A identificação qualitativa dos ácidos carboxílicos, ácidos borónicos e aminas Usando fluoróforos cruciforme

O objetivo geral deste procedimento é usar quatro de flora de moléculas pequenas baseadas na chamada geometria cruciforme para analisar e discriminar qualitativamente analitos de várias classes de compostos. Isso é feito primeiro preparando soluções desses sensores cruciformes em vários solventes diferentes, capitalizando assim sua emissão altamente dependente de solvente. O segundo passo é expor essas soluções aos analitos de interesse, incluindo ácidos carboxílicos, ácidos cônicos ou aminas orgânicas, que podem ser adicionados como sólidos ou em solução.

Em seguida, as soluções combinadas de analito do sensor são irradiadas sob luz ultravioleta de 365 nanômetros, fazendo com que emitam luz na região visível. Essas cores de emissão são fotografadas usando uma configuração de fotografia digital padrão. A etapa final é a geração de painéis de cores de emissão, que são usados para detectar diferenças qualitativas na emissão de diferentes soluções de analitos.

Em última análise, este método de fluorescência será útil para a identificação rápida de analitos comuns nas indústrias farmacêutica e alimentícia. A principal vantagem dessa técnica em relação aos métodos existentes, como a cromatografia, é que ela pode analisar diretamente analitos altamente polares sem a necessidade de uma decisão derivada. Esse método pode ajudar a responder a perguntas-chave em um campo de controle de qualidade de rotina, onde pode ser usado para determinar rapidamente se uma composição bem definida é autêntica ou foi comprometida.

A demonstração visual deste método é crítica, pois o próprio método usa detecção óptica e, devido à sua aplicação final, envolveria operadores não especializados. Demonstrando o procedimento estarão Abel do Laboratório Buns em Heidelberg e Rio Color Lire do meu laboratório na Universidade de Houston. Ambos os alunos de pós-graduação primeiro preparam soluções frescas de estoque de cruciformes de um a três com uma concentração de 50 miligramas por 10 mililitros, di clorometano, e reserve.

Pesar 500 miligramas da substância a analisar ácido carboxílico em seis frascos de 16 ml DR e adicionar 16 ml de acetato de diclorometano-etilo, acetonitrilo nn, álcool dimetilformamida isopropílico ou metanol. Em seguida, adicione 20 microlitros de solução estoque cruciforme a cada frasco e agite o frasco se heterogêneo permitir que a solução correspondente assente. Posicione os frascos sem tampa em uma placa de vidro sob a lâmpada UV com uma distância entre a lente da câmera e os frascos de amostra de 60 centímetros.

Ligue a lâmpada UV e desligue a luz da sala. Tire fotos variando os tempos de exposição de 0,25 a 15 segundos para cada solução para produzir imagens que reflitam a cor da remissão. Em seguida, prepare uma solução 1,0 vezes 10 para o quarto molar negativo de quatro cruciformes em di clorometano e reserve.

Em seguida, prepare cinco soluções individuais para cada analito de ácido cônico dissolvendo 50 miligramas do analito em três mililitros de acetonitrila cada. 1, 2, 4, triclorobenzina di clorometano ciclo-heína e clorobenzina. Transfira 1,8 mililitros de cada uma das soluções de analito para cinco cubetas de quartzo separadas de 10 por 10 milímetros.

Em seguida, adicione 20 microlitros da solução cruciforme previamente preparada em cada uma das cinco cubetas e mexa as duas soluções para homogeneizar. Se for observada alguma precipitação, deixar assentar a solução correspondente. Coloque todos os cinco veterinários Q em uma placa de vidro e irradie-os de cima.

Usando uma lâmpada UV portátil de 365 nanômetros, certifique-se de que a sala esteja escura e tire imediatamente uma fotografia digital das cores de emissão das soluções com uma distância entre a lente da câmera e as cubetas de 45 centímetros e uma velocidade do obturador de 0,5 segundos. Em seguida, prepare pelo menos 80 mililitros cada um de 1,0 vezes 10 para as soluções molares negativas de quatro cruciformes em Acetonitrila 1 2 4, triclorobenzeno ciclohexano di clorometano e clorofórmio dissolver 152,6 miligramas de dois seis ácido clorofilo DI em 40 mililitros de cada uma das soluções cruciformes. Dissolva separadamente 97,6 miligramas de ácido fenilônico em 40 mililitros de cada uma das soluções cruciformes.

Em seguida, dissolva 40 miligramas do analito de amina desejado em dois mililitros de cada solução cruciforme de ácido cônico. Para cada analito de amina, preparar cinco soluções com dois seis ácido diclorofilónico e cinco soluções com ácido fenilónico como aditivos. Transfira alíquotas das 10 soluções preparadas para 10 cubetas de quartzo separadas.

Coloque os dois cinco conjuntos de vete em uma placa de vidro, irradie a 365 nanômetros por um UV portátil e fotografe imediatamente usando as configurações descritas anteriormente usando um programa de processamento de imagem. Recorte um segmento quadrado representativo das fotografias digitais das cores de emissão de cada frasco fotografado. Em seguida, organize esses recortes em painéis semelhantes aos mostrados aqui.

Se a quantificação das diferenças na cor de emissão for desejada, extraia os valores vermelho, verde e azul dos painéis e, em seguida, trate-os estatisticamente para obter desvios padrão relativos das cores de emissão de um analito em relação a outro. Use a seguinte equação. Finalmente, use a equação para identificar analitos de ácido carboxílico desconhecidos e para determinar o desvio entre o analito desconhecido para todas as substâncias do conjunto de dados de calibração usando Fluor cruciforme de um a três em seis solventes diferentes, as respostas fluorescentes foram consideradas dependentes da concentração e da identidade estrutural de um ácido carboxílico retratado.

Aqui está a cor de emissão registrada digitalmente de todas as combinações de ácido carboxílico solvente da flora. Essa matriz exibe 18 cores de emissão características por analito, que podem ser usadas para caracterizar e analisar exclusivamente usando os valores de vermelho verde azul da cor de emissão. Todos os analitos podem ser discernidos em relação aos ácidos carboxílicos, de um a 10 e identificados conforme mostrado no gráfico de autocorrelação aqui usando um procedimento completamente análogo.

Os ácidos onicos B um a B nove são prontamente discriminados uns dos outros usando quatro cruciformes, conforme evidenciado pelo painel de cores de emissão e pelo gráfico de correlação mostrado aqui. A análise das aminas é obtida usando in situ dois complexos formados de quatro cruciformes com um grande excesso de aditivos de ácido cônico, dois seis ácido diclorofilônico e ácido fenilônico. Esses complexos, cujas cores de emissão são diferentes das do cruciforme puro, podem responder aos analitos de amina de duas maneiras.

Um meio mais básico do que a purina desloca o cruciforme quatro de seus complexos com aditivos de ácido cônico, regenerando assim as cores de emissão do cruciforme puro e não complexo quatro. Por outro lado, espécies menos básicas parecem se ligar ao complexo de ácido onico cruciforme sem destruí-lo, e esse evento resulta na modulação da emissão de fluorescência dos complexos. Portanto, a metodologia de detecção vicária é caracterizada por um efeito de nivelamento em que os analitos acima de um certo limite não podem mais ser discriminados uns dos outros Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em algumas horas se for executada corretamente.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como analisar ácidos carboxílicos, ácidos baroni e os meios usando uma configuração simples que emprega a força da gripe cruciforme em um conjunto de vários solventes diferentes. Não se esqueça de que trabalhar com solventes orgânicos e lâmpadas UV pode ser perigoso e precauções como o uso de salas bem ventiladas e óculos de proteção devem sempre ser tomadas ao realizar este procedimento.