procedimentos detalhados para coleta, fixação e manutenção de amostras de plantas micoheterotróficas, aplicando diferentes técnicas de microscopia, como microscopia eletrônica de varredura e transmissão, microscopia de luz, confocal e fluorescência para estudar a colonização fúngica em tecidos e sementes geridas com fungos micorrizais.

Técnicas de Microscopia para Interpretação da Colonização Fúngica em Tecidos de Plantas Micoheterotróficas e Germinação Simbiótica de Sementes

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Microbiota de jardins de formigas Attine: visualizando uma paisagem microbiana por microscopia eletrônica de varredura

Aprenda a técnica do sanduíche de floema para estudar artrópodes e comunidades microbianas em tecidos de árvores. Este método permite observar besouros, ácaros, nematoides e fungos em ecossistemas florestais.

Técnica de Estudos de Artrópodes e comunidades microbianas dentro Árvore Tecidos

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