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DOI: 10.3791/50925-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
The zebrafish serves as a powerful model for studying muscular dystrophies and related neuromuscular diseases. This article details noninvasive assays to assess muscular organization and locomotion in zebrafish embryos.
O peixe-zebra é agora uma ferramenta estabelecida e poderosa para modelar distrofias musculares, miopatias congênitas e doenças neuromusculares relacionadas. A birrefringência e o comportamento de fuga evocado pelo toque são dois ensaios não invasivos comuns usados para determinar o grau de desorganização muscular e comprometimento locomotor de embriões de peixe-zebra durante o desenvolvimento inicial.
O objetivo geral deste procedimento é avaliar a extensão da organização miofibrilar em larvas translúcidas de peixe-zebra e quantificar sua distância de natação em resposta à estimulação tátil para ambos os métodos. Isso é feito primeiro acasalando o peixe-zebra e, em seguida, coletando ovos viáveis na segunda etapa do ensaio para avaliar a estrutura muscular. Um embrião de peixe-zebra anestesiado revestido é posicionado diretamente entre duas lentes polarizadas em um estágio de microscópio estéreo para que o peixe seja orientado ao longo do eixo lateral de seu corpo e esteja na orientação mais plana possível.
A birrefringência é então visualizada e a integridade muscular é quantificada. Na segunda etapa do ensaio de escape evocado por toque, uma única larva revestida é colocada em uma placa de Petri profunda e, em seguida, centralizada no campo de visão do microscópio estereoscópico. Um estímulo sensorial meno é entregue às larvas tocando a cauda com um alfinete de inseto, e a reação do animal é visualizada até que o embrião pare de nadar ou nade para fora do campo de visão.
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