Name: Traçar medo condicionado em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-20T18:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Aprenda o condicionamento de medo em traço para avaliar a memória dependente do hipocampo em camundongos. Este método associa estímulos auditivos aversivos e mede o comportamento de imobilidade em diferentes contextos.

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Este trabalho é apoiado por uma bolsa do Conselho de Pesquisa da Universidade de Baylor e de uma bolsa de pesquisa da Fundação de Epilepsia.

Os ratos utilizados no experimento seguinte foram gerados e alojados na Universidade de Baylor em uma temperatura ambiente de 22 ° C, com uma luz de 14 horas e 10 horas escuro (20:00-06:00 hr) ciclo diurno. Os ratinhos foram fornecidas ad libitum acesso a comida e água. Todos os procedimentos para os ratos estavam em conformidade com os Institutos Nacionais de Saúde Diretrizes para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório e do protocolo de animais foi aprovado pela Universidade de Baylor Animal Care e do Comitê Use. Visão global A tarefa do medo condicionado traço é baseado em procedimentos descritos por Wiltgen e colegas 9. 1. Preparação do Equipamento A câmara de aparelho de condicionamento do medo (26 centímetros x 22 cm x 18) consiste de duas partes que são de acrílico, de dois lados, que são de metal, e um chão de grade de fundo, que é usado para fornecer um choque no pé leve. A câmara de teste é a casad em uma câmara de som atenuado. A câmara também é apertado luz para evitar a luz do lado de fora de influenciar o software de detecção de movimento. <ol><li> Calibrar os níveis de choque, os níveis de luz, e os níveis de intensidade sonora para a câmara de testes. Medir o nível de fundo da câmara de testes. O ruído de fundo nesta câmara é de 65 dB. Use um medidor de som para medir este nível. O medidor deve ser ajustado para 70 dB, definido como C, e para a detecção de ajuste lento. <ol><li> Calibrar o nível de choque de 0,5 mA. Use um dispositivo de calibração externa para calibrar corretamente o nível de choque (ver Tabela Materiais). A medição interna do gerador de choque não é preciso. O gerador de choque administra um choque mexidos que não pode ser medido com precisão por um medidor de amp padrão. </li><li> Coloque uma das pontas em um dos bares da rede e colocar os outros levam 3 ou 4 bares mais. Use o gerador de choque para administrar o choque. Ajuste o nível de choque até o nível correto seja atingido. Faça isso por eAch temer câmara de condicionamento. </li><li> Feche a porta para a câmara quando se mede o nível de luz da câmara. Calibrar o nível de luz de aproximadamente 1,0. Este é um número específico para o software freezeframe utilizado nesta experiência. Um medidor de luz externa vai ler isso como 2 lux. O nível de luz pode ser ajustada movendo a localização da luz casa ou ajustando o condensador da lente. Certifique-se de apertar os parafusos de ajuste para a lente após o ajuste. </li><li> Calibrar o nível do som em decibéis a 85 dB. Use um decibelímetro externo dentro da gaiola de testes para calibrar o nível de decibéis (ver Tabela Materiais). O som apresentado será um tom Hz 2.700. Nota: Se estiver usando camundongos com idade superior a 6 meses de idade, pode ser melhor usar o ruído branco desde ratos mais velhos podem ter déficit auditivo. </li></ol></li><li> Depois que o aparelho está pronto levar os sujeitos a uma sala de espera separada. Nota: Não abrigar o mouse na mesma sala, como a sala de testes. </li><li> ª rótuloe a cauda dos ratos que serão testadas em ordem de teste. É melhor reduzir o manuseio excessivo antes do teste. Alternativamente, as caudas podem ser rotuladas no dia anterior ao ensaio para reduzir a lidar com o stress. Após os ratinhos foram rotulados permitir a aclimatar ao ambiente durante 30 minutos. Tenha gaiolas adicional limpas para abrigar os ratos após o teste é concluído. </li></ol> 2. Traçar Condicionado Dia 1 <ol><li> Retire cada rato da gaiola e colocá-los em gaiolas individuais para o transporte para a câmara de medo condicionado. Use roupa de cama limpa para cada gaiola. Coloque uma nota em gaiola transferência para manter a ordem de camundongos testando correta. Nota: Se os ratos são alojados individualmente em seguida, eles podem ser transportadas na sua gaiola de origem. </li><li> Posicione o mouse na câmara de teste e fechar a porta. Inicie o programa de software. </li><li> No dia de treino, permite que os ratinhos para explorar a câmara durante 3 min. O software em seguida, apresenta a 20 seg de tom (85 dB, 2.700 Hz) to animal. Depois de um período de rastreio de 20 seg um choque ligeiro (2 s, 0,5 mA) é administrado ao animal. </li><li> Registre a reação do assunto para confirmar que recebeu os estímulos aversivos, visualizando o vídeo. Um intervalo inter-julgamento 200 seg separa os ensaios 5 condicionamento. Cada ensaio consiste de 20 seg tom seguido por um atraso de 20 segundos, em seguida, um choque. </li><li> Após o teste é concluído que os animais possam permanecer na câmara de teste durante 1 minuto antes de a retirar da gaiola de teste. </li><li> Colocar o animal de volta na gaiola de transferência e devolvê-lo à sua gaiola. Se houver ratos adicionais em sua gaiola casa, então abrigar individualmente o mouse até que todos os ratos de teste completo. Isto irá reduzir a tensão para o outro ratos que não foram testados. Uma solução alternativa seria a de abrigar individualmente todos os ratinhos uma semana antes do ensaio, para reduzir a influência da remoção contínua ratinhos de uma gaiola. </li><li> Limpe a câmara de testes com 30% de isopropanol após each animal é testado. </li><li> Repita os passos de 2,2-2,7 para todos os murganhos no grupo do teste. </li><li> Retornar todos os ratos para o quarto colônia após o último rato na coorte foi testado. </li></ol> 3. Rastreamento Medo Condicionado Day 2: Teste de memória Rastreamento <ol><li> Teste de memória rastreamento ocorrerá no dia 2. Neste protocolo há 3 apresentações de tom. Coloque os ratos em um novo contexto para o teste traço condicionado. </li><li> Prepare o software para executar um programa com um período inicial de 2 min seguido por três apresentações de 20 segundos de tom. Há sa 220 sec ITI entre cada apresentação tom. </li><li> Para a nova condição contexto, colocar inserções de acrílico no chão da câmara para alterar a forma, textura e cor da câmara de condicionamento. </li><li> Alterar o odor na câmara, colocando extrato de baunilha em um barco pesar sob a inserção chão. </li><li> Limpar a câmara com etanol a 70% em vez de 30% de isopropanol. Nota: Isso vai ajudarpara criar um novo contexto. </li><li> Traga os ratos para a sala de detenção e relabel suas caudas para testes, se necessário. </li><li> Prepare novas gaiolas de transferência contexto, substituindo a cama com papel picado. Nota: Isso vai ajudar na criação de um novo contexto. </li><li> Coloque os ratos na câmara de teste, em seguida, iniciar o programa. Limpar a câmara com etanol a 70% após o teste é concluído. </li><li> Retorne os ratos para sua gaiola para casa após o traço condicionado está concluída. Retornar todos os ratos para o quarto colônia quando todos os ratos foram testados. </li></ol> 4. Rastreamento Medo Condicionado Dia 3: Teste de memória Contextual <ol><li> No terceiro dia de condicionamento contextual é conduzida. Prepare o software para executar um programa para gravar o comportamento de congelamento por 8 min. </li><li> Limpe a câmara com 30% isopropanol antes de testar e depois de testar cada rato. O contexto deve ser idêntica à do dia 1. As gaiolas de transferência deve ser o mesmo que no dia 1. </li><li&gt; Trazer camundongos para a sala de detenção e rotular suas caudas para testes. </li><li> Coloque cada rato na câmara de teste, em seguida, iniciar o programa. Limpe a câmara com 30% de isopropanol após o teste é concluído. </li><li> Retornar todos os ratos para o quarto colônia quando concluído. </li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Houve vários estudos que têm elucidado o circuito neural que subjaz traço medo condicionado. Traçar medo condicionado é acreditado para envolver CA1 do hipocampo 12-14. Existe também evidência de que o córtex pré-frontal medial (CPFm) desempenha um grande papel no rastreio do pestanejar condicionado 15, e o CPFm foi encontrado para ser envolvido no rastreio de condicionamento de medo. Um estudo descobriu que os neurônios mPFC fornecer atividade sustentada durante o período de rastreio, proporcionan...

Com medo condicionado um estímulo neutro (NS) está emparelhado com um estímulo incondicionado aversivo (EUA). O NS é normalmente um tom e se torna um estímulo condicionado (CS) através de sorteios repetidos com os EUA. O CS pode então induzir uma resposta condicionada (CR), tal como a congelação, na ausência do aversivo EUA. Um protocolo de condicionamento do medo utilizada é atraso condicionado. Neste protocolo o início do NS e os EUA é contíguo ou com alguma sobreposição na apresentação do estímulo. Mesmo que demora medo condicionado é um dos tipos mais usados ​​de condicionamento associativo temporais, existem vários outros tipos de arranjos temporais condicionamento associativo: condicionamento simultâneo, condicionado para trás, e traço condicionado 1. No rastro do medo condicionado há um intervalo livre de estímulo entre o NS e os EUA de vários segundos, resultando em um período de &quot;trace&quot;. Vários estudos relataram déficits em rastreio de condicionamento de medo quando as lesões neurotóxicas são produzidas nas estruturas de entrada em que as hipocampo 2-5 ou quando os agentes farmacológicos são utilizados para bloquear a função do receptor no hipocampo. Lesão aos resultados hipocampo os défices traço e no condicionamento contextual, mas não prejudica atraso medo condicionado 8. Existem várias vantagens de se utilizar traço medo condicionado. O protocolo de condicionamento ao medo pode ser alcançado depois de um período de teste de três dias e permite a memória dependente do hipocampo que não é espacialmente dependente. Traçar medo condicionado pode ser usado como um exame complementar para o labirinto Morris água, romance teste de reconhecimento de objeto, ou outros testes de labirinto em investigar a memória dependente do hipocampo.

<table><tbody><tr><td>FreezeFrame</td><td>Coulbourn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30% Isopropanol</td><td></td><td></td><td>Compre 90% de isopropanol e dilua-o até 30%</td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amp-meter</td><td>Med-Associates</td><td>ENV-420</td><td>Windows XP, Vista, e 7 Compatível (apenas 32 bits)Medidor de</td></tr> <tr><td>Nível de Som</td><td></td> Digital <td>33-2055</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de BaunilhaNotas Posty</td> de Extrato <td></td><td></td><td>de Baunilha Puro McCormick</td></tr><tr><td></td><td>3 pol x 3 pol</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

traçar medo condicionado em ratos

Trace Fear Conditioning in Mice

Neste experimento, apresentamos uma técnica para medir a aprendizagem ea memória. No protocolo condicionado traço medo aqui apresentada há cinco sorteios entre um estímulo neutro e um estímulo incondicionado. Há um período de rastreio de 20 segundos que separa cada ensaio condicionado. Na próxima congelamento dia é medido durante a apresentação do estímulo condicionado (CS) e período de vestígios. No terceiro dia, há um teste de 8 minutos para medir a memória contextual. Os resultados representativos são de camundongos que foram apresentados com o estímulo incondicionado aversivo (choque) em comparação com ratos que receberam as apresentações de tom, sem o estímulo incondicionado. Rastreamento medo condicionado foi usado com sucesso para detectar déficits e melhorias sutis de aprendizagem e memória em ratos que não são encontrados com outros métodos de medo condicionado. Este tipo de medo condicionado é considerada dependente da ligação entre o córtex pré-frontal e o hipocampo medial. Uma controvérsia atual é saber se este método é acreditado para ser independente de amígdala. Portanto, é necessário outro teste medo condicionado para examinar os efeitos de aprendizagem e memória dependente de amígdala, como através do atraso medo condicionado.

Para os resultados representativos são apresentados dados de ratos adultos da estirpe C57BL/6J de controlo que receberam os emparelhamentos de estímulo neutro com o estímulo não condicionado (choque condição) em comparação com os ratos que receberam o estímulo neutro, mas não receberam o estímulo não condicionado (nenhum estado de choque). É importante executar esta condição quando a primeira criação deste teste comportamental para determinar se o protocolo foi realizado corretamente. Os dad...

No experimento seguinte, descrevemos um protocolo para traço medo condicionado em ratos. Este tipo de memória associativa inclui um período de traço que separa o estímulo neutro eo estímulo incondicionado.

Traçar medo condicionado em ratos

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings ...

O objetivo geral do experimento a seguir é avaliar a aprendizagem e a memória dependentes do hipocampo em camundongos por meio do condicionamento com esfera de traço. Isso é realizado primeiramente treinando o animal para associar um tom auditivo a um estímulo aversivo. No dia seguinte, o animal é colocado em um contexto novo e o comportamento de imobilização é registrado em resposta ao tom.No terceiro dia, o animal é devolvido ao contexto original e o comportamento de imobilidade é registrado. Os resultados mostram que camundongos treinados com o emparelhamento do tom e choque exibem mais comportamento de imobilidade do que aqueles que não receberam o choque. Este método pode ser utilizado para obter informações sobre aprendizado e memória dependentes do hipocampo em camundongos, sendo especialmente útil no estudo de animais transgênicos e knockouts.O procedimento a seguir é realizado em uma câmara de condicionamento de medo alojada dentro de uma câmara maior com atenuação de som. Com a porta da câmara fechada, posicione as luzes para atingir o nível desejado de iluminação; se corretamente posicionadas, a luz indicadora do nível de iluminação deve estar apagada. Utilize um medidor

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Este artigo apresenta um protocolo para um teste de condicionamento do medo contextual e cued usando um sistema de vídeo de análise para avaliar o medo de aprendizagem e memória em camundongos.

Contextual e Cued Medo Condicionado Teste Usando um sistema de análise de vídeo em Ratos

Este protocolo descreve um método de inflamação química com mielinização e fornece um modelo do rato da epilepsia. Este protocolo também pode ser usado para investigar a vulnerabilidade à indução de convulsões e patogênese após crises epilépticas em ratos.

Inflamação induzida pela mielinização Mouse modelo

Descrevemos um protocolo estendido de condicionamento do medo que produz overtraining e incubação do medo em ratos. Este protocolo envolve uma única sessão de treinamento com pares de choque de tom de 25 tons (ou seja, overtraining) e uma comparação de respostas de congelamento condicionadas durante testes de contexto e sinalização 48 h (curto prazo) e 6 semanas (longo prazo) após o treinamento.

Incubação do medo usando um protocolo estendido de condicionamento do medo para ratos

As respostas comportamentais defensivas dependem da intensidade da ameaça, proximidade e contexto de exposição. Com base nesses fatores, desenvolvemos um paradigma de condicionamento clássico que provoca transições claras entre congelamento condicionado e comportamento de voo dentro de indivíduos. Esse modelo é crucial para a compreensão das patologias envolvidas em ansiedade, pânico e transtornos de estresse pós-traumático.

Um novo paradigma de condicionamento do medo pavloviano para estudar o congelamento e o comportamento de voo

Para estudar comportamentos de voo em um contexto de medo, introduzimos um protocolo modificado de condicionamento do medo. Esse protocolo garante que os camundongos exibam consistentemente comportamentos de voo durante a apresentação da pista no condicionamento do medo.

Condicionamento de medo modificado para induzir comportamentos de voo em camundongos

O paradigma do medo observacional avalia o congelamento vicário em roedores como um modelo de empatia afetiva. Este procedimento envolve a exposição de roedores observadores a demonstradores coespecíficos que recebem choques aversivos nas patas para provocar respostas empáticas de congelamento. Ao empregar ensaios observacionais de medo, os pesquisadores podem investigar os mecanismos neurais subjacentes à empatia afetiva.

Medo observacional como modelo de empatia afetiva em camundongos

A reconsolidação disruptiva é uma abordagem promissora para amortecer a expressão comportamental da memória do medo em pacientes com transtornos de ansiedade ou transtorno de estresse pós-traumático. Em uma série de estudos de condicionamento do medo humano, mostramos que interromper a reconsolidação pelo noradrenérgico β-bloqueador propranolol é muito eficaz em apagar a resposta condicionada ao medo.

Perturbar reconsolidação do Medo Memória em seres humanos por um noradrenérgica β-Blocker

Hormônios gonadais, como o estrogênio, modulam a formação da memória em vários paradigmas experimentais, incluindo a memória de extinção do medo. Este protocolo descreve um conjunto de métodos para investigar a influência dos hormônios gonadais especificamente durante a extinção em fêmeas que circulam naturalmente, incluindo monitoramento do ciclo estral e administração de estrogênio exógeno.

Protocolo de Estudos de Extinção do medo condicionado em Naturally Ciclismo ratas

Este artigo descreve um novo protocolo para a medição quantitativa da motivação social em camundongos usando condicionamento operante para uma recompensa social. O protocolo é útil para a medição da motivação social em modelos de autismo e outros distúrbios do comportamento social em camundongos.

Quantificar motivação social em ratos usando Condicionamento Operante

A preparação apresentada aqui para o condicionamento do piscar de olhos sinalizado pelo bigode em camundongos com a cabeça fixa estimula precisamente bigodes específicos, permitindo que os camundongos deambulem em uma esteira cilíndrica. Um estímulo condicionado de estimulação de bigode (CS) emparelhado com um estímulo incondicionado de choque periorbital (US) resulta em aprendizado associativo confiável neste aparelho.

sinalizado-Bigode Eyeblink condicionamento clássico em Ratos fixo-Cabeça

Aprenda o condicionamento de medo em traço para avaliar a memória dependente do hipocampo em camundongos. Este método associa estímulos auditivos aversivos e mede o comportamento de imobilidade em diferentes contextos.

Traçar medo condicionado em ratos

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