Avaliação da hiperalgesia induzida por morfina e analgésicos Tolerância em ratos usando térmicas e mecânicas nociceptivos Modalidades

O objetivo geral do experimento a seguir é observar o desenvolvimento de hiperalgesia induzida por opioides e tolerância a analgésicos em camundongos. Isso é obtido medindo as respostas nociceptivas térmicas e mecânicas de camundongos virgens após a administração de morfina ao longo de um curso de tempo no dia zero como uma segunda etapa. O limiar nociceptivo é medido diariamente antes da administração de morfina no sétimo dia.

O efeito analgésico da morfina é medido ao longo de um curso de tempo mais uma vez para revelar o desenvolvimento de tolerância analgésica. São obtidos resultados que mostram um aumento da sensibilidade à dor, bem como o desenvolvimento de tolerância analgésica. Após administração repetida de morfina.

Embora este método possa fornecer informações sobre o desenvolvimento de hipersensibilidade à dor e tolerância a analgésicos em camundongos múltiplos. Após o tratamento crônico com opiáceos, também pode ser aplicado a outros opiáceos ou camundongos geneticamente modificados. Demonstrando o procedimento será um estudante de pós-graduação do meu laboratório Para minimizar a analgesia induzida pelo estresse, os camundongos são manuseados por cinco minutos todos os dias e habituados até entrarem livremente no sistema de contenção.

Uma vez habituado, comece o teste de imersão da cauda ajustando o termostato para 48 graus Celsius. Introduza suavemente o mouse no limitador. Uma vez devidamente contido, mergulhe a extremidade saliente de dois terços de sua cauda no banho-maria e inicie o cronômetro.

Discriminar entre resposta nociceptiva e nociceptiva é um elemento-chave deste procedimento. A arbitragem e a prática adequadas são essenciais para o sucesso. Monitore o movimento do animal e pare o cronômetro.

Assim que o rato retirar a cauda da água quente, registre a latência de retirada. Retorne o camundongo à sua gaiola e teste o próximo animal até o final da série mantendo a mesma ordem. Repita as medições da resposta nociceptiva mais duas vezes.

A latência da resposta nociceptiva em segundos para cada camundongo é determinada como o valor médio para três determinações sucessivas. Para o teste de pressão da cauda, primeiro introduza suavemente o mouse no limitador e posicione sua cauda sob a ponta cônica do JMeter anal. Uma vez no lugar, pressione o pedal para aplicar pressão uniformemente crescente na parte proximal da cauda.

Ao primeiro sinal de uma reação nociceptiva, retire a ponta. As respostas nociceptivas podem incluir guinchos difíceis ou retirada da cauda. Registre a força atual em gramas que provoca a resposta nociceptiva.

Repita esta medida nas partes mediana e distal da cauda do mesmo camundongo em intervalos de 32, retorne o animal à sua gaiola de origem e repita essas etapas até que todos os camundongos sejam testados. Primeiro, defina dois grupos de animais com valores nociceptivos médios comparáveis. Em seguida, meça e registre o peso corporal de cada animal.

Uma vez que os grupos salina e morfina tenham sido estabelecidos, prepare uma solução de morfina em solução salina fisiológica para administração subcutânea. Meça as latências de resposta nociceptiva nos testes de imersão da cauda e pressão da cauda e registre-as como tempo 0,0 para cada grupo. Em seguida, injete morfina ou solução salina em cada animal, dependendo do grupo.

Após 30 minutos, comece a registrar as respostas nociceptivas em cada animal. Preste muita atenção aos valores de corte, pois é improvável que os camundongos respondam aos estímulos nocivos neste momento inicial. Na ausência de uma reação nociceptiva, um ponto de corte de 25 segundos é usado para evitar danos aos tecidos, mantendo a mesma ordem de teste.

Repita as medições nociceptivas a cada 30 minutos até 3,5 horas após a injeção para tratamento crônico com morfina. Obtenha os valores do primeiro dia medindo a resposta nociceptiva dos animais no TIT e TPT, conforme demonstrado anteriormente. Prepare uma solução de morfina fresca.

Administre injeções de morfina ou solução salina de acordo com a atribuição do grupo e deixe os animais descansarem até o dia seguinte. No dia seguinte, meça as respostas nociceptivas no TIT e TPT antes de administrar uma segunda rodada de injeções. Repita essas etapas todos os dias durante seis dias.

No sétimo dia, avalie a analgesia induzida por morfina. De acordo com o paradigma do curso de tempo demonstrado anteriormente no teste de imersão da cauda, o efeito analgésico máximo da morfina foi alcançado após 30 minutos. No entanto, no teste de pressão de cauda, o efeito máximo foi alcançado após 60 minutos em comparação com os controles injetados com solução salina.

Esses resultados mostram que as injeções diárias de morfina durante um período de tratamento de sete dias induziram uma redução significativa e progressiva dos valores nociceptivos basais térmicos e mecânicos. Após o tratamento crônico, o valor nociceptivo basal em camundongos tratados com morfina foi significativamente menor do que o dos camundongos controle injetados com solução salina. Após a morfina aguda, a resposta nociceptiva do grupo tratado com morfina crônica aumentou significativamente, mas excedeu apenas ligeiramente o valor nociceptivo basal do controle injetado com solução salina.

Camundongos medidos aos 30 minutos em TIT e TPT e aos 60 minutos em TIT aqui os valores de limiar nociceptivo medidos 30 minutos após a injeção de solução salina ou morfina são plotados para o dia zero e o dia sete após o desenvolvimento. Esta técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da pesquisa da dor explorarem o efeito da intervenção farmacológica ou genética no desenvolvimento da hipersensibilidade à dor e tolerância analgésica induzida pela administração crônica de morfina.