Métodos de coleta de leite para Ratos e Reeves Muntjac cervos

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar como coletar leite de um camundongo ou de um veado mutt jack reeve para uso em uma variedade de experimentos científicos. Isso é realizado primeiramente administrando ocitocina ao animal para estimular a descida do leite, seguido pela anestesia do animal. Em seguida, um pesquisador expressa manualmente o leite enquanto um segundo pesquisador o coleta.

O passo final é garantir a segurança do animal enquanto ela se recupera da anestesia. Em última análise, pode-se coletar aproximadamente de cinco a 30 mililitros de leite de mutt jack por sessão, ou até 450 microlitros de leite de camundongo por sessão. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como aqueles que exigem equipamentos especializados, é que esta técnica é relativamente barata e fácil de aprender.

Este método pode ajudar a responder diversas questões científicas, como, por exemplo, se um patógeno pode ser transmitido da mãe para a prole por meio do leite. Indivíduos novos neste método geralmente se desencorajam porque é necessário praticar para extrair adequadamente o leite. Auxiliando-me neste procedimento estará Stephanie Full Away, uma técnica de nosso laboratório, para estimular a liberação de leite em um camundongo lactante.

Administre duas unidades internacionais por quilograma de ocitocina por via intraperitoneal imediatamente antes de coletar o leite, anestesie o camundongo e aplique uma pequena quantidade de lubrificante ocular em cada olho para evitar que os olhos do camundongo sequem enquanto se aguarda o efeito da anestesia. Prepare alguns discos de álcool estéreis, um pipetador P 200, ponteiras estéreis e um recipiente para armazenar o leite, como um tubo einor de 1,5 mililitro ou um frasco criogênico de 1,2 mililitro. A ordenha requer dois pesquisadores.

Um deles estabiliza o animal e realiza a expressão do leite, enquanto o outro coleta o leite, tomando cuidado para evitar a contaminação do recipiente de coleta. Utilizando um lenço umedecido estéril com álcool, o expressor de leite limpa suavemente a área mamária antes da ordenha.

Após um ou dois minutos da injeção de ocitocina, a descida do leite torna-se visível na região mamária do camundongo. Expulse manualmente o leite da teta usando o polegar e o indicador para massagear e comprimir suavemente o tecido mamário em movimento ascendente até que uma gota visível de leite comece a se formar na base da teta. O coletor de leite agora pressiona o êmbolo da pipeta P200 até o primeiro detente para liberar o ar da ponteira da pipeta e se preparar para a coleta do leite.

Em seguida, o coletor de leite posiciona a ponteira da pipeta no topo da gota de leite. Tendo o cuidado de não colocar a ponteira muito próxima da teta ou da pele, libera lentamente a pressão sobre o êmbolo para aspirar o leite para dentro da ponteira da pipeta, pressionando a ponteira contra a parede do tubo de coleta para que nenhum líquido seja perdido. O coletor de leite usa o polegar para pressionar o êmbolo além do primeiro detento e expelir o leite no recipiente.

Continue a expressar manualmente o leite de cada teto, movendo-se em sentido horário ou anti-horário. É aceitável retornar a um teto anterior para extrair mais leite, especialmente se ele produzir mais leite do que os demais tetos. Após concluir a coleta do leite, permita que o camundongo desperte da anestesia.

Uma vez que a fêmea esteja se movendo facilmente pela gaiola, coloque-a de volta em sua gaiola original com sua ninhada para estimular a descida do leite. Em veados fêmeas lactantes da raça reeve's mut jack, administre 10 unidades internacionais por quilograma de ocitocina por via intramuscular e, em seguida, anestesie imediatamente o mut jack. O nível de anestesia é considerado adequado se houver apenas reflexos mínimos ao tocar as orelhas e se o operador do extrator de leite puder segurar o mut jack sem resistência.

Em seguida, aplique uma pequena quantidade de lubrificante em cada olho para evitar que os olhos do mut jack sequem. Equipe tanto o extrator de leite quanto o coletor de leite com gaze embebida em etanol e vários tubos cónicos de polipropileno de 15 mililitros para armazenar o leite. À medida que a ocitocina começa a fazer efeito, a descida do leite torna-se visível na região mamária dos mutt jacks.

Tanto o expressador de leite quanto o coletor de leite devem usar luvas e higienizá-las com gaze embebida em etanol. Utilize também gaze embebida em etanol para higienizar todo o úbere e cada teto individualmente do animal, mantendo a cabeça do mordedor em uma posição confortável para facilitar a respiração e prevenir a regurgitação ruminal. O coletor de leite posiciona o tubo de coleta próximo ao teto que está sendo ordenhado, sem tocá-lo na pele.

O extrator de leite utiliza o polegar e o indicador para comprimir suavemente o tecido mamário em um movimento ascendente até que a teta esteja cheia de leite e, então, rola suavemente o leite para fora da teta e para dentro do tubo que o coletor de leite está segurando. O leite sai em forma de jato, portanto é importante posicionar o tubo de coleta de modo que se perca o mínimo possível de leite. A teta do Mt Jack é dividida em quadrantes.

O extrator de leite continua a extrair leite de cada quadrante até que o leite não flua mais facilmente. Se não for possível extrair leite de um tetinho, passe a extrair de todos os outros tetos antes de retornar ao primeiro; ao final da coleta do leite, administre aamaz por via subcutânea para reversão rápida da anestesia com bam; por fim, monitore a fêmea até que ela seja capaz de andar, comer e beber por conta própria. Esta figura indica que de 100 a 450 microlitros de leite podem ser obtidos de um camundongo lactante.

Os volumes máximos de leite foram colhidos de oito a 12 dias pós-parto utilizando duas unidades internacionais por quilograma de ocitocina. É mostrado aqui o rendimento aproximado de leite de um camundongo lactante, representado de acordo com o tamanho da ninhada em veados mut jack de reeve. O volume de leite coletado por sessão variou de cinco a 30 mililitros, dependendo do anestésico utilizado e do tempo pós-parto; as datas de início e término das coletas de leite para as fêmeas mut jack são apresentadas nesta tabela.

O leite foi coletado em uma média de 80 dias, com uma variação de 18 a 150 dias. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em cerca de uma hora, dependendo do número de animais dos quais se deseja coletar em uma única sessão. Ao realizar este procedimento, é sempre importante lembrar que a segurança dos animais vem em primeiro lugar. Após este procedimento, pode ser necessário processar o leite, seguido por testes in vitro ou bioensaios, o que pode ajudar a responder perguntas adicionais sobre os componentes do leite.