Name: Ensaios para a identificação de novos antivirais contra a febre catarral ovina vírus (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-11T23:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 2 s
Description: Aprenda a identificar novos antivirais contra o vírus da febre catarral ovina (BTV) usando ensaios baseados em efeito citopático, dose-resposta e tempo de adição. Este método robusto permite avaliar eficácia antiviral e citotoxicidade.

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Este projecto foi apoiado pela concessão 1R03MH08127-01 e 7R03MH08127-02 do NIH para Q. Li, e pelos fundos IMPACTO do Departamento de Medicina da UAB para Q. Li. O apoio do Fundo Molette e da Universidade de Auburn é apreciado. Agradecemos também as assistências técnicas de Ms. Pulin Che eo Sr. Volodymyr Musiienko durante o curso do trabalho.

1. Células, vírus e a compostos antivirais <ol><li> Manter células BSR, de um derivado de rim de hamster bebé (BHK), células 10, em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) contendo 5% de soro fetal de vitelo (FCS), 100U/ml penicilina e 100 ug / ml de estreptomicina. </li><li> Para todos os três ensaios, células da placa em DMEM com 1% de FCS, 100U/ml penicilina e 100 ug / ml de estreptomicina, como anteriormente 5 optimizado. Este meio é referido como meio de ensaio para os três ensaios. </li><li> Incubar todas as células na incubadora a 37 ° C, com 5% de CO 2 e 80-95% de humidade. </li><li> Placa-purificar e propagar o tipo 10 BTV (BTV-10), tal como descrito anteriormente 8. Diluir BTV-10 em meio de ensaio para cada ensaios designados. </li><li> Dissolve-se todos os compostos de ensaio em DMSO para formar uma unidade com a concentração de 10 mM. Guarde os estoques a -20 ° C. </li><li> Dilui-se os compostos a concentrações desejadas, utilizando meio de ensaio para o designadod ensaios 2. </li></ol> 2. Ensaio baseado no CPE utilizando o kit CTG <ol><li> Células BSR semente em um de 384 poços de microplacas (preto, formato de 16 x 24), através de MicroFlo selecione distribuidor. A densidade de sementeira é de 5.000 células / poço, e o volume de sementeira é de 20 uL para análise de eficácia antiviral. </li><li> Incubar as células por 2-3 horas até obter células aderente à placa completamente. </li><li> Adicionar composto antiviral com uma concentração final de 10 uM a cada poço. Misturá-lo completamente. </li><li> Diluir a BTV título desejado e adicionar 5 mL de BTV com denotado MOI para cada poço. Para o controle bem, adicione 5 mL de meio de ensaio. Incubar as células infectadas durante 72 horas a 37 ° C, com 5% de CO 2 e 80-95% de humidade. </li><li> Aos 72 hpi, degelo e equilibrar tampão CTG CTG e o substrato liofilizado até à temperatura ambiente antes de usar. Reconstituir a solução homogénea reagente CTG misturando o liofilizado enzima / substrato e o reagente de tampão de acordo com a poinstruções e do fabricante. </li><li> Equilibrar as placas de ensaio a temperatura ambiente durante 15 min. </li><li> Adicionar um volume igual (25 ul) de reagentes de CTG para cada poço de um distribuidor. Após incubação durante 15 minutos à temperatura ambiente na escuridão, medir os sinais de luminescência utilizando um leitor multi-modo, com um tempo de integração de 0,1 seg. </li></ol> 3. Ensaio de dose-resposta <ol><li> As células BSR semente em uma de 384 poços de microplacas (preto; formato de 16 x 24), através de um dispensador, com uma densidade de sementeira de 5000 células / cavidade em um volume de 20 ul de semeadura para ensaio de eficácia antiviral e 25 uL para o ensaio de citotoxicidade, respectivamente . </li><li> Incubar as células durante 2-3 horas a 37 ° C, com 5% de CO 2 e 80-95% de humidade até que as células estão bem ligados à placa. </li><li> Processo de ensaio de um quarto da área da placa de 384 poços, para cada composto (equivalente a uma placa de 96 poços), como mostrado na Tabela 1. Alocar oito repetições para cada concentraçãonum único ensaio. Atribuir a primeira coluna como o controlo positivo sem adição de composto e vírus, e a última coluna (12 ª) como controlo negativo, adicionando apenas o vírus sem compostos. </li><li> Dilui-se os compostos para 50 uM em meio de ensaio e adicionado à coluna 2 nd a 20 ul / poço para o ensaio de eficácia antiviral. Misturar o composto cinco vezes usando uma pipeta de 8 canais semi-automático para uma concentração de 25 uM. </li><li> Usando uma pipeta semi-automática de 8 canais, transferir 20 ul de mistura em 2 ª coluna para a coluna seguinte (3 º), misturar bem para formar uma concentração de 12,5 | iM. Repetir este processo por meio da transferência de 20 uL de mistura de 3 a coluna para a coluna seguinte (4 mil) para formar uma outra diluição de duas vezes com uma concentração de 6,25 uM. Repita esta diluição em série de duas vezes até a 11 ª coluna. Aspirar e descartar 20 ul da mistura em 11 ª coluna após a adição e a mistura da amostraound. </li><li> Adicionar BTV-10, com base na MOI de 0,01, para cada poço da coluna 2 para a coluna 11 com um volume de 5 ul / poço. Após a adição do vírus, a concentração de composto final em cada coluna devem ser: 20 uM em coluna de 2, 10 ^ M na coluna 3, e continuou com uma diluição de duas vezes para baixo para a coluna 11 com uma concentração final de 0,04 uM. </li><li> Adicionar 5 mL de meio para a coluna como uma célula única de controlo (positivo) e 5 ul / poço de VFC à coluna 12, tal como infecção por vírus da febre catarral apenas controle (negativo). </li><li> Dilui-se os compostos para uma concentração inicial de 200 pM para o ensaio de citotoxicidade. Da mesma forma, adicionar 25 ul / poço de composto para a coluna 2 e 5x misturado com pipeta semi-automática de 8 canais para uma concentração de 100 uM. Não adicione BTV. </li><li> Realizar a diluição série de duas vezes por aspiração 25 mL da coluna 2 para a coluna vizinha 3, e continuou até a última coluna (12 º). Na coluna 12, depois de mistura, aspirado e descartar 25 ul de mixture. A concentração final na coluna 2 deve ser de 100 ^ M e a 12 ª coluna deve estar a 0,2 uM. A coluna 1 é o único controlo celular. </li><li> Para ambos os ensaios de citotoxicidade e eficácia antiviral, incubar as placas a 37 ° C, com 5% de CO 2 e 80-95% de humidade durante 72 horas pós-tratamento. Medir a viabilidade celular utilizando o kit CTG como descrito acima (protocolo passos 2,5-2,7). </li></ol> 4. Time-of-Adição (TOA) Assay <ol><li> Células BSR Semente da coluna 1-24 em 384 poços de microplacas (preto, formato de 16 x 24), através de um distribuidor em 5.000 células / poço e que o volume de semeadura é de 15 mL / poço. </li><li> Para cada composto, utilizam todos os vinte e quatro colunas com oito réplicas para cada ponto de tempo no meio da placa de 384 poços (Tabela 2). Atribuir coluna 1 como células só controle adicionando 10 ul / poço de meio de ensaio. Mark coluna 24, tal como infecção por vírus da febre catarral apenas controle (controle negativo) pela adição de 5 ul / poço de ensaio meio de umd 5 ul / poço de vírus a uma MOI de 0,01 e um volume final de 25 ul / poço. </li><li> Selecione as colunas de números pares da coluna 2-22 como antiviral coluna avaliação da eficácia em diferentes horas após a infecção (hpi). Nessas colunas, infectar as células com 5 mL / poço BTV no MOI de 0,01. No hpi diferente, também adicionar 5 uL / ​​poço composto diluído a cada poço para formar um volume final de 25 ul / poço. Para o denotado -2 e -1 hpi adicionar composto de células BSR antes da infecção BTV. Para 0 hpi, adicione o composto e BTV para a cultura ao mesmo tempo. </li><li> Em paralelo, designam as colunas com números ímpares de coluna de 3-23 como composto apenas controla, de que o composto foi adicionado em diferentes pontos de tempo como designado (-2, -1, 0, 1, 2, 4, 8, 16, 24, 48 hpi). Nestas colunas, adicionar 5 mL de meio / poço de ensaio e 5 pL / cavidade diluída composto para proporcionar um volume final de 25 ul / poço. </li><li> Após o tratamento, as células incubar a 37 ° C, 5% de CO 2, com 80-95% de humidade. </li><li> Determinar a viabilidade celular às 72 hpi usando o kit de CellTiter-Glo, tal como descrito anteriormente (protocolo de passos de 2,5-2,7). </li></ol> 5. Análise de Dados <ol><li> Processar todos os dados utilizando software apropriado primeira in-house com base nos sinais luminescentes obtidos através do leitor multi-modo. Determinar o valor médio (média), o desvio padrão (STDEV) de cada tratamento, bem como as variações de coeficientes (CV), que requer um valor não superior a 10%. </li><li> Transfira os dados processados ​​a partir do software acima para uma ferramenta de software bioestático e gráfico. Levar a cabo a análise de regressão não-linear para determinar os valores de EC 50 e CC 50. </li></ol>

<ol><li>Hemati, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bluetongue+virus+targets+conventional+dendritic+cells+in+skin+lymph%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Bluetongue virus targets conventional dendritic cells in skin lymph.</a> J. Virol. 83, 8789-8799 (2009).</li>
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<li>Van Loock, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+high-throughput+cellular+screening+assay+for+the+discovery+of+HIV-1+integrase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel high-throughput cellular screening assay for the discovery of HIV-1 integrase inhibitors.</a> J. Virol. Methods. 179, 396-401 (2012).</li>
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<li>Kirchmair, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+anti-viral+agents+using+molecular+modeling+and+virtual+screening+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Disord.+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Development of anti-viral agents using molecular modeling and virtual screening techniques.</a> Infect. Disord. Drug Targets. 11, 64-93 (2011).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Para a identificação inicial de visitas antivirais, um dos passos chave para a descoberta da droga anti-viral e de desenvolvimento consiste em desenvolver ensaios robustos, que inclui a selecção de um marcador quantificável, o desenvolvimento de um protocolo simples, obter sinais suficientes e menos do que 10% CV. A maioria das telas bioquímicos ou à base de células são projetados para fornecer um ponto de partida química baseada na mais robusta, ensaio simples e barato, devido à reprodutibilidade requerida no processo ...

BTV é um protótipo de cadeia dupla de RNA vírus do gênero Orbivirus, família Reoviridae. BTV é uma das doenças mais importantes da pecuária nacional, incluindo ovelhas, cabras, gado e outros animais domésticos, com a perda de 3.000 milhões dólares americanos / ano em todo o mundo 1,2. O exótico sorotipo BTV é um importante patógeno animal enumerados nas &quot;USDA alta Consequence Pecuária Patógenos&quot;. Recentemente, o re-emergente de BTV causou um grande surto da doença em bovinos e ovinos em vários países em todo o norte da Europa 3,4. Como resultado do seu significado económico e como um sistema modelo, BTV tem sido o objecto de estudos moleculares, genéticos e estruturais extensas, e várias vacinas têm sido desenvolvidos. No entanto, devido à falta de ensaios adequados para a descoberta da droga anti-viral, não existem medicamentos antivirais disponíveis contra BTV. Em recente pesquisa de alto rendimento campanha (HTS), utilizando o sistema BTV como modelo, nós developed, otimizado e validado um ensaio baseado em CPE para identificar potenciais antivirais de amplo espectro contra arbovírus 5. Ensaio baseado CPE é um ensaio bem conhecido que tem sido utilizado na descoberta de drogas anti-viral contra um número de vírus que induzida rápida e observável CPE / apoptose 5-7. No nosso sistema, infecção pós BTV, CPE é evidente em células de vertebrados, incluindo HeLa, BSR, e HEK 293T 8. CPE induzida por vírus da febre catarral pode ser monitorizada e quantificado usando vários métodos de detecção de viabilidade celular, incluindo o kit de reagente de viabilidade celular CellTiter Glo (kit CTG) 9. Este kit determina o número de células viáveis ​​em cultura com base na quantificação de ATP celular apresentado, o que sinaliza a presença de células vivas, metabolicamente activas. Sob condições otimizadas, o ensaio baseado em CPE aqui apresentado mostrou sua viabilidade com o protocolo de um passo &quot;misturar e medir&quot;, e flexibilidade com sinais luminescentes estáveis. Enquanto isso, os compostos tóxicos reducing viabilidade celular irá ser excluída no presente ensaio baseia-CPE. O ensaio baseado CPE mostrou a sua robustez e fiabilidade para a descoberta da droga anti-viral contra o vírus da febre catarral, e tem sido utilizada para rastrear o NIH Molecular Bibliotecas de Moléculas Pequenas Repository (MLSMR), que conduz à identificação de seis novos aglomerado de potencial composto principal antiviral (s ) 5. Quando um composto antiviral potencial foi identificado usando o ensaio baseado em CPE, que terá de ser submetida ao ensaio de dose-resposta de dez concentração para determinar o intervalo de eficácia antiviral e citotoxicidade 2. A eficácia antiviral, representada como a concentração inibidora 50% (IC50) ou a concentração eficaz 50% (CE 50), é a concentração de uma droga que inibe a CPE induzida por vírus a meio caminho entre a linha de base e no máximo. A citotoxicidade dos antivirais, ou seja, a concentração de 50% de citotoxicidade (CC 50), é a concentraçãode um fármaco induzir 50% de citotoxicidade entre a linha de base e no máximo. O índice selectivo (SI), denotada como 50% de Si (SI 50) é calculado a partir de CC50 / IC 50, que determina a especificidade do anti-viral contra a CPE induzida por vírus. A IC50 (ou EC50), CC 50 e SI 50 valores são medidas importantes para determinar se um composto antiviral é potente e selectivo para o desenvolvimento de drogas. Quando um antiviral mostrou nenhuma toxicidade manifesta in vitro, no entanto, impedido de vírus induzido CPE e o ciclo de vida viral produtiva, é importante caracterizar a sua MOA 2. Iniciamos tal caracterização através da realização de ensaio ToA para determinar a possível etapa (s) do ciclo de vida viral que é afetada pelo antiviral. Geralmente, composto antiviral foram adicionados às células em diferentes épocas pré-ou pós-infecção de vírus. Se os antivirais foram adicionados às células infectadas pôr ao seu alvo step durante o curso da infecção, ela iria resultar em menor actividade, quando comparada com a que foi adicionada antes do passo. Assim, o estudo ToA é crítico para a determinação da eficácia anti-viral de um composto, e o seu alvo potencial, quer no ciclo de vida viral ou a máquina hospedeira envolvidas no ciclo de vida viral. Para todos os três ensaios, a viabilidade celular foi determinada utilizando o kit CTG seguindo as instruções do fabricante 5. Este sistema de detecção emite sinais de luminescência adequadas que poderiam ser analisadas por diversos softwares em casa. Cada ensaio foi validado e executada, pelo menos, em triplicado, com oito réplicas. Para todos os dados obtidos, três parâmetros, incluindo o valor médio (AVE), o desvio padrão (STDEV), e variação de co-eficiente (CV) foram analisados ​​para determinar a robustez do ensaio. Uma vez que a robustez do ensaio foi determinado, os dados irão ser ainda analisada e representada usando vários biostatics e graficaferramentas c 2.

<table><tbody><tr><td>Meio DMEM</td><td>Gibco</td><td>1134218</td><td>Para cultura</td></tr><tr><td>de células FBS</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Para cultura de células</td></tr><tr><td>0,05% Tripsina-EDTA</td><td>Gibco</td><td>1000185</td><td>Para cultura de células</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gbico</td><td>1049769</td><td>Para cultura de células</td></tr><tr><td>Kit CellTiter-Glo (CTG)</td><td>Promega</td><td>TB288</td><td>Para medição de viabilidade celular</td></tr><tr><td>70% etanol</td><td>Fisher</td><td>S25309B</td><td>Diluído a partir de 95%</td></tr> <tr><td>de compostos huashil antivirais</td><td>NIH MLSMR e síntese</td><td></td><td></td>de novo</tr><tr><td>BTV-10</td><td>ATCC</td><td>VR-187</td><td></td></tr><tr><td>BSR célula</td><td>Desenvolvido internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leitor de microplacas multimodo Synergy-II</td><td>BioTek</td><td></td><td>Para leitura de sinal luminescente</td></tr><tr><td>MicroFlo selecione dispensador</td><td>BioTek</td><td></td><td>Adição de células, vírus e reagentes</td></tr><tr><td>Microplaca de fundo plano de 384 poços</td><td>CORNING</td><td>28908031</td><td>Para cultura de células</td></tr><tr><td>Software Gen. 5</td><td>BioTek</td><td></td><td>Para análise de saídas de leitura do leitor de microplacas multimodo Synergy-II</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 5</td><td>GraphPad</td><td>Versão 5</td><td>Para análise biostática e plotagem</td></tr></tbody></table>

ensaios para a identificação de novos antivirais contra a febre catarral ovina vírus

Assays for the Identification of Novel Antivirals against Bluetongue Virus

Para identificar potenciais antivirais contra BTV, temos desenvolvido, otimizado e validado três ensaios aqui apresentados. O ensaio baseado CPE foi o primeiro ensaio foi desenvolvido para avaliar se um composto mostrou qualquer eficácia antiviral e foram utilizados para rastrear o composto biblioteca grande. Enquanto isso, a citotoxicidade dos antivirais podem também ser avaliadas utilizando o ensaio baseado em CPE. O ensaio dose-resposta foi concebido para determinar a gama de eficácia para o antiviral seleccionado, isto é, 50% da concentração inibitória (IC50), ou a concentração eficaz (EC 50), bem como a sua gama de citotoxicidade (CC 50). O ensaio ToA foi utilizado para o estudo inicial Moa para determinar o mecanismo subjacente dos novos antivirais durante BTV ciclo de vida viral ou o possível efeito sobre acolhimento maquinaria celular. Estes ensaios são essenciais para a avaliação da eficácia antiviral no sistema de cultura de células, e têm sido usados ​​para nossas pesquisas recentes levamção para a identificação de uma série de novos medicamentos antivirais contra BTV.

1. Eficácia antiviral de composto O ensaio de ECP de base celular foi desenvolvido, optimizado e validado in vitro utilizando o kit à base de CTG luminescente para identificar novos medicamentos antivirais contra BTV como descrito anteriormente de 2,5. O ensaio de resposta de dez dose foi empregada para reflectir a eficácia antiviral e citotoxicidade de um composto de chumbo identificados medindo o número de células metabolicamente viáveis ​​em cultura com base na quantifica...

Três ensaios, incluindo o efeito citopático (CPE) baseado em ensaio, o ensaio de dose-resposta e (TOA) ensaio de Tempo-de-adição ter sido desenvolvido, optimizado e validado e utilizado para identificar novos medicamentos antivirais contra o vírus da febre catarral (VFC), bem como para determinar o possível mecanismo de ação-de-(MOA) para antivirais recentemente identificados.

Ensaios para a identificação de novos antivirais contra a febre catarral ovina vírus

To identify potential antivirals against BTV, we have  developed, optimized and validated three assays presented here. The CPE-based  assay was the first ...

O objetivo geral deste procedimento é identificar e caracterizar antivirais de pequenas moléculas contra o vírus da língua azul ou BTV usando o ensaio de viabilidade celular baseado em CPE. Isso é feito primeiro rastreando uma biblioteca de compostos antivirais usando o ensaio baseado em efeito citopático ou CPE com o reagente de brilho de título celular. Em seguida, a eficácia antiviral é confirmada e a citotoxicidade dos antivirais selecionados é avaliada usando o ensaio de resposta à dose.Finalmente, o ensaio de tempo de adição é realizado para determinar o possível estágio do ciclo de vida viral de antivirais selecionados, levando aos possíveis mecanismos de ação. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram novos antivirais com CIE antiviral potente e baixa citotoxicidade com base no ensaio de resposta à dose e no ensaio de tempo de adição. Portanto, a principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como o ensaio TCI D 50 em um ensaio de placa, é que essa técnica fornece um método sensível, robusto e altamente reprodutivo no método mensurável para rastrear e categorizar antivírus contra um determinado vírus, incluindo o vírus do glúten, que induz C

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Um método simples blot slot foi desenvolvido para a quantificação da gripe hemaglutinina e neuraminidase viral utilizando anticorpos universal, direccionado para suas seqüências mais conservadas identificados através de análises de bioinformática. Esta abordagem inovadora pode fornecer uma alternativa útil para determinação quantitativa de todos os hemaglutinina e neuraminidase viral.

Análise quantitativa de todos Influenza Tipo A Hemaglutininas Virais e neuraminidases usando anticorpos Universal em Ensaios Blot simples slot

Aqui, apresentamos um protocolo que examina etapas específicas da entrada viral para identificar e avaliar novos agentes antivirais.

No início virais Ensaios de entrada para a identificação e avaliação de compostos antivirais

Aqui, apresentamos os protocolos para identificar imunomoduladores 1) vírus-codificado que promovem a replicação de arbovírus e fatores do hospedeiro 2) eucariota que restringem a replicação de arbovírus. Esses métodos baseados em fluorescência e luminescência permitem aos investigadores para rapidamente obter leituras quantitativas de replicação de arbovírus em simplistas ensaios com baixa relação sinal-ruído.

Arbovírus infecções como ferramentas de triagem para a identificação de fatores Antiviral Viral de imunomoduladores e Host

Este protocolo introduz um procedimento de funcionamento padrão do laboratório para o teste diagnóstico de antígenos do lyssavirus nos bastões em Formosa.

Procedimento de funcionamento padrão para a vigilância do Lyssavirus da população do bastão em Formosa

Um Pan-lyssavirus Nested transcrição reversa da polimerase em cadeia foi desenvolvida para detectar especificamente todos os lissavírus conhecidos. A validação utilizando amostras cerebrais da raiva de diferentes espécies animais mostrou que este método tem sensibilidade e especificidade equivalentes ao teste padrão-ouro de anticorpos fluorescentes e pode ser utilizado para o diagnóstico rotineiro da raiva.

Avaliação de uma reação em cadeia da polimerase de transcrição reversa universal aninhada para a detecção de lissavírus

Aqui descrevemos uma imunocaptura indireta do sanduíche ELISA para determinar o conteúdo de glicoproteína imunogênica em vacinas antirrábicas. Este teste usa um anticorpo monoclonal neutralizante (mAb-D1) reconhecendo aparadores de glicoproteína. É uma alternativa ao teste in vivo NIH para acompanhar a consistência da potência vacinal durante a produção.

Teste in vitro ELISA para avaliar a potência da vacina antirrábica

Este RT-PCR tempo real usando a tintura intercalando de dsDNA é apropriado diagnosticar infecções do lyssavirus. O método começa com o RNA extraído da raiva suspeita de amostras ante mortem ou post-mortem, detalhando a preparação da mistura mestra, adição de RNA, configuração da máquina em tempo real e interpretação correta dos resultados.

Tempo real RT-PCR do Pan-lyssavirus para o diagnóstico da raiva

O objetivo do protocolo é ilustrar os diferentes ensaios relativos à entrada viral que podem ser utilizados para identificar os inibidores da entrada viral do candidato.

Uso de ensaios de entrada viral e análise de ancoragem molecular para a identificação de candidatos antivirais contra coxsackievirus a16

Apresentamos um protocolo completo para o diagnóstico pós-morte da raiva animal em condições de campo usando um teste de diagnóstico imunocromatográfico rápido (RIDT), desde a amostragem da biópsia cerebral até a interpretação final. Também descrevemos outras aplicações usando o dispositivo para análise molecular e genotipagem viral.

Teste de diagnóstico imunocromatográfico rápido pós-morte de campo para configurações limitadas de recursos com outras aplicações moleculares

Neste trabalho, descrevemos os protocolos usados em ensaios baseados em enzimas cílicas e virais para triagem de inibidores da replicação do vírus Zika em um formato de triagem de alto rendimento.

Ensaios antivirais de alta produtividade para tela para inibidores da replicação do vírus Zika

Este artigo descreve a metodologia para gerar partículas pseudotipadas de SARS-CoV-2 usando um sistema repórter de luciferase e seu uso para identificar inibidores de entrada. Esses protocolos são demonstrados usando dois diferentes inibidores de entrada, uma proteína de fusão humana recombinante ACE2-Fc e o composto de pequenas moléculas arbidol.

Procedimentos para a Identificação de Inibidores de Entrada do SARS-CoV-2 como Potenciais Antivirais Utilizando Pseudovírus Baseados em MLV

Aprenda a identificar novos antivirais contra o vírus da febre catarral ovina (BTV) usando ensaios baseados em efeito citopático, dose-resposta e tempo de adição. Este método robusto permite avaliar eficácia antiviral e citotoxicidade.

Ensaios para a identificação de novos antivirais contra a febre catarral ovina vírus

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