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DOI: 10.3791/50981-v
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Duas técnicas de isolamento de gotículas lipídicas celulares a partir de 1) células de levedura e 2) placentas humanas estão apresentadas. A peça central de ambos os processos é a centrifugação de gradiente de densidade, onde a camada flutuante resultante contendo as gotículas podem ser facilmente visualizadas por olho, extraiu-se, e quantificada por análise de Western Blot quanto à pureza.
O objetivo geral deste procedimento é isolar gotículas lipídicas do tecido. Isso é feito primeiro dissecando e separando o tecido placentário. Em seguida, as células da oleína são homogeneizadas.
Em seguida, as organelas são separadas por várias etapas de centrifugação. Finalmente, a camada flutuante contendo as gotículas lipídicas é coletada e as gotas lipídicas são caracterizadas. Em última análise, a microscopia de fluorescência e a análise de sangue ocidental são usadas para mostrar a pureza da fração de gotículas lipídicas.
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