Manutenção de Drosophila
A pesquisa bem sucedida de Drosophila melanogaster depende da manutenção correta e da criação deste valioso organismo modelo. O vídeo a seguir discutirá as etapas necessárias para fornecer nutrição adequada, moradia e manuseio da mosca.
Embora comumente conhecida como mosca-das-frutas, Drosophila melanogaster na verdade subsiste nos microrganismos, como a levedura, que crescem na fermentação de frutas. No laboratório, a dieta da mosca é modificada para fins práticos. Várias receitas estão disponíveis, e todas contêm os componentes essenciais: açúcar e levedura. A seguinte receita é da Universidade de Indiana em Bloomington, famosa por sua vasta variedade de estoques de moscas. Consiste em: água estéril, levedura, farinha de soja, farinha de milho amarela, ágar para textura, xarope de milho e ácido propiônico para inibir o mofo e o crescimento bacteriano. Esses ingredientes são combinados, aquecidos, mexidos e, em seguida, distribuídos em frascos de carcaça de plástico usando uma bomba. Depois de preenchidos, os frascos são plugados com um top de algodão, embrulhados e resfriados a 4 °C. Uma vez solidificado, o alimento é esterilizado via autoclavagem.
Agora que aprendemos um pouco sobre o que as moscas comem, vamos dar uma olhada onde elas vivem e como elas são tratadas.
Uma variedade de contêineres são usados para abrigar moscas. Os frascos são usados para manutenção de moscas e contêm de forma ideal 50-100 adultos. Garrafas são usadas para culturas maiores e abrigam 300-600 moscas adultas. As incubadoras controlam o meio ambiente e são capazes de guardar centenas de frascos e garrafas. As condições normais de armazenamento para moscas são de 25 °C e 60-65% de umidade relativa.
Ao trabalhar com moscas, é importante praticar rotulagem e documentação adequadas, e manter um ambiente limpo para manter a integridade das linhas de mosca e experimentos. Um recipiente deve ser trocado quando cerca de metade das pupas se escorreram ou deixaram o invólucro pupal. As cápsulas parecerão claras.
FYI, o estágio pupal ocorre entre os estágios larval e adulto, e é o momento em que as larvas incubam e se desenvolvem em um adulto. Para identificar as cápsulas pupais como claras, segure o recipiente até uma fonte de luz e inspecione a pupa.
As moscas são transferidas para frascos com mídia fresca — um nome chique para comida de mosca — através de um processo conhecido como "virar moscas". Antes de virar moscas, inspecione a mídia em busca de integridade. Moscas não podem sobreviver com alimentos rachados com ressecamento ou contaminados com mofo ou bactérias.
Para virar moscas, primeiro, toque o frasco de mosca suavemente no balcão para derrubar moscas dos lados do frasco. Em seguida, remova rapidamente a rolha, e inverta as moscas do velho recipiente rapidamente em um novo. Este processo é feito rapidamente, para evitar que as moscas escapem ou sejam esmagadas pela rolha, e para evitar que moscas soltas entrem no frasco durante a capotagem.
Embora a lança de moscas seja o método preferido para a transferência em massa de Drosophila, a anesthetização é necessária para a triagem de moscas. Dois métodos de anestesia serão discutidos aqui: refrigeração e uso de dióxido de carbono. Para esfriar as moscas coloque a cultura em um congelador de -20 °C por 8-12 minutos. Em seguida, coloque moscas em um espaço de trabalho frio e plano para seleção. As moscas também podem ser anestesiadas usando frio, resfriando-as diretamente em uma superfície congelada.
O dióxido de carbono é um método preferido para a anestesia porque não causa mortalidade aguda em moscas ou perigo para o pesquisador. O sistema de entrega de CO2 é composto: de um tanque de CO2; um tubo conectado a uma agulha, para anestesiar moscas em frascos e garrafas; e um tubo conectado a uma placa de CO2 para análise sob o microscópio.
Para anestesiar moscas, insira a agulha de CO2 através da rolha. Alternativamente, bata no recipiente em uma superfície, remova a parada e inverta rapidamente as moscas em uma placa de CO2, mantendo uma vedação fechada até que as moscas fiquem imóveis. Usando um pincel ou fórceps, mova suavemente as moscas para o novo recipiente.
Para descartar moscas indesejadas, despeje-as em um necrotério de moscas, que consiste em uma grande garrafa cheia de isopropanol ou etanol e óleo mineral coberto com um funil.
Agora que vimos como as moscas são mantidas e manuseadas em laboratório, vamos dar uma olhada em como as condições de moradia e alimentação são modificadas para diferentes experimentos.
Alguns experimentos requerem habitação alternativa para conter uma maior quantidade de moscas.
Neste experimento, o pesquisador usa uma gaiola da população de moscas para coletar uma grande quantidade de embriões. Uma gaiola da população de moscas é clara, caixa de plástico capaz de segurar milhares de moscas. O pesquisador libera as moscas desejadas de várias garrafas para a gaiola da população de moscas, em seguida, coloca placas de ágar na gaiola para coletar embriões.
Alguns experimentos exigem a manipulação da dieta de moscas.
Neste experimento, o pesquisador quer observar a resposta de fuga de moscas transgênicas que expressam um canal de íon ativado pela luz em neurônios que regulam a resposta de fuga das moscas. A dieta Drosophila é suplementada com "toda trans-retinal", que é um cofator para este canal e permite que ele funcione. Isso é feito derretendo a comida e adicionando o reagente. A mosca é então exposta à luz azul que ativa o canal e induz a resposta de fuga, e o tempo levado para voar medido.
Uma variedade de condições de moradia e manuseio podem ser manipuladas para experimentação.
Neste experimento, uma elaborada "torre de poder" é criada para estudar os efeitos do exercício em Drosophila. A torre de energia é uma máquina que continuamente sobe e cai, aproveitando a resposta natural da mosca para se mover para cima, contra a gravidade, que é conhecida como "geotaxis negativas".
O desempenho das moscas exercidas na torre de potência é medido usando um ensaio Geotaxis Negativo Rápido Iterativo, ou ensaio RING para abreviar. Moscas em frascos vazios são colocadas na frente de uma câmera. Os frascos são tocados, e as distâncias subidas são registradas. Este experimento mostra que, em comparação com um exercício de grupo controle, teve um impacto positivo na atividade ao longo do tempo.
Este vídeo da JoVE cobriu a manutenção e a criação de Drosophila melanogaster. Depois de assistir a este vídeo, você deve ser capaz de preparar mídia de comida voadora, identificar adequadamente a carcaça apropriada, virar moscas e realizar experimentos simples. Obrigado por assistir!
Drosophila melanogaster, comumente conhecida como moscas-das-frutas, é um organismo modelo frequentemente usado para pesquisas em ciências da vida. Em…
A pesquisa bem sucedida de Drosophila melanogaster depende da manutenção correta e da criação deste valioso organismo modelo. O vídeo a seguir discutirá as etapas necessárias para fornecer nutrição adequada, moradia e manuseio da mosca.
Embora comumente conhecida como mosca-das-frutas, Drosophila melanogaster na verdade subsiste nos microrganismos, como a levedura, que crescem na fermentação de frutas. No laboratório, a dieta da mosca é modificada para fins práticos. Várias receitas estão disponíveis, e todas contêm os componentes essenciais: açúcar e levedura. A seguinte receita é da Universidade de Indiana em Bloomington, famosa por sua vasta variedade de estoques de moscas. Consiste em: água estéril, levedura, farinha de soja, farinha de milho amarela, ágar para textura, xarope de milho e ácido propiônico para inibir o mofo e o crescimento bacteriano. Esses ingredientes são combinados, aquecidos, mexidos e, em seguida, distribuídos em frascos de carcaça de plástico usando uma bomba. Depois de preenchidos, os frascos são plugados com um top de algodão, embrulhados e resfriados a 4 °C. Uma vez solidificado, o alimento é esterilizado via autoclavagem.
Agora que aprendemos um pouco sobre o que as moscas comem, vamos dar uma olhada onde elas vivem e como elas são tratadas.
Uma variedade de contêineres são usados para abrigar moscas. Os frascos são usados para manutenção de moscas e contêm de forma ideal 50-100 adultos. Garrafas são usadas para culturas maiores e abrigam 300-600 moscas adultas. As incubadoras controlam o meio ambiente e são capazes de guardar centenas de frascos e garrafas. As condições normais de armazenamento para moscas são de 25 °C e 60-65% de umidade relativa.
Ao trabalhar com moscas, é importante praticar rotulagem e documentação adequadas, e manter um ambiente limpo para manter a integridade das linhas de mosca e experimentos. Um recipiente deve ser trocado quando cerca de metade das pupas se escorreram ou deixaram o invólucro pupal. As cápsulas parecerão claras.
FYI, o estágio pupal ocorre entre os estágios larval e adulto, e é o momento em que as larvas incubam e se desenvolvem em um adulto. Para identificar as cápsulas pupais como claras, segure o recipiente até uma fonte de luz e inspecione a pupa.
As moscas são transferidas para frascos com mídia fresca — um nome chique para comida de mosca — através de um processo conhecido como "virar moscas". Antes de virar moscas, inspecione a mídia em busca de integridade. Moscas não podem sobreviver com alimentos rachados com ressecamento ou contaminados com mofo ou bactérias.
Para virar moscas, primeiro, toque o frasco de mosca suavemente no balcão para derrubar moscas dos lados do frasco. Em seguida, remova rapidamente a rolha, e inverta as moscas do velho recipiente rapidamente em um novo. Este processo é feito rapidamente, para evitar que as moscas escapem ou sejam esmagadas pela rolha, e para evitar que moscas soltas entrem no frasco durante a capotagem.
Embora a lança de moscas seja o método preferido para a transferência em massa de Drosophila, a anesthetização é necessária para a triagem de moscas. Dois métodos de anestesia serão discutidos aqui: refrigeração e uso de dióxido de carbono. Para esfriar as moscas coloque a cultura em um congelador de -20 °C por 8-12 minutos. Em seguida, coloque moscas em um espaço de trabalho frio e plano para seleção. As moscas também podem ser anestesiadas usando frio, resfriando-as diretamente em uma superfície congelada.
O dióxido de carbono é um método preferido para a anestesia porque não causa mortalidade aguda em moscas ou perigo para o pesquisador. O sistema de entrega de CO2 é composto: de um tanque de CO2; um tubo conectado a uma agulha, para anestesiar moscas em frascos e garrafas; e um tubo conectado a uma placa de CO2 para análise sob o microscópio.
Para anestesiar moscas, insira a agulha de CO2 através da rolha. Alternativamente, bata no recipiente em uma superfície, remova a parada e inverta rapidamente as moscas em uma placa de CO2, mantendo uma vedação fechada até que as moscas fiquem imóveis. Usando um pincel ou fórceps, mova suavemente as moscas para o novo recipiente.
Para descartar moscas indesejadas, despeje-as em um necrotério de moscas, que consiste em uma grande garrafa cheia de isopropanol ou etanol e óleo mineral coberto com um funil.
Agora que vimos como as moscas são mantidas e manuseadas em laboratório, vamos dar uma olhada em como as condições de moradia e alimentação são modificadas para diferentes experimentos.
Alguns experimentos requerem habitação alternativa para conter uma maior quantidade de moscas.
Neste experimento, o pesquisador usa uma gaiola da população de moscas para coletar uma grande quantidade de embriões. Uma gaiola da população de moscas é clara, caixa de plástico capaz de segurar milhares de moscas. O pesquisador libera as moscas desejadas de várias garrafas para a gaiola da população de moscas, em seguida, coloca placas de ágar na gaiola para coletar embriões.
Alguns experimentos exigem a manipulação da dieta de moscas.
Neste experimento, o pesquisador quer observar a resposta de fuga de moscas transgênicas que expressam um canal de íon ativado pela luz em neurônios que regulam a resposta de fuga das moscas. A dieta Drosophila é suplementada com "toda trans-retinal", que é um cofator para este canal e permite que ele funcione. Isso é feito derretendo a comida e adicionando o reagente. A mosca é então exposta à luz azul que ativa o canal e induz a resposta de fuga, e o tempo levado para voar medido.
Uma variedade de condições de moradia e manuseio podem ser manipuladas para experimentação.
Neste experimento, uma elaborada "torre de poder" é criada para estudar os efeitos do exercício em Drosophila. A torre de energia é uma máquina que continuamente sobe e cai, aproveitando a resposta natural da mosca para se mover para cima, contra a gravidade, que é conhecida como "geotaxis negativas".
O desempenho das moscas exercidas na torre de potência é medido usando um ensaio Geotaxis Negativo Rápido Iterativo, ou ensaio RING para abreviar. Moscas em frascos vazios são colocadas na frente de uma câmera. Os frascos são tocados, e as distâncias subidas são registradas. Este experimento mostra que, em comparação com um exercício de grupo controle, teve um impacto positivo na atividade ao longo do tempo.
Este vídeo da JoVE cobriu a manutenção e a criação de Drosophila melanogaster. Depois de assistir a este vídeo, você deve ser capaz de preparar mídia de comida voadora, identificar adequadamente a carcaça apropriada, virar moscas e realizar experimentos simples. Obrigado por assistir!
A pesquisa bem sucedida de Drosophila melanogaster depende da manutenção correta e da criação deste valioso organismo modelo. O vídeo a seguir discutirá as etapas necessárias para fornecer nutrição adequada, moradia e manuseio da mosca.
Embora comumente conhecida como mosca-das-frutas, Drosophila melanogaster na verdade subsiste nos microrganismos, como a levedura, que crescem na fermentação de frutas. No laboratório, a dieta da mosca é modificada para fins práticos. Várias receitas estão disponíveis, e todas contêm os componentes essenciais: açúcar e levedura. A seguinte receita é da Universidade de Indiana em Bloomington, famosa por sua vasta variedade de estoques de moscas. Consiste em: água estéril, levedura, farinha de soja, farinha de milho amarela, ágar para textura, xarope de milho e ácido propiônico para inibir o mofo e o crescimento bacteriano. Esses ingredientes são combinados, aquecidos, mexidos e, em seguida, distribuídos em frascos de carcaça de plástico usando uma bomba. Depois de preenchidos, os frascos são plugados com um top de algodão, embrulhados e resfriados a 4 °C. Uma vez solidificado, o alimento é esterilizado via autoclavagem.
Agora que aprendemos um pouco sobre o que as moscas comem, vamos dar uma olhada onde elas vivem e como elas são tratadas.
Uma variedade de contêineres são usados para abrigar moscas. Os frascos são usados para manutenção de moscas e contêm de forma ideal 50-100 adultos. Garrafas são usadas para culturas maiores e abrigam 300-600 moscas adultas. As incubadoras controlam o meio ambiente e são capazes de guardar centenas de frascos e garrafas. As condições normais de armazenamento para moscas são de 25 °C e 60-65% de umidade relativa.
Ao trabalhar com moscas, é importante praticar rotulagem e documentação adequadas, e manter um ambiente limpo para manter a integridade das linhas de mosca e experimentos. Um recipiente deve ser trocado quando cerca de metade das pupas se escorreram ou deixaram o invólucro pupal. As cápsulas parecerão claras.
FYI, o estágio pupal ocorre entre os estágios larval e adulto, e é o momento em que as larvas incubam e se desenvolvem em um adulto. Para identificar as cápsulas pupais como claras, segure o recipiente até uma fonte de luz e inspecione a pupa.
As moscas são transferidas para frascos com mídia fresca — um nome chique para comida de mosca — através de um processo conhecido como "virar moscas". Antes de virar moscas, inspecione a mídia em busca de integridade. Moscas não podem sobreviver com alimentos rachados com ressecamento ou contaminados com mofo ou bactérias.
Para virar moscas, primeiro, toque o frasco de mosca suavemente no balcão para derrubar moscas dos lados do frasco. Em seguida, remova rapidamente a rolha, e inverta as moscas do velho recipiente rapidamente em um novo. Este processo é feito rapidamente, para evitar que as moscas escapem ou sejam esmagadas pela rolha, e para evitar que moscas soltas entrem no frasco durante a capotagem.
Embora a lança de moscas seja o método preferido para a transferência em massa de Drosophila, a anesthetização é necessária para a triagem de moscas. Dois métodos de anestesia serão discutidos aqui: refrigeração e uso de dióxido de carbono. Para esfriar as moscas coloque a cultura em um congelador de -20 °C por 8-12 minutos. Em seguida, coloque moscas em um espaço de trabalho frio e plano para seleção. As moscas também podem ser anestesiadas usando frio, resfriando-as diretamente em uma superfície congelada.
O dióxido de carbono é um método preferido para a anestesia porque não causa mortalidade aguda em moscas ou perigo para o pesquisador. O sistema de entrega de CO2 é composto: de um tanque de CO2; um tubo conectado a uma agulha, para anestesiar moscas em frascos e garrafas; e um tubo conectado a uma placa de CO2 para análise sob o microscópio.
Para anestesiar moscas, insira a agulha de CO2 através da rolha. Alternativamente, bata no recipiente em uma superfície, remova a parada e inverta rapidamente as moscas em uma placa de CO2, mantendo uma vedação fechada até que as moscas fiquem imóveis. Usando um pincel ou fórceps, mova suavemente as moscas para o novo recipiente.
Para descartar moscas indesejadas, despeje-as em um necrotério de moscas, que consiste em uma grande garrafa cheia de isopropanol ou etanol e óleo mineral coberto com um funil.
Agora que vimos como as moscas são mantidas e manuseadas em laboratório, vamos dar uma olhada em como as condições de moradia e alimentação são modificadas para diferentes experimentos.
Alguns experimentos requerem habitação alternativa para conter uma maior quantidade de moscas.
Neste experimento, o pesquisador usa uma gaiola da população de moscas para coletar uma grande quantidade de embriões. Uma gaiola da população de moscas é clara, caixa de plástico capaz de segurar milhares de moscas. O pesquisador libera as moscas desejadas de várias garrafas para a gaiola da população de moscas, em seguida, coloca placas de ágar na gaiola para coletar embriões.
Alguns experimentos exigem a manipulação da dieta de moscas.
Neste experimento, o pesquisador quer observar a resposta de fuga de moscas transgênicas que expressam um canal de íon ativado pela luz em neurônios que regulam a resposta de fuga das moscas. A dieta Drosophila é suplementada com "toda trans-retinal", que é um cofator para este canal e permite que ele funcione. Isso é feito derretendo a comida e adicionando o reagente. A mosca é então exposta à luz azul que ativa o canal e induz a resposta de fuga, e o tempo levado para voar medido.
Uma variedade de condições de moradia e manuseio podem ser manipuladas para experimentação.
Neste experimento, uma elaborada "torre de poder" é criada para estudar os efeitos do exercício em Drosophila. A torre de energia é uma máquina que continuamente sobe e cai, aproveitando a resposta natural da mosca para se mover para cima, contra a gravidade, que é conhecida como "geotaxis negativas".
O desempenho das moscas exercidas na torre de potência é medido usando um ensaio Geotaxis Negativo Rápido Iterativo, ou ensaio RING para abreviar. Moscas em frascos vazios são colocadas na frente de uma câmera. Os frascos são tocados, e as distâncias subidas são registradas. Este experimento mostra que, em comparação com um exercício de grupo controle, teve um impacto positivo na atividade ao longo do tempo.
Este vídeo da JoVE cobriu a manutenção e a criação de Drosophila melanogaster. Depois de assistir a este vídeo, você deve ser capaz de preparar mídia de comida voadora, identificar adequadamente a carcaça apropriada, virar moscas e realizar experimentos simples. Obrigado por assistir!
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Q1: What ingredients are needed to prepare Drosophila fly food media?
Drosophila fly food contains essential components: sugar and yeast, plus sterile water, soy flour, yellow cornmeal, agar for texture, corn syrup, and propionic acid to inhibit mold and bacterial growth. These ingredients are combined, heated, stirred, and distributed into vials using a pump. After filling, vials are plugged with cotton, wrapped, cooled at 4°C, and sterilized via autoclaving.
Q2: How often should fly containers be changed during maintenance?
A container must be changed when approximately half of the pupae have eclosed, or left the pupal casing. To identify when this occurs, hold the container up to a light source and inspect the pupa—clear casings indicate eclosion. Flies are then transferred to vials with fresh media via a process called flipping flies, ensuring the new food is free from cracks, mold, or bacterial contamination.
Q3: What is the proper technique for transferring flies between containers?
Flipping flies is the preferred bulk transfer method. First, gently tap the vial on the counter to knock flies off the sides. Quickly remove the stopper and invert flies into a new container rapidly. This speed prevents flies from escaping, being crushed by the stopper, or loose flies entering the vial. Before flipping, always inspect media for integrity—flies cannot survive on cracked or contaminated food.
Q4: What are the two main methods for anesthetizing Drosophila flies?
Chilling and carbon dioxide are the primary anesthetization methods. Chilling involves placing cultures in a -20°C freezer for 8-12 minutes or directly on a frozen surface. Carbon dioxide is preferred because it does not cause acute mortality or researcher danger. The CO2 system uses a tank, needle-tipped tube for vials, and a CO2 plate for microscopic analysis, allowing gentle fly manipulation with a brush or forceps.
Q5: What environmental conditions are optimal for storing Drosophila cultures?
Normal storage conditions for flies are 25°C and 60-65% relative humidity. Incubators control the environment and can hold hundreds of vials and bottles. Proper labeling and documentation are essential to maintain the integrity of fly lines and experiments. Vials typically contain 50-100 adults, while bottles house 300-600 adults for larger cultures.
Q6: How can researchers manipulate fly diet for experimental purposes?
Fly diet can be supplemented with specific reagents to study particular biological processes. For example, all-trans-retinal can be added to the food by melting it and incorporating the reagent, enabling light-activated ion channels to function. This allows researchers to observe specific responses, such as escape behavior, when flies are exposed to blue light that activates the channel and induces measurable behavioral responses.
Q7: What is negative geotaxis and how is it measured in Drosophila experiments?
Negative geotaxis is the fly's natural response to move upward against gravity. Researchers study this behavior using a power tower machine that continually rises and drops, challenging flies to climb. Performance is measured using a Rapid Iterative Negative Geotaxis assay, or RING assay, where flies in empty vials are tapped and distances climbed are recorded by camera to assess activity levels.
Chapters in this video
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Overview
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Nutrition
1:48
Housing
2:31
Handling
4:08
Anesthetizing Flies
5:54
Applications
8:19
Summary
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