Traçar medo condicionado em ratos
March 20th, 2014
No experimento seguinte, descrevemos um protocolo para traço medo condicionado em ratos. Este tipo de memória associativa inclui um período de traço que separa o estímulo neutro eo estímulo incondicionado.
O objetivo geral do experimento a seguir é avaliar o aprendizado e a memória dependentes do hipocampo em camundongos por meio do uso de condicionamento de esferas de traço. Isso é conseguido primeiro treinando o animal para associar um tom auditivo a um estímulo aversivo. No dia seguinte, o animal é colocado em um novo contexto e o comportamento de congelamento é registrado em reação ao tom.
No terceiro dia, o animal é devolvido ao contexto original e o comportamento de congelamento é registrado. Os resultados mostram que os camundongos treinados com o emparelhamento de tons de choque exibem mais comportamento de congelamento do que aqueles que não receberam o choque. Este método pode ser usado para fornecer informações sobre o aprendizado dependente do hipocampo e a memória e camundongos, e é especialmente útil quando usado no estudo de animais transgênicos e nocauteados.
O procedimento a seguir é realizado em uma câmara de condicionamento de medo alojada dentro de uma câmara de atenuação de som maior. Com a porta da câmara fechada, as luzes para atingir o nível de iluminação desejado, se colocadas corretamente, a luz indicadora do nível de luz deve estar apagada. Use um medidor de som para confirmar um nível consistente de ruído de fundo dentro de cada câmara.
Em seguida, calibre o tom usado durante o treino. Use um dispositivo de calibração externo para calibrar o nível de choque. Coloque um chumbo em uma barra e outro três ou quatro barras acima.
Use o gerador de choque para administrar o choque e calibre até que o nível correto seja alcançado. Repita esta etapa para cada câmara de condicionamento do medo. Uma vez preparado o aparelho, transfira os sujeitos para uma sala de espera separada da sala de testes para reduzir o manuseio excessivo.
Antes do teste, rotule as caudas pelo menos 30 minutos antes do teste ou no dia anterior. Quando estiver pronto para começar, transfira o mouse de teste para uma gaiola limpa e rotulada para transporte para a câmara de condicionamento do medo. Coloque o mouse na câmara, feche a porta e inicie o programa de software.
No primeiro dia de treinamento, os ratos podem explorar a câmara por três minutos. O software então apresenta um 22º tom, seguido por um 22º intervalo de rastreamento que termina em um leve choque no pé. Observe o sujeito para confirmar que ele recebeu os estímulos aversivos.
Um 202º intervalo entre tentativas separa cinco tentativas de condicionamento. Após os ensaios, deixar o animal permanecer na câmara de ensaio durante um minuto antes de o retirar, voltar a colocá-lo na gaiola de transferência e regressar à sala de espera. Se houver camundongos adicionais a serem testados em sua gaiola doméstica individualmente, aloje o camundongo até que todos os camundongos tenham concluído o teste.
Limpe a câmara de teste com isopropanol a 30% em preparação para o próximo animal. Repita essas etapas até que todos os mouses tenham sido treinados. Devolva todos os ratos para a sala da colônia.
Depois que o último camundongo da coorte for testado no dia seguinte, os animais são testados. Para rastrear a memória do medo. Neste dia, substitua a cama das gaiolas de transferência por papel picado para mudar seu contexto.
O contexto da câmara também é alterado. Coloque uma folha de espuma sob uma inserção de acrílico transparente no chão para alterar sua textura e aparência. Coloque uma divisória de acrílico dentro da área de teste.
Mude o odor colocando o extrato de baunilha em um barco de soro de leite sob o chão. Insira neste dia, limpe a câmara com 70% de etanol em vez de 30% de isopropanol entre cada mouse. Quando estiver pronto, coloque o mouse na câmara de teste e inicie o programa.
A sessão começa com um período de linha de base de dois minutos, seguido por três apresentações do 22º tom. Há um intervalo de 222 tentativas entre cada apresentação de tom. Após o término da sessão, devolva os camundongos à gaiola de origem e continue até que todos os animais tenham sido testados em preparação para o teste no dia seguinte.
Restaure o mesmo contexto usado no primeiro dia. Limpe a câmara com 30% de isopropanol. O condicionamento contextual é realizado no terceiro dia.
Usando as mesmas gaiolas de transferência do primeiro dia, recupere o mouse de teste da sala de espera. Coloque o mouse na câmara de teste e inicie o programa para testar a memória contextual. Execute um programa para registrar o comportamento de congelamento por oito minutos.
Após esse período, retorne o mouse à gaiola de origem e continue testando conforme mostrado anteriormente, os resultados representativos mostram um aumento no comportamento de congelamento em animais que recebem o emparelhamento de tom de choque ao longo da sessão de treinamento. Em um novo contexto, os camundongos que receberam o estímulo de choque aversivo tiveram mais congelamento em comparação com os camundongos que não receberam o choque durante o traçado do tom basal e o intervalo entre as tentativas. Quando retornados ao contexto original, os animais que receberam o estímulo de choque aversivo mostraram um comportamento de congelamento consistentemente maior durante o período de oito minutos.
Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como usar o condicionamento do medo para entender o aprendizado dependente do hipocampo e a memória e os camundongos.
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Visão geral
Este experimento descreve um protocolo para condicionamento de medo residual em camundongos, que avalia a aprendizagem e memória dependentes do hipocampo. O protocolo envolve associar um tom auditivo a um estímulo aversivo e medir o comportamento de congelamento dos camundongos em diferentes contextos.
Componentes principais do estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Psicologia Comportamental
- Aprendizagem e Memória
Fundamentos
- O condicionamento de medo residual é um método usado para estudar a memória associativa.
- O hipocampo desempenha um papel crucial nos processos de aprendizagem e memória.
- Este protocolo pode ser aplicado tanto a camundongos selvagens quanto geneticamente modificados.
- O comportamento de congelamento é uma medida comum de resposta ao medo em roedores.
Propósito do estudo
- Avaliar a aprendizagem e memória dependentes do hipocampo em camundongos.
- Investigar os efeitos de sinais auditivos combinados com estímulos aversivos.
- Fornecer insights sobre os mecanismos da memória associativa.
Métodos utilizados
- Treinar camundongos para associar um tom auditivo a um estímulo aversivo.
- Registrar o comportamento de congelamento em um contexto novo após o treinamento.
- Retornar os camundongos ao contexto original para medir o comportamento de congelamento novamente.
- Comparar o comportamento entre camundongos treinados e não treinados.
Principais resultados
- Camundongos treinados com o emparelhamento do tom de choque exibiram aumento no comportamento de congelamento.
- O comportamento de congelamento foi significativamente maior no contexto original em comparação com o contexto novo.
- Os resultados confirmam a eficácia do condicionamento de medo residual na avaliação da memória.
- Este método é útil para estudar camundongos transgênicos e knockout.
Conclusões
- O condicionamento de medo residual é um método confiável para estudar a função do hipocampo.
- O protocolo pode ajudar a elucidar os mecanismos subjacentes à memória associativa.
- As descobertas contribuem para a compreensão da aprendizagem e memória em camundongos.
