A sorotipagem capsular de Streptococcus pneumoniae Usando o Reaction Quellung

O objetivo geral deste procedimento é realizar a estereotipagem capsular do Streptococcus pneumoniae ou do pneumococo usando a reação de repressão. Isso é feito inoculando primeiro o caldo de infusão do coração com uma cultura pura de pneumococos fresca durante a noite. Na segunda etapa, uma gota de inóculo é transferida para uma lâmina de microscópio de vidro.

O próximo soro antis é adicionado em volume igual à lâmina. Na etapa final, ambas as gotas são misturadas e uma lamínula é colocada sobre a suspensão. Em última análise, a suspensão pode ser vista sob contraste de fase para observar a reação pulmonar positiva ou negativa.

Este método demonstra o método padrão-ouro do pneumococo syp. O método é simples, fácil de executar e fácil de interpretar. A demonstração visual desse método é importante, pois os indivíduos novos nessa técnica podem ter dificuldade em reconhecer qual é a densidade celular adequada para realizar o teste de qualm.

Comece usando uma alça de microlitro descartável estéril para obter uma pequena varredura de uma cultura pura de pneumococos cultivada em uma placa de ágar sangue de cavalo sólida e não seletiva e inocule os pneumococos em 100 microlitros de caldo de infusão de coração. A suspensão deve parecer visivelmente turva e agitar suavemente o tubo para emulsionar a solução celular. Use um novo loop de um microlitro para transferir uma gota do inóculo para um microscópio de vidro.

Deslize em seguida, coloque uma pequena lamínula circular sobre a suspensão e verifique a densidade da suspensão sob contraste de fase às vezes com ampliação de 400. Se o inóculo for muito pesado, dilua a suspensão celular com mais caldo e misture suavemente as células novamente se o inóculo for muito leve. Por exemplo, se houver menos de 50 células visíveis, adicione mais bactérias à suspensão celular e misture suavemente novamente.

Com experiência. A densidade da suspensão celular pode ser avaliada agitando e segurando a suspensão contra a luz, onde deve parecer visivelmente turva. Quando vista ao microscópio, a solução celular deve ser tão densa.

Uma vez alcançada a diluição ideal das células bacterianas, transfira cerca de um microlitro do inóculo para o microscópio de vidro. Deslize a seguir. Usando um novo loop, adicione um volume igual de temperatura ambiente.

Anti-soro na lâmina e misture bem as duas gotas. Com o laço, coloque imediatamente uma pequena lamínula na suspensão, tomando cuidado para não tocar na gota com a pinça. Em seguida, veja a suspensão sob contraste de fase, como acabamos de demonstrar.

Uma reação pulmonar negativa é observada quando pouco ou nenhum inchaço das células pneumocócicas é observado. Semelhante ao controle negativo, uma suspensão de células pneumocócicas sem adição de anti-soros. Uma reação pulmonar de supressão positiva ocorre quando o anticorpo específico do tipo se liga à cápsula do pneumococo, levando a uma alteração em seu índice de refração.

Quando vistas sob contraste de fase, as bactérias parecem inchadas e mais visíveis. Não se esqueça de que, ao fazer esse procedimento, você está realmente trabalhando com microrganismos vivos. Por esse motivo, você precisa ter cuidado para seguir as boas práticas de laboratório, usar roupas de proteção, equipamentos de laboratório apropriados e descartar todos os equipamentos e reagentes no final do processo com segurança.

Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em aproximadamente 10 minutos se for executada corretamente. Depois de ver este procedimento, você deve ter uma boa ideia de como sorotipar o pneumococo usando a reação qua pulmonar. Essa técnica é importante para a compreensão da epidemiologia pneumocócica, tanto no transporte nasofaríngeo quanto em uma doença invasiva.