Medindo Mudanças na Tátil sensibilidade na pata traseira de ratos utilizando um aparelho eletrônico von Frey

O objetivo geral deste procedimento é medir nenhuma resposta suscetiva à pressão mecânica na pata traseira de camundongos. Isso é feito colocando primeiro os animais em um piso de malha de arame e permitindo que eles se habituem quando estiverem prontos. Uma ponta de polipropileno é aplicada na parte inferior da pata traseira e a pressão é aumentada gradualmente.

Quando a resposta comportamental apropriada é observada, o estímulo é retirado. Uma vez que os valores basais são coletados, os animais recebem uma intervenção experimental antes de novos testes. Em última análise, as alterações nos limiares de retirada da pata traseira são comparadas entre os grupos de tratamento para determinar o efeito de um tratamento específico nas mudanças na sensibilidade tátil à pressão.

A dor é um componente cardinal da inflamação. É importante medir e caracterizar a dor em diferentes contextos. Este método relativamente simples de avaliação da dor pode ser aplicado a muitos modelos diferentes de inflamação.

Demonstrando o procedimento estarão Tiana ov, uma técnica de pesquisa em meu laboratório, Madison Mack, que esteve envolvida neste trabalho como estudante de graduação e Akila Sykes. Atualmente sou estudante de graduação em meu laboratório. Comece configurando o aparelho de teste para facilitar o acesso às patas traseiras.

Coloque câmaras individuais em cima de um piso de malha. O piso de malha deve estar a uma altura confortável e em uma superfície resistente. Em seguida, coloque o aparelho eletrônico de Von Frey na bancada.

Certifique-se de que a sonda e o cabo estejam conectados adequadamente à unidade de exibição e ligue o instrumento no modo de configuração. Defina a leitura para zero e coloque cuidadosamente o peso de teste fornecido no cone da sonda Von Frey. Registre a leitura e repita este procedimento novamente no final do teste, se houver uma discrepância entre os dois valores, o aparelho pode precisar ser recalibrado.

Selecione uma ponta de polipropileno do tamanho apropriado para o tecido a ser testado. As pontas rígidas funcionam bem para o tecido menos sensível e mais resistente da pata traseira. Monte cuidadosamente a ponta no cone da sonda.

Em seguida, mude do modo de configuração para o modo de operação. Isso exibirá a pressão máxima aplicada quando a sonda for retraída. Dois investigadores são necessários para medir os limiares de retirada da pata traseira.

Um, para operar o aparelho e realizar as medições, e outro para registrar essas medições a fim de reduzir o viés. O investigador que opera o TER anestésico deve ser cego para os tratamentos, bem como para os valores de limiar de retirada registrados. Além disso, para garantir a consistência entre as medições, o mesmo indivíduo deve registrar todos os valores basais e de limite de retirada.

48 horas antes do tratamento, o primeiro conjunto de medições basais é registrado. Coloque o material absorvente abaixo do suporte para coletar os resíduos excretados. Depois de montar a ponta e zerar a sonda, o experimentador que registra as medições deve colocar os camundongos em câmaras individuais.

Cubra as câmaras com tampas perfuradas e coloque um objeto pesado por cima. Para evitar que os ratos escapem, deixe-os se aclimatar à câmara por 15 minutos antes de prosseguir. Geralmente, indivíduos novos nessa técnica terão dificuldades com a aplicação gradual de pressão aumentada e, com o estabelecimento de consistência interna com suas próprias medições, a prática é essencial para gerar resultados reprodutíveis.

Quando estiver pronto, use as duas mãos para levantar a sonda lentamente e estimular a pata da pata traseira esquerda ou direita. Aumente a pressão gradualmente até que um comportamento nociceptivo seja observado. Estes são identificados por retração da pata traseira, lambida da pata traseira ou para pular a pata.

Instrua o outro investigador a registrar a pressão que provocou o comportamento observado. Durante a medição, é útil encorajar o rato a ficar parado, colocando um palato alimentar do lado de fora da câmara ou fazendo um leve ruído, como um toque suave, antes que a medição seja feita. Continue para o próximo mouse até que cada um tenha sido testado uma vez e repita este procedimento mais quatro vezes.

Depois de coletar cinco valores de linha de base, obtenha uma média para cada camundongo. Repita as medições da linha de base 24 horas depois e use esses valores para calcular outra média. Para garantir que todos os camundongos tenham respostas basais consistentes, exclua animais com um limite médio de abstinência basal abaixo de 3,5 gramas ou com limites basais diferentes em dois gramas ou mais.

Por fim, atribua os camundongos em grupos de tratamento separados para que a linha de base média de abstinência de cada um seja a mais semelhante possível Aqui, os limiares de abstinência foram medidos após a pata traseira, administração do veneno, ROS raca. Controle tratado com solução salina. Os camundongos mostraram pouca mudança em comparação com a linha de base em todos os tempos.

As respostas nociceptivas testadas em camundongos tratados foram claramente mantidas por até seis horas. Além disso, o edema tecidual, característico da inflamação, foi evidente no veneno, mas não nas patas traseiras tratadas com solução salina. As mudanças induzidas pelo veneno na sensibilidade tátil foram acompanhadas por um influxo de neutrófilos de quase 1000 vezes.

Em comparação com as patas traseiras tratadas com solução salina em patas tratadas com solução salina, os mastócitos plantares no tecido da pata traseira estavam praticamente intactos ou mostraram degranulação leve. Em contraste, na corça acasalada, houve 15 a 20% de degranulação moderada e extensa dos mastócitos. Essa técnica pode ser adaptada para avaliar a sensibilidade mecânica ou tátil em uma ampla gama de tecidos além da pata traseira.

Portanto, essa técnica pode ser incorporada em muitos modelos diferentes de inflamação e dor em roedores.