Name: Redução de Concentração e Durações Itraconazol são bem sucedidos no tratamento Batrachochytrium dendrobatidis Infecção em anfíbios (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Aprenda um protocolo de tratamento com itraconazol em concentração reduzida e duração menor para eliminar infecções por Batrachochytrium dendrobatidis em anfíbios, minimizando efeitos colaterais e melhorando o bem-estar animal.

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Eu gostaria de agradecer a CL Richards-Zawacki ajuda conceituar o projeto experimental e auxiliando com materiais, A. Pessier ajuda estabelecer um regime de tratamento e necropsia análises, MWH Chatfield, MJ Robak, K. Tasker e D. Lenger ajuda na laboratório e apoio e M. McFadden e P. Harlow no Zoológico Taronga para o uso de seu espaço durante as filmagens. O projeto foi parcialmente financiado pela Louisiana Departamento de Vida Selvagem e Pesca através da concessão Louisiana Comissão de Educação Ambiental atribuído a LA Brannelly e pela Life Technologies.

Aprovação de Ética: Este estudo e seus métodos foram aprovadas pelo Uso de Animais e Cuidados Comitê da Universidade de Tulane (protocolo n º 0407.). 1. Testes para Bd Infecção <ol><li> Limpando para Bd <ol><li> Animais Swab com um cotonete estéril cinco vezes no ventrum, cinco vezes em cada coxa, de cada lado, e cada um dos membros de um total de 45 cursos. Limpando é um método não invasivo de amostragem para Bd na pele de anfíbios. </li><li> Rodar suavemente o cotonete durante e entre os cursos para garantir a maior quantidade de DNA é recolhida no cotonete. </li><li> Armazene cotonetes em microtubos de 1,5 ml a -20 ° C. </li></ol></li><li> Extração de DNA e ensaio qPCR <ol><li> Extrair ADN genómico a partir dos cotonetes usando um kit de isolamento de ADN comercialmente disponíveis, em conformidade com as instruções de tecido animal. </li><li> Analisar o ADN extraído utilizando PCR quantitativo em tempo real (qPCR) seguinte Boyle <em&gt; et al, 17, com as seguintes modificações.: </li><li> Diluir as amostras de extração de DNA de 1:10 com água deionizada dupla. </li><li> Adicionar 0,7 mL de albumina de soro bovino (BSA) para impedir a inibição da PCR. </li><li> Incluir um controlo positivo interno em cada amostra para garantir a inibição PCR não estava afetando os resultados. </li><li> Amostras de correr com um controle positivo e negativo e uma série de padrões de diluição para estimar zoospore (infecção) de carga. </li></ol></li></ol> 2. Inoculação <ol><li> Cultura Bd <ol><li> Prepare o caldo de triptona, adicionando 10 g de triptona e 1 L de osmose inversa ou de água desionizada, autoclavada (121 ° C durante 40 minutos) e deixa-se arrefecer. Uma vez arrefecida a 23 ° C, adicionar 1 ml de penicilina-estreptomicina. </li><li> Grow Bd tensão (a partir de J. JEL411 Longcore, isolado a partir de Guabal, Panamá de um Phyllomedusa lemon) num caldo de triptona durante sete dias a 23 ° C. </li></ol></li><li> Transfira a bRoth cultura de triptona e placas de agar. <ol><li> Para fazer placas, adicionam-se 10 g de triptona e 10 g de ágar e 1 L de osmose inversa ou de água deionizada e de autoclave (121 ° C durante 40 min). </li><li> Uma vez que a mistura autoclavada é fria o suficiente para tocar, mas antes que ele congela, despeje em placas de Petri, 1/4-1/3 íntegra, em uma capela de fluxo laminar. </li><li> Quando agar tem congelado e resfriado por completo, adicionar 0,5 ml de caldo de Bd para cada prato e espalhe uniformemente em volta do prato. Deixe secar. </li><li> Uma vez que as placas são inoculados com zoósporos bd, placas de vedação com Parafilm. </li><li> Permitir que as placas a incubar a 23 ° C durante cinco a sete dias. Verifique zoospore movimento para assegurar a viabilidade antes da inoculação. </li></ol></li><li> Placas inundação para solução inoculação zoospore <ol><li> Após os cinco a sete dias de incubação Bd e crescimento, inundar cada placa com 5 ml de água da torneira e envelhecido permitir zoósporos de introduzir os meios de comunicação durante 10 min. </li><li> Despeje a suspe zoosporension para um recipiente portátil. </li><li> Estimar concentração zoospore com um hemocitômetro. </li><li> Dilui-se a mistura uma concentração de 1 x 10 6 por 3 ml com água da torneira envelhecido. </li></ol></li><li> Inocular animais <ol><li> Em cada 50 ml recipientes, inocular cada animal por vazamento 3 ml mistura de inóculo sobre a sua ventrum. Permitir inoculo extra para escorrer para a base do recipiente de inoculação. </li><li> Cada animal irá permanecer no recipiente de inoculação durante 24 h para assegurar a infecção. </li><li> Após 24 horas da inoculação, o retorno animais para terrários desinfectados individuais. </li><li> Permitir infecção construir por duas semanas. Confirme infecção com cotonete e os resultados de qPCR, e começar o tratamento. </li><li> Para controles Bd-negativos, inundação Bd-livre placas de ágar com 5 ml com idades água da torneira, e inocular os animais simulada usando os mesmos métodos acima. </li></ol></li></ol> 3. Regime de Tratamento <ol><li> Prepare banho de tratamento <ol><li> Adicionar 2,50 ml itraconazol aquosa (1% Sporanox solução oral) para uma solução de L Anfíbio Ringer (0,0025% itraconazol - a menor concentração tratamento eficaz). <ol><li> Solução receita do Anfíbio Ringer: 1 L de osmose reversa ou água deionizada, cloreto de 6,6 g de sódio, 0,15 g de cloreto de potássio, 0,15 g de cloreto de cálcio e 0,2 g de bicarbonato de sódio. Solução de autoclave (121 ° C durante 40 minutos) e deixa-se arrefecer até à temperatura ambiente. </li><li> Para 0,01% de concentração de tratamento itraconazol, adicionar 10,00 ml itraconazol aquosa (1% Sporanox solução oral) para solução de 1 L Anfíbio Ringer </li><li> Para 0.005% de concentração tratamento itraconazol, adicionar 5,00 ml itraconazol aquosa (1% Sporanox solução oral) para solução de 1 L Anfíbio Ringer. </li></ol></li><li> Para controles Bd-positivas e Bd-negativos, banhar animais em Solução de Ringer Anfíbio sem itraconazol. </li></ol></li><li> Tratamento &lt;ol&gt; <li> Coloque anfíbios individuais em 50 ml desinfectados recipientes com 35 ml da solução de tratamento. </li><li> Assegurar animais são totalmente cobertos por cinco minutos rodando suavemente o recipiente. </li><li> Retornar animais para terrários desinfectados. Repita durante seis dias. </li></ol></li><li> Assegurar o sucesso do tratamento <ol><li> Os animais de teste para a infecção Bd sobre o tratamento dia começa. </li><li> Os animais de teste para a infecção Bd uma semana após terminar o tratamento, e uma vez por semana durante quatro semanas para garantir a infecção foi eliminada. </li></ol></li></ol> 4. Bd como Biohazard <ol><li> Desinfetar semanal terrários individual. <ol><li> Banhe os recipientes Terraria e tratamento em um alvejante banho solução a 10%. </li><li> Lavar cada recipiente branqueada duas vezes com água corrente. </li><li> Permitir recipientes para secar por 24 horas antes de sua reutilização. </li></ol></li><li> Usar luvas de borracha nitrílica limpas ao manusear animais para evitar a contaminação cruzadade Bd patógeno. Mudar de luvas entre tratamento de cada animal. </li><li> Desinfectar todos os resíduos de líquido antes do descarte por levando a solução a 10% de lixívia. </li><li> Autoclave todos os resíduos sólidos que está potencialmente exposto a Bd antes do descarte. </li></ol>

<ol><li>Stuart, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Status+and+trends+of+amphibian+declines+and+extinctions+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Status and trends of amphibian declines and extinctions worldwide.</a> Science. 306 (5702), 1783-1786 (2004).</li>
<li>Skerratt, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+chytridiomycosis+has+caused+the+rapid+global+decline+and+extinction+of+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22EcoHealth%22%5BJournal%5D)">Spread of chytridiomycosis has caused the rapid global decline and extinction of frogs.</a> EcoHealth. 4, 125-134 (2007).</li>
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<li>Martel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+safe+antifungal+treatment+protocol+to+eliminate+Batrachochytrium+dendrobatidis+from+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Developing a safe antifungal treatment protocol to eliminate Batrachochytrium dendrobatidis from amphibians.</a> Med. Mycol. 49 (2), 143-149 (2011).</li>
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<li>Young, S., Speare, R., Berger, L., Skerratt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloramphenicol+with+fluid+and+electrolyte+therapy+cures+terminally+ill+green+tree+frogs+%28Litoria+caerulea%29+with+chytridiomycosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Zoo+Wildlife+Med%22%5BJournal%5D)">Chloramphenicol with fluid and electrolyte therapy cures terminally ill green tree frogs (Litoria caerulea) with chytridiomycosis.</a> J. Zoo Wildlife Med. 43 (2), 330-337 (2012).</li>
</ol>

O autor declara não interesses financeiros concorrentes.

Usando este protocolo, fomos capazes de forma segura e eficaz reduzir a dose de tratamento e tempo de tratamento itraconazol por Bd em anfíbios. A menor dose do tratamento e do tempo (0,0025% por seis dias) era um tratamento bem sucedido para I. subclinically infectados nebulifer. A eficácia de ambos uma dose mais baixa e tempo de tratamento demonstram a necessidade de ensaios clínicos para tratamento de infecção tratamentos bd, como atualmente não há tratamentos seguros e eficazes a ...

Anfíbios estão experimentando atualmente o maior declínio da biodiversidade de todos os táxons de vertebrados 1. Quitridiomicose, uma doença de pele causada pelos dendrobatidis patógeno Batrachochytrium fúngicas chytrid (bd), é uma das principais causas desses declínios dramáticos 2 Bd é o pior já registrado patógeno para causar a perda de biodiversidade:. Que infecta mais de 600 espécies de anfíbios e tem causado declínios em mais de 300 espécies, das quais cerca de 200 espécies tornaram-se criticamente ameaçadas ou extintas 2,3. O fungo anfíbio não é hospedar específico e não está claro quais são as qualidades do hospedeiro permitem infecção Bd progredir causando doença grave. Chytridiomycosis causa morte por perturbar canais iônicos na pele, resultando na perda de eletrólitos e insuficiência cardíaca 4. Além disso, Bd sobrenadante (que não contém zoósporos Bd) provoca uma resposta imune em girinos 5 leading pesquisadores a acreditar Bd produz um subproduto tóxico 6. Porque muitas espécies estão diminuindo rapidamente, colônias de garantia de cativos e programas de melhoramento são importantes medidas de conservação, e pode ser a única tábua de salvação para algumas espécies. Estabelecer e manter colônias livres de doenças é um desafio para as instalações de gestão de anfíbios. Os atuais métodos quimioterápicos para o tratamento de infecções Bd, embora eficazes, podem ser prejudiciais para os animais que estão sendo tratados, e nenhum método de tratamento único tem sido bem sucedida entre as espécies e classes de idade de anfíbios 7. Poucos estudos clínicos de tratamentos para a infecção Bd foram realizados 7. Os três métodos mais utilizados de tratamento são a terapia do calor, cloranfenicol e itraconazol. Terapia de calor é uma opção de tratamento nonchemotherapeutic que parece ter poucos efeitos secundários, pode ser utilizada em vários estágios da vida, e é Generaliado eficaz. Num ensaio de tratamento, Chatfield e Richards-Zawacki 8 constatou que 96% dos animais tratados tinha desaparecido infecções depois de ser alojados a 30 ° C durante 10 dias. Embora este estudo não foi 100% bem sucedida, ele fornece uma linha de base para os outros para avaliar a terapia de calor para sua própria espécie. Terapia de calor, embora eficaz para muitas espécies, é impraticável para muitas espécies alpine que não pode permanecer a temperaturas elevadas por um longo período de tempo. Cloranfenicol, um agente antibacteriano, foi utilizada com sucesso para tratar Bd em muitas espécies, e inibe o crescimento de fungos in vitro. Como um agente antibacteriano, o cloranfenicol não ataca o fungo especificamente mas tem sido conhecido por causar a apoptose em células eucarióticas 9. Especulou-se que a terapia de cloranfenicol provoca a apoptose na pele, matando esporângios intracelular, embora o mecanismo exacto de acção é desconhecido. Embora nenhum estudo clínico foi realizado e, portanto,a dose e tempo de tratamento não ter sido avaliado, protocolos de tratamento correntes requerem tipicamente a submersão de duas a quatro semanas 10,11, tornando impraticável o tratamento de anfíbios terrestres. Cloranfenicol foi também restrito em alguns países para uso veterinário porque a exposição humana tem sido associada com uma forma rara de anemia aplástica 12. Itraconazol, um antifúngico azóis, é o mais amplamente utilizado para o tratamento da infecção por Bd em anfíbios em cativeiro. O protocolo mais utilizado é animais de banho em uma solução de 0,01% itraconazol por cinco minutos por dia durante 11 dias consecutivos. Este protocolo foi derivado de padrões utilizados para a administração de mamíferos, e, ao mesmo tempo eficaz para anfíbios, que não se baseia em estudos clínicos em anfíbios 11,13. Este protocolo pode provocar efeitos colaterais negativos em certas espécies, especialmente no género Rana e em girinos e metamorphs últimos 11.Girino tratamento foi bem sucedido com uma concentração muito mais baixa (0,0005%) do itraconazole, mas foi associado a despigmentação 14. Esta mesma concentração foi julgado em metamorphs recentes e encontrou a ser vencida no tratamento da infecção 15. Porque não existe risco de efeitos colaterais negativos com o tratamento itraconazol, alguns profissionais têm utilizado a metade da concentração usual (0,005%) por 11 dias consecutivos e encontrei este para ser bem sucedido na cura de infecções Bd 16. O presente estudo é um resumo de um estudo tratamento clínico utilizando itraconazol para tratar a infecção Bd 15. O protocolo descreve uma tentativa para encontrar a menor dose e tempo de tratamento, que é seguro e eficaz para o tratamento de animais infectados com Bd itraconazol. Animais utilizados neste estudo foram metamorphs recentes de sapos costa do golfo, Incilius nebulifer.

<table><tbody><tr><td>0,1% de itraconazol aquoso, Sporonox</td><td>Janssen Pharmaceutica Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640-500</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-1</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP510-100</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328-500</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes estéreis</td><td>Equipamentos médicos e de fio</td><td>MW113</td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml Microtubos</td><td>Sarstedt</td><td>73.703.217</td><td></td></tr><tr><td>Qiagen DNEasy Kit de Sangue e Tecido</td><td>Qiagen</td><td>69581</td><td></td></tr><tr><td>7500 PCR em tempo real</td><td>Applied Biosystems</td><td>4351104</td><td></td></tr><tr><td>VIC IPC</td><td>Applied Biosystems</td><td>4308323</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Applied Biosystems</td><td>AM2618</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Invitrogen</td><td>30391023</td><td></td></tr><tr><td>Triptona</td><td>Invitrogen</td><td>Q10029</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS430589</td><td></td></tr></tbody></table>

redução de concentração e durações itraconazol são bem sucedidos no tratamento<em&gt; batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; infecção em anfíbios

Reduced Itraconazole Concentration and Durations Are Successful in Treating Batrachochytrium dendrobatidis Infection in Amphibians

Anfíbios estão experimentando o maior declínio de qualquer classe de vertebrados e uma das principais causas desses declínios é um fungo, Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), que faz com que a quitridiomicose doença. Colônias de garantia de cativeiro são importantes em todo o mundo para as espécies de anfíbios ameaçadas e pode ser a única tábua de salvação para aqueles em perigo crítico de extinção. A manutenção de colônias livres de doença é uma prioridade dos gestores de cativeiro, ainda tratamentos seguros e eficazes para todas as espécies e entre as fases da vida ainda não foram identificados. O tratamento quimioterapêutico mais amplamente utilizado é o itraconazol, embora a dose utilizada pode ser prejudicial para alguns indivíduos e espécies. Foi realizado um ensaio tratamento clínico para avaliar se uma dose mais baixa e mais seguro, mas eficaz, de itraconazol poderia ser encontrado para curar infecções bd. Observou-se que, reduzindo a concentração de tratamento ,01-,0025% e reduzindo o tempo de tratamento de 11-6 Dias de banhos 5 min, rãs poderia ser curado de infecção Bd com menos efeitos secundários e menos mortalidade associada ao tratamento.

Itraconazol tratamento foi considerado bem sucedido se todos os animais foram Bd-negativos, quatro semanas após o fim do tratamento. Antes do tratamento iniciado duas semanas após a inoculação, todos os animais foram inoculados Bd-infectadas, com uma carga média de zoosporos de 1.121,7 (± 17,34), enquanto que quatro semanas após o fim do tratamento, os animais de controlo Bd-positivos tinham uma média de zoosporos de carga 16,765.12 ( ± 14643,08). Tratamento de <em...

Infecção Batrachochytrium dendrobatidis em anfíbios pode ser eliminado usando uma concentração reduzida (0,0025%) e duração mais curta (banhos de cinco minutos, durante seis dias) de itraconazol do que é geralmente usado. Menos de mortalidade e menos efeitos secundários negativos foram observadas utilizando este protocolo de tratamento modificado.

Redução de Concentração e Durações Itraconazol são bem sucedidos no tratamento<em&gt; Batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; Infecção em anfíbios

Amphibians are experiencing the greatest decline of any vertebrate class and a leading cause of these declines is a fungal pathogen, Batrachochytrium ...

O objetivo geral deste procedimento é tratar anfíbios infectados com o fungo anfíbio Kitt, Bera key tridium, dendro, he ou BD, utilizando a quimioterapia antifúngica com at triazole. Isso é realizado primeiramente cultivando culturas de BD e inoculando os animais com o patógeno fúngico. O segundo passo consiste em testar os animais por meio da extração de DNA e QPCR em swabs de pele para confirmar a infecção por BD.Em seguida, os animais infectados são tratados mediante banho com solução de econazol a 0,0025% durante cinco minutos por dia, durante seis dias. O passo final é monitorar o estado da infecção nos animais tratados, realizando análise de QPCR em swabs de pele por um período mínimo de quatro semanas após a conclusão do tratamento, a fim de garantir o sucesso do tratamento do animal. Este procedimento demonstra que uma concentração reduzida e um tempo de tratamento mais curto do antifúngico itraconazol são eficientes para o tratamento de animais infectados com bd. A principal vantagem do uso deste regime terapêutico em comparação com a dose recomendada de tratamento, que consiste em uma solução de itraconazol a 0,01% durante 11 dias, é que uma concentração reduzida equivale

reduced-itraconazole-concentration-durations-are-successful-treating

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Este protocolo descreve o uso de cotonetes do reservatório e análise de lodos de sistemas de zebrafish, que leva à detecção de aumentada em comparação com o uso exclusivo de sentinelas para detectar agentes patogénicos como Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. e  Tomentosa de Pseudocapillaria. Propõe-se também um sistema para monitorar os ovos p. tomentosa em quarentena.

Análise ambiental de Aeromonas hydrophilae Mycobacterium spp. tomentosa Pseudocapillaria em sistemas de Zebrafish

Este artigo sintetiza os atributos de projeto e a eficácia dos sistemas de tratamento que tratam a água de chuva urbana ea irrigação agrícola para eliminar os pesticidas e outros contaminantes associados à toxicidade aquática.

Vegetated Sistemas de Tratamento para Remoção de Contaminantes Associados à Toxicidade de Águas Superfícies na Agricultura e Escorrências Urbanas

Podemos quantificar a morte celular epidérmica em sapos com quitridiomicose usando dois métodos. Primeiro, usar terminal transferase-mediated dUTP nick em situ histologia rotulagem final (TUNEL) para determinar diferenças entre animais clinicamente infectados e não infectados. Em segundo lugar, realizamos uma análise de série de tempo da apoptose infecção usando uma análise de proteínas caspase 3/7.

Usando o Terminal Transferase-mediada dUTP Nick End-rotulagem (TUNEL) e Caspase 3/7 ensaios a morte de células epidérmicas medida em sapos com quitridiomicose

O estudo da biologia dos anfíbios fornece informações valiosas sobre os processos reprodutivos, fisiológicos, embriológicos e de desenvolvimento que impulsionam os organismos de muitos grupos taxonômicos. Aqui, apresentamos um guia abrangente sobre diferentes metodologias que podem ser usadas para estudar o controle e o monitoramento ovariano em anfíbios.

Técnicas reprodutivas para monitoramento e controle ovariano em anfíbios

Um protocolo baseado em placa de microtitulação de 96 poços usando um ensaio de redução de 2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-carboxanilidade-2H-tetrazólio (XTT) é descrito neste documento, para estudar os efeitos de anticorpos em biofilmes formados por C. tropicalis. Este protocolo in vitro pode ser usado para verificar o efeito de potenciais novos compostos antifúngicos sobre a atividade metabólica de células de espécies de Candida em biofilmes.

Um ensaio de redução solúvel à base de tetrazólio para avaliar o efeito de anticorpos em biofilmes de Candida tropicalis

Este é um método para amostragem e isolamento de bactérias cultiváveis da microbiota cutânea de salamandras pletodontídeas europeias (gênero Speleomantes). Aqui, apresentamos um protocolo para amostragem da pele da salamandra com swabs e processamento usando abordagens cultiváveis. Descrevemos a amostragem, o isolamento e o estabelecimento da cultura axênica com caracterização da cepa bacteriana.

Isolamento e Identificação de Cepas Bacterianas da Pele de Anfíbios Terrestres

O design de proteínas envolve a construção de sequências de aminoácidos e a incorporação de motivos específicos para criar variantes funcionais. Essa abordagem é fundamental para o desenvolvimento de peptídeos antimicrobianos (AMPs) para combater patógenos resistentes a antibióticos. Este artigo apresenta um procedimento para construção de proteínas usando várias ferramentas de bioinformática.

Aplicação de I TASSER, trRosetta, UCSF Chimera, servidor HADDOCK e HEX loria para design de proteínas De Novo e In Silico

Esse protocolo fornece um guia otimizado e detalhado para usar a planária Schmidtea mediterranea como sistema modelo para estudar as interações hospedeiro-patógeno durante infecções fúngicas. O método se baseia no procedimento anterior para infectar planárias com o patógeno fúngico humano Candida albicans, fornecendo orientações detalhadas para aumentar a reprodutibilidade e a consistência experimental.

Um Protocolo Otimizado para Infecção por Candida albicans em Schmidtea mediterranea para Estudar a Patogênese Fúngica e a Defesa do Hospedeiro

Aprenda um protocolo de tratamento com itraconazol em concentração reduzida e duração menor para eliminar infecções por Batrachochytrium dendrobatidis em anfíbios, minimizando efeitos colaterais e melhorando o bem-estar animal.

Redução de Concentração e Durações Itraconazol são bem sucedidos no tratamento Batrachochytrium dendrobatidis Infecção em anfíbios (Vídeo) | JoVE Journal

Redução de Concentração e Durações Itraconazol são bem sucedidos no tratamento

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