Name: Imagiologia espinhas dendríticas dos neurônios do hipocampo de rato primária usando Structured Illumination Microscopy (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 11 s
Description: Aprenda a imaginar espinhas dendríticas de neurônios hipocampais de rato em super-resolução usando microscopia de iluminação estruturada. Esta técnica permite visualizar mudanças morfológicas sutis com detalhe superior à microscopia confocal convencional.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Este trabalho foi financiado por uma H64.09.016 VIDI número de concessão da Organização Holandesa para Pesquisa Científica (NWO) para CPF. CPF é grato ao Dr. Silvina A. Fratantoni por seus comentários críticos e correções sobre o manuscrito final. GMRDL / Emmm são suportados pelo holandês Tecnologia Fundação STW (12151 projeto e 11350), que faz parte da NWO, e que é parcialmente financiado pelo Ministério dos Assuntos Económicos. Agradecemos a Catherine Cristóvão e Peter Drent da Nikon Instruments Europe BV para a assistência e apoio. HX foi apoiado pela Royal Dutch Academia de Artes e Ciências (concessão 11CDP10) e WT foi apoiado pela concessão da Organização Holandesa para Pesquisa Científica (concessão 820.02.006).

<ol><li>Gustafsson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surpassing+the+lateral+resolution+limit+by+a+factor+of+two+using+structured+illumination+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">Surpassing the lateral resolution limit by a factor of two using structured illumination microscopy.</a> J Microsc. 198, 82-87 (2000).</li>
<li>Yoshihara, Y., De Roo, M., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+spine+formation+and+stabilization%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Dendritic spine formation and stabilization.</a> Curr Opin Neurobiol. 19, 146-153 (2009).</li>
<li>Dailey, M. E., Smith, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamics+of+dendritic+structure+in+developing+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The dynamics of dendritic structure in developing hippocampal slices.</a> J Neurosci. 16, 2983-2994 (1996).</li>
<li>Alvarez, V. A., Sabatini, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+and+physiological+plasticity+of+dendritic+spines%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anatomical and physiological plasticity of dendritic spines.</a> Annu Rev Neurosci. 30, 79-97 (2007).</li>
<li>Jaworski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+microtubules+regulate+dendritic+spine+morphology+and+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Dynamic microtubules regulate dendritic spine morphology and synaptic plasticity.</a> Neuron. 61, 85-100 (2009).</li>
<li>Abbe, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beitr%C3%A4ge+zur+Theorie+des+Mikroskops+und+der+mikroskopischen+Wahrnehmung%5BTitle%5D)+AND+%22Archiv+f%C3%BCr+mikroskopische+Anatomie%22%5BJournal%5D)">Beiträge zur Theorie des Mikroskops und der mikroskopischen Wahrnehmung.</a> Archiv für mikroskopische Anatomie. 9, 413-418 Forthcoming.</li>
<li>Gustafsson, M. G., Agard, D. A., Sedat, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((I5M%3A+3D+widefield+light+microscopy+with+better+than+100+nm+axial+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">I5M: 3D widefield light microscopy with better than 100 nm axial resolution.</a> J Microsc. 195, 10-16 (1999).</li>
<li>Heintzmann, R., Cremer, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laterally+modulated+excitation+microscopy%3A+improvement+of+resolution+by+using+a+diffraction+grating%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+SPIE+3568+Optical+Biopsies+and+Microscopic+Techniques+III%22%5BJournal%5D)">Laterally modulated excitation microscopy: improvement of resolution by using a diffraction grating.</a> Proc. SPIE 3568 Optical Biopsies and Microscopic Techniques III. , 185-196 (1999).</li>
<li>Karadagliƒá, D., Wilson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+formation+in+structured+illumination+wide-field+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">Image formation in structured illumination wide-field fluorescence microscopy.</a> Micron. 39, 808-818 (2008).</li>
<li>Schermelleh, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subdiffraction+multicolor+imaging+of+the+nuclear+periphery+with+3D+structured+illumination+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Subdiffraction multicolor imaging of the nuclear periphery with 3D structured illumination microscopy.</a> Science. 320, 1332-1336 (2008).</li>
<li>Gustafsson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+structured-illumination+microscopy%3A+wide-field+fluorescence+imaging+with+theoretically+unlimited+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nonlinear structured-illumination microscopy: wide-field fluorescence imaging with theoretically unlimited resolution.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13081-13086 (2005).</li>
<li>Nagerl, U. V., Willig, K. I., Hein, B., Hell, S. W., Bonhoeffer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-cell+imaging+of+dendritic+spines+by+STED+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Live-cell imaging of dendritic spines by STED microscopy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 18982-18987 (2008).</li>
<li>Kner, P., Chhun, B. B., Griffis, E. R., Winoto, L., Gustafsson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+video+microscopy+of+live+cells+by+structured+illumination%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Super-resolution video microscopy of live cells by structured illumination.</a> Nat Methods. 6, 339-342 (2009).</li>
<li>James, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aligned+microcontact+printing+of+micrometer-scale+poly-L-lysine+structures+for+controlled+growth+of+cultured+neurons+on+planar+microelectrode+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Aligned microcontact printing of micrometer-scale poly-L-lysine structures for controlled growth of cultured neurons on planar microelectrode arrays.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 47, 17-21 (2000).</li>
<li>Dumitriu, D., Rodriguez, A., Morrison, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput%2C+detailed%2C+cell-specific+neuroanatomy+of+dendritic+spines+using+microinjection+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High-throughput, detailed, cell-specific neuroanatomy of dendritic spines using microinjection and confocal microscopy.</a> Nat Protoc. 6, 1391-1411 (2011).</li>
<li>Fitzsimons, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knockdown+of+the+glucocorticoid+receptor+alters+functional+integration+of+newborn+neurons+in+the+adult+hippocampus+and+impairs+fear-motivated+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Knockdown of the glucocorticoid receptor alters functional integration of newborn neurons in the adult hippocampus and impairs fear-motivated behavior.</a> Mol Psychiatry. , (2012).</li>
<li>van Hooijdonk, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus-mediated+transgene+delivery+to+the+hippocampus+reveals+sub-field+specific+differences+in+expression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Lentivirus-mediated transgene delivery to the hippocampus reveals sub-field specific differences in expression.</a> BMC Neurosci. , (2009).</li>
<li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat Protoc. 1, 2406-2415 (2006).</li>
<li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal%2C+a+new+serum-free+medium+combination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J Neurosci Res. 35, 567-576 (1993).</li>
<li>Izeddin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+dynamic+imaging+of+dendritic+spines+using+a+low-affinity+photoconvertible+actin+probe%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Super-resolution dynamic imaging of dendritic spines using a low-affinity photoconvertible actin probe.</a> PLoS ONE. 6, (2011).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Neste artigo um protocolo de trabalho para imagem espinhas dendríticas de neurônios do hipocampo de ratos primários cultivados in vitro utilizando SIM é descrito. O método de cultura de neurônios do hipocampo principal é uma adaptação do método original descrito por Kaech e Banker 18. As principais diferenças são a utilização de meio de cultura Neurobasal/B27, o que elimina a necessidade de culturas astrogliais alimentadoras, e a adição do inibidor mitótico FUDR no dia 3, que promove a sobrevivência ...

A espinha dendrítica é uma pequena saliência da membrana neuronal. Esta estrutura característica é especializada para receber normalmente a entrada de uma única sinapse e representa a área de contato físico entre os dois neurônios. A maioria das espinhas dendríticas funcionalmente maduros consistem em uma ponta globular, denominado cabeça e um pescoço fino que liga a cabeça ao eixo dendrítica. No entanto, as espinhas não são estáticos e mover e alterar a sua morfologia ainda continuamente no cérebro adulto 2 activamente. Dentro de um período de 2 semanas de tempo, ratos culturas de neurônios do hipocampo primários derivados de tempo pós-natal embrionária ou início de tarde desenvolver árvores dendríticas complexas com inúmeras saliências membrana que evoluem a partir de filipodia cedo para estruturas da coluna-como 3. Com base nesse comportamento dinâmico e outras características, espinhas dendríticas são pensados ​​para proporcionar um substrato anatômico para o armazenamento de memória e 4,5 transmissão sináptica. Dada ªe papel crítico que o tamanho da espinha dendrítica e forma têm em função sináptica, é importante para medir com precisão as suas dimensões. Espinhas variam de cerca de 200 a 2000 nanómetros de comprimento e pode ser facilmente identificado por microscopia de fluorescência confocal de varrimento laser. No entanto, outras dimensões do que o comprimento da coluna vertebral são geralmente abaixo de resolução dos sistemas ópticos convencionais, teoricamente fixo por difração de cerca de 200 nanômetros de 6. Esses poderes são insuficientes para resolver imaginando pequenos detalhes, como a largura da coluna pescoços e cabeças. Muito trabalho foi dedicado a resolver este problema e muitos relativamente novas técnicas de microscopia de super-resolução proporcionaram um progresso substancial. Em particular, é possível obter uma resolução para além do limite clássico sem descartar qualquer emissão de luz por meio de microscopia de iluminação estruturada lateralmente (SIM), numa vasta área, microscópio confocal não 7-10. Usando esta técnica, em combinação com os não-lineatécnicas de microscopia de r, que é teoricamente possível a melhorar a resolução lateral do microscópio óptico de um factor 11 ilimitado. No entanto, na maioria das circunstâncias experimentais, de SIM permite ultrapassar o limite de resolução por um factor de dois 1. Outros super-resolução técnicas de microscopia óptica, tais como esgotamento emissão estimulada (STED) microscopia 12 e microscopia localização foto-ativação (PALM) 12 foram aplicadas à imagem das espinhas dendríticas. Métodos baseados em localização, como PALM requerem um grande número de imagens raw para atingir super-resolução e, portanto, são limitados em velocidade. Por outro lado, STED pode alcançar alta velocidade de imagem, embora a contagem relativamente baixos de fótons e pequenos campos de visão, que podem não ser o caso do SIM 13. Neste artigo, o objetivo é fornecer um protocolo de trabalho para imagem espinhas dendríticas de neurônios do hipocampo de ratos primários cultivados in vitro </em&gt; usando SIM. O protocolo consiste em duas fases distintas: inicial consistindo de estabelecimento, desenvolvimento, transfecção e imunohistoquímica de ratos principais culturas de neurônios do hipocampo e uma fase tardia dedicado a provar imagem.

<table><tbody><tr><td>Fórceps</td><td></td><td></td><td></td>fino</tr><tr><td>Fórceps</td><td></td><td></td><td></td>grandes</tr><tr><td>Tesoura</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>fina Tesoura</td><td></td><td></td><td></td>grande</tr><tr><td>Espátula</td><td></td><td></td><td></td>romba</tr><tr><td>Microscópio de dissecação com iluminação</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio</td><td></td><td></td><td></td>de luz</tr><tr><td>37 & Graus; C banho-maria</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr>Capuz <td></td><td></td><td></td>de<td>cultura de células de fluxo laminar</td></tr><tr><td>Forno</td><td></td><td></td><td></td>seco de alta temperatura</tr><tr><td>Bico de</td><td></td><td></td><td></td>Bunsen</tr><tr><td>Incubadora de cultura de células (5% CO2, 37 &deg; C)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Agitador</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr> orbital <tr><td>de microcentrífuga</td><td></td><td></td><td></td></tr> < td colspan = "4 "> [cabeçalho]</td></tr> <tr><td>Configuração do microscópio de iluminação estruturada Nikon que consiste em:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Microscópio invertido de pesquisa Nikon Eclipse Ti com sistema</td><td></td><td></td><td></td>de foco perfeito</tr><tr><td>Lente objetiva de óleo Nikon CFI Apo TIRF 100x (N.A. 1.49)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>4 lasers de safira coerentes (comprimento de onda de saída de 458, 488, 514 e 561 nm)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Iluminador</td><td></td><td></td><td></td>SIM</tr><tr><td>Controlador de estágio Nikon MCL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nano-Drive controlador</td><td></td><td></td><td></td>piezo</tr><tr><td>Nikon Intensilight C-HGFIE lâmpada</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>de mercúrio Microscópio SIM Gabinete de controle</td><td></td><td></td><td></td>de temperatura</tr><tr><td>Andor EM-CCD Camera iXon DU897</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC com Microsoft Windows 7 Home Edition</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon' s NiS Elements 6.14 Pacote</td><td></td><td></td><td></td>de software SIM</tr><tr><td>Nikon tipo A óleo de</td><td></td><td></td><td></td> imersão</tr></tbody></table>

imagiologia espinhas dendríticas dos neurônios do hipocampo de rato primária usando structured illumination microscopy

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

As espinhas dendríticas são saliências emergentes da dendrite de um neurónio e representam os alvos primários pós-sinápticos de entradas excitatórios no cérebro. Os avanços tecnológicos têm identificado estas estruturas como elementos-chave na conectividade neuronal e plasticidade sináptica. A análise quantitativa da morfologia da coluna usando microscopia de luz continua a ser um problema essencial, devido a limitações técnicas associadas limite intrínseco da refração da luz. Espinhas dendriticas podem ser prontamente identificados por microscopia de fluorescência confocal de varrimento laser. No entanto, medindo mudanças sutis na forma e tamanho de espinhos é difícil, porque outros do que o comprimento da coluna dimensões são geralmente menores do que a resolução óptica convencional fixada por limite de resolução teórico de microscopia de luz de 200 nm. Várias técnicas de resolução de super recentemente desenvolvidos têm sido utilizados para imagem estruturas celulares menores do que os 200 nm, incluindo espinhas dendriticas. Tstas técnicas baseiam-se em operações de campo distante clássicos e, por conseguinte, permitir a utilização de métodos de preparação de amostras existentes e para além da imagem da superfície de uma amostra. Descrito aqui é um protocolo de trabalho para aplicar resolução estruturada microscopia de iluminação super (SIM) para a imagem das espinhas dendríticas em culturas de neurônios do hipocampo primários. Possíveis aplicações de SIM coincidir com os de microscopia confocal. No entanto, as duas técnicas apresentam aplicabilidade diferente. SIM oferece resolução lateral superior eficaz, ao passo que a microscopia confocal, devido ao uso de um orifício físico, atinge melhoria resolução à custa da remoção de luz fora de foco. Neste protocolo, neurónios primários são cultivadas em lamelas de vidro, utilizando um protocolo padrão, transfectados com os plasmídeos de DNA que codificam as proteínas fluorescentes e fotografadas usando SIM. Todo o protocolo aqui descrito leva aproximadamente duas semanas, porque espinhas dendríticas são visualizados após 16-17 dias in vitro, quandodesenvolvimento dendrítica é o ideal. Após a conclusão do protocolo, espinhas dendríticas pode ser reconstruído em 3D da série de pilhas de imagens do SIM usando software especializado.

Descrito aqui é um protocolo de trabalho padronizado para imagens espinhas dendríticas de neurônios do hipocampo de ratos primários in vitro utilizando SIM. O fluxo de trabalho de protocolo e os seus passos cruciais são mostrados na Figura 1. Geral, o protocolo de demora cerca de 2 semanas de trabalho experimental separadas numa primeira fase de preparação da amostra, incluindo a cultura, o desenvolvimento e a transfecção de neurónios do hipocampo de rato primários e imuno-histoquímica, e segun...

Este artigo descreve um protocolo de trabalho de imagem espinhas dendríticas dos neurônios do hipocampo in vitro utilizando Structured Illumination Microscopy (SIM). Microscopia Super-resolução usando SIM oferece resolução de imagem significativamente além do limite de difração da luz em todas as três dimensões espaciais, permitindo que a imagem de espinhas dendríticas individuais com maior pormenor.

Imagiologia espinhas dendríticas dos neurônios do hipocampo de rato primária usando Structured Illumination Microscopy

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...

O objetivo geral deste procedimento é obter imagens de espinhas dendríticas em super-resolução. Isso é realizado primeiramente preparando um cultivo primário de hipocampo de rato, chamado segundo passo é visualizar as espinhas dendríticas por meio da transfeção com GFP e coloração. Em seguida, a aquisição das espinhas dendríticas marcadas com GFP é realizada em super-resolução utilizando um microscópio SIM.O passo final consiste em reconstruir os dados brutos da imagem em 3D, prontos para análises subsequentes de imagem. Em última instância, neurônios hipocampais primários que expressam GFP, obtidos em super-resolução, são utilizados para demonstrar alterações sutis na morfologia dos espinhos dendríticos. A principal vantagem dessa técnica em comparação com métodos existentes, como a microscopia confocal convencional, é que ela permite estudar a morfologia dos espinhos dendríticos com maior detalhe.Este método pode ajudar a investigar questões centrais em neurociência, como alterações dependentes de fatores moleculares e farmacológicos na forma das espinhas dendríticas. A microscopia de eliminação estruturada baseia-se na projeção de padrões de linhas sobre a amostra, o que fornece

imaging-dendritic-spines-rat-primary-hippocampal-neurons-using

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Numerosos estudos recentes identificaram mutações em proteínas sinápticas associada a patologias cerebrais. Primários cultivados neurônios corticais oferecem grande flexibilidade para examinar os efeitos destas proteínas doenças associadas na morfologia e motilidade espinha dendrítica.

Análise de Morfologia Spine dendríticas em neurônios cultivados CNS

Fonte: Pekarek, B. T., et. al., Imagem e quantificação de dendritos neuronais intactos via limpeza de tecido CLARITY. J. Vis. Exp. (2021)Neste vídeo, demonstramos a preparação, imagem e análise de um cérebro de camundongo limpo para examinar árvores dendríticas, morfologia da coluna vertebral e distribuição neuronal usando microscopia confocal e técnicas de reconstrução 3D.

Imagem de microscopia confocal de árvores dendríticas intactas e morfologia da coluna vertebral em um cérebro de camundongo limpo

Fonte: Gouder, et. al. Quantificação tridimensional de espinhas dendríticas de neurônios piramidais derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos. J. Vis. Exp. (2015).Este vídeo demonstra a imagem e análise de espinhas dendríticas em neurônios piramidais transduzidos e imunomarcados usando microscopia confocal. O ruído de fundo é reduzido e os dendritos são rastreados estimando seu diâmetro e comprimento. A segmentação automatizada da coluna vertebral envolve a definição de...

Quantificação de espinhas dendríticas usando imagens de microscopia confocal

A imagem de lapso de tempo no animal vivo fornece informações valiosas sobre a reorganização estrutural no cérebro intacto. Aqui, apresentamos uma preparação de crânio afinado que permite imagens transcranianas de estruturas sinápticas marcadas com fluorescência no córtex de camundongo vivo por microscopia de dois fótons.

Two-Photon<em&gt; In vivo</em&gt; Imagem de espinhas dendríticas no Rato Cortex Usando um desbaste-crânio Preparação

Descrevemos dois métodos para visualização e quantificação da arborização dendrítica no hipocampo de modelos de camundongos: imagens em tempo real e de profundidade de campo estendida. Enquanto o primeiro método permite um rastreamento topográfico sofisticado e a quantificação da extensão da ramificação, o último permite a visualização rápida da árvore dendrítica.

Avaliação de dendríticas Arborização no giro dentado do hipocampo em Ratos Região

Espinhas dendríticas dos neurônios piramidais são os sites da maioria das sinapses excitatórias no córtex cerebral dos mamíferos. Este método descreve a análise quantitativa 3D de morfologias coluna em neurônios piramidais glutamatérgicos corticais humanos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas.

A quantificação tridimensional das espinhas dendríticas de Piramidal neurônios derivados pluripotentes induzidas pelo homem Células-Tronco

Este método descreve uma preparação crônica que permite o acesso óptico ao hipocampo de camundongos vivos. Esta preparação pode ser utilizada para realizar imagens ópticas longitudinais de plasticidade estrutural neuronal e plasticidade celular evocada por atividade ao longo de um período de várias semanas.

Imagem latente longitudinal do dois-fotão do hipocampal dorsal CA1 em ratos vivos

A Microscopia eletrônica de varredura de blocos de blocos serial (SBEM) é aplicada à imagem e análise de colunas dendríticas no hipocampo murino.

Microscopia eletrônica de varredura de blocos de bloco serial (SBEM) para o estudo de espinhas dendríticas

O presente protocolo descreve um método para visualizar e medir anéis de actina e outros componentes do esqueleto periódico da membrana do segmento inicial do axônio usando neurônios hipocampais de ratos cultivados e microscopia de iluminação estruturada em 3D (3D-SIM).

Propriedades de medição do esqueleto periódico da membrana do segmento inicial de axônio usando microscopia de iluminação estruturada em 3D (3D-SIM)

O protocolo descreve uma modificação do método golgi rápido, que pode ser adaptado a qualquer parte do sistema nervoso, para colorir neurônios no hipocampo e córtex pré-frontal medial do rato.

Mancha rápida de Golgi para Visualização da Coluna Dendrítica no Hipocampo e Córtex Pré-Frontal

As espinhas dendríticas são compartimentos pós-sinápticos da maioria das sinapses excitatórias. Alterações na morfologia da coluna dendrítica ocorrem durante o neurodesenvolvimento, envelhecimento, aprendizado e muitos distúrbios neurológicos e psiquiátricos, ressaltando a importância de uma análise confiável da coluna dendrítica. Este protocolo descreve a quantificação da morfologia da coluna dendrítica de forma precisa e reprodutível usando um software automático de reconstrução...

Quantificação da coluna dendrítica usando um software automático de reconstrução tridimensional de neurônios

Aprenda a imaginar espinhas dendríticas de neurônios hipocampais de rato em super-resolução usando microscopia de iluminação estruturada. Esta técnica permite visualizar mudanças morfológicas sutis com detalhe superior à microscopia confocal convencional.

Imagiologia espinhas dendríticas dos neurônios do hipocampo de rato primária usando Structured Illumination Microscopy

Explorar mais vídeos