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DOI: 10.3791/51256-v
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Um microarray amplificação combina assimétrica PCR amplificação e hibridização microarray em uma única câmara, que simplifica significativamente o fluxo de trabalho microarray para o usuário final. Simplificar o fluxo de trabalho microarray é um primeiro passo necessário para a criação de diagnósticos à base de microarray que podem ser rotineiramente usados em ambientes com recursos mais baixos.
O objetivo geral do experimento a seguir é genotipar a microbactéria tuberculose multirresistente, usando um microarray de amplificação. Isso é obtido realizando uma PCR assimétrica multiplex sobre o topo de um microarray dentro de uma única câmara de reação microfluídica. Lá, a amostra é simultaneamente amplificada, rotulada com tamanho selecionado, feita de fita simples e hibridizada com o microarray.
Em seguida, depois que o microarray é lavado, um leitor mostra se a microbactéria tuberculose está presente e se contém uma mutação de DNA conhecida por conferir resistência à rifampicina iso, niazi etambutol ou estreptomicina. A vantagem desse método sobre os métodos existentes de sonda de linha de microarray ou hibridização de ácido nucleico é que um microarray de amplificação simplifica significativamente a interação do usuário com o teste. Ainda assim, ao fornecer a sensibilidade analítica da PCR e a capacidade de multiplexação de um microarray Para este procedimento, tenha um espaço de trabalho limpo limpo com solução descontaminada e tenha ácidos nucléicos puros o suficiente para PCR multiplex.
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