Name: Injeção sistêmica de células-tronco neurais / progenitoras em ratos com EAE crónica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-15T18:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Aprenda a injetar células-tronco neurais/progenitoras por via intravenosa em ratos com encefalomielite autoimune experimental, modelo de esclerose múltipla. Este método minimamente invasivo permite rastrear a sobrevivência e integração celular no SNC.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores agradecem Jayden Smith para revisão crítica e edição de prova do manuscrito. Este trabalho recebeu o apoio da National Multiple Sclerosis Society (NMSS, bolsas parciais RG-4001-A1), o italiano Multiple Sclerosis Association (AISM, conceder 2010/R/31), o Ministério italiano da Saúde (GR08-7), Wings for Life, Banca Popolare di Ragusa Agricola (BAPr), o Conselho Europeu de Investigação (ERC) no âmbito do acordo ERC-2010-StG Grant não o Programa 7 quadro da Comunidade Europeia (CE) 260511-SEM_SEM e (FP7/2007-2013) sob acordo de subvenção n * graus; 280772 - Ione.

<ol><li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplanted+multipotential+neural+precursor+cells+migrate+into+the+inflamed+white+matter+in+response+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Transplanted multipotential neural precursor cells migrate into the inflamed white matter in response to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Glia. 41, 73-80 (2003).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+adult+neurospheres+induces+recovery+in+a+chronic+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Injection of adult neurospheres induces recovery in a chronic model of multiple sclerosis.</a> Nature. 422, 688-694 (2003).</li>
<li>Chu, K., Kim, M., Jeong, S. W., Kim, S. U., Yoon, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+can+migrate%2C+differentiate%2C+and+integrate+after+intravenous+transplantation+in+adult+rats+with+transient+forebrain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells can migrate, differentiate, and integrate after intravenous transplantation in adult rats with transient forebrain ischemia.</a> Neurosci. Lett. 343, 129-133 (2003).</li>
<li>Bottai, D., Madaschi, L., Di Giulio, A. M., Gorio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability-dependent+promoting+action+of+adult+neural+precursors+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Viability-dependent promoting action of adult neural precursors in spinal cord injury.</a> Mol. Med. 14, 634-644 (2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurosphere-derived+multipotent+precursors+promote+neuroprotection+by+an+immunomodulatory+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurosphere-derived multipotent precursors promote neuroprotection by an immunomodulatory mechanism.</a> Nature. 436, 266-271 (2005).</li>
<li>Einstein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraventricular+transplantation+of+neural+precursor+cell+spheres+attenuates+acute+experimental+allergic+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Intraventricular transplantation of neural precursor cell spheres attenuates acute experimental allergic encephalomyelitis.</a> Mol. Cell Neurosci. 24, 1074-1082 (2003).</li>
<li>Chu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cell+transplantation+reduces+spontaneous+recurrent+seizures+following+pilocarpine-induced+status+epilepticus+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cell transplantation reduces spontaneous recurrent seizures following pilocarpine-induced status epilepticus in adult rats.</a> Brain Res. 1023, 213-221 (2004).</li>
<li>Jeong, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cell+transplantation+promotes+functional+recovery+in+rats+with+experimental+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cell transplantation promotes functional recovery in rats with experimental intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 34, 2258-2263 (2003).</li>
<li>Aboody, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+display+extensive+tropism+for+pathology+in+adult+brain%3A+evidence+from+intracranial+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells display extensive tropism for pathology in adult brain: evidence from intracranial gliomas.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 12846-12851 (2000).</li>
<li>Muller, F. J., Snyder, E. Y., Loring, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy%3A+can+neural+stem+cells+deliver%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene therapy: can neural stem cells deliver.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 75-84 (2006).</li>
<li>Martino, G., Pluchino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of neural stem cells.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 395-406 (2006).</li>
<li>Deckert-Schluter, M., Schluter, D., Hof, H., Wiestler, O. D., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+ICAM-1%2C+VCAM-1+and+their+ligands+LFA-1%2C+Mac-1%2C+CD43%2C+VLA-4%2C+and+MHC+class+II+antigens+in+murine+Toxoplasma+encephalitis%3A+a+light+microscopic+and+ultrastructural+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Differential expression of ICAM-1, VCAM-1 and their ligands LFA-1, Mac-1, CD43, VLA-4, and MHC class II antigens in murine Toxoplasma encephalitis: a light microscopic and ultrastructural immunohistochemical study.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 53, 457-468 (1994).</li>
<li>Hemmer, B., Archelos, J. J., Hartung, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+concepts+in+the+immunopathogenesis+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">New concepts in the immunopathogenesis of multiple sclerosis.</a> Nat. Rev. Neurosci. 3, 291-301 (2002).</li>
<li>Butcher, E. C., Picker, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocyte+homing+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lymphocyte homing and homeostasis.</a> Science. 272, 60-66 (1996).</li>
<li>Rampon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+of+systemic+delivery+of+neural+precursor+cells+to+the+brain%3A+assembly+of+brain+endothelial+apical+cups+and+control+of+transmigration+by+CD44%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism of systemic delivery of neural precursor cells to the brain: assembly of brain endothelial apical cups and control of transmigration by CD44.</a> Stem Cells. 26, 1673-1682 (2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+ameliorate+autoimmune+encephalomyelitis+in+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells ameliorate autoimmune encephalomyelitis in non-human primates.</a> Ann. Neurol. 66, 343-354 (2009).</li>
<li>Martino, G., Pluchino, S., Bonfanti, L., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+regeneration+in+physiology+and+pathology%3A+the+immune+signature+driving+therapeutic+plasticity+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Brain regeneration in physiology and pathology: the immune signature driving therapeutic plasticity of neural stem cells.</a> Physiol. Rev. 91, 1281-1304 (2011).</li>
<li>Aharonowiz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+transplanted+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of transplanted human embryonic stem cell-derived neural precursors in an animal model of multiple sclerosis.</a> PLoS ONE. 3, e3145(2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulatory+neural+stem%2Fprecursor+cells+protect+from+central+nervous+system+autoimmunity+by+restraining+dendritic+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Immune regulatory neural stem/precursor cells protect from central nervous system autoimmunity by restraining dendritic cell function.</a> PLoS One. 4, (2009).</li>
<li>Einstein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+attenuate+autoimmune+encephalomyelitis+by+peripheral+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neural precursors attenuate autoimmune encephalomyelitis by peripheral immunosuppression.</a> Ann. Neurol. 61, 209-218 (2007).</li>
<li>Gritti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+stem+cells+from+the+adult+mouse+brain+proliferate+and+self-renew+in+response+to+basic+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multipotential stem cells from the adult mouse brain proliferate and self-renew in response to basic fibroblast growth factor.</a> J. Neurosci. 16, 1091-1100 (1996).</li>
<li>Furlan, R., Pluchino, S., Marconi, P. C., Martino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+gene+delivery+into+the+central+nervous+system+using+intrathecally+injected+nonreplicative+viral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytokine gene delivery into the central nervous system using intrathecally injected nonreplicative viral vectors.</a> Methods Mol. Biol. 215, 279-289 (2003).</li>
<li>Constantin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+and+analysis+of+adhesive+events+in+brain+microvessels+by+using+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualization and analysis of adhesive events in brain microvessels by using intravital microscopy.</a> Methods Mol. Biol. 239, 189-198 (2004).</li>
<li>Politi, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic-resonance-based+tracking+and+quantification+of+intravenously+injected+neural+stem+cell+accumulation+in+the+brains+of+mice+with+experimental+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Magnetic-resonance-based tracking and quantification of intravenously injected neural stem cell accumulation in the brains of mice with experimental multiple sclerosis.</a> Stem Cells. 25, 2583-2592 (2007).</li>
<li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-graft+of+allogeneic+immune+regulatory+neural+stem+cells+%28NPC%29+and+pancreatic+islets+mediates+tolerance%2C+while+inducing+NPC-derived+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Co-graft of allogeneic immune regulatory neural stem cells (NPC) and pancreatic islets mediates tolerance, while inducing NPC-derived tumors in mice.</a> PLoS One. 5, (2010).</li>
<li>Amariglio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-derived+brain+tumor+following+neural+stem+cell+transplantation+in+an+ataxia+telangiectasia+patient%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient.</a> PLoS Med. 6, (2009).</li>
<li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+proinflammatory+cytokines+on+the+growth%2C+fate%2C+and+motility+of+multipotential+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of proinflammatory cytokines on the growth, fate, and motility of multipotential neural precursor cells.</a> Mol. Cell Neurosci. 24, 623-631 (2003).</li>
<li>Giusto, E., Donega, M., Cossetti, C., Pluchino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-immune+interactions+of+neural+stem+cell+transplants%3A+From+animal+disease+models+to+human+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-immune interactions of neural stem cell transplants: From animal disease models to human trials.</a> Exp. Neurol. , (2013).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Terapias baseadas em células estaminais somáticas estão emergindo como uma das estratégias mais promissoras para o tratamento de distúrbios do sistema nervoso central inflamatórias crônicas, como MS2 11. Embora os mecanismos que sustentam os seus efeitos terapêuticos ainda precisam ser completamente elucidada, o impacto significativo do transplante NPC em diferentes modelos experimentais de doenças neurodegenerativas deu origem à crença um tanto provocante que as células estaminais podem em breve ser aplicado...

Fortes evidências surgiu a partir de estudos in vivo que comprovem a eficácia terapêutica do transplante de células-tronco somáticas neurais / precursoras (NPCs) em modelos animais de doenças do SNC, 1-8. No entanto, uma série de questões relacionadas com a entrega de células-tronco para o acolhimento exigir uma análise cuidadosa antes de estes resultados experimentais podem ser traduzidos em aplicações clínicas. Um obstáculo particularmente importante para o desenvolvimento de terapias com células estaminais restauradores (nonhematopoietic) para, doenças cerebrais inflamatórias crônicas multifocais é a identificação da rota ideal de injeção NPC. Uma sólida compreensão da fisiopatologia da doença-alvo (focal ou multifocal; degenerativa inflamatória ou primária primária), e uma análise cautelosa de questões de viabilidade e de risco associados com as técnicas de entrega são em identificar o protocolo ideal para a entrega de células-tronco. Embora o foco ( <em&gt; Por ex. no parênquima do sistema nervoso), transplante de células estaminais é uma abordagem lógica para o tratamento de doenças do sistema nervoso central caracterizadas por áreas espacialmente confinados de dano (por exemplo, doença de Parkinson e doença de Huntington, do cérebro e da medula espinhal lesões traumáticas, e acidente vascular cerebral), a mesma abordagem pode ser ser praticamente inviável em condições como esclerose múltipla, onde um dano multifocal, crônica, e espacialmente disseminada CNS acumula ao longo do tempo. Neste último caso, visando injeções de células focais de lesões individuais, também é prejudicada pela capacidade limitada de NPCs transplantadas para migrar por longas distâncias dentro do parênquima do SNC, levando, assim, a identificação de métodos alternativos, mais adequados de CNS alvejando com transplantes NPC menos invasivas . Grande promessa surgiu a partir das observações que NPCs como alvo um tumor intracraniano (por exemplo. Glioma) em camundongos quando injetada por via intravenosa fora do CNS9. Seguindo este seminalem evidência in vivo da pathotrophism células-tronco 10, os dados extensos foram acumuladas pertencente à viabilidade e à eficácia terapêutica do transplante de NPCs sistémica em animais de laboratório com encefalomielite auto-imune experimental (EAE), como um modelo de lesão inflamatória do SNC, através quer intravenosa (iv) ou intracerebroventricular (ICV). NPC injeção 1,2,5,6,8 .. Temos mostrado pela primeira vez que esta depende da capacidade de NPCs transplantadas para atacar e entrar no CNS inflamada, e se envolver posteriormente intercelular múltipla programas de comunicação dentro de microambientes específicos in vivo 11. A fim de orientar especificamente o CNS, NPCs são entregues diretamente no líquido cefalorraquidiano (LCR) circulação por injeção icv, ou na corrente sanguínea através de injeção intravenosa. Uma vez que entra ou da corrente sanguínea ou CSF, NPCs transplantados interagir ativamente como hematoencefálica (BBB) ​​ou (BCSFB) barreiras sangue líquido céfalo-raquidiano e entrar no parênquima do SNC. Essa interação entre o enxerto NPC eo BBB (ou BCSFB) é regulada pelo conjunto específico de moléculas de adesão celular NPC superfície (CAMs) e facilitado pela expressão de altos níveis de CAM contra-ligantes em ativados endoteliais / células ependimárias 12-14. Exemplos destas CAMs incluem o receptor de hialuronato, CD44, e a molécula de adesão intercelular (ICAM) -1 ligando antigénio muito tardio (AMT) -4 5,15,16 (que, em leucócitos, são responsáveis ​​da interacção com ependimária activada e células endoteliais), e para um antigénio de Linfócitos muito menor extensão associada à função (LFA) -1 e P-selectina glicoproteína ligando (PSGL) -1. NPCs também expressar uma grande variedade de receptores de quimiocinas, incluindo CCR1, CCR2, CCR5, CXCR3, CXCR4 e (mas não expressam CCR3 e CCR7), que são funcionalmente activos, tanto in vitro como in vivo, 5,16. Assim, systemicaNPCs lly injectados usar estes CAMs, juntamente com a proteína G de receptores acoplados (GPCRs), para acumular a nível do CNS inflamado. Por outro lado, NPCs injetado sistemicamente em ratos saudáveis ​​não entram no CNS via vascular ou cefalorraquidiano rotas espaço fluido 2. Inflamação do SNC, ou endotelial / ativação de células ependimária seguinte citocina sistêmica ou lypopolisaccharide (LPS) de injeção como um modelo de encefalite induzida quimicamente, é necessário que o acúmulo de NPCs sistemicamente injetadas no cérebro e medula espinhal 2. Assim, segmentação bem sucedida do CNS com terapias NPC sistêmicas depende da identificação de uma janela específica doença de oportunidade (WoO), no qual o cérebro ea medula espinhal são ambiente propício para a acumulação e migração transendotelial de NPCs. Tais condições geralmente surgem no contexto de inflamação aguda e subaguda 17. Depois de ter entrado no CNS, transplantado NPCs indiferenciadasforam mostradas para melhorar as características clínico-patológicos de ratinhos, assim como maiores, primatas não humanos com EAE. Este tem sido descrito para ser dependente de substituição de células mínimo 2 e notável secreção de fatores parácrinos imunes reguladoras e neuroprotetores dentro perivascular CNS 2,5,6,18 vs não-SNC áreas inflamadas 19,20 (por exemplo, linfonodos), em resposta à sinalização celular inflamatória provocada pela infiltração de células imunes 5. Aqui nós descrevemos os aspectos metodológicos fundamentais da injeção sistêmica de NPCs somáticas em um modelo do rato de EAE crónica. Mais especificamente, vamos definir os protocolos que estabelecemos para (i) derivam, expanda e se preparar para o transplante NPCs somáticas da zona subventricular (SVZ) de adultos C57BL / 6; (Ii) induzir a EAE crónica em tais ratinhos e (iii) realizar terapeuticamente eficaz sistémica (iv ou icv) NPC transplante icamundongos nto EAE.

<table><tbody><tr><td><forte>Cultura de células</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EBSS</td><td>Sigma</td><td>E2888</td><td></td></tr><tr><td>L-Cisteína</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C7352</td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>30H11965</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>D/0700/50</td><td></td></tr><tr><td>Mouse NeuroCult meio basal</td><td>Tecnologias de células-tronco</td><td>05700</td><td></td></tr><tr><td>Suplementos de proliferação NeuroCult</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>05701</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Fator básico de crescimento de fibroblastos</td><td>Peprotech</td><td>100-18B-1000</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento epidérmico</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15-1000</td><td></td></tr><tr><td>Caneta / Strep</td><td>Invitrogen</td><td>1514012</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel (solução de revestimento)</td><td>BD Biosciences</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>NeuroCult&reg; Kit de diferenciação (Mouse)</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>05704</td><td></td></tr><tr><td>Accumax</td><td>eBioscience</td><td>00-4666-56</td><td></td></tr><tr><td>PBS de Dulbecco (DPBS) (10x) sem Ca e Mg</td><td>PAA Laboratories</td><td>H15-011</td><td></td></tr><tr><td>Myco trace</td><td>PAA Laboratories</td><td>Q052-020</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td><forte> Imunofluorescência</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Soro de cabra normal</td><td>PAA Laboratories</td><td>B11-035</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenoglicol p- (1,1,3,3-tetrametilbutil)-éter fenílico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Rato anti Nestin</td><td>Abcam</td><td>ab11306</td><td></td></tr><tr><td>Coelho anti GFAP</td><td>DAKO</td><td>203344</td><td></td></tr><tr><td>Rato anti histona H3 (fosfo S10)&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab14955</td><td></td></tr><tr><td>Coelho anti MAP-2</td><td>Abcam</td><td>ab32454</td><td></td></tr><tr><td>Rato anti MBP</td><td>AbD SEROTEC</td><td>MCA409S</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-O4, clone 81 | MAB345</td><td>Millipore</td><td>MAB345</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Solução de montagem</td><td>DAKO</td><td>S3023</td><td></td></tr><tr><td>EAE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Freund's Adjuvant Incompleto</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F5506</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis</td><td>DIFCO</td><td>H37Ra</td><td></td></tr><tr><td>MOG(35&ndash; 55)&nbsp;</td>Lista de toxinas <td>Espikem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pertussis</td><td>Laboratórios Biológicos</td><td>181</td><td></td></tr><tr><td>Processamento de tecidos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iris tesoura reta</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Pinça romba/dobrada</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>11080-02</td><td></td></tr><tr><td>Fatiador de cérebro</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS005-1</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas cirúrgicas</td><td>Swann-Morton</td><td>324</td><td></td></tr><tr><td>P200, P1000 pipetas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cetamina (Vetalar)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>01LC0030</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina (Rompun)</td><td>Bayer</td><td>32371</td><td></td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico</td><td>KOPF</td><td>Modelo 900</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Hamilton</td><td></td><td>7762-04</td><td></td></tr> laboratórios <tr><td>PK-6100</td><td></td> do<td>vetor do jogo da elite ABC</td><td></td></tr> <tr><td>do Sigma 158127 de PFA) do Sigma do paraformaldeído (PFA)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

injeção sistêmica de células-tronco neurais / progenitoras em ratos com eae crónica

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

Células tronco / progenitoras neurais (NPCs) são uma fonte de células-tronco promissor para abordagens de transplante, visando a reparação cerebral ou restauração em neurologia regenerativa. Esta directiva surgiu a partir da evidência extensa que a reparação do cérebro é alcançado após o transplante NPC focal ou sistêmica em vários modelos pré-clínicos de doenças neurológicas. Estes dados experimentais identificaram a rota de entrega célula como um dos principais obstáculos de terapias com células estaminais restauradores para doenças cerebrais que requerem avaliação urgente. Enxerto de células-tronco intraparenquimatosa representa uma abordagem lógica para essas patologias caracterizadas por lesões isoladas e acessíveis do cérebro, como lesões da medula espinhal e doença de Parkinson. Infelizmente, este princípio é aplicável mal às condições caracterizadas por uma natureza multifocal, inflamatória e disseminada (no tempo e no espaço), incluindo a esclerose múltipla (MS). Como tal, o cérebro a segmentação por sistentrega NPC émica tornou-se um protocolo invasivo e terapeuticamente eficazes de baixo para entregar células para o cérebro e espinal-medula de roedores e primatas não humanos afectados por danos inflamatória crónica experimental do sistema nervoso central (SNC). Este método alternativo de entrega célula baseia-se na pathotropism NPC, especificamente a sua capacidade inata para (i) detectar o ambiente através de moléculas de adesão de células funcionais e receptores de citocinas inflamatórias e quimiocinas; (Ii) cruzar as barreiras anatômicas vazamento após intravenosa (iv). Ou intracerebroventricular (ICV) de injecção; (Iii) se acumulam no nível do sítio perivascular múltiplo (s) do cérebro e da medula espinhal dano inflamatório; e (iv) exercer notável trófico tecidual e os efeitos de regulação do sistema imunológico em diferentes células alvo hospedeiro in vivo. Aqui vamos descrever os métodos que desenvolvemos para a iv. e &lt;em&gt; entrega icv de NPCs singênicos em camundongos com encefalomielite autoimune experimental (EAE), como modelo de desmielinização inflamatória crônica do SNC, e prevê a entrega de células-tronco sistêmica como uma técnica valiosa para o direcionamento seletivo do cérebro inflamado em neurologia regenerativa.

NPC derivação e caracterização Dissecções SVZ são realizadas em piscinas (n = 5-7 ratinhos / piscina) de 6-8 semanas de idade C57BL / 6 ratos por meio de dissociação mecânica e enzimática (Figura 1A). Depois de alguns dias de cultura em CGM, neuroesferas flutuantes começar a formar (Figuras 1A e 1B). Esferas primárias são recolhidos e mecanicamente passada casa 4-5 DIV. Após passagem, o número de células vivas e mortas são verificadas e os números de células cumu...

O transplante de células-tronco / progenitoras neurais (NPCs) detém grandes promessas em neurologia regenerativa. A administração sistêmica de NPCs se transformou em baixo invasivo e muito eficaz terapeuticamente protocolo eficaz, para entregar as células-tronco no cérebro e na medula espinhal de roedores e primatas não-humanos que sofreram prejuízos inflamatória crônica experimental do sistema nervoso central.

Injeção sistêmica de células-tronco neurais / progenitoras em ratos com EAE crónica

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

O objetivo geral deste protocolo é administrar células progenitoras de células-tronco neurais ao SNC por meio de injeção intravenosa em camundongos afetados pela encefalomielite autoimune experimental, um modelo de doença que imita a esclerose múltipla. Isso é realizado primeiramente obtendo-se células progenitoras de células-tronco neurais, ou NPCs, da zona subventricular do cérebro de camundongos adultos. O segundo passo consiste em marcar geneticamente as NPCs com tecnologia de vetor viral para identificação e rastreamento celular in vivo.Em seguida, neuroesferas em proliferação são dissociadas em uma suspensão de células simples, ressuspendidas na densidade desejada e injetadas na veia da cauda de camundongos com EAE no pico da doença. Por fim, são realizadas análises patológicas e imunohistoquímicas de órgãos e tecidos post mortem para identificar e caracterizar a distribuição da sobrevivência e a integração das células-tronco injetadas. A principal vantagem desta técnica é que ela fornece um método minimamente invasivo, seguro e eficaz para transplantar células-tronco e progenitoras no sistema nervoso inflamado.Este método ajuda a responder três perguntas fundamentais relacio

systemic-injection-neural-stemprogenitor-cells-mice-with-chronic

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Linhagens determinados são capazes de resistir a indução de encefalomielite autoimune experimental (EAE) com proteína básica de mielina. Descrito aqui é um simples protocolo de imunização que reverte a apatia e induz a doença paralítica em vários típicos EAE manchas resistentes do mouse.

Superando indiferença em Encefalomielite autoimune experimental (EAE) linhagens mais resistentes por transferência adotiva e desafio antigênico

Este vídeo demonstra o método de indução de encefalomielite autoimune experimental (EAE) injetando peptídeos derivados de mielina com um adjuvante para ativar células T autorreativas, que migram para o cérebro. A toxina da coqueluche é administrada para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que essas células T e outras células imunológicas entrem no cérebro. Essas células imunes causam desmielinização, levando ao comprometimento da transmissão nervosa e ao...

Geração de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Neste vídeo, um modelo de camundongo com esclerose múltipla é estabelecido usando encefalomielite autoimune experimental (EAE). O camundongo é injetado com uma emulsão contendo um peptídeo neuronal e um adjuvante, desencadeando uma resposta imune que ativa as células T autorreativas. Isso é seguido por uma injeção de toxina coqueluche (PTX) para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que as células T autorreativas se infiltrem no cérebro. Essa infiltração inicia uma...

Indução de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Descrevemos um método para implantar e manter janelas de vidro sobre a medula espinhal exposta de camundongos adultos para estudar a encefalomielite autoimune experimental. Essas janelas fornecem acesso óptico crônico à medula espinhal para monitorar a dinâmica celular no nível subcelular em animais vivos usando microscopia de dois fótons.

Implantação de vidro Medular do Windows em camundongos adultos com Experimental Auto-imune Encephalomyelitis

Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo animal estabelecido de esclerose múltipla. C57BL / 6 são imunizados com mielina de oligodendrócitos glicoproteína (MOG) peptídeo 35-55 (MOG 35-55), o que resulta em uma paralisia flácida ascendente causada por células imunes autorreactivas no sistema nervoso central. Protocolos para indução e monitoramento de doenças serão discutidos.

Mielina Oligodendrocyte glicoproteína (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induzida Encefalomielite Auto-imune Experimental (EAE) em murganhos C57BL / 6

Este manuscrito descreve os métodos de indução e pontuação do modelo experimental de encefalomielite autoimune (EAE), juntamente com a avaliação da distribuição de células imunes e níveis de citocinas de mRNA em linfonodos, baço, sangue e medula espinhal usando citometria de fluxo e PCR quantitativo, respectivamente, em várias fases da doença.

Indução de encefalomielite autoimune experimental em camundongos e avaliação da distribuição da doença dependente de células imunes em vários tecidos

Mostramos uma técnica para in vivo bioluminescência vivo e no infravermelho próximo de imagem de neurite óptica e encefalite no modelo de encefalomielite autoimune experimental (EAE) para a esclerose múltipla em ratinhos SJL / J.

Bioluminescência e Near-infrared imagem de neurite óptica e Cérebro Inflamação no modelo de EAE de esclerose múltipla em ratinhos

Aqui, apresentamos os protocolos para investigar o comprometimento da unidade neurovascular durante encefalomielite auto-imune experimental in vivo. Abordamos especificamente como determinar a permeabilidade da barreira hemato - encefálica e gelatinase atividade envolvida na migração de leucócitos através da limitans da glia.

Visualizando o comprometimento das barreiras endoteliais e Glial da unidade Neurovascular durante encefalomielite auto-imune Experimental In Vivo

O presente protocolo descreve a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo utilizando glicoproteína de oligodendrócitos de mielina e monitorando o processo da doença usando um sistema de pontuação clínica. Os sintomas experimentais relacionados à encefalomielite autoimune são analisados usando tomografia microcomputadorizada de fêmur de camundongo e teste de campo aberto para avaliar o processo da doença de forma abrangente.

Indução e Diversos Indicadores de Avaliação da Encefalomielite Autoimune Experimental

Até o momento, os protocolos para o isolamento simultâneo de todos os principais tipos celulares residentes no sistema nervoso central do mesmo camundongo são uma demanda não atendida. O protocolo mostra um procedimento aplicável em camundongos ingênuos e experimentais com encefalomielite autoimune para investigar redes celulares complexas durante a neuroinflamação e, simultaneamente, reduzir o número necessário de camundongos.

Isolamento Simultâneo dos Principais Tipos Celulares Residentes no Sistema Nervoso Central de Camundongos Adultos com Encefalomielite Autoimune

A encefalomielite autoimune experimental (EAE) serve como modelo animal de esclerose múltipla. Este artigo descreve uma abordagem para pontuar inflamação medular, desmielinização e lesão axonal em EAE. Adicionalmente, um método para quantificar os níveis de luz solúvel dos neurofilamentos no soro de camundongos é apresentado, facilitando a avaliação da lesão axonal em camundongos vivos.

Pontuação de Inflamação, Desmielinização e Lesão do Axônio do Sistema Nervoso Central na Encefalomielite Autoimune Experimental

Aprenda a injetar células-tronco neurais/progenitoras por via intravenosa em ratos com encefalomielite autoimune experimental, modelo de esclerose múltipla. Este método minimamente invasivo permite rastrear a sobrevivência e integração celular no SNC.

Injeção sistêmica de células-tronco neurais / progenitoras em ratos com EAE crónica

Explorar mais vídeos