Name: Heterotópico Rat auxiliar Liver Transplantation com fluxo regulado Portal Vein Arterialização na Insuficiência Hepática Aguda (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 19 s
Description: Aprenda o transplante hepático auxiliar heterotópico em ratos com arterialização da veia porta para insuficiência hepática aguda. Este método avalia morfologia e função do enxerto em modelo experimental.

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Este estudo foi financiado pela &quot;Deutsche Forschungsgemeinschaft&quot; (DFG). K. Schleimer foi apoiado pelo Lise Meitner Sociedade do Ministério da Ciência e Pesquisa da NRW. Gostaríamos de agradecer a senhora Mary-Joan Blümich pelo seu excelente assistência edição. Dr. Maria Kokozidou foi financiada a Fresenius 2011_A61.

1. Animais Experimentais <ol><li> Obter uma aprovação do Comitê de Ética local para todos os experimentos que serão realizados, de acordo com as diretrizes de proteção animal FELASA (K 40, 17/99). </li><li> Use ratos Lewis machos disponíveis para compra a partir de qualquer criador comercial (por exemplo, Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Alemanha). Aqui, 224 animais (112 doadores, 112 destinatários) foram utilizados para realizar 112 transplantes. Os receptores foram sacrificados seis semanas de pós-operatório. No momento da operação, os animais devem pesar 250-350 g. </li><li> Manter os animais em quartos climatizados com acesso gratuito à comida e água. </li></ol> 2 Anestesia e preparação operativo <ol><li> Colocar o rato dentro de uma caixa de plexiglas ligado à máquina de anestesia com uma taxa de fluxo de oxigénio de 1 L / min, e um vaporizador de isofluorano com 5% de gás anestésico para induzir a anestesia. Manter a anestesia em 1,5% isofluorano. </li><li> Colocar os ratos emdecúbito dorsal sobre uma placa de aquecimento. </li><li> Retire a pele do abdômen com um creme de depilação. </li><li> Prepare um campo cirúrgico estéril da seguinte forma: Use um desinfetante para limpar a bancada. Para a desinfecção de clorexidina a utilização local de incisão primeira, segunda e álcool, finalmente, uma solução de esfrega (por exemplo, cloro-hexidina e 70% de álcool isopropílico). Usar um vestido cirúrgico descartável e luvas cirúrgicas. </li><li> Use instrumentos de microcirurgia estéreis. </li><li> Use um microscópio de operação em ampliação de 12-20 vezes. </li></ol> 3 Procedimento Cirúrgico <ol><li> Operação do Doador Preparação <ol><li> Realize uma laparotomia mediana e ressecção do lobo lateral esquerdo eo lobo médio do enxerto, como descrito por Higgins. 14 </li><li> Em seguida, preparar o ligamento hepatoduodenal. Primeiro ligadura do ducto biliar, a fim de induzir a congestão e dilatação do ducto biliar. Em seguida, ligar e transecto a gastroduodenal veia e artéria. Em seguida, isolar o tronco celíaco e da artéria hepática comum e transecto da artéria gástrica esquerda e artéria esplênica. Inciso do ducto biliar congestionado, e introduzir um stent 20-G para ele. O posicionamento do stent tem de assegurar a drenagem de todo o sistema de ductos biliares hilares. Transecto do ducto biliar distal ao stent. </li><li> Isolar o segmento infrahepatic da veia cava logo acima da veia renal direita. Perfusão </li><li> Após ligadura da aorta acima do tronco celíaco, fixar a veia porta e inciso lo. Introduzir o cateter de perfusão (14 L) para dentro da veia portal, e efectuar a perfusão com 30 ml de triptofano--cetoglutarato de histidina (HTK) -solution (12 cm de H2O, 4 ° C). </li><li> Cortar o diafragma e a veia cava supra-hepática para permitir que o perfusato para fluir para fora. </li><li> Extirpar o tronco celíaco, juntamente com um remendo da aorta e lave-o com uma solução de histidina-triptofano-cetoglutarato. Explantação </li><li> Transecto a veia cava infrahepatic logo acima da veia renal direita. </li><li> Em seguida, coloque um stent com um diâmetro de 0,3 milímetros na veia porta e corrigi-lo com uma ligadura. Durante a operação seguinte, na veia porta é arterializada através da artéria renal direita. Transecto a veia portal distal ao stent. </li><li> Após ligadura da veia cava supra-hepática, transecto-lo juntamente com um manguito de diafragma. </li><li> Explante enxerto e armazená-lo em histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK) -solution a 4 ° Celsius em um saco plástico com gelo. Suturas lugar de canto (8-0 Ethilon) na veia cava infrahepatic. </li></ol></li><li> Operação Destinatário <ol><li> Realize uma laparotomia mediana e preparar a veia cava infrahepatic. Em seguida, isolar a artéria renal direita e do ureter, ligar o ureter e transecção ele. Fixar a artéria renal direita em sua origem, em seguida, ligar a veia renal direita. Em seguida, após a transecção da re tantovasos Nal, realizar a nefrectomia. Posteriormente, encurtar a artéria renal direita, lave-o com solução de heparina salina (soro fisiológico 40 UI de heparina / ml). </li><li> Transecto a veia renal direita proximal à ligadura após o pinçamento proximal e distal da veia cava infrahepatic para criar um lúmen ovais na veia cava infrahepatic. Lavar a veia cava com uma solução salina com heparina. Implantar o enxerto na região renal direita do abdômen do destinatário. </li><li> Anastomosar infrahepatic fim-lateral da veia cava do doador para a veia cava recipient`s com sutura contínua 8-0 Ethilon. </li><li> Após lavagem com solução de heparina / solução salina, introdução do stent na veia portal para a artéria renal direita (Figura 3). Ligue a veia porta ea artéria renal com dois pontos (8-0 Ethilon). Fixe o stent ligando na artéria renal com uma ligadura (trançado de seda preta 7-0). </li><li> Para permitir a reperfusão, primeiro retire a braçadeira arterial, em seguida, ambosbraçadeiras venoso (Figura 4). </li><li> Prepare a aorta infra-renal, em seguida, coloque uma proximal e distal e inciso microclampe a aorta direita entre os dois grampos. Anastomose término-lateral entre a aorta e tronco celíaco do doador, usando um tapa-aórtica, com sutura contínua 10-0 Ethilon. </li><li> Inserir o canal biliar para o duodeno: Aplicar uma sutura em bolsa na parede do duodeno, fazer uma pequena incisão na parede do duodeno à direita no meio do em bolsa. Introduzir o ducto biliar stent para o duodeno, e aperte o sutura em bolsa. Finalmente, segurar o duodeno e do ducto biliar firmemente junto com dois pontos (8-0 Ethilon) (Figura 5). </li><li> Em seguida, realizar uma ressecção do fígado nativo, primeiro descrito por Emond et al. para imitar insuficiência hepática aguda. sete </li><li> Fixar a veia cava supra-hepática do enxerto, em conjunto com um rotador de diafragma, a parede abdominal lateral do recipient com Vicryl 4-0 sutura. Lavar o abdômen com solução salina (Figura 6). </li><li> Para a camada muscular utilizar um fio de sutura 4-0 Vicryl execução e para a sutura contínua cutânea 3-0 Vicryl. </li></ol></li></ol> 4 Recuperação e manejo pós-operatório <ol><li> Deixe os animais recuperar da anestesia sob uma lâmpada de aquecimento infravermelho. </li><li> Injectar buprenorfina a uma dose de 0,03-0,05 mg / kg de peso corporal todas as 8-12 horas sc durante 2 dias. </li><li> Examine os animais relativas ao estado geral e sinais de doença ou infecções. </li></ol> 5 Cálculo do fígado inicial Peso Native Calcula-se o peso inicial de fígado nativo da seguinte maneira: subtrair o peso dos lóbulos do fígado ressecados a partir do peso do fígado completo (2,66% do peso corporal (este valor, com um desvio padrão de 0,49% +/- foi determinada em experiências anteriores com n = 80 animais da mesma estirpe e umage)) 15.

<ol><li>Boudjema, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+for+fulminant+and+subfulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation for fulminant and subfulminant hepatic failure.</a> Transplantation. 59, 218-223 (1995).</li>
<li>Boudjema, K., Jaeck, D., Siméoni, U., Bientz, J., Chenard, M. P., Brunot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+auxiliary+liver+transplantation+for+subacute+liver+failure+in+a+child%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Temporary auxiliary liver transplantation for subacute liver failure in a child.</a> The Lancet. 342, 778-779 (1993).</li>
<li>Chenard-Neu, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation%3A+Regeneration+of+the+native+liver+and+outcome+in+30+patients+with+fulminant+hepatic+failure+-+a+multicenter+European+study%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation: Regeneration of the native liver and outcome in 30 patients with fulminant hepatic failure - a multicenter European study.</a> Hepatology. 23, 1119-1127 (1996).</li>
<li>Gubernatis, G., Pichlmayr, R., Kemnitz, J., Gratz, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver%E2%80%93transplantation+%28APOLT%29+for+fulminant+hepatic+failure%3A+first+successful+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver–transplantation (APOLT) for fulminant hepatic failure: first successful case report.</a> World J Surg. 15, 660-666 (1991).</li>
<li>Erhard, J., Lange, R., Giebler, R., Rauen, U., de Groot, H., Eigler, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterialization+of+the+portal+vein+in+orthotopic+and+auxiliary+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Arterialization of the portal vein in orthotopic and auxiliary liver transplantation.</a> Transplantation. 60, 877-879 (1995).</li>
<li>Erhard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+arterialization+of+the+portal+vein+for+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with arterialization of the portal vein for acute hepatic failure.</a> Transpl Int. 11, 266-271 (1998).</li>
<li>Emond, J., Capron-Laudereau, M., Meriggi, F., Bernuau, J., Reynes, M., Houssin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extent+of+Hepatectomy+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Extent of Hepatectomy in the rat.</a> Eur Surg Res. 21, 251-259 (1989).</li>
<li>Mas, A., Rode`s, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatic failure.</a> Lancet. 349, 1081-1085 (1997).</li>
<li>Terpstra, O. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+grafting%3A+a+new+concept+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver grafting: a new concept in liver transplantation.</a> The Lancet. 342, 758(1993).</li>
<li>Terpstra, O. T., Reuvers, C. B., Schalm, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+heterotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary heterotopic liver transplantation.</a> Transplantation. 45, 1003-1007 (1988).</li>
<li>Schleimer, K., Lange, R., Rauen, U., Erhard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+acute+liver+failure+in+the+rat+-+an+illustrated+description+of+a+new+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in acute liver failure in the rat - an illustrated description of a new surgical approach.</a> Langenbecks Arch Surg. 384 (2), 204-208 (1999).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiologic+microcirculation+of+the+heterotopically+transplanted+rat+liver+with+portal+vein+arterialization+depending+on+optimal+stent+diameter%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit%22%5BJournal%5D)">Physiologic microcirculation of the heterotopically transplanted rat liver with portal vein arterialization depending on optimal stent diameter.</a> Med Sci Monit. 28 (BR140-145), (2006).</li>
<li>Hong, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+portal+arterialization+with+auxiliary+liver+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hiroshima+J.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Study of portal arterialization with auxiliary liver in rats.</a> Hiroshima J. Med. Sci. 40, 29-33 (1991).</li>
<li>Higgins, G. M., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+pathology+of+the+liver.+I--Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Path%22%5BJournal%5D)">Experimental pathology of the liver. I--Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch. Path. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+flow-regulated+portal+vein+arterialization+offers+a+successful+therapeutic+option+in+acute+hepatic+failure--investigations+in+heterotopic+auxiliary+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization offers a successful therapeutic option in acute hepatic failure--investigations in heterotopic auxiliary rat liver transplantation.</a> Transpl Int. 19 (7), 581-588 (2006).</li>
<li>Lee, S., Edgington, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Forum%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation in the rat.</a> Surg. Forum. 17, 220-222 (1966).</li>
<li>Hess, F., Willemen, A., Jerusalem, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+the+rat%2C+influence+of+the+condition+of+the+recipient%27s+liver+on+the+fate+of+the+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in the rat, influence of the condition of the recipient's liver on the fate of the graft.</a> Eur. Surg. Res. 9, 270-279 (1977).</li>
<li>Aguirrezabalaga, J., Arnal, F., Marini, M., Centeno, A., Fernandez-Selles, C., Rey, I., Gomez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+portal+arterialization+in+the+rat%3A+description+of+a+new+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with portal arterialization in the rat: description of a new model.</a> Microsurgery. 22, 21-26 (2002).</li>
<li>Palmes, D., Dietl, K. H., Drews, G., Holzen, J. P., Spiegel, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+treatment+of+acute+liver+failure+in+a+new+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver transplantation: treatment of acute liver failure in a new rat model.</a> Langenbecks Arch Surg. (386), 534-541 (2002).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+microcirculation+of+a+liver+graft+by+controlled+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Improved microcirculation of a liver graft by controlled portal vein arterialization.</a> J Surg Res. 116 (2), 202-210 (2004).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+hyperperfusion+causes+disturbance+of+microcirculation+and+increased+rate+of+hepatocellular+apoptosis%3A+investigations+in+heterotopic+rat+liver+transplantation+with+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Portal hyperperfusion causes disturbance of microcirculation and increased rate of hepatocellular apoptosis: investigations in heterotopic rat liver transplantation with portal vein arterialization.</a> Transplant Proc. 38 (3), 725-729 (2006).</li>
</ol>

Todos os autores declararam interesses conflitantes.

O primeiro transplante de fígado de rato heterotópico auxiliar foi descrito por Lee et al. 16, em 1966, seguido por Hess. 17 A veia portal do enxerto anastomose com a veia portal do destinatário. Durante este processo, o fornecimento de sangue da veia porta para o fígado nativo é comprometida. Em 1991, Hong realizada parada com PVA através da artéria ilíaca do destinatário. 13 Sem regulação do fluxo sangüíneo portal enorme e congestionamentos sinusoi...

Insuficiência hepática aguda representa um problema grave em medicina clínica que leva a uma taxa de mortalidade de 60-80%. 8 Na insuficiência hepática aguda, transplante hepático auxiliar é uma terapia alternativa promissora para superar a fase aguda. O fígado nativo é deixado para regenerar e segue para a regeneração dos medicamentos de imunossupressão pode ser interrompido. Como consequência, o enxerto se torne atrófica. No entanto, a técnica operatória para transplante de fígado auxiliar ainda é discutido. 1-3 Neste contexto, Terpstra relatou a falta de espaço para o enxerto, o sangue portal roubar fenômeno e que o problema de congestão venosa e drenagem 9-10 veia porta do doador. anastomose fim-a-lado a veia porta do destinatário. Isto resultou em competição de fluxo portal entre o enxerto eo fígado nativo e em trombose da veia porta. A maioria destes problemas técnicos podem ser evitadas com a utilização do método APOLT-(orthotopic implantação de segmentos auxiliares). 4 No entanto, este método requer extensas ressecção de ambos o fígado nativo e o enxerto. 4, em 1998, e a sua equipa Erhard desenvolvido o transplante heterotópico auxiliar fígado (PARADA), utilizando a arterialização da veia porta (PVA) (Figura 1 ). O hilo e a veia portal do fígado nativa sejam respeitados com a utilização do presente método. Isso poupa o destinatário de efeitos colaterais indesejáveis, tais como trombose da veia porta e sangue portal roubar fenômeno, que poderia perturbar a recuperação do fígado nativo. Além disso, há grandes ressecções hepáticas do fígado nativo e enxerto são necessários para este método, com conseqüente menor sangramento e mais massa total do parênquima hepático restante para colmatar (enxerto) e regeneração (fígado nativo). Esta técnica se mostrou promissora resultados clínicos iniciais. 5-6 O objetivo deste trabalho experimental foi o desenvolvimento de uma técnica de parar com Arterialização veia porta emo rato para fins de pesquisa (figura 2). Nos experimentos preliminares, não levamos em consideração a regulação do fluxo sangüíneo da veia portal arterializado, o que resultou em congestionamento do enxerto transplantado após a reperfusão e sangramento maciço da cápsula do fígado. 11 Desde então, o fluxo de sangue na veia portal arterializado foi regulada por um stent com um diâmetro interno de 0,3 mm e um comprimento de 8 mm. Experiências piloto tinham mostrado que um diâmetro de 0,3 milímetros de stent produz um fluxo de sangue média na veia porta arterializado que está dentro da gama fisiológica superior (1,7 +/- 0,4 ml / min / g de peso de fígado). Nossos 12 resultados sem regulação do fluxo sanguíneo correlacionar com os resultados de Hong, que realizou parada com PVA através da artéria ilíaca do destinatário. 13 Em seus experimentos, sem regulação do fluxo sangüíneo portal enorme e congestionamentos sinusoidais ocorreu. O objetivo do nosso vídeo é demonstrate passo a passo desta técnica cirúrgica experimental ne.w no rato. No longo prazo, a técnica proposta pode ser utilizado em estudos sobre a regeneração do fígado e da concorrência inter-fígado e Arterialização veia porta, hiperperfusï¿½ veia porta e regulação do fluxo sangüíneo portal.

<table><tbody><tr><td>Seda Trançada preta 7-0&nbsp;</td><td>Produtos Ethicon</td><td>892100</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Produtos Ethicon</td><td>J285G</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Produtos Ethicon</td><td>J284G</td><td></td></tr><tr><td>Ethil 8-0</td><td>Produtos Ethicon</td><td>1714G</td><td></td></tr><tr><td>Ethil 10-0</td><td>Produtos Ethicon</td><td>7770G</td><td></td></tr><tr><td>Segurança Vasofix 14G</td><td>B Braun</td><td>2758853</td><td></td></tr><tr><td>Segurança Vasofix 20G</td><td>B Braun</td><td>2758818</td><td></td></tr><tr><td>2 French (0.012"/0.3 mm ID x 0.025"/0.6 mm OD) x 24"/60 cm cateter de poliuretano</td><td>Access technologies uma divisão da Norfolk Medical, Inc., Illinois, EUA</td><td>Solução CNC-2P</td><td></td></tr><tr><td>HTK, Custodiol</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH, Alsbach-H&auml; hnlein, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluorano 5 %</td><td></td><td></td><td>Qualquer genérico</td></tr><tr><td>Heparina</td><td></td><td></td><td>Qualquer genérico</td></tr><tr><td>0,9% de solução salina</td><td></td><td></td><td>Qualquer genérico</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>Qualquer genérico</td></tr></tbody></table>

heterotópico rat auxiliar liver transplantation com fluxo regulado portal vein arterialização na insuficiência hepática aguda

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

Na insuficiência hepática de transplante de fígado auxiliar aguda é uma abordagem alternativa interessante. O objetivo é fornecer um apoio temporário até que o fígado nativo não regenerou. 1-3 O APOLT-método, a implantação ortotópico de segments- auxiliar evita a maioria dos problemas técnicos. No entanto, este método necessita de grandes ressecções de ambos o fígado nativo e o enxerto. 4 Em 1998, Erhard desenvolvido o transplante heterotópico auxiliar fígado (PARADA), utilizando a arterialização da veia porta (PVA) (Figura 1). Esta técnica se mostrou promissora resultados clínicos iniciais. 5-6 Desenvolvemos uma parada-técnica com fluxo regulado PVA no rato para examinar a influência do PVA-fluxo regulado na morfologia e função (Figura 2) enxerto. Um enxerto de fígado reduzida para 30% do seu tamanho original, foi heterotopicamente implantado na região renal direita do receptor após o explante do rim direito.60; A veia cava de infra-hepática do enxerto anastomose com a veia cava infrahepatic do destinatário. O Arterialização da veia porta do doador foi realizado via artéria renal direita do destinatário com a técnica de stent. A regulação do fluxo de sangue da veia porta arterializado foi conseguido com a utilização de uma prótese com um diâmetro interno de 0,3 mm. O tronco celíaco do enxerto foi de ponta a lado com anastomose aorta do destinatário e do ducto biliar foi implantado no duodeno. A ressecção do fígado nativo foi realizada para induzir falha hepática aguda 7. Deste modo foram realizados 112 transplantes. A taxa de sobrevivência perioperatória foi de 90% e a taxa de sobrevivência de 6 semanas foi de 80%. Seis semanas após a operação, o fígado nativo regenerada, que apresenta um aumento de peso de 2,3 ± 0,8 g para 9,8 ± 1 g. Nesta altura, o peso do enxerto diminuiu de 3,3 ± 0,8 g para 2,3 ± 0,8 g. </p&gt; Nós fomos capazes de obter promissores resultados a longo prazo em termos de morfologia e função do enxerto. HALT com fluxo regulado PVA preenche de forma confiável insuficiência hepática aguda até o fígado nativo regenera.

A duração média do transplante foi de cerca de 150 min. O tempo de isquemia fria foi de 64 +/- 7 min, o tempo de isquemia quente foi inferior a 25 min. A taxa de sobrevivência perioperatória foi de 90% e a taxa de sobrevivência de 6 semanas foi de 80%. A perda de 20% foi devido a peritonite por causa do deslocamento do stent e extravasamento biliar (quatro animais) durante a primeira semana de pós-operatório e, devido à pneumonia, abcesso intra-abdominal e íleo (sete animais) durante os segu...

O transplante de fígado auxiliar proporciona um suporte temporário em insuficiência hepática aguda, até que a regeneração do fígado, não. O transplante heterotópico auxiliar fígado (HALT) com Arterialização veia porta (PVA) torna a função hepática está suficientemente bem. Desenvolvemos uma técnica análoga, no rato, para examinar a influência da arterialização veia portal na morfologia e função do enxerto.

Heterotópico Rat auxiliar Liver Transplantation com fluxo regulado Portal Vein Arterialização na Insuficiência Hepática Aguda

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

A falha hepática aguda representa um problema grave na medicina clínica, levando a uma taxa de mortalidade de 60 a 80% na falha hepática aguda. O transplante hepático auxiliar é uma terapia alternativa promissora. Após a regeneração do fígado nativo, a imunossupressão pode ser descontinuada e o enxerto hepático pode ser removido ou deixado para atrofiar.No entanto, a técnica cirúrgica para o transplante hepático auxiliar é controversa. O método APOL, que consiste no implante ortotópico de segmentos auxiliares, evita a maioria dos problemas técnicos que poderiam surgir. Contudo, este método exige ressecções extensas tanto do fígado nativo quanto do enxerto.Em 1998, Erhart e sua equipe iniciaram o transplante hepático auxiliar heterotópico denominado halt. Ao utilizar a veia porta arterializada chamada PVA, esta técnica demonstrou resultados clínicos iniciais promissores. Desenvolvemos uma técnica halt com veia porta arterial regulada por fluxo no rato para fins de pesquisa. Este vídeo ilustra em detalhes essa nova técnica experimental. Foram operados 224 ratos machos syngenéticos da linhagem Louis pesando entre 250 e 350 gramas.As operações de doador e receptor foram realizadas sob anestesia inalatória. A anestesia geral dos animais foi induzida com óxido de flúor em uma caixa de plexiglass conectada ao aparelho de anestesia, com um fluxômetro de oxigênio regulado em um litro por minuto. O vaporizador continha uma concentração de 5% de flúor.A anestesia foi mantida em 1,5%. Foi obtida aprovação do comitê de ética local para todos os experimentos, os quais foram realizados de acordo com as diretrizes de proteção animal phia. Durante a operação seguinte, a veia porta é arterIALIZADA por meio da artéria renal direita.O fluxo sanguíneo na veia porta arterIALIZADA é regulado por um stent com diâmetro interno de 0,3 milímetros e comprimento de oito milímetros. Experimentos piloto haviam demonstrado que um diâmetro de stent de 0,3 milímetro proporciona um fluxo sanguíneo médio na veia porta arterIALIZADA que se situa dentro do limite superior da faixa fisiológica.A microcirculação hepática é visualizada por meio da imagem OPS, uma técnica de espectroscopia de reflexão que permite a observação em tempo real da microcirculação hepática in vivo. Sem o uso de agentes de contraste e com imersão em solução salina fisiológica, a sonda é posicionada suavemente sobre a superfície do lobo hepático direito. É importante aqui não comprimir o parênquima hepático.A operação de doador é demonstrada primeiro após laparotomia mediana. O lobo lateral esquerdo e o lobo mediano do enxerto são ressecados conforme descrito por Higgins. Aqui você vê o preparo do ligamento hepato-duodenal.O ducto biliar é ligado primeiro para induzir congestão e dilatação do ducto biliar pequeno. A veia gastroduodenal e a artéria são ligadas e seccionadas. Em seguida, o tronco CIC, a artéria hepática comum, a artéria gástrica esquerda e a artéria esplênica são isolados posteriormente.A artéria gástrica esquerda e a artéria esplênica são seccionadas. Aqui você vê o tronco CIC e aqui a artéria hepática comum. O ducto biliar congesto é incisado e um stent de calibre 20 é introduzido nele.O posicionamento do stent deve garantir a drenagem de todo o sistema biliar do ducto biliar. O ducto biliar é seccionado distalmente ao stent. O segmento infra-hepático da veia cava é isolado logo acima da veia renal direita.Aqui você vê o órgão após o preparo, após a ligadura da aorta acima do tronco celíaco. A veia porta é clampada e incisada. O cateter de perfusão é agora introduzido e a perfusão é realizada com 30 mililitros de solução de histidina-triptofano-cetoglutarato.O diafragma e a veia cava supra-hepática são cortados para permitir que o sangue escoe. O tronco da CIV, juntamente com um retalho aórtico, é excisado e lavado com solução de histidina, triptofano e alfa-cetoglutarato. A veia cava infra-hepática é seccionada logo acima da veia renal direita.Em seguida, um stent com diâmetro de 0,3 milímetros é colocado na veia porta e fixado com a ligadura. A veia porta é seccionada distalmente ao stent. Aqui você vê o ducto biliar, a veia porta, o tronco celíaco e a veia cava infra-hepática.Após a ligadura da veia cava supra-hepática, ela é seccionada juntamente com um retalho do diafragma. O enxerto é retirado e armazenado em solução de histidina, triptofano e alfa-cetoglutárico a quatro graus Celsius em um saco plástico sobre gelo. Em seguida, são colocados pontos na veia cava infra-hepática. A seguir, é demonstrada a cirurgia do receptor.Após a laparotomia e preparação, a veia cava infra-hepática e a artéria renal direita são inicialmente isoladas. Em seguida, o ureter é ligado e seccionado. Após a artéria renal direita ser clampada em sua origem, a veia renal direita é ligada.Em seguida, após a secção de ambos os vasos renais, realiza-se a nefrectomia. Posteriormente, a artéria renal direita é encurtada e lavada com solução salina heparinizada após a clampeamento proximal e distal da veia cava infra-hepática. A veia renal direita é seccionada proximalmente à ligadura.Desta forma, uma luz oval é criada na veia cava infra-hepática. O enxerto é posicionado abaixo do fígado nativo. A veia cava infra-hepática do doador é anastomosada, extremidade com lateral, à veia cava do receptor com uma sutura contínua de polipropileno 8-0.Após a lavagem com solução salina heparinizada, o stent na veia porta é introduzido na artéria renal direita. A veia porta e a artéria renal são conectadas com dois pontos. O uso de um stent com diâmetro interno de 0,3 milímetros e comprimento de oito milímetros permite uma anastomose arteriovenosa com taxas de fluxo de entrada padronizadas e reguladas.O stent de ligação é fixado na artéria renal com uma ligadura para permitir a reperfusão. Primeiro, a pinça arterial é removida, seguida pelas duas pinças venosas. Agora você observa a microcirculação no momento da reperfusão, iniciando-se pelos vasos interlobulares, seguindo ao longo dos seios e chegando à veia central do lóbulo hepático.Aqui você agora vê o enxerto com reperfusão, a veia porta arterialisada e o ducto biliar. A aorta infrarrenal é preparada, depois clampada e incisada. É realizada uma anastomose término-lateral entre a aorta e o tronco celíaco utilizando um retalho aórtico com sutura contínua de etileno 10-0.Após a aplicação de uma sutura em bolsa de tabaco, é feita uma pequena incisão na parede duodenal. O ducto biliar com stent é então introduzido no duodeno e a sutura em bolsa de tabaco é apertada. Finalmente, o duodeno e o ducto biliar são mantidos firmemente juntos com dois pontos.Aqui você vê o enxerto com reperfusão e o fígado nativo que foi ressecado sub-totalmente para simular insuficiência hepática aguda. Os animais receberam injeções pós-operatórias de buprenorfina por via subcutânea a cada oito a 12 horas durante dois dias.A taxa de sobrevida perioperatória foi de 90% e a taxa de sobrevida em seis semanas foi de 80%. Durante a primeira semana pós-operatória, quatro ratos morreram de peritonite devido a uma displasia do stent e vazamento biliar. Além disso, sete ratos morreram de pneumonia, abscesso intra-abdominal ou íleo. Os animais sobreviventes encontravam-se em excelente estado geral.Seis semanas após a cirurgia, os parâmetros de síntese hepática estavam dentro da faixa normal. Aqui você vê os cientistas seis semanas após o transplante heterotópico auxiliar de fígado em rato com artéria da veia porta. Seis semanas após a operação, o fígado nativo regenerou, mostrando um aumento no peso de 2,3 ± 0,8 gramas para 9,8 ± 1,0 grama.Neste momento, o GRAT estava atrófico e o peso do fígado diminuiu de 3,3 ± 0,8 gramas para 2,3 ± 0,8 gramas. O peso total de ambos os fígados estava dentro da proporção fisiológica entre peso do fígado e peso corporal na coloração histopatológica com hematoxilina e eosina seis semanas após a interrupção. Hepatócitos normais foram observados, sem edema nem degeneração gordurosa.Todos os gráficos mostraram leve proliferação da bile, ductal e colangite devido à formação de lodo. Apenas em dois gráficos pôde-se observar necrose hepatocelular intersticial de baixo grau. O uso de um stent com diâmetro interno de 0,3 milímetros e comprimento de oito milímetros resulta em um fluxo sanguíneo portal médio após a reperfusão da veia porta arterialisada, que se situa dentro do limite superior da faixa fisiológica.A drenagem biliar é o calcanhar de Aquiles do transplante hepático. No transplante hepático em ratos, os receptores frequentemente morrem nos primeiros dias pós-operatórios devido a vazamento biliar e peritonite. Realizamos a anastomose coledocoduodenal com ostomia utilizando um stent, uma sutura contínua, e dois pontos adicionais que a fixam contra vazamentos e desconexão.Com esta técnica, as complicações biliares foram reduzidas para 4%. No presente estudo, foi realizada uma ressecção subtotal do fígado nativo. Utilizamos este método descrito inicialmente por Amond para induzir falência hepática aguda. Em contraste com a aplicação de agentes hepatotóxicos, este método é padronizado e não apresenta efeitos colaterais em outros sistemas orgânicos ou no enxerto.Diferentemente do transplante hepático ortotópico, não há fase hepática final. Durante o transplante hepático heterotópico, a Anas pode ser realizada sem qualquer pressão de tempo. Além disso, na posição heterotópica, não há interferência pelo diafragma em movimento.Além disso, a veia porta do receptor não é clampeada, evitando assim a congestão venosa do intestino delgado, baço, pâncreas e estômago. Com esta técnica, conseguimos obter resultados promissores a longo prazo em termos de enxerto, morfologia e função, no transplante heterotópico auxiliar de fígado em ratos com fluxo regulado pela veia porta. A artéria venosa é uma técnica inovadora que apresenta poucas dificuldades e é fácil de aprender.Essa técnica é adequada para investigar o efeito da veia porta, da hiperperfusão hepática arterial e da regulação do fluxo sanguíneo sobre a função e a morfologia da microcirculação hepática. Esse modelo permite futuros estudos sobre regeneração hepática na competição inter-hepática.

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Medicina

Nós apresentamos uma revisão fácil de estabelecer a técnica de dois manguito clássica para transplante hepático em ratos.

Transplante hepático ortotópico experimental em ratos

O transplante hepático em ratos é um modelo indispensável experimental para a pesquisa biomédica. Aqui apresentamos nossos procedimentos cirúrgicos para transplante ortotópico do fígado do rato com a reconstrução da artéria hepática utilizando um enxerto parcial de 50%.

Procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de Transplante de Fígado parcial ortotópico com reconstrução arterial hepática

A pesquisa experimental em animais desempenha um papel fundamental no desenvolvimento da prática clínica de transplante. O modelo de transplante de fígado ortotópico suíno (OLTx) se assemelha muito às condições humanas e é frequentemente usado em pesquisas clinicamente orientadas. O protocolo a seguir contém todas as informações para um modelo OLTx suíno confiável usando um shunt porto-caval-jugular ativo.

Técnica para as aquisições de fígado de porco e Transplante ortotópico usando um Active Porto-Caval Shunt

Descrevemos uma nova técnica para transplante coração-pulmão abdominal heterotópico (HAHLT) em ratos. A configuração do transplante resulta em uma circulação do enxerto parcialmente carregada, permitindo avaliação funcional direta. Esse modelo pode ser empregado para estudos agudos ou crônicos de função e estado imunológico do enxerto transplantado.

Rat heterotópico abdominal coração / pulmão Transplante Single-carregado em uma configuração-Volume

Aqui, apresenta-se um protocolo envolvendo transplante hepático parcial de re-arterialized de rato. Especificamente, 70% fígado foi ressecado na vivo usando uma técnica atualizada de hepatectomy orientada a embarcação. A artéria hepática foi reconstruída em uma forma de ponta-a-lado. A técnica de punho foi modificada para encurtar o tempo de anastomose da veia cava infrahepatic.

Re-Arterialized transplante de fígado parcial de rato com na vivo orientado a embarcação 70% Hepatectomy

A reconstrução da veia cava suprahepatic (SHVC) continua a ser uma etapa difícil em transplante ortotópico de fígado de rato. Neste artigo, vamos mostrar um protocolo passo a passo para a reconstrução de SHVC em ratos utilizando uma técnica de anastomose magnético romance.

Um modelo do rato de ortotópico transplante hepático, usando uma técnica de anastomose magnético romance para reconstrução de veia Cava Suprahepatic

O objetivo deste estudo é modificar o modelo de transplante de fígado ortotópico de ratos para representar melhor o transplante de fígado humano e melhorar a sobrevivência do receptor. O método apresentado restabelece o fluxo arterial hepático conectando a artéria hepática comum do fígado doador à artéria hepática adequada do fígado receptor.

Complicações reduzidas após reconexão arterial em um modelo de rato de transplante de fígado ortotópico

Este artigo fornece uma descrição detalhada de como construir um modelo animal da fase anháptica (isquemia hepática) em ratos para facilitar a pesquisa básica sobre a lesão isquemia-reperfusão após o transplante hepático.

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O protocolo auxiliar de transplante hepático heterotópico de rato descrito aqui oferece uma ferramenta prática de investigação para explorar os mecanismos de rejeição do aloenxerto hepático. Este modelo ajuda a aliviar os obstáculos cirúrgicos e o estresse animal do transplante hepático ortotópico em ratos.

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Técnica de transplante heterotópico Murino Coração

Aprenda o transplante hepático auxiliar heterotópico em ratos com arterialização da veia porta para insuficiência hepática aguda. Este método avalia morfologia e função do enxerto em modelo experimental.

Heterotópico Rat auxiliar Liver Transplantation com fluxo regulado Portal Vein Arterialização na Insuficiência Hepática Aguda

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