Name: Imagem Através do Pupal Caso de Drosophila melanogaster (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-23T15:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Aprenda a técnica de imagem através do pupário de Drosophila melanogaster usando microscopia confocal de varredura rápida. Este método permite visualizar processos celulares dinâmicos in situ sem comprometer a viabilidade do organismo.

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Os autores gostariam de agradecer Akira Chiba para apoio intelectual, apoio material, e ações. Graças à Julia Dallman para comentários.

1. Voar Trabalho <ol><li> Manter moscas em meio padrão fubá-ágar-melaço de levedura à temperatura ambiente 10. </li><li> Para cruzes, isolar virgens dentro de 6 horas de eclosão. Depois de atravessar a machos do genótipo desejado, mudança voa para novos frascos a cada 3-4 dias. </li></ol> Nota: Para estas experiências, linha Gal4 A9 foi usado para conduzir a expressão de transgenes na asa. Fly ações podem ser obtidos a partir do centro de estoque em Bloomington. Ações usadas nestes experimentos incluem A9-Gal4 (Bl # 8761), His2Av-GFP (Bl # 5941), Sco / cyo HsCre (Bl # 1092), UAS-ChRFP-Tub (Bl # 25773), lollibow 11. 2. Seleção e montagem de pupas <ol><li> Estágio de pupa, quer por coletá-los como prepupas branco (WPP) e mantê-los a 25 ° C até atingirem a idade apropriada ou usando critérios morfológicos 12. </li><li> Para observar divisões celulares, selecione pupa que passaram recentemente por cabeça eversão.A partir deste momento até pouco antes da eclosão (em&gt; 96 h), pupas são imóveis permitindo a observação prolongada de lapso de tempo. </li><li> Remover pupas dos frascos pelo primeiro tocá-los com um pincel umedecido em água, à espera de um minuto para permitir que a água para soltar o adesivo e em seguida, delicadamente estimulando-os para o pincel. </li><li> Delicadamente, lave pupas selecionados por cutucando-os com um pincel em água para remover as salivares adesivas glândula e partículas de alimento. </li><li> Transferir pupas limpa para um prato de 25 milímetros Petri com um fundo de lamela (número 1 ½ lamelas). </li><li> Usando tiras finas de massa de modelar ou cera dental ou como um suporte, montar pupas de modo que o tecido de interesse está mais próximo da lamela. Nota: Nos estudos aqui descritos, foram observados asas, pernas, pupa histoblasts abdominais ou notum dorsal. Na prática, todo o tecido dentro de 20 mM da superfície da caixa de pupa é observável. </li><li> Pupas Oriente com cuidado para que o tissue de interesse é paralela à superfície da lamela de vidro. </li><li> Uma vez pupas são montados, usar um pincel para transferir uma camada fina de tiodietilenoglicol (TDG) para o espaço entre a pupa e a lamela. </li></ol> Nota: TDG reduz a dispersão de superfície, corresponde ao índice de refração do óleo, e permite que o oxigênio a permear o tecido 13. O uso de óleos não é recomendado, já que tendem a privar os tecidos de oxigênio, causando a cessação rápida de comportamentos celulares. 3. Imagem Nota: Para imagens, um microscópio confocal é provável que seja essencial que o confocalidade remove a maior parte do fundo obscurecimento causada por iluminação intensa do processo de pupas. <ol><li> Ajuste as configurações do confocal para minimizar o impacto da iluminação no desenvolvimento de pupas e viabilidade. Para isso, encontrar um equilíbrio entre a intensidade da excitação e da sensibilidade da coleta. Uma configuração típica para wi imagiologiaª a Leica SP5 utilizado o scanner de ressonância (8.000 Hz), potência do laser ajustado para 2% (10% de transmitância de 20% de energia), conjunto de pinhole a 120 micrômetros, linha Média definida a 8. Definições irá variar, dependendo das condições experimentais. </li></ol> Nota: Para resolver escala fina apresenta 40X e 63X lentes de imersão em óleo (até 0,1 mm de distância de trabalho) também têm sido utilizados com sucesso neste método, apesar de limitar a profundidade de foco. 4. Análise Para analisar quadros, z-pilhas ou filmes importar os arquivos de dados para FIJI, que tem ferramentas eficazes para a visualização, medição e modificar arquivos para apresentação 14. Por exemplo tempo para concluir a mitose foi medido utilizando o intervalo de amostragem e navegador de imagem multidimensional para percorrer quadros, enquanto observa uma célula de prófase para telophase. x, y, e z, as dimensões podem ser medidos utilizando a ferramenta de medição. Para instruções detalhadas sobre o software e seu usover: http://fiji.sc/Fiji.

<ol><li>Raff, J. W., Jeffers, K., Huang, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+Fzy%2FCdc20+and+Fzr%2FCdh1+in+regulating+the+destruction+of+cyclin+B+in+space+and+time%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The roles of Fzy/Cdc20 and Fzr/Cdh1 in regulating the destruction of cyclin B in space and time.</a> J. Cell Biol. 157, 1139-1149 (2002).</li>
<li>Stramer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+wound+inflammation+in+Drosophila+embryos+reveals+key+roles+for+small+GTPases+during+in+vivo+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Live imaging of wound inflammation in Drosophila embryos reveals key roles for small GTPases during in vivo cell migration.</a> J. Cell Biol. 168, 567-573 (2005).</li>
<li>Clark, I. B., Jarman, A. P., Finnegan, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+Drosophila+gonad+formation+reveals+roles+for+Six4+in+regulating+germline+and+somatic+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Live imaging of Drosophila gonad formation reveals roles for Six4 in regulating germline and somatic cell migration.</a> BMC Dev. Biol. 7, 52 (2007).</li>
<li>Fuger, P., Behrends, L. B., Mertel, S., Sigrist, S. J., Rasse, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+synapse+development+and+measuring+protein+dynamics+using+two-color+fluorescence+recovery+after+photo-bleaching+at+Drosophila+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Live imaging of synapse development and measuring protein dynamics using two-color fluorescence recovery after photo-bleaching at Drosophila synapses.</a> Nat. Protoc. 2, 3285-3298 (2007).</li>
<li>Siller, K. H., Serr, M., Steward, R., Hays, T. S., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+Drosophila+brain+neuroblasts+reveals+a+role+for+Lis1%2Fdynactin+in+spindle+assembly+and+mitotic+checkpoint+control%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Live imaging of Drosophila brain neuroblasts reveals a role for Lis1/dynactin in spindle assembly and mitotic checkpoint control.</a> Mol. Biol. Cell. 16, 5127-5140 (2005).</li>
<li>Roy, S., Hsiung, F., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+of+Drosophila+cytonemes+for+distinct+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Specificity of Drosophila cytonemes for distinct signaling pathways.</a> Science. 332, 354-358 (2011).</li>
<li>Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+the+Drosophila+microchaete+lineage%3A+a+novel+intrinsically+asymmetric+cell+division+generates+a+glial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell.</a> Development. 126, 3573-3584 (1999).</li>
<li>Ninov, N., Martin-Blanco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+epidermal+morphogenesis+during+the+development+of+the+adult+abdominal+epidermis+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Live imaging of epidermal morphogenesis during the development of the adult abdominal epidermis of Drosophila.</a> Nat. Protoc. 2, 3074-3080 (2007).</li>
<li>Edgar, B. A., Lehner, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+control+of+cell+cycle+regulators%3A+a+fly%27s+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Developmental control of cell cycle regulators: a fly's perspective.</a> Science. 274, 1646-1652 (1996).</li>
<li>Wirtz, R. A., Semey, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+kitchen%3A+equipment%2C+media+preparation%2C+and+supplies%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Information+Service%22%5BJournal%5D)">The Drosophila kitchen: equipment, media preparation, and supplies.</a> Drosophila Information Service. 58, 176-180 (1982).</li>
<li>Boulina, M., Samarajeewa, H., Baker, J. D., Kim, M. D., Chiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+multicolor-labeled+cells+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Live imaging of multicolor-labeled cells in Drosophila.</a> Development. 140, 1605-1613 (2013).</li>
<li>Bainbridge, S. P., Bownes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+the+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 66, 57-80 (1981).</li>
<li>Staudt, T., Lang, M. C., Medda, R., Engelhardt, J., Hell, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2%2C2%27-thiodiethanol%3A+a+new+water+soluble+mounting+medium+for+high+resolution+optical+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">2,2'-thiodiethanol: a new water soluble mounting medium for high resolution optical microscopy.</a> Microsc. Res. Tech. 70, 1-9 (2007).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat. Methods. 9, 676-682 (2012).</li>
<li>Meyer, E. J., Ikmi, A., Gibson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interkinetic+nuclear+migration+is+a+broadly+conserved+feature+of+cell+division+in+pseudostratified+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Interkinetic nuclear migration is a broadly conserved feature of cell division in pseudostratified epithelia.</a> Curr. Biol. 21, 485-491 (2011).</li>
<li>Sauer, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitosis+in+the+neural+tube%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Mitosis in the neural tube.</a> J. Comp. Neurol. 62, 377-405 (1935).</li>
<li>Livet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+strategies+for+combinatorial+expression+of+fluorescent+proteins+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transgenic strategies for combinatorial expression of fluorescent proteins in the nervous system.</a> Nature. 450, 56-62 (2007).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Para visualizar, medir e quantificar características de células em divisão, necessário o desenvolvimento de uma preparação simples para a observação de mitose na ala de pupa vivo de Drosophila por meio de análise confocal de His2AvGFP expressando células. Este método foi utilizado para demonstrar que o ciclo celular na asa de pupa tem semelhanças fortes para célula no epitélio pseudo ciclos em que se movem os núcleos para a superfície apical do epitélio, onde eles entram em mitose. Após telófase, núcleos cair d...

<html> A mosca do vinagre, Drosophila melanogaster, é um modelo bem estabelecido para o estudo de vários aspectos da biologia. Pesquisa Drosophila tem uma história rica de experiências genéticas que permite formas sofisticadas de manipulação genética, incluindo expressão, knockdown e mutação. Com o advento de rótulos de proteína fluorescente, este repertório foi expandido para incluir estudos de células e proteínas em animais vivos. O embrião da mosca é um excelente sistema para tais estudos, pois é pequeno e opticamente clara permitindo profunda, de alta resolução de imagem in vivo 1-3. Outros estágios de desenvolvimento da mosca provaram ser menos tratável, exigindo anestesia 4, dissecção e cultura de curto prazo de 5,6, ou a criação de janelas na cutícula para imagens 7,8. Estas manipulações geralmente comprometer o desenvolvimento dos animais no longo prazo ou afectar o animal de modo a limitar de imagem para períodos curtos. ent &quot;&gt; Para estudar novas mutações em genes que se assemelham a reguladores do ciclo celular, é essencial para encontrar uma preparação adequada para estudar o tempo e a fidelidade do ciclo celular. Como a maioria dos ciclos de células embrionárias são truncados (SM ou S-G2-M) e os mutantes em estudo não apresentam defeitos, até estágios mais avançados, foi importante para observar o ciclo celular em tecidos fase de pupa. células epiteliais na pupa tem um ciclo mais típico celular G1-S-G2-M e pupas desta fase são não é capaz de movimentos musculares 9. O ponto de partida inicial para manipulações incluído todo intacta pupas expressando Histone2AV-GFP. Apesar da opacidade aparente do processo de pupa, esta preparação intacta mostrou ser excelente para a longo prazo in vivo de imagens. Essa técnica é simples o suficiente para que pesquisadores de graduação rotineiramente usá-lo para estudar aspectos da biologia celular e de desenvolvimento em Drosophila e ainda a resolução é bom o suficiente para permitir a discriminação de recursos em escala micrométrica. Com este método, as observações dos eventos mais horas, minutos ou segundos são possíveis simplesmente ajustando os parâmetros de séries temporais. Vídeos usando o azul, proteínas fluorescentes verde, amarelo, laranja e vermelho, ou combinações destes, foram feitas. Mais importante, se o cuidado de minimizar a intensidade do laser, mesmo a longo prazo de imagem não tem nenhum efeito sobre o desenvolvimento ou a viabilidade dos animais.

<table><tbody><tr><td>Fly stuff fly pad</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-114</td><td>para anestesia de moscas</td></tr><tr><td>CO2 gás</td><td>Airgas South</td><td>CD50</td><td>Para anestesia de moscas</td></tr><tr><td>Regulador</td><td>Airgas South</td><td></td><td>CO2 regulador</td></tr><tr><td>Frascos para moscas</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-113RLBF</td><td>Cultura</td></tr> <tr><td>de moscasDrosophila linhas:A9-Gal4 (Bl#8761), His2Av-GFP (Bl#5941), Sco/CyO HsCre (Bl#1092), UAS-ChRFP-Tub (Bl#25773)</td><td>Bloomington Stock Center</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Pratos com fundo de vidro #1 1/2</td><td>WillCo Wells BV</td><td></td><td>Para microscopia</td></tr><tr><td>Tiodietilenoglicol</td><td>Fluka</td><td>88559</td><td>mountant</td></tr><tr>Loja de materiais <td></td><td>de arte</td><td>em argila de modelagem</td><td>Suporte para posicionar pupas contra</td></tr><tr><td>Pincéis</td><td>loja</td><td></td> de materiais de arte <td>Para manipular moscas</td></tr><tr><td>Pinças Finas, Inox #5</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>11252-20</td><td>Dumont #5</td></tr><tr><td>computador</td><td>qualquer</td><td></td><td>8 Gb RAM para análise de imagem/filme</td></tr><tr><td>Software</td><td></td> Fiji <td>Software de análise de imagem http://fiji.sc/Fiji</td> software <td>de análise de imagem</td></tr><tr><td>Microscópio</td><td></td><td></td> confocal <td>Qualquer confocal de varredura rápida deve ser suficiente</td></tr><tr><td>20X seco e 40X ou 63X lentes de imersão em óleo</td><td>qualquer</td><td></td><td>Para imagens de tecidos</td></tr><tr><td>, celulares e recursos subcelularesÓleo de imersão (não fluorescente)</td><td></td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Estereomicroscópio</td><td>qualquer</td><td></td><td>Para manipulação de moscas</td></tr></tbody></table>

imagem através do pupal caso de<em&gt; drosophila melanogaster</em

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

A utilização prolongada de Drosophila como modelo para a biologia celular e de desenvolvimento produziu um conjunto de ferramentas. Em conjunto, estas técnicas têm permitido a análise de células e biologia do desenvolvimento de uma variedade de ângulos metodológicas. Imagens ao vivo é um método emergente para a observação de processos celulares dinâmicos, como a divisão celular ou motilidade celular. Tendo mutações em proteínas isoladas do ciclo celular putativos descaracterizados se tornou essencial para observar a mitose in situ usando imagens ao vivo. A maioria dos estudos de imagem ao vivo em Drosophila têm-se centrado sobre os estágios embrionários que são acessíveis à manipulação e observação por causa de seu pequeno tamanho e claridade óptica. No entanto, nestas fases do ciclo celular é incomum em que falta uma ou ambas as fases gap. Em contraste, as células da asa pupal de Drosophila têm um ciclo celular comum e passam por um período de mitose rápido que mede cerca de 20 horas de desenvolvimento de pupas. É fácil de identify e isolar pupas do palco apropriado para pegar mitose in situ. Montagem pupas intactas a melhor combinação de tratabilidade e durabilidade durante o exame, permitindo experiências de correr por várias horas com um impacto mínimo sobre a viabilidade celular e animal. O método permite a observação de estruturas tão pequenas quanto, ou menor do que, cromossomas voar. Ajuste das definições de microscópio e os detalhes de montagem, permitiu extensão da preparação para visualizar a dinâmica da membrana de células adjacentes e as proteínas marcadas com fluorescência, tais como a tubulina. Este método funciona para todas as proteínas fluorescentes testados e podem captar recursos escala submicrométricas sobre uma variedade de escalas de tempo. Embora limitado ao exterior 20 mM de pupa com um microscópio confocal convencional, esta abordagem para observar proteína e dinâmica celular em tecidos pupa in vivo podem ser geralmente úteis para o estudo da biologia celular e de desenvolvimento nestes tecidos.

As células em epitélio pseudo, tais como o olho de Drosophila em desenvolvimento, ou a camada do ventrículo do sistema nervoso central em desenvolvimento de vertebrados, são submetidos a movimentos nucleares, denominado migração nuclear interkinetic, no tempo, com o ciclo celular. A replicação do ADN ocorre quando os núcleos são em ou perto da superfície da célula basal e introduzir a mitose quando os núcleos de atingir a superfície apical 15,16. As células asa pupa formar um epitélio monocamada divi...

Este trabalho demonstra o uso de um microscópio confocal de varredura rápida para o comportamento das células de imagem diretamente através do pupário. Ao deixar o caso de pupa intacto, este método permite a observação e medição de processos celulares dinâmicos numa fase de desenvolvimento de Drosophila que é difícil de estudar directamente.

Imagem Através do Pupal Caso de<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

Neste vídeo, demonstraremos técnicas inovadoras que permitem imagens do estágio de pupa de Drosophila melanogaster sem comprometer a integridade estrutural da pupa. Mantendo o caso da pupa intacto, minimizamos o impacto do processo de imagem sobre o desenvolvimento e a viabilidade da pupa. Utilizamos um microscópio confocal com varredura ressonante de 8.000 hertz para a aquisição de imagens.É importante destacar que a velocidade de varredura extremamente rápida e a alta sensibilidade deste microscópio reduzem significativamente o desbotamento, permitindo períodos prolongados de observação. Com este método, temos sido capazes de visualizar uma variedade de processos biológicos celulares, incluindo o comportamento, fop, podia, morfogênese, fagocitose e mitose. Com esta técnica, podemos observar eventos in situ por períodos prolongados de tempo sem danificar o organismo.As observações obtidas por meio desses métodos podem ser utilizadas para compreender uma variedade de fenômenos biológicos nesta fase relativamente inacessível do desenvolvimento de drosófila, as pessoas do queijo, o estágio apropriado, examinamos enquanto ainda estão no frasco em busca de indicadores-chave do estágio

imaging-through-the-pupal-case-of-drosophila-melanogaster

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Biologia

Mesoscópica fluorescência tomografia opera além dos limites de penetração de tecido de corte de microscopia de fluorescência. A técnica é baseada na projeção multi-iluminação e uma descrição do transporte de fótons. Demonstramos in-vivo visualização de corpo inteiro em 3D da morfogênese da GFP-expressando asa em discos...

Mesoscópica de fluorescência para Tomografia In-vivo Imaging de desenvolvimento Drosophila</em

Preparação de Desenvolvimento e Adultos Drosophila Brains e retina de imagens ao vivo

Neste vídeo, descrevemos um método para imagens de células vivas de células em divisão assimétrica órgão sensorial progenitoras e células epidérmicas em...

Em células vivas, imagens de células precursoras de órgãos sensoriais na Intact Drosophila As pupas

Fonte: Hellerman, M. B., et al. Imagens ao vivo do  olho de pupa  de Drosophila. J. Vis. Exp. (2015)O vídeo demonstra uma técnica de imagem ao vivo para estudar o padrão dos olhos em uma pupa de Drosophila melanogaster. Os marcadores marcados com proteína fluorescente verde (GFP) permitem a visualização da organização e diferenciação celular durante a formação da estrutura ocular em desenvolvimento.

Imagens ao vivo do olho de pupa de Drosophila usando microscopia de fluorescência

Este protocolo apresenta um método eficiente para obter imagens do neuroepitélio do olho pupal de Drosophila vivo. Este método compensa o movimento do tecido e a topologia irregular, melhora a visualização dos limites celulares por meio do uso de várias proteínas de junção marcadas com GFP e usa um equipamento de imagem facilmente montado.

Vivo-imaging da Drosophila Pupal Eye

Aqui, os protocolos experimentais são descritos para preparar Drosophila em diferentes estágios de desenvolvimento e realizar imagens ópticas longitudinais de batimentos cardíacos de Drosophila usando um sistema de microscopia de coerência óptica (OCM) personalizado. As alterações morfológicas e dinâmicas cardíacas podem ser caracterizadas quantitativamente pela análise dos parâmetros estruturais e funcionais do coração a partir de imagens de OCM.

Drosophila Preparação e imagem longitudinal do coração Função In Vivo Usando Optical Coherence Microscopy (OCM)

Aqui, apresentamos um método fácil de usar e versátil para executar ao vivo de imagens de processos de desenvolvimento em geral e músculo-tendão morfogênese em particular na vida pupas de Drosophila .

Na Vivo Imagem latente da morfogênese músculo-tendão em pupas de Drosophila

Este protocolo é projetado para a imagem e análise da dinâmica da orientação celular e crescimento tecidual na epitélia abdominal Drosophila à medida que a mosca-das-frutas sofre metamorfose. A metodologia aqui descrita pode ser aplicada ao estudo de diferentes estágios de desenvolvimento, tecidos e estruturas subcelulares em Drosophila ou outros organismos modelo.

Imagem e Análise da Dinâmica de Orientação e Crescimento tecidual na Epitélia Drosophila em Desenvolvimento durante os estágios pupal

Aqui, discutimos um fluxo de trabalho para preparar, dissecar, montar e obter imagens de cérebros de explantes vivos de larvas de terceiro ínstar de Drosophila melanogaster para observar a dinâmica celular e subcelular sob condições fisiológicas.

Imagem de células vivas de cérebros de larvas de terceiro ínstar de Drosophila melanogaster

Aqui, um protocolo é apresentado para imagens ao vivo de longo prazo da perna de Drosophila durante o estágio de pupa, envolvendo a remoção completa do pupário. Este protocolo também pode ser aplicado a outros tecidos.

Imagem ao vivo de longo prazo do desenvolvimento da perna de pupa de Drosophila após a remoção do pupário

Drosophila é um modelo poderoso para entender os mecanismos fundamentais da miogênese. Este protocolo para a dissecção e preparação de hemissecções de tórax permite a análise microscópica do músculo de voo indireto dos estágios pupal e adulto. Este protocolo permite imagens confocais da morfologia celular, localização de proteínas, estrutura muscular e vários outros aspectos da miogênese.

Dissecção de músculos de voo indireto de Drosophila melanogaster para abordagens de microscopia

Aprenda a técnica de imagem através do pupário de Drosophila melanogaster usando microscopia confocal de varredura rápida. Este método permite visualizar processos celulares dinâmicos in situ sem comprometer a viabilidade do organismo.

Imagem Através do Pupal Caso de

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