Question 1

Quais condições de temperatura são as melhores para cultivar C. elegans no laboratório?

Accepted Answer

C. elegans pode ser cultivado a 16, 20 ou 25 °C dependendo dos requisitos experimentais. A temperatura afeta diretamente a velocidade do ciclo de vida: a 25 °C, os vermes completam seu ciclo de vida 2,1 vezes mais rápido do que a 16 °C. O crescimento mais rápido significa que os vermes amadurecem mais rápido, põem mais ovos e consomem mais comida, tornando a seleção da temperatura crítica para o design experimental.

Question 2

O que C. elegans comem e como são alimentados no laboratório?

Accepted Answer

C. elegans são alimentados com OP50, uma cepa padronizada de E. coli usada em todos os laboratórios de vermes em todo o mundo. Na natureza, os vermes se alimentam de matéria vegetal em decomposição, mas no laboratório eles consomem OP50 cultivado em placas de meio de crescimento de nematoides (NGM) ou em meio líquido. Esta dieta padronizada assegura condições experimentais consistentes em todas as instalações de pesquisa.

Question 3

Como você faz e prepara placas NGM para cultura de C. elegans?

Accepted Answer

Combine ingredientes de meio de crescimento de nematoides com água desionizada, autoclave por pelo menos 15 minutos, depois deixe esfriar para 55 °C. Adicione aditivos assépticos se necessário, pipete em placas de Petri até 2/3 cheio, e deixe secar durante a noite. Inocule com E. coli OP50 ressuspensa a 10X de concentração, deixe secar durante a noite, depois exponha à luz UV para esterilização antes do uso.

Question 4

O que é um picador de minhocas e como é construído?

Accepted Answer

Uma pinça de verme é uma ferramenta feita de fio de platina-irídio de calibre 30 selado em uma ponta de pipeta Pasteur. O fio é achatado na extremidade e dobrado para cima para formar uma colher, depois lixado até ficar liso. A pinça permite que os pesquisadores manipulem e transfiram individualmente os vermes sob um microscópio de dissecação sem danificá-los ou a superfície do ágar.

Question 5

Como C. elegans são congelados e recuperados para armazenamento a longo prazo?

Accepted Answer

Lave as larvas recentemente famintas em M9 Buffer, transfira para um cryotube, adicione volume igual de 30% de glicerol em M9 Buffer, e armazene a -80 °C. Para recuperar, descongele à temperatura ambiente, pipete em placas NGM frescas com OP50 e incube a 20 °C. Após 2-3 dias, transfira os animais para novas placas e permita uma geração de reprodução antes de marcar os fenótipos.

Question 6

O que acontece com C. elegans quando experimentam estresse ou superlotação?

Accepted Answer

Quando famintos ou superlotados, C. elegans entram no estágio dauer, um estágio larval resistente ao estresse onde os vermes não envelhecem. Este mecanismo de sobrevivência permite que as populações persistam em condições adversas até que os recursos se tornem disponíveis novamente, tornando as larvas dauer úteis para armazenamento a longo prazo e manipulação experimental.

Question 7

Como a interferência de RNA é usada para estudar a função gênica em C. elegans?

Accepted Answer

Pesquisadores preparam placas com E. coli expressando dsRNA do gene-alvo, que os vermes consomem. Vermes no quarto estágio larval são transferidos para placas de RNAi para por ovos, então a progênie é coletada nos estágios de desenvolvimento desejados e avaliada quanto aos fenótipos. Essa abordagem silencia genes específicos para determinar sua função, aproveitando insights de desenvolvimento e reprodução de caenorhabditis elegans para pesquisa de doenças.

Manutenção de C. elegans - Questionário de avaliação