Avaliação da Estrutura e Função do Ventrículo Direito em modelo de camundongo Pulmonary Artery constrição por Ecocardiografia transtorácica

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um método não invasivo para avaliar a estrutura e a função do ventrículo direito em um modelo de camundongo de constrição da artéria pulmonar. Isso é feito obtendo-se primeiro por ultrassom, as visualizações dos modos B e M dos eixos longos paraesternais para obter a dimensão da câmara do ventrículo direito, encurtamento fracionário e espessura da parede do ventrículo direito. O segundo passo é obter uma visão do eixo curto paraesternal no nível papilar médio para calcular a mudança da área fracionária.

Em seguida, obtém-se a visão do eixo curto para esternal no nível da valva aórtica para atingir a espessura da parede do VD e a velocidade de pico da artéria pulmonar. A etapa final é obter uma visão modificada do eixo longo paraesternal do VD e da AP Para calcular a velocidade de pico da artéria pulmonar, o cálculo da AF pode ser feito a partir do eixo curto e longo. Em última análise, com base nas imagens acima, etapa cinco, o cálculo e a análise de dados podem ser realizados offline.

A principal vantagem dessa técnica dos métodos existentes, como a caracterização do VD, é que a ecocardiografia é um método não invasivo. Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave na avaliação da estrutura e função do VD. Para iniciar este protocolo, primeiro obtenha camundongos machos C 57 pretos de seis com oito semanas de idade e deixe-os se aclimatar por uma semana antes de qualquer procedimento experimental.

Em seguida, anestesiar totalmente os animais e realizar a oclusão da artéria pulmonar de acordo com as diretrizes do A VMA e os protocolos iacuc aprovados pela sua instituição. Observe que, durante a imagem, a escolha adequada da anestesia, como uma curta duração de isoflurano inalatório, é crucial para a manutenção dos batimentos cardíacos em taxas fisiológicas normais. As imagens como as vistas aqui são coletadas usando o sistema vivo 2100.

Imagens semelhantes podem ser obtidas usando sistemas de imagem de ultrassom de outros fabricantes. Recomenda-se que todas as imagens sejam obtidas e analisadas de forma cega sempre que possível. Comece usando o modo B para obter uma visão completa do eixo longo paraesternal do ventrículo esquerdo com o animal em decúbito dorsal.

Na plataforma. Posicione a sonda de ultrassom de 40 megahertz, também conhecida como MS five 50 D no animal com um ângulo de cerca de 30 graus no sentido anti-horário em relação à linha paraesternal esquerda com o entalhe apontando na direção do mimo. Em seguida, ajuste o ângulo da sonda inclinando ligeiramente ao longo do eixo Y, como visto aqui, para obter uma visão completa da câmara do ventrículo esquerdo no centro da tela.

Assim que os pontos de referência adequados forem claramente visualizados, mude para o modo M, uma linha indicadora aparecerá na tela. Na configuração do modo M, a linha deve ser posicionada para passar pela porção mais larga da câmara ventricular direita usando a aorta como ponto de referência, conforme ilustrado aqui em um modelo de oclusão da artéria pulmonar e em um camundongo simulado. Nesta visão, a parede do ventrículo direito e o septo intraventricular devem estar claramente visíveis, certifique-se de que a profundidade do foco esteja no centro da câmara do ventrículo direito.

Registre os dados na taxa de quadros mais alta possível para medição da dimensão da câmara do ventrículo direito, encurtamento fracionário e espessura da parede do ventrículo direito offline. Em seguida, para obter alterações de área fracionária, mude para o modo B. Em seguida, encontre o eixo longo view como antes e, em seguida, gire a sonda 90 graus no sentido horário Para obter o eixo curto view, incline a sonda ligeiramente ao longo do eixo X da sonda para evitar a obstrução view do esterno.

Em seguida, mova-se ligeiramente para cima e para baixo ao longo do eixo Y da sonda. Para obter a visão papilar média, procure a visão com a maior dimensão da câmara nesta visão, os músculos papilares estão normalmente localizados nas posições de duas e cinco horas, como visto aqui agora a partir da visão do eixo curto para esternal, mova a sonda no eixo Y em direção ao crânio até que a seção transversal da válvula aórtica possa ser vista no meio da janela. A via de saída do ventrículo direito deve ser visível na parte superior como uma estrutura em forma de meia-lua com a válvula tricúspide separando o ventrículo direito do átrio direito.

Conforme ilustrado aqui, registre os dados usando ctor para a medição do ventrículo direito. A espessura da parede offline permanece na mesma posição. Mude para o modo doppler colorido e posicione a linha tracejada amarela PW paralela à direção do fluxo no recipiente.

Observe que as cores azul e vermelho indicam fluxo para longe e em direção à sonda, respectivamente. Em seguida, coloque o cursor da onda de pulso na área estenosada. É aceitável ter um ângulo de sonda inferior a 20 para dados de registro de medição precisos usando ctor para medição da velocidade de pico de PA offline.

Em seguida, para obter uma visão modificada do eixo longo paraesternal, continue na configuração do modo B e posicione a sonda na linha paraesternal direita e incline lentamente a sonda em um ângulo de cerca de 30 a 45 graus no eixo Y da sonda em direção ao tórax para visualizar claramente a artéria pulmonar cruzando a aorta. Em seguida, mude para o modo doppler colorido e posicione a linha tracejada PW amarela paralela à direção do fluxo no recipiente. O ângulo Doppler deve ser o mais próximo possível de zero grau, mantendo a direcionalidade paralela ao fluxo de PA.

Coloque o cursor PW na ponta dos folhetos da válvula pulmonar e registre os dados usando ctor e meça a velocidade de pico do PA. A espessura da parede do ventrículo direito off-line pode ser calculada a partir dos dados do modo B obtidos da visão do eixo curto paraesternal do ventrículo direito no nível da aorta. Comece selecionando a ferramenta de rastreamento de área 2D para traçar a área da parede do ventrículo direito na diástole, como visto aqui em rosa.

Em seguida, use a ferramenta de rastreamento de distância para traçar as circunferências interna e externa da parede do trajeto de saída do ventrículo direito. Pegue a média das circunferências interna e externa que a espessura da parede do ventrículo direito pode ser calculada usando a equação vista aqui. Medições consistentes da espessura da parede do ventrículo direito, área ou dimensões podem ser feitas usando várias janelas acústicas nos eixos longo e curto.

A escolha de algumas dessas janelas dependerá da experiência do operador e pode ser responsável por alguma variabilidade, como visto aqui. A função sistólica do ventrículo direito pode ser medida em placas, vista como porcentagem de encurtamento fracionário ou na visão do músculo papilar médio como porcentagem de alteração da área fracionária, respectivamente. A dilatação do VD pode ser medida no eixo longo e curto como dimensão da câmara do ventrículo direito e área do ventrículo direito.

Na diástole, a espessura da parede livre do ventrículo direito como marcador de hipertrofia do VD pode ser determinada com precisão usando o modo M ou o método de rastreamento de área. Da mesma forma, a velocidade de pico da artéria pulmonar também pode ser obtida com o modo de eixo longo para esternal ou eixo curto. Medições confiáveis da velocidade de pico do PA e, portanto, do gradiente de pressão de pico dentro do PA podem ser obtidas usando o doppler colorido em janelas acústicas de eixo curto e longo.

Por fim, neste estudo, mostramos que a ecocardiografia não invasiva é uma alternativa viável ao método de cateterismo cardíaco direito terminal atualmente utilizado como padrão-ouro para a medida do RVSP em cinco animais. O cateterismo foi realizado para comparação com o RVSP. A medição e os cálculos de pressão foram altamente comparáveis.

Uma vez medida, essa técnica pode ser feita em 15 a 20 minutos se for realizada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de manter a frequência cardíaca dos camundongos em níveis fisiológicos. Após este procedimento, este cateterismo ventricular pode ser realizado para obter a pressão sistólica ventricular da costela.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como medir as alterações estruturais e funcionais no ventrículo direito usando ecocardiografia em camundongos após constrição da artéria pulmonar.