Name: A Single-fly Ensaio para comportamento de forrageamento em Drosophila (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-04T21:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Aprenda a quantificar mudanças comportamentais em Drosophila melanogaster causadas pela privação alimentar usando um ensaio automatizado de busca por odor. Este método rastreia a latência das moscas para localizar a fonte de alimento.

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Este trabalho foi apoiado por bolsas de investigação para JWW do Instituto Nacional de Saúde (R01DK092640) e National Science Foundation (0.920.668).

1. Fly Recolha e fome <ol><li> Rear as moscas experimentais sob condições de temperatura e umidade controladas (por exemplo, 21 ° C, 50-60% de umidade relativa) em um ciclo claro / escuro de 12 horas. </li><li> Colete feminino voa no dia da eclosão e colocá-los, juntamente com 4-5 machos, em novos frascos de alimentos (máximo de 30 por frasco). Idade voa de 2-5 dias. </li><li> Prepare as câmaras, fly fome. <ol><li> Empurrar um único tecido (4,8 x 8,4 polegadas) para a parte inferior de um frasco de plástico vazio. Molhar o tecido com água destilada. Use um objeto para empurrar para baixo sobre o tecido e esprema delicadamente o excesso de água. </li><li> Inverta o frasco para descartar a água extra. Deve haver água suficiente para manter as moscas hidratado e da câmara de fome úmido, mas não o suficiente para afogar as moscas. </li></ol></li><li> Transfira as moscas do frasco de comida em uma câmara de fome e ligar o frasco cerca de 18-24 horas antes do experimento começa. Armazenar ofrascos sob condições de temperatura e humidade controladas durante a noite até que o experimento começa no dia seguinte. </li></ol> 2. Preparação do Odor Alimentação <ol><li> Prepara-se uma solução de agarose a 1% através da adição de 0,1 g de agarose de baixa temperatura de fusão de 10 ml de água destilada em um balão de vidro. Aquecer a solução de agarose em um forno de microondas apenas até que comece a ferver, mas bem antes que ferve. <ol><li> Pare o microondas e agite o frasco uma vez. Repita este passo mais duas vezes até que a agarose foi completamente dissolvido. Manter a solução de agarose, num estado líquido, mantendo o frasco quente numa placa de aquecimento fixada em 50 ° C. </li></ol></li><li> Adicionar 990 mL da solução de agarose a 1% e 10 ml de vinagre de maçã para um tubo de 1,5 ml Eppendorf para fazer uma solução de 1% de vinagre de maçã. Vortex a solução até mista e coloque em uma incubadora de banho seco definido como 50 ° C. </li></ol> 3. Quarto Testing and Behavior Setup Câmara <ol><li&gt; Definir a sala de ensaios para as condições desejadas (por exemplo, temperatura e umidade). </li><li> Ligue o painel de LED (660 nm). </li><li> Lavar as peneiras e placas de teste com água quente e aquecê-los em um forno de secagem até que toda a umidade evapore. Arrefecer as peneiras e placas para baixo para a temperatura ambiente de testes antes dos experimentos iniciais. </li><li> Posicionar um prato raso na parte superior da placa difusora e enchê-lo com água para aumentar a humidade local e para mascarar a água na gota de agarose. </li><li> Posicione as peneiras sobre o prato de água. </li></ol> 4. Voar Carregando nas placas de teste Diagramas com especificações para placas de teste pode ser encontrada na seção de arquivos complementares. A placa de teste é feita de acrílico transparente e é composto por 6 arenas de teste. Um controle deslizante simples contém câmaras de exploração que permitem o carregamento mosca, a contenção temporária e lançamento simultâneo de 6 moscas em suas respectivas câmaras emo início da experiência. -Mira gravadas no centro de cada área na placa indicar onde odorantes deve ser pipetada. <ol><li> Insira os controles deslizantes para a placa de testes de acrílico. </li><li> Deslize suavemente o aspirador para o frasco após o tampão de algodão e permitir que cerca de 6 moscas para entrar no aspirator.it é fundamental para ser o mais suave possível em manuseá-los. Pode-se tirar proveito do comportamento da mosca fototáxico para induzir moscas a rastejar em direção ao aspirador, apontando a abertura do frasco para uma fonte de luz fraca. Se necessário, pode-se também aplicar sucção suave para aspirar aproximadamente 6 moscas do sexo feminino. </li><li> Inserir a extremidade do aspirador no primeiro orifício da placa de teste. Permitir uma única mosca passar para a cela e gentilmente avançar o controle deslizante para a frente para carregar uma mosca para o próximo buraco. Continue até que todos os 6 moscas ocupam celas da placa. </li><li> Pipetar 5 ul de solução de agarose de vinagre de cidra de maçã 1% directamente sobre o centro da crOSS-pêlos na face interior da placa de teste. </li></ol> 5. Posicionando a placa de teste <ol><li> Para centralizar a placa de teste, abra o arquivo chamado &quot;Posicionamento Tool.vi.&quot; &quot;LabVIEW VI para o posicionamento da ferramenta. vi podem ser encontrados na seção Arquivos Suplementar. Execute o arquivo, clicando na seta branca no canto superior esquerdo da tela. </li><li> Colocar a placa de teste no topo do crivo de modo a que a área de abertura voltada para o chão peneira e o alvo é o odor no tecto da placa. Alinhe a mira gravado em volta da placa de teste com a mira na tela do monitor. </li><li> Quando o alinhamento tenha sido concluída, abortar a execução clicando no ponto vermelho localizado perto do canto superior esquerdo do monitor. </li></ol> 6. Registre o Fly Posição durante o experimento <ol><li> Para acompanhar e registrar as coordenadas da mosca durante cada tentativa de busca de alimentos, abra o arquivo de software de aquisição de &quot;Fly Tracking - Seis Zones.vi &quot;LabVIEW VIs para&quot; Fly Tracking -. Seis Zones.vi &quot;pode ​​ser encontrado na seção Arquivos Suplementar Execute o arquivo, clicando na seta branca no canto superior esquerdo do monitor. . </li><li> Atribua um nome ao arquivo e clique em &quot;OK&quot;. </li><li> Avance os controles deslizantes nas câmaras de teste para liberar as moscas nas arenas de teste. Tenha cuidado para não mover as câmaras de teste, pois isso levará a alinhamento impróprio com coordenadas de software de análise. </li><li> Clique em &quot;Start&quot; (gravação começa) e garantir que a única fonte de luz na câmara de teste é o painel de LED a 660 nm. </li><li> Quando o julgamento for concluído, retire a peneira e câmara de comportamento. Levante a placa de testes da peneira e remover as moscas, submergindo a placa de gelo. Limpe suavemente a placa com água quente e remover todos os detritos de agarose. Colocar as placas de ensaio em uma estufa de secagem para remover a humidade. </li><li> Ventile a área de teste, rodando em um small fã durante cerca de 2 min. Gire o ventilador desligado e carregar o próximo grupo de moscas na próxima placa de teste. </li></ol> 7. Análise de Dados Utilizando Software &quot;Análise de Dados para Fly rastreamento em seis zonas&quot; podem ser encontrados na seção Arquivos Suplementar. Durante a aquisição de dados, coordena o programa de aquisição de registros de posição mosca individual para cada ponto de tempo em um arquivo de texto. A única câmera digital posicionada acima das placas de teste adquire imagens com uma taxa de quadros de 0,5 Hz. O programa de software de análise de &quot;Análise de Dados para a mosca-Tracking seis zonas&quot; extrai informações a partir desse arquivo de texto para a) calcular a velocidade média, b) determinar o ponto de tempo em que uma mosca localizado com sucesso a fonte odor, e c) construir janelas gráficas que permitem que o usuário vista: localização, distância da mosca voar a partir da fonte odor ao longo do tempo e velocidade média mosca ao longo do tempo. Ele também formata os dados para facilitar a exportação em um spreprograma adsheet. Nesta macro, a latência de pesquisa alimento é definida como o ponto temporal em que voa passar, pelo menos, 5 segundos dentro de um raio de 5 mm acima do centro da arena. <ol><li> Abra o arquivo de software de análise de &quot;Análise de Dados para Fly Tracking - seis zonas&quot;. Na aba &quot;Windows&quot;, clique em &quot;Create New Table&quot;. Repita este passo até seis mesas foram criadas. </li><li> Na guia &quot;macros&quot;, clique em &quot;Foodfinding&quot;. Um painel principal deve aparecer com as seguintes opções: Open Data Arquivo primas para layout; Open Data Arquivo primas para arquivo de dados; Fly Localização; Distância; velocidade; layout; FormatDataFile. </li><li> Para visualizar os dados brutos, sem acréscimo de valores em um arquivo de texto, clique em &quot;Abrir arquivo de dados brutos para o Layout.&quot; Localize e selecione o arquivo de dados experimental na janela do navegador que aparece. Clique em &quot;Abrir&quot;. </li><li> Clique em &quot;Fly Location&quot; para ver a localização de cada mosca em cada uma das seis arenas (seis parcelas XY retratando cada mosca &#39;s posição ao longo do tempo deve aparecer na tela). </li><li> Clique em &quot;Distância&quot; para ver a distância de cada mosca da fonte de odor (seis parcelas retratando distância da mosca da fonte de odor ao longo do tempo deve aparecer na tela). A linha horizontal em y 5 mm indica o limiar para o qual a mosca é considerado para ser localizado na fonte de alimento. </li><li> Clique em &quot;Speed&quot; para ver a velocidade média de cada mosca durante o julgamento (seis parcelas retratando a velocidade da mosca ao longo do tempo deve aparecer na tela). </li><li> Clique em &quot;Layout&quot; para exibir um layout com todos os localização mosca, distância, velocidade e gráficos, além de a velocidade média (durante os primeiros 50 seg) e latência de encontrar a fonte de odor para cada mosca (Figura 1). Para visualizar adequadamente a disposição, pode ser necessário ajustar as margens. Para fazer isso, primeiro clique na janela de layout. Sob a guia &quot;Arquivo&quot;, clique em &quot;Configurar Página para Layout.&quot; Repor as margens para0,2 polegadas e clique em &quot;OK&quot;. Imediatamente deixou de cada parcela localização é uma pequena mesa com os títulos de &quot;Speed&quot; e &quot;Latência&quot;. Os valores inseridos em cada ponto indicam a velocidade média em mm / seg e pesquisa de alimentos latência em segundos. Entradas em branco sob Latência indicam a mosca não conseguiu localizar a fonte de odor. Alimentação latência de pesquisa é definido como o ponto no tempo em que as moscas passou pelo menos 5 segundos dentro de um raio de 5 mm a partir do centro da câmara. </li><li> Para imprimir um layout, clique na área de layout (atualizações de layout para o arquivo atual). Clique em &quot;Arquivo&quot; e depois clique em &quot;Layout de impressão.&quot; </li><li> Para visualizar o próximo arquivo, basta clicar em &quot;Abrir Arquivo de Dados-prima para Layout.&quot; Clique no seguinte arquivo de dados brutos que você deseja ver e clique em &quot;OK&quot;. Clique na janela de Layout para atualizar a janela com o novo arquivo de dados. </li><li> As configurações podem ser salvos em um arquivo de experimento para uso posterior. </li></ol> 8. Exportar dados deo software de análise de dados para um programa de planilha <ol><li> Para exportar dados de velocidade e latência para cada arquivo, clique em &quot;Open Data Arquivo primas para arquivo de dados.&quot; Selecione um arquivo de dados experimentais e clique em &quot;Abrir&quot;. Uma nova janela do navegador aparecerá. </li><li> Na nova janela do navegador, clique com o botão direito em &quot;Novo&quot; e depois clique em &quot;Documento de texto.&quot; Nome do novo documento de texto. Selecione o arquivo de texto recém-nomeado e clique em &quot;Abrir&quot;. Ele armazena os dados do arquivo de dados brutos para o arquivo de texto. </li><li> Para exportar dados de outro arquivo, clique em &quot;Abrir Arquivo de Dados-prima para arquivo de dados.&quot; Clique em outro arquivo e clique em &quot;Abrir&quot;. Selecione o arquivo de texto a partir do passo 8.2). Continue esse processo para os arquivos de dados restantes que deseja exportar. </li><li> Uma vez que todos os arquivos de dados desejadas tenham sido adicionadas ao arquivo de texto, clique em &quot;Formato de Arquivo de Dados.&quot; Selecione o documento de texto usado para armazenar os dados dos passos anteriores e clique em &quot;Abrir&quot; (um novo window irá abrir automaticamente). </li><li> Crie um novo documento de texto na janela, atribuir um nome ao arquivo e clique em &quot;Salvar&quot;. Isso cria um arquivo de texto que contém o nome do arquivo, velocidade média, e latência para cada voar e pode ser importado para um programa de planilha. </li><li> Parcelas cumulativas são construídos a partir de dados sobre o número total de moscas que atingem o alvo odor de alimentos como uma função do tempo (Figura 3). </li><li> Conjuntos de dados experimentais são analisados ​​para significância estatística usando um teste z para proporções. </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDethier%2C+VG+%22The+hungry+fly+%3A+a+physiological+study+of+the+behavior+associated+with+feeding%22">The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding</a>. , Harvard University Press. (1976).</li>
<li>Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+facilitation+by+neuropeptide+signaling+mediates+odor-driven+food+search%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search.</a> Cell. 145, 133-144 (2011).</li>
<li>Root, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+presynaptic+gain+control+mechanism+fine-tunes+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A presynaptic gain control mechanism fine-tunes olfactory behavior.</a> Neuron. 59, 311-321 (2008).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+of+Drosophila+to+biogenic+levels+of+carbon+dioxide+depend+on+life-stage%2C+sex+and+olfactory+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context.</a> J. Exp. Biol. 209, 2739-2748 (2006).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 71, 708-712 (1974).</li>
<li>Fishilevich, E., Domingos, A. I., Asahina, K., Naef, F., Vosshall, L. B., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+behavior+mediated+by+single+larval+olfactory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis behavior mediated by single larval olfactory neurons in Drosophila.</a> Curr. Biol. 15, 2086-2096 (2005).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li>
<li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li>
<li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14, 341-351 (1995).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
</ol>

Os autores declaram que não há interesse financeiro concorrente.

Neste protocolo, descrevemos um procedimento passo-a-passo para o ensaio de comportamento de busca de alimentos. Além de odores alimentares relacionados com, mas também pode ser adaptada para o estudo da capacidade de voar para localizar outros objectos de odor. Por exemplo, ele pode ser aplicado para o estudo do comportamento de localização mate em moscas macho 3 Há várias considerações adicionais para este protocolo que vamos mencionar aqui em relação a este procedimento.: Em pr...

Unidos da fome promover dois tipos de comportamentos apetitivas: busca de alimentos e consumo de alimentos 1. Este ensaio comportamental simples é útil para o estudo de comportamentos quimiotáticos associados forrageamento 2,3. Especificamente, ele rastreia a posição da mosca, velocidade de caminhada e latência para localizar um alvo odor de alimentos. Latência de encontrar comida serve como métrica para medir as mudanças na sensibilidade do sistema de detecção de odor da mosca a jusante das alterações no seu estado appetitive interno. Uma versão manual deste ensaio foi utilizado anteriormente para mostrar a sinalização do receptor de GABA-B é importante para o comportamento odor localização em moscas adultas 3. A versão automatizada atual do ensaio foi fundamental para o estudo de como curto-neuropeptídeo F (SNPF) sinalização remodela o mapa olfativo em Drosophila e influências apetitivo comportamentos 2. O teste é realizado a uma temperatura e humidade ambiente escuro, controlado. Digitalcâmeras de vídeo definidas acima das placas de teste de acrílico transparente controlar moscas backlit pelo 660-nm iluminação LED. Informações da câmara é processada em tempo real por um computador estacionado próximo à área de testes. Nós usamos o software de aquisição de dados para gravar e salvar as coordenadas de posições voar durante o período de testes. Neste paradigma, o sujeito é liberado em uma arena que contém um odor de alimentos no centro, o objeto odor cria um gradiente de odor de alimentos dentro da arena, que induz o comportamento de busca de alimentos em tempo real. Um protocolo semelhante busca odor tem sido aplicado para o estudo de chemosensation em larvas Drosophila único 7. Enquanto outros ensaios comportamentais, tais como o de quatro campos olfatômetro 4,5 ou o t-labirinto 6 avaliar odor aversão ou atração comportamentos, este paradigma é o mais adequado para avaliar a sensibilidade e de quimiotaxia comportamentos olfativos. Vários principais vantagens acompanhar esta assay. Primeiro, ele permite a aquisição rápida de grandes conjuntos de dados, porque a coleta de dados e análise são principalmente automatizado. Em segundo lugar, este ensaio isola e mede o comportamento das moscas individuais, eliminando, assim, os sinais sociais olfativos que podem influenciar seus comportamentos. Em terceiro lugar, a simplicidade do protocolo e design experimental simples fazer o teste eficiente e fácil de ensinar aos outros. Além disso, este ensaio pode ser usado para investigar mais circuitos neurais subjacentes ao comportamento de busca de alimentos combinando-a com o grande conjunto de ferramentas genéticas disponíveis para Drosophila melanogaster 8. Expressão Targeted de transgenes que o silêncio ou excitar neurônios pode ser conseguido com ferramentas como o sistema GAL4-UAS, bem como o TS1 UAS-Shibire, UAS-tétano-toxina, e UAS-TRPA1 (B) transgenes 9-12.

<table><tbody><tr><td>Espectro</td><td></td> <td>de vinagre de maçã</td><td>disponível comercialmente</td></tr><tr><td>Agarose, Tipo VII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0701</td><td>baixa temperatura gelificante agarose</td></tr><tr>Placa <td></td> de<td>teste de acrílico</td><td>placa personalizada</td><td>contém 6 arenas. Cada arena tem 60 mm de diâmetro e 6 mm de altura. Consulte os diagramas de placas de teste para medições específicas.</td></tr><tr><td>LabVIEW V.8.5</td> Plataforma <td>776670-09</td> da <td>National Instruments</td><td>para programas: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi NOTA: "elapsed time.vi", "time into file.vi" e "two object detect.vi" são sub-rotinas incluídas que devem estar disponíveis para que o programa principal de aquisição de dados "FlyTracking--Six zones.vi" seja executado.</td></tr><tr><td>LabVIEW Vision 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software de aquisição LabVIEW Vision 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Builder AI 3.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro V.6</td><td>Wavemetric, Inc.</td><td></td><td>plataforma para macro: Análise de Dados para Rastreamento de Moscas--Seis Zonas</td></tr><tr><td>Basler scA1390-17fm</td><td>National Instruments</td><td>779980-01</td><td>Câmera Digital NOTA: driver para câmera disponível em lente Baslerweb.com</td></tr><tr><td>8 mm</td><td>National Instruments</td><td>780024-01</td><td>Lente para Câmera Digital Basler</td></tr><tr><td>Placa Difusora de Vidro Moído</td><td>Edmund Optics</td><td>personalizado</td><td>Difunde luz, 25 cm x 30 cm</td></tr><tr><td>US Std. No. 100</td><td>Fischer Scientific</td><td>04-881X</td><td>Peneira com abertura nominal de 150 &mu; m</td></tr><tr><td colspan="4">Opção de iluminação 1</td></tr><tr><td>LED retroiluminação LED 660 nm (20 cm x 20 cm)</td><td>Spectra West</td><td>BL47192</td><td>uma opção de iluminação mais simples, mas mais cara.</td></tr><tr><td>Fonte de alimentação para LED</td><td>Backlight Spectra West</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Opção de iluminação 2</td></tr><tr><td>660 nm LEDs</td><td>Superbrightleds</td><td>RL5R1330</td><td>Comprimento de onda 660 nm (aproximadamente 7 x 7 matriz de LED para um painel de 14,7 polegadas x 9,75 polegadas)</td></tr><tr><td>Fonte de alimentação DC linear</td><td>GW Instek</td><td>GPS-1830D</td><td>Fonte de alimentação para painel de LED</td></tr><tr><td>Placa de ensaio sem solda</td><td>Digikey</td><td>922354-ND</td><td>Placa de ensaio para LEDs</td></tr></tbody></table>

a single-fly ensaio para comportamento de forrageamento em drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

Para muitos animais, a fome promove mudanças no sistema olfativo de uma forma que facilita a busca de fontes de alimentos apropriados. Neste artigo de vídeo, descrevemos um método automatizado para medir o efeito de fome ou saciedade em olfativo comportamento de busca de alimentos dependente na fruta Drosophila melanogaster mosca adulta. Em uma caixa à prova de luz iluminado por uma luz vermelha que é invisível para as moscas de fruta, uma câmera ligada ao software de aquisição de dados personalizado monitora a posição de seis moscas simultaneamente. Cada mosca se limita a caminhar em arenas individuais contendo um odor de alimentos no centro. As arenas de ensaio repousar sobre um piso poroso que funciona para prevenir a acumulação de odor. A latência para localizar a fonte de odor, uma métrica que reflecte a sensibilidade olfactiva em diferentes estados fisiológicos, é determinada por análise de software. Aqui, discutimos os mecanismos críticos de executar este paradigma comportamental e abranger questões específicas sobre mosca loading, a contaminação odor, temperatura do ensaio, a qualidade dos dados e análise estatística.

O software de análise de dados e a disposição, um exemplo dos quais pode ser visto na Figura 1, são utilizados para avaliar o desempenho de cada mosca durante a sua 10 min ensaio de acordo com um conjunto de critérios de análise. Os seguintes critérios são utilizados para determinar se os dados de cada mosca serão utilizados para análise de dados e são projetados para eliminar as moscas que não são capazes de realizar a tarefa de busca de alimentos, devido a lesão, doença, estresse ou falta de motivação...

Neste artigo de vídeo, descrevemos um método automatizado para medir o efeito de fome ou saciedade em olfativo comportamento de busca de alimentos dependente na fruta Drosophila melanogaster mosca adulta.

A Single-fly Ensaio para comportamento de forrageamento em Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

O objetivo geral deste procedimento é quantificar as mudanças comportamentais desencadeadas pela privação alimentar na mosca adulta Salala Melanogaster. Isso é feito pelas primeiras moscas famintas por 18 a 24 horas. O segundo passo é carregar moscas individuais em câmaras de comportamento, cada uma contendo uma fonte de odor atraente em seu centro.Em seguida, um sistema de computador com uma câmera digital rastreia a posição de cada voo ao longo do tempo e registra. Suas coordenadas para posterior análise dos dados. A etapa final é determinar a latência de cada mosca para atingir a fonte de odor usando um software personalizado.Em última análise, este ensaio de comportamento de pesquisa de alimentos de alto rendimento pode ser usado para estudar a relação entre a função do circuito neural e as respostas comportamentais. A principal vantagem deste ensaio sobre o método existente, como os companheiros de equipe, é que ele quantifica o comportamento quimiotático em moscas individuais. Este método pode ajudar a responder a perguntas em neurobiologia, como quais circuitos neurológicos são importantes para o comportamento quimiotático e como esses circuitos neurológicos são moderados pe

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Neuroscience

Neurociência

Ensaios de comportamento para as funções de medição de locomoção, aprendizado e habilidades de memória...

Locomotor ensaio, Aprendizagem e Memória Os déficits no Drosophila Modelos de neurodegeneração

Drosophila melanogaster é um sistema modelo de genética e comportamentalmente tratável que tem sido usada para compreender a base molecular e celular de muitos processos biológicos importantes para mais de um século 1. Drosophila tem sido bem explorado para obter insights sobre a base genética do comportamento da mosca.

Métodos de Ensaio para Drosophila Comportamento

Este vídeo descreve um método simples para quantificar a locomoção da mosca e mostra o ensaio de escalada realizado. O ensaio de escalada com mosca é um teste geral da função motora que depende de uma resposta negativa da geotaxe.

Ensaio de escalada com mosca: um método para testar a locomoção geral em Drosophila melanogaster

As fêmeas de Drosophila escolhem entre substratos e selecionam locais atraentes para a postura de ovos. Este vídeo descreve um ensaio comportamental que testa sua tomada de decisão, chamado de ensaio de preferência de postura de ovos. O clipe em destaque demonstra o procedimento com uma configuração personalizada, que permite aos pesquisadores não apenas testar o comportamento de muitas fêmeas ao mesmo tempo, mas também é compatível com gravação de vídeo e configurações optogenéticas.

drosófila Ensaio de preferência de postura de ovos: um método para testar a tomada de decisão em moscas

Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar a evitação de indivíduos estressados. Este paradigma é poderoso, mas fácil de usar, e pode ser usado para avaliar a influência de genes e ambiente em um tipo de interação social em Drosophila melanogaster.

Ensaio simples para Quantificação de Prevenção Social Drosophila melanogaster

O Flywalk sistema de rastreamento automático é usado para alta resolução de quantificação do comportamento guiado por odor em Drosophila melanogaster.

De alta resolução Quantificação do Comportamento Odor-guiada em<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Usando a<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigm

Fornecemos um protocolo detalhado para um ensaio de comprimento de caminho de forrageamento de Drosophila melanogaster. Discutimos a preparação e manuseio de animais de teste, como realizar o ensaio e analisar os dados.

Forrageamento Protocolo Caminho de comprimento para<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larvas

Descrevemos aqui uma configuração comportamental e método de análise de dados para testar as respostas olfativas de até 100 moscas do vinagre (Drosophila melanogaster). Este sistema pode ser usado com estímulos olfativos únicos ou múltiplos e adaptável para ativação optogenética ou silenciamento de subconjuntos neuronais.

Comportamentos olfativos ensaiadas pelo monitoramento do computador de<em&gt; Drosophila</em&gt; Em um olfatômetro de quatro quadrantes

Apresentamos um protocolo para um ensaio de alimentação de duas opções para moscas. Este ensaio de alimentação é rápido e fácil de executar e é adequado não apenas para pesquisas de laboratório de pequena escala, mas também para telas comportamentais de alto rendimento em moscas.

Um ensaio rápido de preferência alimentar em Drosophila

O presente protocolo avalia a atividade locomotora de Drosophila rastreando e analisando o movimento de moscas em uma arena artesanal usando software de código aberto Fiji, compatível com plugins para segmentar pixels de cada quadro com base em gravação de vídeo de alta definição para calcular parâmetros de velocidade, distância, etc.

Uma técnica simples para avaliar a atividade locomotora em Drosophila

O Transtorno do Espectro do Autismo (TEA) está associado ao comportamento social e comunicativo prejudicado e ao surgimento de comportamento repetitivo. Para estudar a inter-relação entre genes de TEA e déficits comportamentais no modelo de Drosophila , cinco paradigmas comportamentais são descritos neste artigo para testar o espaçamento social, agressão, namoro, aliciamento e comportamento de habituação.

Paradigmas para Avaliação Comportamental no Modelo de Drosophila de Transtorno do Espectro do Autismo

Aprenda a quantificar mudanças comportamentais em Drosophila melanogaster causadas pela privação alimentar usando um ensaio automatizado de busca por odor. Este método rastreia a latência das moscas para localizar a fonte de alimento.

A Single-fly Ensaio para comportamento de forrageamento em Drosophila

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