Name: A detecção do genoma e Transcrições de um vírus DNA persistente em tecidos neuronais por fluorescentes Em situ Hibridização Combinado com Imunocoloração (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-23T14:45:00.000+00:00
Duration: 13 min 22 s
Description: Aprenda a detectar o genoma do vírus herpes simplex tipo 1 em gânglios trigeminais de camundongos infectados usando hibridização in situ fluorescente. Este método permite visualizar o genoma viral em neurônios individuais.

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Agradecemos N. Sawtell (Hospital Medical Center de Cincinnati Children, Cincinnati, Ohio, EUA), S. Efstathiou (University of Cambridge, Reino Unido) e James Hill (LSU Health Sciences Center, New Orleans, EUA) para fornecer amostras de HSV-1 infectados ratinhos e coelhos, respectivamente, e para reagentes; H. Masumoto (Instituto Kazusa DNA Research, Chiba, Japão) e S. Khochbin (Institut Albert Bonniot, Grenoble, França) para discussões úteis. Este trabalho foi financiado por doações do Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) (programa ATIP, para PL, http://www.cnrs.fr), a Agência Nacional Francesa de Pesquisa (ANR) (ANR-05-MIIM- 008-01, CENTROLAT, <a href="http://www.agencenationale-recherche.fr">http://www.agencenationale-recherche.fr</a> ), a Fundação FINOVI ( <a href="http://www.finovi.org/:fr:start">http://www.finovi.org/:fr:start</a> ), o Labex DEVweCAN (ANR-10-LabX-61 ) da Université de Lyon, dentro do programa &quot;Investissements d&#39;Avenir &quot;(ANR-11-IDEX-0007) operado pela ANR ( <a href="http://www.agence-nationale-recherche.fr">http://www.agence-nationale-recherche.fr</a> ), l&#39;Association pour la Recherche contre le Cancer (ARC-7979 e ARC- 4910, <a href="http://www.arc-cancer.net">http://www.arc-cancer.net</a> ), la Ligue Nationale Contre le Câncer (LNCC, <a href="http://www.ligue-cancer.net">http://www.ligue-cancer.net</a> ) e Inca (programa EPIPRO, <a href="http://www.e-cancer.fr">http://www.e -cancer.fr</a> ). FC e PL são pesquisadores do CNRS.

Os autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.

O protocolo aqui descrito permite a detecção de HSV-1 do genoma latente nos neurónios de secções de tecido neuronal de rato. O nosso conhecimento das vias que regulam a expressão de genes virais tem sido limitada pela falta de método para detectar ADN genómico de HSV-1 in situ no interior de tecidos neuronais. As informações sobre o número de cópias do genoma e proporção de neurônios infectados vieram principalmente de análise de PCR em neurônios dissociados 11,12. Em elucidar o papel da arquitetura ...

<html> Vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1) é um vírus humano neurotrópico persistente, que estabelece uma infecção latente a longo prazo nos neurónios do gânglio trigeminal (TG) do sistema nervoso periférico, a partir do qual reactiva periodicamente para replicar e propagação. O HSV-1 é um genoma de 150 kb de dsDNA de localizações no núcleo do neurónio hospedeira, onde permanece como chromatinized plasmídeos multicópia, que não se integram no genoma da célula hospedeira de 1,2. Durante a latência, o programa genético de HSV-1 do ciclo replicativo é fortemente reprimida, e a expressão do gene é restringida ao transcrito associado à latência (TAL), locus de estabelecimento de latência para o início da reactivação 3. LAT produz um longo 8,5 kb não codificante RNA transformado em um grande 2 kb lariat estável, e vários miRNA 4-7. HSV-1 latência é assim caracterizado pela presença do ADN genómico virai, o ARN LAT, e a ausência de proteínas do ciclo replicativo detectáveis. ONTEÚDO &quot;&gt; Os modelos animais, predominantemente rato e coelho, são modelos experimentais recapitulando várias características de latência em humanos. Um dos principais interesses desses modelos é que eles permitem estudar aspectos fisiológicos do HSV-1 latência em hospedeiros imunocompetentes. Nas últimas décadas , muitas ferramentas experimentais, tais como vírus e ratinhos geneticamente modificados, foram desenvolvidos para estudar a fisiologia, genética e biologia celular do HSV-1 de latência, a partir de tecidos animais. Até agora, ADN genómico virai foi detectado e quantificado por mancha de Southern e qPCR de TGs dissociada. No entanto, não existe presentemente nenhum método disponível para a detecção de HSV-1 do genoma por hibridização in situ em secções de tecido 8. Consequentemente, a latência é rotineiramente avaliada em seções histológicas, através da detecção de LAT RNA por hibridação in situ de ARN em vez de A detecção do genoma viral. Porque não tem sido possível caracterizar as células infectadas com base na presença de genomas virais, this limitação técnica tem sido uma grande desvantagem para a análise de muitos aspectos das interacções hospedeiro-vírus, tais como a relação entre o genoma viral e a expressão de genes celulares e virais ou do hospedeiro mediadas por células de resposta imune 9,10. Mais importante ainda, a heterogeneidade da célula-a-célula da infecção latente permanece relativamente inexplorado e foi mostrado ser uma característica chave de latência em ratos e em neurónios sensoriais ganglionares humanos implantados em ratos SCID 11-17. Tipicamente, foi mostrado por qPCR que o genoma de HSV-1 Número de cópia por célula varia de 5 a várias centenas. Embora LAT aparece como um regulador chave da latência e reativação, os dados de qPCR em neurônios isolados e in situ PCR indicaram que apenas um subconjunto de neurônios latentes infectadas, tão baixo quanto 30%, expressa o locus LAT 11,12,18-21. Como a célula hospedeira e o ambiente celular no tecido impacto sobre o estabelecimento de latência do vírus ea expressão do gene viral permanece obscura. Descrevemos aqui um sólido fluorescente de hibridização in situ (FISH), o método para a detecção eficiente de baixa cópia de HSV-1 de ADN genómico dentro de secções de tecido de animais neuronais. Este método foi desenvolvido e utilizado por nós para obter acesso a resolução da microscopia de imagem de alta que é necessário estudar a interação do genoma viral com a célula hospedeira componentes intra-nucleares 22. Além disso, é descrito um método de coloração de múltiplos para a detecção simultânea do DNA viral com RNA e proteínas, o que é uma ferramenta única para descrever as interacções vírus-hospedeiro que regulam a expressão de genes virais. O método também pode ser aplicado a uma ampla gama de análises que requerem a detecção de HSV-1 do genoma latente, tais como a quantificação neurónios infectados em grande número de secções. Um passo fundamental é aplicar o tratamento de recuperação antigênica para fazer o DNA viral acessível a hibridização. Assim, este protocolo também pode ser eficiente para a detecçãode outros vírus dsDNA, que não são atualmente detectável por abordagens DNA-FISH convencionais dentro tecidos animais.

<table><tbody><tr><td>Camundongos Balb/c</td><td>Janvier, França</td><td></td><td>Fêmeas de 6 semanas de idade</td></tr><tr><td>HSV-1 cepas</td><td>SC16 cepa (tipo selvagem)</td><td></td><td>Ver Labetoule, M. et al. Invest. Oftalmol. Vis. Sci 44, 217&ndash; 225 (2003) para obter detalhes sobre a cepa HSV-1 e a preparação do estoque de vírus.</td></tr><tr><td>Cloridrato de cetamina</td><td>Sigma</td><td>K2753</td><td>Injeção intraperitoneal de uma solução contendo cetamina (100mg/kg) e xilazina (10mg/kg)</td></tr><tr><td>Cloridrato de xilazina</td><td>Sigma</td><td>X1251</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído (PFA)</td><td>Sigma</td><td>158127</td><td>Suspenda 4 g de PFA em 90 ml de água. Adicione 50 &micro; l de 1N NaOH e calor a 60 &graus; C em banho-maria com agitação. O PFA se dissolve em cerca de 30 min. Adicione 10 ml de PBS 10x. Esta solução pode ser preparada com antecedência e armazenada a -20 &graus; C em tubos de 5 ml. Cuidado. Manipular sob um exaustor.</td></tr><tr><td>Fisiológico Salino</td><td>Sigma</td><td>07982-100TAB-F</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS, pH 7.4 (estéril)</td><td>Life Technologies</td><td>10010-015</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Sigma</td><td>84100</td><td>Prepare uma solução de sacarose a 20% em 1x PBS.</td></tr><tr><td>Meio de incorporação crioseccionado - Composto OCT Tissue-Tek</td><td>SAKURA</td><td>4583</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit de purificação de DNA de vetor grande</td><td>Qiagen</td><td>12462</td><td>Para purificar o vetor Cosmid ou BAC contendo o genoma HSV-1 e armazenar a -20 &deg; </td></tr><tr><td>Kit de tradução C Nick</td><td>Roche Applied Sciences</td><td>10 976 776 001</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Cy3-dCTP</td><td>GE Healthcare</td><td>PA53021</td><td>Proteger da luz</td></tr><tr><td>0.5 M EDTA</td><td>Sigma</td><td>E6758</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>G50 Mini coluna giratória</td><td>GE Healthcare</td><td>27-5330-01</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>DNA de esperma de salmão 10 mg/ml</td><td>Invitrogen Life Technologies</td><td>15632-011</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Etanol grau de biologia molecular</td><td>Sigma</td><td>87047</td><td>Prepare uma solução a 70%</td></tr><tr><td>DNA de esperma de salmão</td><td>Invitrogen Life Technologies</td><td>15632-011</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Formamida Biologia Molecular grau</td><td>Sigma</td><td>F9037</td><td>Cuidado. Manipular sob a hotte.</td></tr><tr><td>Sonda comercial biotinilada HSV-1</td><td>Enzo Life Sciences</td><td>ENZ-40838</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Caneta hidrofóbica ImmEdge</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-4000</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>20x Citrato de Sódio Salino (SSC)</td><td>Sigma</td><td>S6639</td><td>Prepare uma solução 2x SSC em ddH20.</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787</td><td>Prepare uma solução estoque a 10% em água e armazene a +4 °C. Prepare a solução a 0,5% em 1x PBS antes de usar.</td></tr><tr><td>10 mM Citrato de sódio pH 6,0</td><td>Sigma</td><td>S1804</td><td>Prepare uma solução estoque 100 mM (10x). Pesar 10,5 g de ácido cítrico (MW 210.14). Cuidado, irritante e tóxico, use máscara e luvas apropriadas) e dissolva em 400 ml de água. Ajuste o pH em 6,0 com 1 N NaOH (cuidado, irritante, use luvas). Ajustar para 500 ml com água destilada. Diluir 10x em água destilada antes de usar.</td></tr><tr><td>Ácido Acético</td><td>Sigma</td><td>320099</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Metanol, grau de biologia molecular</td><td>Sigma</td><td>322415</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Sulfato de dextrano - MW 500.000</td><td>Euromedex</td><td>EU0606-A</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Solução de Denhardt (100x)</td><td>Euromedex</td><td>1020-A</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Cimento de Borracha "FixoGum"</td> <td>Marabut</td><td>290110000</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit de purificação de DNA&nbsp; - Kit de purificação de PCR Qiaquick</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit de transcrição T7 in vitro</td><td>Ambion Life Technologies</td><td>AM1314</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Biotina-16-UTP</td><td>Roche Ciências Aplicadas</td><td>11388908910</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Minicoluna de purificação de RNA</td><td>Qiagen</td><td>73404</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Complexo de Ribonucleosídeo Vanadil</td>, <td>New England Biolabs</td><td>S1402S</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Sigma</td><td>H3410</td><td>Preparar uma solução a 3% em água destilada. Armazene em +4 &deg; C e proteger da luz.</td></tr><tr><td>TRNA de levedura</td><td>Invitrogen</td><td>15401011</td><td>preparar uma solução de 10 mg/ml em água livre de RNAse</td></tr><tr><td>Soro de cabra normal</td><td>Invitrogen</td><td>PCN5000</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticorpos primários</td><td>qualquer fornecedor</td><td></td><td>Os seguintes anticorpos primários foram usados na seção de resultados: anti-camundongo CENP-A (coelho mAb C51A7, Cell Signaling Technologies) e anti-ATRX H-300 (Santa Cruz Biotechnology)</td></tr><tr><td>Anticorpos fluorescentes secundários</td><td>Invitrogen Life Technologies</td><td></td><td>Os anticorpos secundários fluorescentes usados rotineiramente em nosso protocolo são anticorpos de cabra marcados com Alexa Fluor (IgG H+L). O anticorpo usado na seção de resultados é um anticorpo anti-cabra de coelho labalizado com Alexa Fluor 488 (referência A11001)</td></tr><tr><td>Kit de amplificação de sinal de tiramida (TSA) - estreptavidina + Alexa Fluor 350 (fluorescência azul)</td><td>Invitrogen Life Technologies</td><td>#T20937</td><td>Os kits TSA também estão disponíveis no</td></tr><tr><td>kit de amplificação de sinal de tiramida (TSA) Perkin Elmer - estreptavidina + Alexa Fluor 488 (fluorescência verde)</td><td>Invitrogen Life Technologies</td><td>#T20932</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen Life Technologies</td><td>H3570</td><td>Prepare um 0.5 &micro; g/ml em 1x PBS imediatamente antes da utilização. Descarte a solução restante.</td></tr><tr><td>Lamínula de 22 mm x 50 mm. n&deg; Microscopia Eletrônica de Vidro 1.5</td><td>Sciences</td><td>72204-04</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Meio de montagem com agente anti-desbotamento - VECASHIELD</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1000</td><td>Outro produto convencional é o Fluoromount G da Electron Microscopy Science</td></tr><tr><td>Lâminas de vidro Superfrost</td><td>FisherScientific</td><td>12-550-15</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Equipamento/Material</td><td>Nota de referência da empresa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agulha para infecção</td><td></td><td></td><td>Micropipeta de vidro trefilada a quente. Feito sob medida.</td></tr><tr><td>Equipamento de dissecação</td><td>Moria, França</td><td></td><td>Tesoura e fórceps microcirúrgicos</td></tr><tr><td>Bomba peristáltica</td><td>Cole Palmer Instruments</td><td></td><td>Easyload Masterflex</td></tr><tr><td>Dispositivo de bomba de microsseringa (Nano Pump)</td><td>kdScientific</td><td>KDS310</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Criostato</td><td>Leica França</td><td>CM 1510-1</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>-80 &deg; C freezer</td><td>Sanyo</td><td></td><td>Ultra Low -80 &deg; C</td></tr><tr>Forno <td></td><td></td><td>de micro-ondas doméstico</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Aquecedor de bloco seco</td><td>Eppendorf</td><td>022670204</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Fosso de Incubadora</td><td>Boekel Scientific</td><td>240000</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Pote Coplin</td><td>Dominique Dutscher</td><td>68512</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Recipiente para Mancha de Vidro</td><td>Dominique Dutscher</td><td>68506</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Microscópio fluorescente</td><td>Zeiss</td><td></td><td>As imagens apresentadas na seção de resultados foram coletadas com um Zeiss AxioObserver com objetiva 40X LD NeoFluor N.A 0.6 e 100X PlanApochromat N.A 1.3. Conjunto de filtros #38, #43 e #43. Fonte de luz de fluorescência HXP 120. Câmera CCD Photometrics CoolSNAP HQ2. O sinal será mais facilmente observado em um microscópio recente de alta eficiência, como a série Zeiss AxioImager / AxioObserver, a série Nikon Ti-E / Ni-E ou a série Leica DM / DMI6000</td></tr></tbody></table>

a detecção do genoma e transcrições de um vírus dna persistente em tecidos neuronais por fluorescentes em situ hibridização combinado com imunocoloração

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Codetection uma única célula de um gene, o seu produto de ARN e as proteínas reguladoras celulares é fundamental para o estudo da expressão gênica. Este é um grande desafio no campo da virologia e, em especial para os vírus de ADN persistentes-replicante nucleares que envolvem modelos animais para o estudo. Tipo de vírus Herpes simplex 1 (HSV-1) estabelece uma infecção latente ao longo da vida nos neurônios periféricos. Vírus latente serve como reservatório, a partir do qual reactiva e conduz a um novo episódio herpético. A biologia da célula de HSV-1 latência permanece mal compreendida, em parte devido à falta de métodos para detectar o HSV-1 genomas in situ em modelos animais. Descreve-se um DNA-hibridação in situ fluorescente (FISH) abordagem de detecção eficiente de baixa cópia genomas virais dentro das seções de tecidos neuronais a partir de modelos animais infectados. O método baseia-se à base de calor antigénio desmascaramento, e as sondas de ADN caseiros directamente marcados ou sondas disponíveis comercialmente. Desenvolvemos um stai triploabordagem ning, combinando DNA-FISH com RNA-FISH e imunofluorescência, utilizando peroxidase baseado amplificação de sinal para acomodar cada requisito de coloração. Uma grande melhoria é a possibilidade de obter, dentro de 10 um secções de tecido, os sinais de baixa de fundo que pode ser fotografada em alta resolução por microscopia confocal e de campo amplo epifluorescência convencional. Além disso, a coloração tripla trabalhou com uma ampla gama de anticorpos dirigidos contra as proteínas virais e celulares. O protocolo completo leva 2,5 dias para acomodar o anticorpo e a penetração da sonda no interior do tecido.

Depois de vários meses de testes extensos descobrimos que baseada em calor latente desmascaramento química feita de HSV-1 do genoma disponível para hibridização in situ fluorescente. Durante o processo, tentámos vários processos de desmascaramento, e tratamentos baseados apenas pelo calor (ou seja, o aquecimento das secções até à temperatura sub-ponto de ebulição em um forno de micro-ondas) apareceu eficiente. Em seguida, testamos vários buffers de sal que são rotineiramente utilizados em imuno-histoqu...

Foi estabelecido um protocolo de hibridização fluorescente in situ para a detecção de um genoma do vírus de ADN persistente nas secções de tecido de modelos animais. Este protocolo permite estudar processo de infecção por codetection do genoma viral, os seus produtos de ARN, e proteínas virais ou celulares no interior das células individuais.

A detecção do genoma e Transcrições de um vírus DNA persistente em tecidos neuronais por fluorescentes Em situ Hibridização Combinado com Imunocoloração

Single cell codetection of a gene, its RNA product and cellular regulatory proteins is critical to study gene expression regulation. This is a challenge ...

O objetivo geral deste procedimento é detectar o genoma do vírus do herpes simples, tipo um, em cortes de gânglios trigêmeos de camundongos latentes infectados por hibridização fluorescente in situ. Isso é realizado primeiramente inoculando o vírus no lábio do animal, seguido por um período de incubação de 28 dias, durante o qual o vírus se estabelece nos gânglios trigêmeos. Em seguida, os gânglios trigêmeos são coletados, embutidos e seccionados por criomicrotomia.As seções são submetidas a vários tratamentos preparatórios, incluindo a etapa fundamental de aquecimento em tampão de citrato de sódio. Por fim, é realizada a hibridização in situ fluorescente utilizando sondas fluorescentes específicas para o herpes. Em última análise, os resultados podem mostrar o posicionamento do genoma viral dentro do núcleo de neurônios individualmente infectados por meio da microscopia confocal.Em muitos casos, o estudo de um ciclo de vida variado exige o uso de modelos animais. O principal benefício da técnica apresentada aqui é que ela fornece dados no nível de célula única utilizando uma abordagem de individualização institucional. O modelo real de infecções por HS reproduz a maioria dos aspec

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Uma técnica que combina na coloração tetrâmero situ e hibridização in situ (ISTH) permite o mapeamento, visualização e análise da proximidade espacial de vírus específicos células CD8 + T ao seu infectados por vírus metas e determinação das relações quantitativas entre estes efetores imunes e metas aos resultados infecção.

Uma técnica para Simultaneamente Visualize-Virus específicos células T CD8 + e células infectadas por vírus In situ</em

Detecção de RNA viral por fluorescência<em&gt; In situ</em&gt; Hybridization (FISH)

Neste vídeo, as células infectadas com vírions MCPyV foram submetidas a uma reação em cadeia de hibridização in situ para detectar genomas específicos do MCPyV. Além disso, a técnica DNA-HCR foi combinada com FISH para visualizar o DNA MCPyV em células da pele humana infectadas.

HCR-DNA FISH: Uma técnica de hibridização in situ de fluorescência para detectar DNA viral em células infectadas

Fonte: Vallery, T. K. &amp; Steitz, J. A. Hibridização Fluorescente In Situ Quantitativa (FISH) e Imunofluorescência (IF) de Produtos Gênicos Específicos em Células Infectadas pelo KSHV. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra a hibridização fluorescente in situ para visualizar RNA viral em células infectadas por vírus. Ele descreve as etapas envolvidas na hibridização da sonda, amplificação do sinal e imagem confocal.

Determinação da Distribuição de RNA Viral em Células Hospedeiras por Hibridização In Situ Fluorescente

Fonte: Baleriola, J., et. al., Detecção de mRNAs localizados axonalmente em seções cerebrais usando hibridização in situ de alta resolução.  J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra a detecção de mRNA dentro de axônios colinérgicos em fatias fixas de hipocampo de camundongo usando hibridização in situ fluorescente e coloração de anticorpos. A microscopia de fluorescência revela a localização espacial de mRNAs marcados com sonda e colina acetiltransferase em neurônios colinérgicos.

Imunocoloração de neurônios em fatias de cérebro de camundongo após hibridização in situ fluorescente

Localizar a expressão gênica em tipos específicos de células pode ser um desafio devido à falta de anticorpos específicos. Aqui descrevemos um protocolo para detecção tripla simultânea de expressão gênica combinando hibridização in situ de RNA de fluorescência dupla com imunocoloração.

Combinando Duplo Fluorescência<em&gt; In Situ</em&gt; A hibridação com imunomarcação para a detecção da expressão de três genes em secções do cérebro do rato

Fábricas de transcriptional virais são estruturas discretas que são enriquecidas com celular RNA polimerase II para aumentar a transcrição do gene viral durante a reativação. Aqui, um método para localizar sites de ativamente transcrevendo cromatina viral em 3D espaço nuclear por uma combinação de hibridação de RNA de coloração e em situ de imunofluorescência é descrito.

Imagem latente funcional das fábricas de transcrição Viral usando microscopia de fluorescência 3D

Nós descrevemos um protocolo que utiliza a hibridação in situ da fluorescência (peixes) para visualizar RNAs herpética múltiplas dentro das pilhas humanas liticamente contaminadas, na suspensão ou no aderente. Este protocolo inclui a quantificação da fluorescência produzindo uma relação Mimivírus e pode ser estendido para o visualização simultâneo do anfitrião e das proteínas virais com imunofluorescência (se).

Hibridação in situ da fluorescência quantitativa (peixes) e immunofluorescence (se) de produtos específicos do gene em pilhas KSHV-infectadas

Este protocolo descreve um método para combinar hibridização in situ fluorescente (FISH) e imunohistoquímica de fluorescência (IHQ) em cortes frescos congelados e fixos de camundongos em cérebros, com o objetivo de obter sinais de FISH multimarcados e IHC de fluorescência. IHQ teve como alvo proteínas citoplasmáticas e ligadas à membrana.

Combinando Hibridização In Situ por Fluorescência Multiplex com Imunohistoquímica Fluorescente em Seções Cerebrais de Camundongos Frescos Congelados ou Fixos

Apresenta-se aqui um protocolo para uma abordagem de imagem de fluorescência, multiplex immunofluorescente cell-based detection of DNA, RNA and protein (MICDDRP), um método capaz de visualização simultânea de fluorescência unicelular de proteínas virais e ácidos nucleicos de diferentes tipos e filamentos. Essa abordagem pode ser aplicada a uma gama diversificada de sistemas.

Imagem de fluorescência multiplexada de célula única para visualizar ácidos nucleicos virais e proteínas e monitorar HIV, HTLV, HBV, HCV, Zika Virus e Influenza Infection

Aprenda a detectar o genoma do vírus herpes simplex tipo 1 em gânglios trigeminais de camundongos infectados usando hibridização in situ fluorescente. Este método permite visualizar o genoma viral em neurônios individuais.

A detecção do genoma e Transcrições de um vírus DNA persistente em tecidos neuronais por fluorescentes Em situ Hibridização Combinado com Imunocoloração (Vídeo) | JoVE Journal

A detecção do genoma e Transcrições de um vírus DNA persistente em tecidos neuronais por fluorescentes Em situ Hibridização Combinado com Imunocoloração

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