Name: O Xenopus Oocyte Cut-aberto vaselina Gap Técnica Voltage-clamp Com Fluorometria (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-11T14:55:00.000+00:00
Duration: 10 min 57 s
Description: Aprenda a técnica de voltage-clamp com gap de vaselina em oócitos de Xenopus para registrar correntes iônicas com baixo ruído e alta resolução temporal. Este método permite estudar a cinética de canais iônicos em eletrofisiologia.

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Todos os membros da Universidade de Washington em St. Louis Cardiac Molecular Laboratório de Engenharia. A Burroughs Bem-vindo Fundo Prémio Carreira na Interface Científica - 1010299 (para JS).

<ol><li>Kalstrup, T., Blunck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+internal+pore+opening+in+KV+channels+probed+by+a+fluorescent+unnatural+amino+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dynamics of internal pore opening in KV channels probed by a fluorescent unnatural amino acid.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 8272-8277 (2013).</li>
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<li>Taglialatela, M., Toro, L., Stefani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+voltage+clamp+to+record+small%2C+fast+currents+from+ion+channels+expressed+in+Xenopus+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Novel voltage clamp to record small, fast currents from ion channels expressed in Xenopus oocytes.</a> Biophys. J. 61, 78-82 (1992).</li>
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<li>Gagnon, D. G., Bissonnette, P., Lapointe, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+disulfide+bridge+linking+the+fourth+and+the+seventh+extracellular+loops+of+the+Na%2B%2Fglucose+cotransporter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Identification of a disulfide bridge linking the fourth and the seventh extracellular loops of the Na+/glucose cotransporter.</a> J. Gen. Physiol. 127, 145-158 (2006).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

A vaselina oócito tensão lacuna técnica braçadeira cut-aberto permite a resolução rápida de dados, baixo ruído, maior controle sobre a solução interna e composição da solução externa e gravações estáveis ​​através de protocolos relativamente longos 19. Estas vantagens definir esta técnica além de o grampo de voltagem de dois eléctrodos padrão e técnicas de fixação de membranas. Apesar de equipamento especializado é necessária e que o protocolo é relativamente difícil, muito poucos problemas ocorrem quando o s...

Técnicas de fixação de tensão especializados permitir a gravação de correntes iônicas de potenciais de membrana controladas. Amplamente utilizado braçadeira de tensão de dois eletrodos (TEVC) e técnicas de patch clamp fornecer informações eletrofisiológico confiável sobre as propriedades de muitos canais iônicos. No entanto, ambos os métodos têm desvantagens que impedem a obtenção de dados confiáveis ​​para os canais de sódio dependentes da voltagem rápidos e outros canais de ativação rápida nas membranas, como as de oócitos de Xenopus. Os laboratórios Bezanilla e Stefani, consequentemente, desenvolveu a técnica lacuna vaselina braçadeira de tensão cut-aberto (COVG) para ovócitos 2. A técnica tem sido amplamente aplicada para gravar, Na +, K +, Ca 2 + e canais de 3-8. Durante a gravação COVG, uma membrana do oócito expressando a proteína heteróloga é dividido em três regiões. Os dados de corrente iônica é gravado a partir da região superior do oócito como obanho em torno da região superior é presa a um potencial de comando, que pode ser fácil e rapidamente mudado. Os guardas região meio contra correntes de fuga ao ser fixada ao mesmo potencial que a região superior 9. A região inferior é onde a abertura do oócito (cut-open) ocorre através do uso de uma solução de saponina ou uma cânula. Química ou a abertura manual da membrana na região do fundo permite um controlo do potencial interno, que está fixada ao solo, e torna a célula contígua com a solução interior da câmara inferior. Perfusão de soluções para a câmara inferior pode ajustar as propriedades do ambiente interno, enquanto troca da solução na câmara de topo altera o ambiente externo. <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51040/51040fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51040/51040fig1.jpg" width="500px" /> Figura 1. Oocyte Cut-Open Voltage-Clamp Bath Setup Diagram. (A) Topabaixo da vista dos três banhos separados um do outro. As dimensões das câmaras para COVG são apresentados na figura. (B) Vista lateral da configuração banhos em posição de teste. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51040/51040fig1highres.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver a imagem ampliada</a> . As vantagens da técnica COVG incluem baixo nível de ruído atual (1 nA a 3 kHz), o controle da composição iônica dos meios externos, a capacidade de modular os meios de comunicação interna, resolução de tempo rápido (20-100 constante ms de tempo de decaimento do capacidade transitória), e gravações estáveis ​​por várias horas 9. As desvantagens são que requer equipamento especializado e é mais difícil de realizar em comparação com dois de fixação de tensão de eléctrodo (TEVC) 10. Embora a abordagem COVG requer equipamentos altamente especializados e elementos processuais complexas, pode permitir a aquisição de valiosodados eletrofisiológicos capazes. Estes dados, como gating correntes com cinética rápida e correntes cauda 4, podem ser gravadas sem alguns dos problemas associados com outros protocolos de fixação de tensão, incluindo canal degradado. Pequenas modificações na configuração COVG pode permitir o uso de controladores de temperatura e fluorometria braçadeira de tensão (VCF). A inclusão de elementos de fluorometria braçadeira de tensão dentro da montagem COVG pode aumentar a saída de dados, conferindo a capacidade de monitorar mudanças conformacionais de proteínas e ao mesmo tempo de gravação atual 11-13.

<table><tbody><tr><td>Solução externa</td><td>Número de catálogo</td> <td>da marca</td> <td>[Final], peso ou volume</td></tr><tr><td>N-metil-D-glucamina (NMDG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2004</td><td>25mM</td></tr><tr><td>MES Sal de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5057</td><td>90mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>20mM</td></tr><tr><td>Hidróxido de cálcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>239232</td><td>2mM</td></tr><tr><td>MES Hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8250</td><td>variável (pH a 7,4)</td></tr><tr><td>Solução</td><td></td><td></td><td></td>Interna</tr><tr><td>N-metil-D-glucamina (NMDG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2004</td><td>105mM</td></tr><tr><td>MES Sal de Sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5057</td><td>10mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>20mM</td></tr><tr><td>Etilenoglicol-bis(2-aminoetiléter)-N,N,N',N'-ácido tetracético (EGTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4378</td><td>2mM</td></tr><tr><td>MES Hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8250</td><td>variável (pH a 7,4)</td></tr><tr><td>Solução</td><td></td><td></td><td></td>Despolarizante</tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221473</td><td>110mM</td></tr><tr><td>Cloreto de magnésio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td>1,5mM</td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio</td><td>Caisson</td><td>C021</td><td>0.8mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>10mM</td></tr><tr><td>Solução</td><td></td><td></td><td></td>de pipeta</tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221473</td><td>3M</td></tr><tr>Solução <td></td><td></td><td></td>de<td>saponina</td></tr><tr><td>Saponina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47036</td><td>0.125g</td></tr><tr><td>interna Solução</td><td>Veja acima</td><td></td><td>50mL</td></tr><tr><td>de solução</td><td></td><td></td><td></td>de ponte de ágar</tr><tr><td>N-metil-D-glucamina (NMDG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2004</td><td>100ml de 1M</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>1.2g</td></tr><tr><td>MES Hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8250</td><td>variável (pH a 7.4)</td></tr><tr>Produtos de pesquisa <td>de ágar granulado</td><td> Solução de</td> armazenamento <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> internacional A20250 3% <tr><td>NMDG NMDG, HEPES, MES Solução de hidrato</td><td>veja acima</td><td></td><td>40ml</td></tr><tr><td>Água</td><td></td><td></td><td>60ml</td></tr><tr><td>Nome do Material / Equipamento</td><td>Número de catálogo</td><td>da empresa</td><td>Comentários / Descrição</td></tr><tr><td>Braçadeira de oócitos de alto desempenho</td><td>Dagan</td><td>CA-1B</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de Aquisição de Dados</td><td>Axon CNS</td><td>&nbsp; Osciloscópio Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Tektronix&nbsp;</td><td>Filtro de Potência para Rack TDS 210</td><td></td></tr><tr><td></td><td>APC&nbsp;</td><td>Controlador</td> de temperatura do banho de aquecimento/resfriamento G5 <td></td></tr><tr><td></td><td>Dagan</td><td>HCC-100A</td><td></td></tr><tr><td>PC</td><td>Dell</td><td>Optiplex 990</td><td></td></tr><tr><td>pCLAMP 10.3 Voltagem Clamp Software</td><td>Molecular Devices, LLC</td><td>pCLAMP10.3</td><td></td></tr><tr><td>TMC Plataforma de mesa de controle de vibração</td><td>TMC</td><td>64 SERIES</td><td></td></tr><tr><td>TMC Mesa de ar de controle de vibração</td><td>TMC</td><td><a name="INTERVALO! Série C10">20&nbsp; Coletor</td> de dados de eletrodo < / a > <td></td></tr><tr><td>V1 / I</td><td>Parte de Dagan</td> do micromanipulador <td>CA-1B</td><td></td></tr><tr><td>MX10L</td> Banho / Guarda <td>Siskiyou</td><td>MX10L</td><td></td></tr><tr><td>Headstage (com conectores apropriados)</td> <td>Parte</td><td>Dagan do microscópio CA-1B</td><td></td></tr> Banho de controle de temperatura <tr><td></td><td>Omano</td><td>OM2300S-JW11</td><td></td></tr><tr><td>Personalizado</td><td>ou Dagan</td><td>Personalizado ou Dagan Personalizado ou HE-204C</td><td>Câmara personalizada feita de materiais da Cool Polymers (série D). Dagan também fornece um estágio pré-fabricado (HE-204C).</td></tr><tr><td>Recipiente de pellets AgCl personalizado</td><td>personalizado</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eletrodo Ag / AgCl usinado personalizado, pellet, 2,0 mm</td><td>Warner</td><td>E-206</td><td></td></tr><tr><td>Banho de oócitos externo</td><td>personalizado ou Dagan</td><td>personalizado ou CC-1-T-LB</td><td>Personalizado usinado ou comprado da Dagan</td></tr><tr><td>Banho interno de oócitos</td><td>personalizado ou Dagan</td><td>personalizado ou CC-TG-ND</td><td>Personalizado usinado ou comprado da Dagan</td></tr><tr><td>Capilares para pontes de ágar e eletrodos puxados</td><td>Warner</td><td>G150T-4</td><td></td></tr><tr><td>Montagens rotativas para microscópio, micromanipulador e banho</td><td>Siskiyou</td><td>SD-1280P</td><td></td></tr><tr><td>Fiber-Lite</td><td>Dolan-Jenner</td><td>LMI-600</td><td></td></tr><tr><td>Alvejante regular</td><td>Clorox</td><td>470174-764</td><td></td></tr><tr><td>Xenopus laevis Oócitos</td><td>Nasco</td><td>LM535M (fêmeas sexualmente maduras)</td><td></td></tr><tr><td>90 Solução externa Na+</td><td>Consulte a folha</td><td></td><td></td>de soluções</tr><tr><td>10 Solução interna Na+</td><td>Consulte a folha</td><td></td><td></td>de soluções</tr><tr><td>3 M KCL</td><td>Veja a folha de</td><td></td><td></td>soluções</tr><tr><td>Saponina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>Solução de armazenamento NMDG</td><td>Veja a folha</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>de soluçõesPipetas de transferência de 5mL</td><td>SciMart</td><td>GS-52</td><td></td></tr><tr><td>Injetor de eletrodo KCl modificado</td><td>BD</td><td>309659</td><td>Ponta de seringa de plástico derretida para permitir a injeção de solução em eletrodos. Alternativamente, um Microfil por WPI pode ser adquirido.</td></tr><tr><td></td> Pinça <td>Personalizada</td><td></td> <td>Microvaccum</td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>63040-458</td><td></td></tr><tr><td>Ferramentas de Manuseio de Oócitos (Bomba de Pipeta)</td><td>VWR</td><td>53502-222</td><td></td></tr><tr><td>Garrafa de Água Deionizada</td><td>VWR</td><td>16649-911</td><td></td></tr><tr><td>Vaselina Vaselina Vaselina</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-086-291&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Materiais adicionais necessários para gravações VCF:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Microscópio VCF</td><td>Nikon</td><td>Eclipse FN1</td><td></td></tr><tr><td>Nikon CFI APO 40XW NIR Objetiva</td><td>Nikon</td><td>N40X-NIR</td><td></td></tr><tr><td>X-Y Sistema Tradutor para Microscópios Verticais de Estágio Fixo</td><td>Instrumentos</td><td>Sutter MT500-586</td><td></td></tr><tr><td>Banho de Oócito VCF Externo Personalizado</td><td></td><td></td><td>Usinado sob medida. As dimensões da câmara são 2,7 x 1,9 x 0,4 cm.</td></tr><tr><td>Banho de oócito VCF interno</td><td>personalizado</td><td></td><td>usinado sob medida. As dimensões da câmara são 1,6 x 1,6 x 0,4 cm.</td></tr><tr><td>Banho de Controle de Temperatura Modificado</td><td></td><td></td> Câmara <td>personalizada feita de materiais de polímeros frios (série D). As dimensões da câmara do banho do controlador de temperatura modificado são 2,7 x 1,9 x 0,3 cm para a câmara horizontal e 1 x 2,5 x 0,5 cm para a câmara vertical.</td></tr></tbody></table>

o<em&gt; xenopus</em&gt; oocyte cut-aberto vaselina gap técnica voltage-clamp com fluorometria

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

A vaselina oócito lacuna cut-aberto (COVG) técnica braçadeira de tensão permite a análise das propriedades eletrofisiológicas e cinéticos de canais iônicos heterólogas em oócitos. Gravações do setup cut-aberto são particularmente úteis para a resolução de correntes de baixa magnitude gating, rápida ativação corrente iônica e desativação. As principais vantagens sobre a tensão de dois eléctrodos de aperto (TEVC) técnica incluem o aumento da velocidade de fixação, uma melhor relação sinal-ruído, e a capacidade de modular o intracelular e meio extracelular. Aqui, nós empregamos o canal de sódio cardíaco humano (HNA V 1.5), expressa em oócitos de Xenopus, para demonstrar a configuração cut-aberto e protocolo, bem como as modificações que são necessárias para adicionar capacidade de fluorometria braçadeira de tensão. As propriedades dos canais iônicos de ativação rápida, como HNA V 1.5, não pode ser totalmente resolvido em temperatura ambiente usando TEVC, em which, a totalidade da membrana do oócito é apertado, tornando difícil o controlo da tensão. No entanto, na técnica de corte-aberto, o isolamento de apenas uma pequena porção da membrana celular permite a fixação rápida necessária para registar com precisão cinética rápida evitando canal degradado associado com técnicas de fixação de membranas. Em conjunção com a técnica COVG, cinética do canal de iões e propriedades electrofisiológicas pode ser ainda analisada utilizando fluorimetria fixador de tensão, onde o movimento é controlado por meio da proteína de cisteína de conjugação de fluoróforos extracelularmente aplicadas, a inserção de proteínas fluorescentes codificados geneticamente, ou a incorporação de aminoácidos não naturais na região de interesse 1. Esta informação adicional produz informação cinética sobre rearranjos conformacionais dependentes de voltagem da proteína através de alterações no microambiente em torno da molécula fluorescente.

A Figura 4 mostra a variação na permeabilidade do oócito como uma solução de saponina é aplicada à parte inferior do oócito. Figura 5 mostra a taxa de troca da solução intracelular por difusão seguinte permeabilização saponina. 20-40 min são necessárias para chegar a um estado de equilíbrio 2,18. A Figura 6A mostra vestígios gerados a partir do protocolo de gravação. A figura mostra as correntes iónicas (após subtracção P/-8 vazam...

A abordagem lacuna vaselina cut-aberto é usado para obter baixos gravações de ruídos de correntes iônicas e gating de canais iônicos dependentes de voltagem expressos em oócitos de Xenopus com alta resolução de cinética de canais rápidos. Com modificações menores, fixador de tensão fluorometria pode ser acoplado com o protocolo do oócito corte aberto.

O<em&gt; Xenopus</em&gt; Oocyte Cut-aberto vaselina Gap Técnica Voltage-clamp Com Fluorometria

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

O objetivo geral deste procedimento é obter gravações com baixo ruído de correntes iônicas e de comporta de canais iônicos ativados por voltagem expressos em zap cítulos, com alta resolução temporal das cinéticas rápidas do canal. Isso é realizado primeiramente injetando o RNA mensageiro do canal iônico gravado nos oócitos de rã. O segundo passo é criar pontes de agar, moldando os tubos capilares e, em seguida, preenchendo-os com uma solução de agar contendo sal.Em seguida, o arranjo aberto é preparado para o experimento colocando todos os componentes, incluindo o local de UO e as pontes de ágar, em suas posições designadas. O passo final é inserir o microeletrodo no local de UO para permitir gravações em regime de fixação de voltagem. Por fim, o protocolo de gravação é utilizado para demonstrar as correntes iônicas provenientes dos canais iônicos localizados na membrana do oócito.A principal vantagem da técnica de potencial fixo com preparação aberta é que permite gravações estáveis com baixo ruído de uma população muito grande de canais iônicos. Também possibilita uma rápida resolução da cinética dos canais. Uma demonstração visual deste método é essencial, pois algumas etapas, c

the-xenopus-oocyte-cut-open-vaseline-gap-voltage-clamp-technique-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este destina-se como uma introdução para o patch clamp de gravação a partir de oócitos Xenopus laevis. Abrange vitelínico remoção da membrana, a formação de um selo gigaohm (gigaseal), ea conversão opcional do patch para a topologia de fora-out.

Gravação de patch-clamp de canais iônicos Expresso em Oócitos Xenopus

Corrente iônica de canais BK é gravado usando técnicas de patch clamp. Canais BK são expressos...

Grampo patch e Técnicas de Perfusão para estudar canais iônicos Expresso em Xenopus Oócitos

Vamos descrever um método que mede a cinética de transporte de íons de proteínas da membrana juntamente com site-specific análise das mudanças conformacionais usando fluorescência em células individuais. Esta técnica é adaptável a canais iônicos, transportadores e bombas de íons e pode ser utilizado para determinar restrições de distância entre as subunidades da proteína.

Examinando o Dynamics Conformacional de Proteínas de Membrana In situ Com Labeling-Site dirigido Fluorescência

Descrevemos um método para quantificar a atividade de ATPases do tipo P de contratransporte de K+ pela expressão heteróloga das enzimas em oócitos de Xenopus e medindo a captação de Rb+ ou Li+ em células individuais por espectrofotometria de absorção atômica. O método é uma alternativa sensível e segura aos experimentos de fluxo de radioisótopos, facilitando estudos cinéticos complexos.

Medindo o transporte de catiões de Na, K e H, K-ATPase em<em&gt; Xenopus</em&gt; Oócitos por espectrofotometria de absorção atômica: uma alternativa para Ensaios de Radioisótopos

Para complementar os métodos habitualmente utilizados para estudar TRPV4 de, dois métodos são descritos: O mecanosensibilidade pode ser estudada por Ca 2 +-aequorina luminometria em leveduras transgénicas após desafio com hipo-osmótico. Ele também pode ser examinada em TRPV4-ARN injectado oócitos de Xenopus a-célula inteira de dois eléctrodos de aperto de voltagem ou remendo grampo em no modo de célula ou excisadas.

Luminométricos levedura e Xenopus ovócitos eletrofisiológicos Exames do mecanosensibilidade Molecular de TRPV4

Um método para imagens de alterações no potencial de membrana usando indicadores de tensão geneticamente codificados é descrito.

Membrana de imagem Potencial com dois tipos de sensores de tensão fluorescentes geneticamente codificados

Procedimentos otimizados para o isolamento de folículos únicos, microinjeções de RNA citoplasmático, remoção de camadas de células circundantes e expressão de proteínas em oócitos de Xenopus são descritos. Além disso, é apresentado um método simples para mudanças rápidas de solução em experimentos eletrofisiológicos com canais iônicos dependentes de ligantes.

Xenopus Oócitos: Métodos otimizados para microinjeção, remoção de camadas de células foliculares e rápidas mudanças Solução em experimentos eletrofisiológicos

Este artigo descreve um aumento da Fluorometria Voltagem-Clamp convencional (VCF) onde Fluorescente Aminoácidos Não-naturais (fUAA) são usados ​​em vez de corantes maleimida, para sondar rearranjos estruturais em canais iônicos. O procedimento inclui injeção de DNA de oócito de Xenopus , coinjeção de ARN / fUAA e medições simultâneas de corrente e fluorescência.

Braçadeira de tensão Fluorometria em<em&gt; Xenopus</em&gt; Oócitos Usando Aminoácidos Fluorescentes Não-naturais

As gravações de células inteiras dos fotorreceptores Drosophila melanogaster permitem a medição de solavancos escuros espontâneos, colisões quânticas, respostas macroscópicas à luz e relações tensão-tensão em várias condições. Em combinação com as ferramentas de manipulação genética de D. melanogaster , este método permite o estudo da via de sinalização inositol-lipídico ubíqua e seu alvo, o canal TRP.

Método eletrofisiológico para gravações de tensão de célula inteira de<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorreceptores

Descrevemos um método para a preparação e imagem ao vivo de extratos citoplasmáticos não diluídos de ovos de Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparação de extrato de ovo e métodos de imagem vivos para visualização da organização citoplasmática dinâmica

Aqui apresentamos um protocolo para expressar proteínas de junção de lacunas em oócitos xenopus e gravar corrente juncional entre dois oócitos apposed usando um amplificador comercial projetado para gravações de tensão de oócito duplo em um modo de medição de corrente lateral alta.

Gravação gap junction current de Xenopus Oocytes

Aprenda a técnica de voltage-clamp com gap de vaselina em oócitos de Xenopus para registrar correntes iônicas com baixo ruído e alta resolução temporal. Este método permite estudar a cinética de canais iônicos em eletrofisiologia.

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