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High-throughput Citometria de Fluxo Ensaio Celular para detectar anticorpos em N-metil-D-aspartat...
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JoVE Journal Medicine
High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

High-throughput Citometria de Fluxo Ensaio Celular para detectar anticorpos em N-metil-D-aspartato ou dopamina-2 Receptor em Soro Humano

Full Text
16,791 Views
10:19 min
November 23, 2013

DOI: 10.3791/50935-v

Mazen Amatoury1, Vera Merheb1, Jessica Langer1, Xin Maggie Wang2, Russell Clive Dale1, Fabienne Brilot1

1Institute for Neuroscience and Muscle Research, The Kids Research Institute at the Children's Hospital at Westmead,The University of Sydney, 2Flow Cytometry Centre,Westmead Millennium Institute for Medical Research

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ao longo dos últimos anos, os ensaios baseados em células vivas têm sido utilizados com sucesso para detectar anticorpos contra antigénios de superfície e de conformação. Aqui, descrevemos um método que utiliza o fluxo de alto rendimento citometria permitindo a análise de grandes grupos de pacientes. Detecção de novos anticorpos irá melhorar o diagnóstico e tratamento de distúrbios mediados pela imunes.

O objetivo geral do experimento a seguir é detectar anticorpos neuronais anti D dois R ou N-M-D-A-R em amostras de pacientes usando um ensaio baseado em células de citometria de fluxo de alto rendimento. Isso é conseguido por subaderência, a sequência completa de CDNA de D dois humanos R ou N-M-D-A-R dentro de um plasmídeo. Como segunda etapa, uma linhagem celular humana é transfectada, o que leva à expressão de antígenos neuronais na superfície celular.

Em seguida, as células transfectadas são incubadas com soro do paciente e um anticorpo secundário apropriado antes da aquisição da citometria de fluxo. Para detectar a ligação de anticorpos a antígenos de superfície celular, os resultados são obtidos com base na análise de citometria de fluxo. Este nosso ensaio baseado em células de citometria de fluxo de três portas é rápido, quantitativo e eficiente para grandes coortes de amostras de pacientes.

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